Está en la página 1de 53

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GHOHMANN

BIOQUIMICA
ENZIMAS
PARTE II

Mgr. SOLEDAD BORNAS ACOSTA

CINETICA QUIMICA
CINETICA QUIMICA
Parte de la qumica que estudia la
velocidad (V) de una reaccin qumica
y todos los factores que pueden
alterarla (merecen especial atencin la
concentracin de los reaccionantes y la
temperatura) en un determinado
tiempo.

CINETICA QUIMICA
A
REACCION DE
1ORDEN

V [A]
V=K [A]
Es decir conforme se
aumenta [A] se
aumenta la Velocidad

Segn la ley de Accin


de Masas establecida
por Guldberg y Waage
(1867), es aquella
reaccin donde la
velocidad de reaccin Vi
es proporcional a la
concentracin del
reaccionante.

[A]

CINETICA QUIMICA
REACCION DE
2ORDEN

Es aquella reaccin
donde la velocidad
de reaccin es
proporcionalmente
directa al cuadrado
de la concentracin
del reaccionante.

K
A + B
C+D
V [A] [B]
V = K[A] [B]
V=K [A]2
Los reaccionantes se
dan en forma definida
[A]=[B]

Vi

[A]2

CINETICA QUIMICA
REACCION DE
3ORDEN / CERO
ORDEN

Es aquella reaccin
donde la velocidad de
reaccin es constante
conforme se aumenta
la concentracin del
reaccionante.

V=K
La reaccin no cumple
con la ley de Accin de
Masas
Vi

[A]

CINETICA ENZIMATICA

En 1913 investigadores (alemanes) LEONOR


MICHAELIS y MAUD MENTEN realizaron
diversos estudios con respecto de cmo se
afectaba las reacciones qumicas catalizadas
por enzimas, para ello desarrollaron todo un
MODELO MATEMTICO.

En 1925 G. BRIGGS y J. HALDANE realizaron


mayores investigaciones y anlisis apoyando
el modelo y estableciendo una HIPTESIS de
validez
mas
general
conocida
como
APROXIMACIN AL ESTADO ESTACIONARIO

CINETICA ENZIMATICA

CINETICA ENZIMATICA
PRINCIPIOS
1. Las reacciones qumicas catalizadas por
enzimas se dan en tiempos cortos y breves.
t = cortos y [P] 0
En tiempos cortos el [P] es tan pequeo que se
desprecia; por lo tanto, se desprecia la cuarta
reaccin (K4)

CINETICA ENZIMATICA
2. Se genera un equilibrio entre el
complejo [ES] alcanzando un Estado
Estacionario.
ESTADO ESTACIONARIO [ES] = K
V1 = V2 + V3
Siendo mas estable
V1 = Formacin del [ES]
V2 + V3 = Desaparicin del [ES]

CINETICA ENZIMATICA
V1
V1

V2
V2

V3
V3

[S] [E]
= K1 [S] [E]

[E] = [Et] - [ES]

[ES]
= K2 [ES]
[ES]
= K3 [ES]

V1 = V2 + V3
K1 [S] ([Et] - [ES]) = K2 [ES] + K3 [ES]

CINETICA ENZIMATICA
3. La cantidad de [P] se forma en un
determinado tiempo.

Velocidad Inicial (Vi)


Es cualquier velocidad
que depende del paso 3
Vi = K3 [ES]

CINETICA ENZIMATICA
4. La constante de Michaelis (km)
Km se puede definir
en trminos de constantes
para la formacin y
ruptura del complejo [ES]
Km es la [S] que alcanza la mitad de la Vmx

CINETICA ENZIMATICA
5. La enzima presenta velocidad
mxima (Vmax) y se satura.
Vmax = k3 [Et]
La Vmax depende de la [E]

CINETICA ENZIMATICA
ECUACION DE MICHAELIS Y MENTEN

Ec. Hiprbola rectangular

La Ecuacin tiene un defecto matemtico y


experimental, y es que nunca se llegar al 100%
de la Vmax.

CINETICA ENZIMATICA
Problema
A que Vi se alcanzar con una [S] = km

CINETICA ENZIMATICA
Significado de Km
Permite ver la afinidad de la enzima
con el sustrato.
Por lo tanto, las enzimas son mas
activas cuando su km es menor o
caso contrario son menos activas
cuando su km es mayor.

CINETICA ENZIMATICA
ECUACION DE LINEWEAVER-BURK
Ecuacin de Recprocas
Dobles que considera las
Inversas 1/Vi y 1/[S] nos
da una lnea recta, cuya
Pendiente es km/Vmax.
Esta ecuacin nos permite
medir con mayor precisin
la Vmax y Km.
Ec. Lnea recta
y = ax + b

CINETICA ENZIMATICA
Ec. de Woolf
[S] /V

1/Vmax
km /Vmax

Ecuacion simple reciproca


donde se multiplica la
Ec. Lineweaver-Burk

[S]

Ec. de Eaddie-Hofstfe
Vmax
Vi

-Km
Vmax/Km
Vi/ [S]

Ecuacin simple reciproca


donde se multiplica la Ec.
Michaelis-Menten

CINETICA ENZIMATICA
FACTORES
Que afectan la velocidad de reaccin.
1. EFECTO DE LA [S]
Conforme se incrementa
la [S] se incrementa
la velocidad , pero llega
un momento en que la
velocidad se vuelve
constante, entonces
se dice que se ha
alcanzado la Vmax.

