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Sistema de Hematologa

ADVIA 120/2120

Pag. 1

Dic-10

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Mas que un equipo de hematologa, un verdadero Sistema


Hematolgico para el usuario
Gold Standard en seguimiento de Leucemias y Anemias en equipos de
5ta generacin.

Pag. 2

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El primer equipo automatizado se lanzo en 1950


Principio: Impedancia
Parmetros Bsicos
Muestra: Sangre perifrica
Equipos actuales:
Principio: Citometra de Flujo, radiofrecuencia.
Parmetros nuevos con aplicaciones clnicas importantes
Analiza fluidos corporales

Pag. 3

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TECNOLOGIA
Colorimetra Hemoglobina
Citometria de flujo. Dispersin de luz: GR y Plaquetas.
Diferencial por peroxidasa Serie blanca
Citometria de flujo: Diferencial serie blanca por complejidad
nuclear
Citometria de flujo: Reticulocitos
Colormetro

Pag. 4

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ERITROCITOS

Rango lineal :
RBC: 0-7.0x106/uL

Pag. 5

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Difraccin
De luz
Diodo
Lser

Celda de
Flujo

Cmara
Lanzadera

Flujo de
Envolvente

ERITROCITOS

Citmetro de Flujo

Flujo de
Muestra

Pag. 6

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Low Angle 2 - 3
( Volumen )

ERITROCITOS

Anlisis de Glbulos Rojos

High Angle 5 - 15
( Concentracin HGB )

La media de concentracin de Hemoglobina define CHCM


Pag. 7

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GLOBULOS ROJOS

60L

Hypochromic

120L

Microcrocytic
28 gm/dL

Hyperchromic

Low Angle / Volume (fL)

Macrocrocytic

41 gm/dL

High Angle / Hgb Concentration


Pag. 8

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CITOMETRIA DE FLUJO

Rango lineal :
PLT: 0-3500000/uL

Pag. 9

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HIGH ANGLE

RBC Scatter

LOW ANGLE
Pag. 10

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Anlisis ptico Bidimensional

Mapa de plaquetas 2-D


..
Microcitos.
.

Volumen (fL)

Plaquetas Gigantes

0 - 60 fl

Fantasmas RBC

Plaquetas

Detritus
Fragmentos de RBCs

Indice de Refraccin
Pag. 11

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Anlisis Bi-dimensional
Dos dimensiones:
1) Tamao de Plaquetas:

0 60 fL
Precisin mejorada de contaje de plaquetas en muestras con plaquetas
grandes (>20fL)
Identifica e incluye plaquetas grandes en el contaje.

2) Densidad de Plaquetas (IR)

Permite una mejor discriminacin entre plaquetas y otros eventos


(fragmentos celulares, microcitos)

Permite la determinacin de nuevos parmetros de activacin de plaquetas,


como el MPC (componente plaquetario medio)

Pag. 12

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COMPARACIN DE LOS MTODOS DE CUANTIFICACIN DE PLT


Convencional

ADVIA 120

bi-dimensional

Uni-dimensional

Medida de volumen y ndice de


refraccin de cada plaqueta

Solo se mide el volumen celular

Particulas de interferencia pueden


ser contadas e includas en el
recuento de PLT.

Microcitos, fragmentos de RBC y


fantasmas de RBC discriminados y
excluidos del contaje de PLT

Importancia clnica potencial de MPC y


MPM

Pag. 13

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Parmetro

Explicacin

PLT

Contaje PLT corregido x Factores Cal RBC x Factores Cal PLT x


Factor de dilucin

MPV

Media del histograma Volumen de plaquetas

PCT

(PLQ x MPV) / 1.000

IDP

100 x (SD del histograma Volumen de plaquetas MPV)

LPLT

Plaquetas con volumen mayor a 20fL

CMP

Componente plaquetario medio

Pag. 14

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METODOS

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PLAQUETAS

Parmetros

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Comparacin del mtodo 2D PLT del ADVIA 120 con contaje por
Impedancia y contaje por Inmunofenotipificacin

Desarrollado por Dr. Samuel Machin, University College, London


Comparacin del contaje PLT 2D ADVIA con:
Contaje de plaquetas inmuno CD61
Tres diferentes tecnologas de impedancia
Resultados fueron publicados en el British Journal of Haematology
2000 108:2, 228-235

Pag. 15

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Impedance (1)

ADVIA 120
100
Impedance (1) (x 10 9/L)

160

ADVIA (x 10 9/L)

