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DETECCIN DE

HONGOS EN
TEJIDOS
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INTRODUCCIN
Las micosis comprenden un abanico de trastornos que abarca desde
infecciones cutneas superficiales y mucosas que pueden originar
irritacin local a procesos muy invasivos asociados a patgenos
sistmicos y oportunistas clsicos. Las infecciones graves se deben a
un grupo cada vez ms amplio de patgenos, que engloba hongos
patgenos habituales, como algunas especies de Candida,
Cryptococais neoformans, Histopfasma capsulatum, y ciertas
especies de Aspergillus, junto a formas miceliales hialinas y
dematiceas menos conocidas.
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METODOS DE LABORATORIO PARA


EL DIAGNSTICO DE MICOSIS

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Muestra: Biopsia
Etapas:

Observacin
macroscpica.
Fijacin.
Seleccin de zonas de
estudio.
Deshidratacin.
Inclusin.
Realizacin de cortes.
Hidratacin.

Tincin.

Examen microscpico.

DIAGNOSTICO DIRECTO

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FUNDAMENTO
- El decolorante alcohol acetona disuelve a los lpidos de la pared impidiendo
la retencin del cristal violeta en los organismos Gram negativos
- Se forma un complejo: lugol-cristal-violeta

Aspergillus fumigatus

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Tincin Ziehl-Neelsen (cido-AlcoholResistentes)


Es el procedimiento utilizado para colorear aquellos
organismos que son difciles de colorear con colorantes
bsicos, porque se muestran impermeables a la coloracin.
El contenido lipdico de estos organismos esta compuesto
principalmente por ceras y fosfolpidos que alcanzan hasta
un 40% de su peso seco total.
El cido-alcohol-resistencia es la capacidad de ciertos
materiales biolgicos para formar complejos con algunos
colorantes y que luego de la exposicin al alcohol-cido
no ocurre decoloracin
Se cree que el cido miclico es responsable de cidoalcohol-resistencia
til en algunos microorganismos cidoresistentes como
N.Asteroides,N.Brasiliensis y otros actinomicetes.

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ACTINOMICETES

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OTRAS COLORACIONES:

.-DOMINICI
.-WRIGHT
.-AZUL DE METILENO
.-GIEMSA
.-ALBERT
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TINCIONES FLUORESCENTES
Fluorescencia primaria: capacidad de determinados hongos en emitir radiacin visible
tras ser irradiados con luz UV (autofluorescencia) se ha podido demostrar una
autofluorescencia incluidos en parafina y teidos con hematoxilina-eosina y de
P. jiroveci en preparaciones teidas con Papanicolaou.
Fluorescencia secundaria: Se basan en la visualizacin de objetos no fluorescentes tras
marcado con molculas fluorescentes.
Hay que distinguir la quimiofluorescencia, que marca de modo general las estructuras
fngicas (naranja de acridina, rojo Congo y agentes blanqueantes), de la especfica o
inmunofluorescencia que permite la identificacin especfica de ciertos.

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QUIMIOFLUORESCENCIA:
NARANJA DE ACRIDINA:
Se trata de un fluorocromo que se liga a macromolculas polianinicas, como
los mucopolisacridos y los cidos nucleicos.
Es una tcnica sencilla y rpida (<5 min) reactivo barato, estable.
Reactivo
Preparar, utilizando siempre guantes, una solucin stock 1 % p/v de Naranja
de Acridina en agua destilada. Se puede almacenar en la oscuridad a 4 C hasta
6 meses. La solucin de trabajo se prepara diariamente, aadiendo 0,5 ml de la
solucin stock a 5 ml de un tampn acetato 0,2 M a pH 4.
Procedimiento
Teir el frotis con solucin de trabajo durante 2 min, lavar con
agua y dejar secar.
Se puede hacer un montaje con agua y observar inmediatamente con
microscopio de fluorescencia.
Los hongos se tien de color naranja y los ncleos de los leucocitos se tien de
color verde.
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AGENTES BLANQUEADORES:
Estas molculas, de gran heterogeneidad qumica, son compuestos orgnicos heterocclicos,
incoloros o dbilmente coloreados que, en solucin o aplicados a un sustrato, absorben la
radiacin en el ultravioleta cercano (350 nm) y emiten la mayora de la energa absorbida
en la regin azul del espectro visible (430 nm). Presentan una peculiar y gran afinidad por
polisacridos constituidos por uniones beta-glucosdicas (glucanos, quitina, celulosa)
presentes en los hongos.
Los ms ampliamente utilizados son:
.-Calcofluor White (CW)
.-El Blankophor
.-El Uvitex 2B.
Su alta afinidad por la quitina, glucano y celulosa los convierte en marcadores ideales de la
estructura fngica, ya sea en la muestra clnica como en el cultivo posterior. Se trata de un
mtodo diagnstico en tiempo real (1-2 min).

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Preparacin del blanqueador Calcofluor White(CW)


La solucin se prepara con 1 g de polvo de calcoflor blanco (Polysciences.Warrington PA)
en 100 ml de agua destilada (solucin madre al 0.1%), se calienta suavemente.
Se coloca en un portaobjetos una gota de solucin de KOH con una gota de la preparacin y
se coloca un cubreobjetos, se calienta ligeramente y se examina bajo microscopio de
fluorescencia.

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TINCIONES RUTINARIAS
TINCION HEMATOXILINA-EOSINA:

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TINCIONES ESPECIALES

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