CINETICA ENZIMATICA
2. EFECTO DEL pH
Conforme aumenta el pH la Velocidad tambin
aumenta, pero llega un
momento en que la
Velocidad disminuye.
Por lo tanto, la curva
adopta una forma de
campana y el punto
mas alto de la velocidad
sera el que indique el
pH ptimo

CINETICA ENZIMATICA

CINETICA ENZIMATICA
3. EFECTO DE LA TEMPERATURA
Conforme aumenta la temperatura
aumenta la velocidad, pero en un
momento dado la temperatura
afecta la estructura proteica de la
enzima y altera la energa cintica.
Por lo tanto, las enzimas empiezan
a desnaturalizarse y pierden su
actividad cataltica.
La curva que se obtiene tiene
forma de campana y la velocidad
mxima nos indica que la enzima
se encuentra en una temperatura
ptima.

CINETICA ENZIMATICA
Todas las enzimas presentan una
temperatura ptima:
Los animales de sangre caliente lo
tienen entre los 30 40C
Los experimentos en laboratorio se
trabaja con con temperaturas de 25C.
Los microorganismos termfilos
sobreviven a temperaturas de 60
70C y pueden llegar a
100C.

CINETICA ENZIMATICA
4. EFECTO DE LA [E]
La velocidad de reaccin
catalizada por una
enzima es directamente
proporcional a la [E]
siempre y cuando la [S]
se encuentre saturada.
Grficamente se obtiene
una recta.
Este factor es importante
para dosificar una
enzima en una
preparacin dada.

[S] = saturado
Vi

[E]

INHIBICION ENZIMATICA
Las enzimas pueden ser inhibidas
por sustancias qumicas conocidas
como
INHIBIDORES
ENZIMATICOS, los cuales actan
sobre
el
tipo
de
grupos,
mecanismo
de
accin,
especificidad
de
sustrato,
conformacin especfica de la
enzima.

INHIBICION ENZIMATICA
1. INHIBICION IRREVERSIBLE
Se presenta en la naturaleza como
producto de la intervencin del hombre.
Es
decir
generar
sustancias
artificiales creados por el hombre. Ej.
Venenos, iones de metales pesados,
insecticidas, productos qumicos para la
guerra qumica.
Se caracteriza porque se une en forma
irreversible al sitio activo de la enzima.

INHIBICION ENZIMATICA
INHIBICION IRREVERSIBLE
Ej. DI-ISOPROPIL FLUOROFOSFATO (DFP)

SerOH
ENZIMA

DFP
ESTER DI-ISO
PROPIL FOSFORICO

DE ENZIMA

INHIBICION ENZIMATICA
INHIBICION IRREVERSIBLE
Ej. Cis-SH
+
Hg
ENZIMA P-MERCURIO
BENZOATO

DERIVADOS
MERCURICO
DE ENZIMA

Cis-SH + I DERIVADO
ENZIMA
MONOIODO COVALENTE
ACETAMIDA DE ENZIMA

INHIBICION ENZIMATICA
2. INHIBICION REVERSIBLE
Bloquea la actividad de las Enzimas en
forma reversible. Se caracteriza por
encontrarse en la naturaleza y se los
utiliza para regular la actividad de
algunas enzimas que forman parte del
metabolismo.
Tipos: Inhibicin competitiva
Inhibicin no competitiva
Inhibicin acompetitiva

INHIBICION ENZIMATICA
a) INHIBICION COMPETITIVA
Caractersticas:
El inhibidor se parece al sustrato y compite
con el sustrato por unirse al centro activo
de la enzima (mediante enlaces no
covalentes) formando un complejo EI.
No genera producto
Provoca disminucin de la Vi
Afecta km y Vmax permanece constante.
Se supera aumentando la [S].

INHIBICION ENZIMATICA
INHIBICION COMPETITIVA

INHIBICION ENZIMATICA
INHIBICION COMPETITIVA

CH2- COO|

COOMALONATO

EI

INHIBICION ENZIMATICA
INHIBICION COMPETITIVA

ALLOPURINOL + ENZIMA

EI

INHIBICION ENZIMATICA
INHIBICION COMPETITIVA

enzima
EI

ACIDO FOLICO

INHIBICION ENZIMATICA
INHIBICION COMPETITIVA
Utilizado en
quimioterapia

Importante
para la sntesis
de protenas y
cidos nucleicos

METOTREXATO + E

EI

INHIBICION ENZIMATICA
INHIBICION COMPETITIVA

INHIBICION ENZIMATICA
b) INHIBICION NO COMPETITIVA
Caractersticas:
El inhibidor se une a un lugar diferente del
sitio activo de la enzima mediante enlaces
no covalentes.
El inhibidor puede unirse a la enzima libre o
a la enzima del complejo ES formando un
complejo EI o ESI
La Vmax se altera y la Km permanece
constante
No se supera aumentando la [S].