80
60
40
y = 1.0972x + 0.9661

20

R = 0.9542

140
120
y = 0.9313x + 5.4471

100

R = 0.6877

80
60
40
20
0

0
0

20

40

60

80

100

Immunophenotypic Count (x 10 9/L)

Impedance (3) (x 10 9/L)

Impedance (2) (x10 9/L)

100
y = 0.9757x + 1.2843
2

R = 0.808

60
40
20
0
20

40

60

60

80

100

Impedance (3)

120

40

Immunophenotypic Count (x 10 9/L)

Impedance (2)

80

20

80

Immunophenotypic Count (x 10 9/L)

100

200
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0

y = 0.9777x + 2.8624
2

R = 0.5657

20

40

60

80

100

Immunophenotypic Count (x 10 9/L)

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Example of CD First Pass


Reportable Results
CD SAPPHIRE

ADVIA 2120

1st. Impedance Plt count 49,700?

2nd. Optical Plt count 3,600?

1. Plt count 13,000


Right Result the 1st Time,
every time

3rd. Immuno CD61 Plt count- 12,200!


Additional time & cost
Pag. 17

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El equipo ADVIA 2120 usa sus diferentes


metodologas para realizar un cruce de informacin:
1. El conteo de la serie blanca se coteja por 2
metodologas: Basolobularidad y Peroxidasa.
2. La concentracin de hemoglobina colorimtrica se
coteja con la concentracin de hemoglobina celular.

Pag. 18

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Basolobularidad
Peroxidasa

Rango lineal :
WBC: 0.02-400x103/uL

M
N
L

B
N

LEUCOCITOS

Dos Metodologas
para lectura de leucocitos

Pag. 19

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Glbulos Blancos
Contaje dual WBC

Clasificacin citoqumica de acuerdo a la actividad peroxidasa y la


densidad nuclear

Linealidad expandida: Hasta 400 x 103/uL


Alarmas precisas y bajas tasa de revisin manual

E
L

N
L

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Pag. 20

B
N

M
N

N
N
L
N
L

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E
N

B
N

L = Linfocito
B = Basofilo
M =Monocito
N = Neutrofilo
E = Eosinofilo
Coloracin de Peroxidasa

Coloracin de Wright

Pag. 21

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LEUCOCITOS

Citoqumica de Peroxidasa

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ADVIA 120 Peroxidase Cytochemistry


RBC
Eosinophil

Neutrophil

Monocyte

Heat/SDS
Formaldehyde
(Dil 1)

4-ChloroNaphthol (Dil 2)
H2O2 (Dil 3)

Basophil
Lymphocyte
Pag. 22

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METODO PEROX

75C

!SOS!!

reactivos
PEROX

La diferencia
son los
grnulos!!

Por que estar


tan plido?

Pag. 23

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LEUCOCITOS

Tincin de Mieloperoxidasa

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High angle detector


(5o - 15o)
Lmpara de
TungstenoHalogeno

Pag. 24

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Absorbancia
Peroxidase

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LEUCOCITOS

METODO PEROX

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METODO PEROX

Pag. 25

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Volumen

LEUCOCITOS

METODO PEROX: Tincin peroxidasa

Actividad Peroxidasa

Pag. 26

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2
3
4

Pag. 27

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LEUCOCITOS

Citograma - Peroxidasa

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Basophil / Nuclear Lobularity Cytochemistry

Eosinophil
RBC
Neutrophil
Heat
Phthalic Acid
Surfactant

Monocyte

Basophil
Lymphocyte
Pag. 28

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High angle detector


(5o - 15o)

Laser
670 nm

Low angle detector


(2o-3o)

Pag. 29

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LEUCOCITOS

METODO BASO

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Volumen

LEUCOCITOS

Citograma - Basolobularidad

Nivel de Lobularidad

Pag. 30

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LUC

Pag. 31

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Rango lineal :
Retic: 0.2 - 24.5%

Pag. 32

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RETICULOCITOS

Anlisis Reticulocitos

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High angle detector


(5o - 15o)
Laser
670nm

Absorbancia
Contenido RNA
Oxazine
750
Tincin de
RNA

Pag. 33

Low angle detector


(2o-3o)

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RETICULOCITOS

Tres Sensores pticos

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Angulo Alto

Nivel de Maduracin

RETICULOCITOS

RETICULOCITOS

Absorcin de Oxazina 75
Pag. 34

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Parmetro

Explicacin

#Retic

RBC x (%Retic 100) x 1000

%Retic

100 x (Contaje RETIC n clulas aceptadas RTC) x factor


cal %RETIS

CHr

Contenido medio de hemoglobina de los reticulocitos

CHCMr

Media del histograma HC Retic para la poblacin de


reticulocitos

MCVm

Media del histograma Volumen RETIC para la poblacin


madura

MCVr

Media del histograma Volumen RETIC para la poblacin de


reticulocitos

Pag. 35

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RETICULOCITOS

Parmetros Reportados

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CONTENIDO DE HEMOGLOBINA DE LOS


