BIOTECNOLOGA

BIOTECNOLOGA
SISTEMAS DE CULTIVO Y ASPECTOS
GENERALES DE LOS BIORREACTORES

Ing. Jos M. Reynoso

Sistemas de cultivo
BIOTECNOLOGA

Para un componente cualquiera del cultivo, incluida la

biomasa, se puede plantear el siguiente balance de materia
en el biorreactor
Acumulacin = Ingreso Salida + Formacin Consumo
(1)
donde V es el volumen de cultivo, F1
el caudal de alimentacin, F2 el de
salida, Ci1
la concentracin del
componente i en la alimentacin y Ci
la concentracin en el caudal de
salida, la que, si el cultivo est bien
mezclado, se puede asumir idntica a
la que hay en el biorreactor. Los
restantes trminos rf y rci se referen
a la velocidad de formacin y

Sistemas de cultivo
BIOTECNOLOGA

Por otra parte, el volumen de cultivo variar en el tiempo,

segn sean F1 y F2.
Suponiendo que la densidad del cultivo y de la alimentacin
son iguales, resulta:
(2)

De acuerdo a como son F1 y F2, puede haber, bsicamente

tres sistemas de cultivo

Cultivo continuo
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1 Cultivo continuo
Ambos caudales son iguales y de acuerdo a la ec. (2), V ese
constante por lo que la ec (1), se reduce a:

(3)

Batch alimentado
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2 Batch alimentado
El caudal de salida F2 es nulo, por lo que V aumentar en el
tiempo, de acuerdo al valor del caudal de entrada

(4)
Y en el balance de masa, se anula el trmino F2Ci resultando:
(5)
Obviamente, V queda dentro del diferencial pues vara con el tiempo segn la
ec (4). Por este motivo, el batch alimentado y a diferencia del caso anterior
tiene duracin limitada en el tiempo ya que el volumen no puede
incrementarse ms all del volumen til del biorreactor.

Batch
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3 Batch
Ambos caudales son nulos por los que V es constante y en la
ec (1) se anulan los trminos F1Ci1 y F2Ci

(6)
La duracin del cultivo batch es tambin limitada en el tiempo y
depende, esencialmente de las condiciones iniciales del cultivo. Una
vez inoculado el medio, la concentracin de biomasa aumenta a
expensas de los nutrientes y cuando el substrato que limita el
crecimiento se agota, finaliza el batch.

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Cultivo continuo
Para poner en marcha un cultivo continuo se realiza
previamente uno batch y en un momento dado se comienza
a alimentar con medio fresco con un caudal F y por un
rebalse se mantiene el volumen constante.
El caudal de salida contendr clulas, medio de cultivo
parcialmente agotado y, eventualmente, algn producto. Si
alimentamos con medio fresco y estril signifca que X 1=0 y
P1=0, por lo que slo debemos considerar la concentracin
de substrato limitante del crecimiento,
S1, en la
Balances
alimentacin.
(7)
(8)

de masa
para X, S y
P
X = biomasa
S = subs
limitante

Cultivo continuo
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En el estado estacionario, las concentraciones dentro del

biorreactor permanecern constantes en el tiempo
se igualan a 0, las ecs (7), (8) y (9)
(7)

Teniendo en
cuenta que rx =
X

(8)
(9)
(10)
D = velocidad
de dilucin

Cultivo continuo
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Teniendo en cuenta que:

nos encontramos con que la concentracin de S en el estado
estacionario es :
(11)
De la ec (8) surge
sabemos que:

ec (12)

, pero adems

Por lo que la concentracin de la biomasa en estado

estacionario es:

Cultivo continuo
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Por lo que la concentracin de la biomasa en estado

estacionario es:

(13)

Si en particular S es la fuente de carbono y energa,

donde
ms es el coefciente de mantenimiento e
es el
rendimiento que se obtendra si el mantenimiento fuera nulo.
Entonces

es igual a:

Si ms =0, la ec
(14) se reduce a
la (13).

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Cultivo continuo

La Fig. 16 muestra como varan la concentracin de sustrato en estado

estacionario en funcin de la velocidad de dilucin. La curva superior corresponde
a la ecuacin (13) y la inferior a la ecuacin (14), pudindose observar en este
ltimo caso que el efecto del mantenimiento celular se hace notable a bajas
velocidades de dilucin. En ambos casos puede apreciarse que existe un valor de
D por encima del cual es X = 0, con lo cual por la ecuacin (13) o (14) es S = S 1 .
Si se reemplaza este valor en la ecuacin (11) se obtiene la velocidad de dilucin
crtica Dc .