INHIBICION ENZIMATICA
INHIBICION NO COMPETITIVA

INHIBICION ENZIMATICA
INHIBICION NO COMPETITIVA
Cis-SH + Ag++
Cis-S-Ag + H+
ENZIMA
ENZIMA
Mercptidos de SH
Cianuro (CN-)
Citocromo Oxidasa
EI
Acido sulfidrico

Monoxido (CO)

INHIBICION ENZIMATICA
INHIBICION NO COMPETITIVA

INHIBICION ENZIMATICA
c) INHIBICION ACOMPETITIVA
(INCOMPETITIVA)
Caractersticas:
El inhibidor se une unicamente al complejo
ES mediante enlaces no covalentes.
Se afecta tanto Km como Vmax.
No se afecta la pendiente.
Poco comn en sistemas enzimticos con un
solo sustrato pero comn en sistemas de
mltiples sustratos

INHIBICION ENZIMATICA
INHIBICION ACOMPETITIVA

INHIBICION ENZIMATICA
INHIBICION ACOMPETITIVA

ENZIMAS DE REGULACION
Para que la vida proceda de una
manera
ordenada,
el
flujo
de
metabolitos a travs de las vas del
metabolismo debe ser regulado.
Existe un grupo pequeo de enzimas
que
presentan
mecanismos
muy
sensibles de regular su actividad y se
da en base a modificadores del
sustrato.

ENZIMAS DE REGULACION
Tipos de modulacin:
a) Modulacin Allostrica
Las enzimas regulan su actividad
mediante
moduladores allostricos que pueden aumentar o
disminuir su actividad.
b) Modulacin Covalente
Las enzimas a travs de procesos de fosforilacin y
desfosforilacin se produce un cambio en su actividad.
c) Modulacin Gentica
Consiste en regular la expresin de los genes que
codifica a este tipo de enzimas provocando un cambio
en la cantidad de enzima.

ENZIMAS ALLOSTERICAS
Enzimas muy sensibles de regular su
actividad.
Caractersticas:
1. Presentan estructura cuaternaria, la
cual est constituida de subunidades.
Ca subunidad presenta un sitio o centro
activo.
2. Su peso molecular es mayor en
comparacin con otras enzimas.
3. La mayora son inestables a 0C.

ENZIMAS ALLOSTERICAS
4. Presenta una cintica de

propia caracterstica, donde


al estudiar el efecto de la
[S] se obtiene una curva
sigmoidal y donde la Vmax
y Km presentan el mismo
significado.
Su cintica es un tanto
diferente a la de MichaelisMenten, lo que llama la
atencin es el incremento
rpido de la velocidad, lo
que explica que estas

ENZIMAS ALLOSTERICAS
TEORIA ALLOSTERICA
El trmino allostrico significa OTRO
ESPACIO
(Allos = Otros).
Cada subunidad presenta dos
conformaciones dos formas en el
espacio, por lo tanto se llaman:
CONFORMACIN
ESTADO CONFORMACIONAL

ENZIMAS ALLOSTERICAS

ENZIMAS ALLOSTERICAS
COOPERATIVISMO
Se da por induccin donde el sustrato
induce a una subunidad, esta a su vez
induce simultneamente a las otras
subunidades, las cuales cooperan para
ser activas. Es decir se activan en
cooperativismo.

ENZIMAS ALLOSTERICAS
a

ENZIMAS ALLOSTERICAS
5. Estas enzimas se unen a ciertas sustancias
qumicas llamadas moduladores allostricos a
nivel de su sitio allostrico por medio de
enlaces no covalentes, provocando un cambio
en la conformacin de sus subunidades.
Los moduladores son de dos tipos:
a) M. POSITIVOS(ACTIVADORES) son
sustancias capaces de aumentar la actividad
de este tipo de enzima.
b) M. NEGATIVOS (INHIBIDORES) Son
sustancias capaces de inhibir la actividad de
este tipo de enzimas.

ENZIMAS ALLOSTERICAS
La enzima puede ser MONOVALENTE cuando tiene
un solo efector o puede ser POLIVALENTE cuando
tiene varios efectores.
segn el tipo de efector las enzimas pueden ser:
HETEROTROFICAS cuando las enzimas son
activadas o inhibidas por un efector diferente al
sustrato.
HOMOTROPICAS
cuando las enzimas son
activadas o inhibidas por el sustrato como efector.
MIXTO son la mayora de las enzimas donde el
sustrato como otras sustancias funcionan como
efectores