RETICULOCITOS (CHR)
El contenido de hemoglobina de los reticulocitos (CHr) es una medida
directa del estado del nivel de hierro de los reticulocitos
CHr es el predictor mas fuerte de deficiencia de hierro en los nios
(Brugnara 1999)
Existe una prueba precisa y sensitiva al tiempo para la deteccin de
una deficiencia funcional de hierro en pacientes de Hemodilisis
(Fishbane 1997, Mittman 1997, Fishbane 2001, Tessitore 2001, Thomas
2002, Brugnara 2002, Kotisaari 2002)

Pag. 36

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Pag. 37

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Productividad Tecnolgica Comprobada


1. Tincin de peroxidasa permanece
como el GOLD STANDARD para
diferencial de WBC.
2. Parmetros nicos, relevantes y
aceptados de RBCs.
3. Anlisis ptico de plaquetas en
Dos-dimensiones.

Pag. 38

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Conveniencia en el Mundo- Real

Presentacin compacta y de
mesa que maximiza el espacio.

Pequeas cantidades de
muestra.

Tres modos separados de


aspiracin de muestra.

Reactivos a bordo / registro de


inventario.

Reactivos monitoreados
automticamente.

Pag. 39

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en resumen
Sistema de Hematologia ADVIA 120 :
Alta Tecnologa (Mtodo Perox: Gold
Standard Diferencial)
Detecta anormalidades prematuras
(tincin citoquimica y complejidad
nuclear)
Efectividad y precisin en contajes
bajos de plaquetas.
Sensitividad para deteccin de
anormalidades de hemates.
Detallado anlisis de anemias
(RETIC.)
Tratamiento de anemias, por
deficiencia de hierro.
Pag. 40

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MUCHAS GRACIAS

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Conclusin - HPC
En este artculo se hace una breve descripcin
de nuestro programa de monitorizacin
de clulas progenitoras o stem cells
(SCMP) recientemente desarrollado. En
ste, se introducen unas nuevas magnitudes
de investigacin (HPC# y HPC %)
que se monitorizan junto a los recuentos
de WBC, NEUT y PLT, para determinar el
momento ptimo de la recolecta de clulas
progenitoras (PBSC).

Pag. 42

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HPC - ROCHE
Datos en pantalla
En el modo HPC, aparecen como nuevas magnitudes de investigacin
el HPC# (recuento en valor absoluto) y el HPC % (porcentaje).
Estos dos valores se calculan de la siguiente forma:
HPC# = Nmero de clulas que se detectan en el rea HPC
HPC#
HPC % = x 100
WBC #
Las seales que aparecen en el rea de deteccin de HPC del
diagrama de dispersin, son de color rosa

Pag. 43

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ERITROCITOS
Reaccin:
- El reactivo ADVIA 120 RBC/PLT contiene Sulfato de Dodecilsdico
(SDS) y glutaraldehdo que causa que los eritrocitos y las plaquetas
se hagan esfricos.
As la forma se elimina como un factor de variacin.
- Los eritrocitos y las plaquetas se fijan.

Pag. 44

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MICROCITOSIS

Pag. 45

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MACROCITOSIS

Pag. 46

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HIPOCROMIA

Pag. 47

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HIPERCROMIA

Pag. 48

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ANISOCITOSIS
Se relaciona con el VCM: grande, mediano, pequeo

Aniso
Pag. 49

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HCVAR
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ANISOCITOSIS

ANEMIA DIMORFA HETEROGENEA

Pag. 50

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LEUCOCITOS (Perox)
Reaccin:
- El Surfactante Sulfato dodecyl sdico y el Brij-35 en combinacin con
el calor, lisa las clulas rojas.
El formaldedo fija las clulas blancas. El medio hipertnico produce
crenacin y contraccin de las clulas blancas, lo cual incrementa el
ndice de refraccin y permite la mejor identificacin de los linfocitos
sobre el ruido.