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Cultivo continuo

Si como ocurre normalmente Sl Ks se tiene que Dc = m, lo

cual es un criterio muy til en el momento de seleccionar un
valor de D apropiado, ya que deber cumplirse que D <m. En
caso contrario ocurrir el "lavado" del cultivo, debido a que la
velocidad de salida de las clulas del biorreactor ser mayor que
la de crecimiento.
Debe tenerse en cuenta que la Fig. 16 se representa en caso
que est dado por la ecuacin de Monod, pero si en medio del
cultivo hay sustancias inhibidoras del crecimiento (o son
formados por microorganismos) o el sustrato limitante es el
inhibidor,
debern
emplearse
las
expresiones
de

correspondientes a la presencia de este inhibidor

Formacin de producto
En estado estacionario, la ec. 9

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Se reduce a:
(16)

o bien

Donde
representa la concentracin de producto en estado
estacionario y
es la velocidad especfca de formacin de producto.
Dependiendo de como sea la cintica de formacin de
produccin ser la forma de la curva de
vs. D.

Determinacin de los parmetros

de crecimiento
El cultivo continuo es sumamente til para determinar los
parmetros de crecimiento como

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As, reordenando la ec. 11

Se obtiene:

La grfca es una recta si el cultivo

puede ser representado por una cintica
como la de Monod

(18)

Determinacin de los parmetros

de crecimiento

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Tambin si reordenamos la ec. 14

Resulta:

(19)

BIOTECNOLOGA

Batch alimentado
Para iniciar un batch alimentado valen las mismas
consideraciones que se hicieron para iniciar un cultivo continuo,
salvo que en este caso supondremos que se inicia la
alimentacin del cultivo cuando el substrato limitante se ha
agotado.
Si bien este no es un requisito indispensable, permite simplifcar
el tratamiento matemtico y adems es un bien punto de
partida con respecto al objetivo del batch alimentado que
controlar la velocidad de crecimiento mediante la velocidad de
alimentacin.
Tambin supondremos que alimentamos con medio de cultivo
fresco y estril, es decir que X1 = 0 y P1 = 0

Batch alimentado

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Despus de estas consideraciones, los balances para X, S y P

sern (ver ec. 5)

Si en la ec. 21, reemplazamos

cuenta la ec. 20 resulta:

y se tiene en

Batch alimentado

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Si deseamos que la velocidad de crecimiento est controlada

por la alimentacin, esta deber ser tal que en todo momento
sea S sea prcticamente igual a 0 y por lo tanto d(S.V)/dt =0.
Esto equivale a decir que el substrato es consumido totalmente
ni bie

donde X0 y V0 representan la concentracin de biomasa y el

volumen de cultivo en el momento de iniciar la alimentacin. La
variacin de V con el tiempo se obtiene integrando la ec (4).

Resultando la ec (26)

Batch alimentado

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El criterio para disear una alimentacin adecuada se obtiene

combinando las ecs 20 y 24, (con t=0)

(27)
Como criterio adicional conviene seleccionar el valor de S l tan alto como
sea posible y F relativamente pequeo a fn de evitar la excesiva dilucin
del cultivo.
La contrapartida es que la duracin del batch alimentado puede
prolongarse excesivamente, por lo que normalmente se trata de
encontrar la solucin de compromiso,
donde intervienen adems, aspectos econmicos.
El valor de durante el batch vara permanentemente, ya que por la
ecuacin (20) es:

Batch alimentado

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Reemplazando en la ec 29, las ecs24 y 25 resulta::

Por tanto disminuye con el tiempo. Esto es vlido solamente

para el caso tratado aqu, es decir con F y Sl constantes, pero
nada impide hacer alimentaciones con F = F(t) o S 1 = S1(t),
con lo cual puede lograrse, por ejemplo, que se mantenga
constante o bien que aumente hasta valores cercanos a m.
La diversidad de alimentaciones posibles que pueden
emplearse es, quizs, una de las caractersticas ms
apreciables del batch alimentado. La otra es que este sistema
de cultivo es muy apropiado para obtener altas
concentraciones de biomasa, muy superiores a las que se
podran obtener en un batch, donde la limitacin est dada
por la concentracin inicial de nutrientes del medio de cultivo
que pueden tolerar los microorganismos.

