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CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR

Clase2.ReplicacindelADN.

Lic.LuisSnchez

TecnlogoMedicoenLaboratorioClnicoyAnatomaPatolgica

The Eukaryotic Cell Cycle


Restriction
Point

DNA
Synthesis

Quiescence

G1
S

G1
S

G2
S
M
S
Mitosis

II.HistoricalBackground
A.1953WatsonandCrick:LaestructuradelADNprediceelmecanismodelareplicacin
Ithasnoescapedournoticethatthespecificpairwehavepostulatedimmediatelysuggests
apossiblecopyingmechanismforthegeneticmaterial.

B.1958MeselsonandStahl:LareplicacindelADNessemiconservativa

ReplicacindelADN.Caractersticasgenerales
DNASynthesis:
1.RequiereunADNtemplate(molde)yunprimerconExtremo3OHend
(LasintesisdeADNnopuedeiniciarsedenovo)
2.RequieredNTPs.
3.Ocurreenladireccion53.

PequeosARNactuan
comoprimersenvivo

LaReplicacines:
Semiconservativa
Semidiscontinua
Bidireccional.

SEMICONSERVACION
themostbeautifulexperimentinbiology.

All
hybrids
1/2old:
1/2new

1/4old:
3/4new

1/2hybids:
1/2new
All
hybrids

LostresmodelospotencialesdereplicacionelADNysusresultadospredichos.

Theactualdata!

SEMIDISCONTINUA

Cadenalider

SntesisContinua

Cientosamilesdepb/tipocelular

Sntesisdiscontinua
Cadenarezagada

Continua+discontinua=

semidiscontinua

Bidireccional
Quieredecir,
queenalgn
momentoestas
dosHorquillas
sevana
encontrarantes
desepararse.

CmosellevaacabolareplicacinenelADNcircular

Mayoradelasbacterias

Usadoporlosvirus,
Nonecesitaprimers

Usadopormitocondrias
ycloroplasto

MapadelcromosomadeE.colicadanumeroesminuos(40000bp)

ComoseverealmenteunareplicacindeADNenE.coli.

ElcomplejoADNEnzima
Bsicoparalareplicacin

Recuerdanenquedireccinprocedalareplicacin?

ELREPLISOMAOSISTEMAADNREPLICASA

Comoseproducelareplicacin
enunabacteria
Puedeserdivididaen:
Iniciacin
Elongacin
Terminacin

Iniciacin(Bacteria)

AcomododesecuenciasenelorigendereplicacindeE.coli(OriC)

Fasedeelongacin

Escuandolacadenasealargaproductode
lasntesis.Sntesisdelasdoscadenasseda
enformasdiferentes:cadenaldery
rezagada.

Sntesisdelacadenarezagada

TERMINACIONDELAREPLICACION

SeqTeraprox20pb,actancomotrampa,
dondelashorquillasentranperonosalen.
LasprotenasTUS(sustanciadeutilizacindel
terminal)encuentranestassecuenciasTeryelcomplejo
TERTUSdetienelareplicacinporunsololado

LasADNpolimerasasse
equivocan?
Si.Perotienemecanismosquereparaneldao
(Proofreading=correccindelectura).
LaE.colitiene4,6x106pbensugenoma.
LaADNpolimerasaseequivocaen1/10001/10000pb.
Entonces,comoseexplicaquealfinaldelareplicacin,laADN
polimerasaseequivoque1x1091x1010xbase?
Primero,elemparejamientoATyCGhacequegeomtricamentesea
correctoello.
Segundo,estonoessuficiente,senecesitanenzimasqueayudana
mejorarlafidelidaddelareplicacin.
Tercero,apesardeestasenzimasdereparacinenlareplicacin,aun
haymasenzimasqueactanpostreplicacin.

IV.DNAPolymerasesofE.coli
ThefirstDNApolymerasewasdiscoveredbyArthurKornbergin1957DNA
PolymeraseI

A.E.coliDNAPolIhas3enzymaticactivities:
1)53DNApolymerase
2)35exoncuclease(Forproofreading)

KlenowFragment

3)53DNAexonuclease(ToeditoutsectionsofdamagedDNA)
1

5to3Exo.

323

KlenowFragment

aa928

5to3Pol&3to5Exo

HansKlenowshowedthatlimitedproteolysiswitheithersubtilisinortrypsinwillcleave
PolIintotwobiologicallyactivefragments.
FactsaboutDNASynthesisErrorRates:
DNApolymeraseinsertsoneincorrectnucleotideforevery105nucleotidesadded.
Proofreadingexonucleasesdecreasetheappearanceofanincorrectpairedbasetoone
inevery107nucleotidesadded.
Actualerrorrateobservedinatypicalcellisonemistakeinevery1010nucleotides
added.
ErrorrateforRNAPolymeraseis1/105nucleotides.

Mecanismodecorreccin
delecturas(Proofreading)
Ejm.FragmentodeKlenow
deE.coli

REPLICACIONEN
EUCARIOTAS
Hastaaqutodoloexplicadoespara
procariotas(bacterias).
Cmosucedeentonceslareplicacinen
organismosmascomplejoscomolos
eucariotas?

Enqudiferenciaunprocariotadeun
eucariota?
Entrminosdereplicacinenquese
diferencian?
Tienendiferentesorgenesdereplicacin.
Porqu?

Enelhumanocadaorigenestadistanciadaentre30000300000pb

SongenomasLinealesocirculares?
Seagrupanenverdaderoscromosomas?
entoncescualessonlaspartes?
OriC=ORC(Complejodereconocimientodelorigen)

Cualeselproblemaconlostelmeros
Mitosis

Apoptosis
loelimina

Meiosis

Terminandoeltrabajode
replicacinenloseucariotas