Detector de absorcin
Filtro
Lmpara de tungsteno

Corriente Analtica

Detector de dispersin

Separador de luz

Pag. 51

Dic-10

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Campo
Obscuro

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LEUCOCITOS (Perox)
Clasificacin citoqumica de acuerdo a la actividad de peroxidasas.
Tipo celular
Mieloblastos
Promielocitos
Mielocitos
Metamielocitos
Bandas
Neutrfilos
Eosinfilos
Basfilos
Linfoblastos
Prolinfocitos
Linfocitos
Linfocitos atpicos
Monoblastos
Promonocitos
Monocitos
Clulas plsmticas
NRBCs

Pag. 52

Dic-10

-, algunas veces + (especialmente micromieloblasts)


3+
3+
3+
2-3+
2+
4+
-1+ (No se tien en ADVIA 120)
-1+
1+
-

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Perox Cytogram
Monocytes
Neutrophils

Large
Unstained
Cells

Lymph and
Basophil

Eosinophils

NRBC

Platelet
Clumps

Noise

Pag. 53

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Scatter / Volume

Scatter / Volume

METODO PEROXIDASA

Absorption / Staining

Absorption / Staining
Pag. 54

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Deficiencia de Mieloperoxidasa (MPO)


Debido a una tencin de peroxidasa de la serie
mieloide muy baja.
Condiciones de activacin
%PMN - (%Neuts+%Eos) 25, Y
No NRBC flag, Y
Valido valle MN-PMN (d/D 0.15).

Pag. 55

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LEUCEMIA LINFOCITICA CRONICA

LEUCEMIA LINFOCITICA AGUDA

ATIPICOS, BLASTOS

Pag. 56

Dic-10

LEUCOCITOS

LINFOCITOS ATIPICOS

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Pag. 57

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Baso Citograma
Baso
Saturation

Basophils

Baso
Suspect

MN

PMN
Blasts

Noise
Pag. 58

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Low Angle / Volume

Low Angle / Volume

METODO BASOLOBULARIDAD

Pag. 59

High Angle
/
Dic-10
Density/Lobularity

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High Angle / Density/Lobularity


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BASOFILOS
12 uL de sangre
ADVIA 120 BASO contiene:
-

Acido Hydroclrico, 9.00 mmol/L


Acido ftlico, 21.49 mmol/L
Preservativo
Surfactante

Reaccin:
- El reactivo ADVIA 120 BASO contiene cido ftlico y un surfactante
el cual lisa las clulas rojas y destruye las membranas de las
plaquetas y leucocitos, excepto basfilos.

Pag. 60

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Indice de Lobularidad
(Niveles de Desviacin Izquierda)

Los valores de LI definen los niveles de severida de la alarma LS, mas


no la activan.
La alarma LS se activa si BASO d/D <0.15

Pag. 61

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Indice de Lobularidad

LI

PMNx
14

Para muestras con poblacin BASO bimodal

Para muestras sin poblacin bimodal BASO y


PMNx > 20

Si PMNx < 20, o no existe poblacin bimodal no se activa la alarma LS.


EL software interpreta la poblacion como MN

Pag. 62

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Blastos (BLASTS)
Baso

Blast region events to left of channel 9

%Blasts = 1.5-5% Y %LUC 4.5%, O


%Blasts 5, O
%BASO + %BASO Susp + %BASO Sat 10%

Pag. 63

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BASOFILOS
Indice de Lobularidad
1.- Mononucleares
2.- Polimorfonucleares
3- Valle
El ndice de lobularidad (LI)
proporciona una indicacin del grado
de maduracin de la curva
leucocitaria
Relacin 2:1
Pag. 64

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BASOFILOS
Desviacin a la Izquierda

Estos citogramas pertenecen a un paciente con Bronquitis.


La alarma de LS encendi debido a que el ndice de lobularidad fue
menor a 1.9%
En el conteo manual se encontraron 15 bandas
Pag. 65

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BASOFILOS
Granulocitos Inmaduros

1 Neutrfilos

2 Eosinfilos

3 Polimorfonucleares

La presente muestra fue tomada a un paciente con Leucemia mieloblstica aguda.


La alarma de GI apareci porque [(%NEUT+%EOS)-%PMN] fue mayor de 5.0%.
Pag. 66

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El significado clnico de una cuenta plaquetaria


ms precisa, es ms crtica en ...

Conteos bajos
disminuye las transfusiones
ajuste y monitoreo del tratamiento
Conteos altos
monitoreo del tratamiento para
disminucin de plaquetas
El histograma 2D-PLT VOL muestra la
distribucin de las clulas por su volmen
El histograma tiene un rango de 0 fL to 60 fL.