Batch

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Aplicando la ec. 6
producto, resulta:

a la biomasa, el substrato y el

Batch

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Suponiendo que no se forma productos y que la relacin entre y S

puede ser representada por la ec de Monod, surge que:

El sistema formado por las ecuaciones (38) y (39) posee solucin

analtica, pero en sta no aparece X en forma explcita por lo que resulta
de escasa utilidad.
En cambio es posible analizar casos particulares haciendo algunas
suposiciones.
Por ejemplo se puede asumir que durante una buena parte del tiempo se
cumplir que S Ks, por lo tanto las ecuaciones (38) y (39) se reducen a:

Batch

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Por tanto bajo las condiciones indicadas el crecimiento se llevar a cabo

con el mximo valor de p posible. Integrando la ecuacin (40) con la
condicin a t = 0;
X = Xo, se llega a la expresin:

La ecuacin (42) establece que para S Ks el crecimiento es

exponencial (fase exponencial), y por la ecuacin (43) es posible calcular
el valor de m grafcando el lnX en funcin del tiempo.

Batch

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La variacin de S con t se obtiene introduciendo la ecuacin (42) en la

ecuacin (41) e integrando con la condicin a t=0, S=S0

A medida que el cultivo transcurre, S disminuye hasta que se llega a la

condicin en que S es comparable a Ks y por lo tanto dX/dt comienza a
disminuir (fase de desaceleracin) hasta hacerse fnalmente nula cuando
S = 0. En este punto se alcanza la mxima concentracin de biomasa y
fnaliza el batch (fase estacionaria).
La concentracin fnal de biomasa, Xf , se puede calcular si se conoce el
Yx/s :

Batch

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La variacin de S con t se obtiene introduciendo la ecuacin (42) en la

ecuacin (41) e integrando con la condicin a t=0, S=S0

A medida que el cultivo transcurre, S disminuye hasta que se llega a la

condicin en que S es comparable a Ks y por lo tanto dX/dt comienza a
disminuir (fase de desaceleracin) hasta hacerse fnalmente nula cuando
S = 0. En este punto se alcanza la mxima concentracin de biomasa y
fnaliza el batch (fase estacionaria).
La concentracin fnal de biomasa, Xf , se puede calcular si se conoce el
Yx/s :

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Batch

El cultivo tipo "batch", si bien es quizs el ms difundido, es el

que menos posibilidades de control ofrece. Una vez sembrado el
medio de cultivo y fjada la temperatura, las clulas quedan
"libradas a su propia suerte" o, dicho de otro modo, a su propia
potencialidad, que se manifesta creciendo a la mxima
velocidad que le permite el medio de cultivo empleado, siendo
el operador un mero espectador de los acontecimientos.
En este aspecto tanto el cultivo continuo como el batch
alimentado superan ampliamente al "batch".

BIOTECNOLOGA

PRODUCTIVIDAD

La productividad volumtrica est expresada como gramos de

producto (o clulas) por litro y por hora y es una medida de la
perfomance del proceso. En un proceso batch es necesario
calcular la productividad sobre el tiempo total del proceso, el
cual incluye no solo el tiempo de fermentacin sino tambin el
tiempo requerido para vaciar el fermentador despus de la
corrida anterior, limpieza del recipiente y llenar y esterilizar
nuevamente el medio. La productividad total est dada por la
pendiente de una lnea desde el origen hasta el punto de
terminacin de la fermentacin. La productividad mxima est
dada por una lnea similar a travs del origen pero tangente a la
curva de crecimiento; esto sucede a una concentracin de
producto (o clulas) menor que el mximo.

PRODUCTIVIDAD

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El tiempo total para el proceso puede ser calculado como:

(47)
Donde td involucra los tiempos improductivos.
De esta forma, obtenemos la ecuacin de productividad
(48)

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PRODUCTIVIDAD

En un cultivo continuo, la productividad P (g/lh) est defnida

por:
(49)
Sustituyendo la ec. 49 en la ec 13, nos queda:

(50)

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PRODUCTIVIDAD

La productividad P puede expresarse ahora como una funcin de

la velocidad de dilucin.
La D necesaria para obtener mxima productividad puede
calcularse derivando la ec con respecto a D e igualando a cero

Obtenemos velocidad de dilucin ptima Dopt

(51)

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PRODUCTIVIDAD (Batch vs
Continuo)
Se puede comparar la productividad para la produccin de masa
celular, en fermentadores batch y fermentadores continuos,
examinando la relacin de la ec 48 con el producto D M XM donde
XM es la concentracin celular que se obtiene la velocidad de
dilucin ptima .
(52)
Y la relacin entre la productividad en reactores continuos y la
productividad en reactores batch es:
(53)