El histograma 2D-PLT PC histogram muestra la


distribucin de las plaquetas de acuerdo al ndice de
refraccin (concentracin de componente plaquetario).
El histograma tiene un rango de0 g/dL to 40 g/dL.
Pag. 67

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ADVIA 120
RETICULOCITOS
El reactivo ADVIA 120 autoRETIC contiene:
- Oxazina 750, 11.4 mg/L
- Buffer
- N-Tetradecyl-N,N-dimethyl-3-ammonio-1-propane
sulfonate, 0.023 mmol/L

Reaccin:
El reactivo ADVIA 120 autoRETIC contiene un detergente (surfactante)
que hace esfricos (isovolumtricamente) a los eritrocitos.
Tambin contiene un colorante catinico, Oxazina 750, que tie las clulas
de acuerdo a su contenido de RNA.
Pag. 68

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RETICULOCITOS

Absorption

Pag. 69

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ABSORCION RETICULOCITOS

Pag. 70

Dic-10

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ADVIA 120
BENEFICIOS RETICULOCITOS
La ferritina es una evaluacion indirecta de la
deficiencia funcional de hierro
Monitorear el porcentaje de clulas
hipocrmicas permite un monitoreo directo
El contenido de hemoglobina (CHr) de los
reticulocitos ha demostrado ser mas sensible
que el porcentaje de hipocromia
El uso de CHr permite un monitoreo ms
eficiente, que nos da la optimizacin del
uso de EPO y tratamientos con hierro, lo
que como consecuencia tiene un mejor
manejo del paciente anmico

Despus de 4 das
Inicio

Despus de 2 semanas
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Despus de 1 mes

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Anemia

Manual Differential
54 Neutrophils
2 Bands
21 Lymphs
3 Atyps
19 Mono
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1 Eos

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Promyelocytic Leukemia

Manual Differetial
6 Neutrophils
7 Bands
17 Lymphs
76 IG
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Acute Lymphocytic Leukemia

Comments:
98% Blasts on manual differential
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Macrocytosis
Case #1

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Macrocytosis
Macrocytes

Normal
Lymphocyte

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Case #2

Microcytic Hypochromic RBCs

Pag. 80

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Microcytic Hypochromic RBCs

Microcytic
Hypochromic
Normal

Red Blood Cells

Lymphocyte

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Case #8

Cold Agglutinin (Pre-Warming)

Pag. 82

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Agglutination of RBCs

Cold Agglutinin (Pre-Warming)


Pag. 83

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Case #8

Pre Warmed

Pag. 84

Cold Agglutinin (Warmed)


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Case #9

Hgb SS - Sickle Cell Anemia

Pag. 85

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Hgb SS - Sickle Cell Anemia

Sickled
Cells

Pag. 86

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Case #10

Low MCHC

Pag. 87

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Hypochromic Red Blood Cell

Normochromic Red Blood Cell

Low MCHC
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Case #11

High MCHC
Pag. 89

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Hyperchromic Red Blood Cells

Pag. 90

High MCHC
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Normochromic Red Blood Cell

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Alarmas Morfologicas con Niveles


de Intensidad (hasta +++)
ANISOCITOSIS

RDW > 16%

VARIACION DE LA CONC.
DE HGB

HDW > 3.4 g/dL

HIPERCROMIA

%HYPER > 4%

HIPOCROMIA

%HYPO > 4%

MACROCITOSIS

%MACRO > 2.5%

MICROCITOSIS

%MICRO > 2.5%

RBC NUCLEADOS (RB)

(Valley Count -

200) > 2% WBCP


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AGREGADOS PLAQ. (NW)

Clumps Count > 300

FRAGM. DE RBC

RBCF > 100,000 cells/l

FANTASM. DE RBC

RBCG > 100,000 cells/L

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PLAQUETAS

Alarmas Morfologicas con Niveles


de Intensidad
(hasta%LPLT
+++) > 10% PLT
PLAQ.
GRANDES

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Alarmas Morfologicas con Niveles de


Intensidad (hasta +++)
%LUC > 4.5 and %LUC > (%BLAST + 1.5)

GRANULOCITOS INMADUROS

[(%NEUT + %EOS) - %PMN] > 5.0%

DESVIACION IZQUIERDA
BASO d/D < 0.15 and %NEUT > 30%
BLASTOS
1. %BLASTS 1.5% to 5.0% and %LUC > 4.5%, o
2. %BLASTS > 5.0% WBCB
DEFICIENCIA DE MIELOPEROXIDASA (MO)
[%PMN - (%NEUT + %EOS)] > 25 y no hay NRBC flag

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LEUCOCITOS

LINFOCITOS ATIPICOS

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