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CINTICA ENZIMTICA

E + S

SE

E + P

Protenas con actividad cataltica de los seres vivos.


Unidades del Metabolismo
Regulan la vel. de las reac. qum. espontneas (G-).
No promueven reacciones no-espontneas (G +).
Incrementan la Vel. De reaccin 103 a 1012 veces sin
afectar el sentido de la reaccin.
No forman parte del producto de la reaccin.

PROPIEDADES GENERALES

AUMENTAN LA VELOCIDAD DE REACCIN


De 106 to 1012 veces vs sin enzima.
An ms rpido que los catalizadores qumicos.

CONDICIONES DE REACCIN
Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)
pH neutro (5-9), la mayora 6.5 7.5
Presin atmosfrica normal

CAPACIDAD DE REGULACIN

Por concentracin de sustrato


Por concentracin de enzima
Por inhibidores competitivos (semejantes al sustrato)
Por inhibidores no competitivos (modificacin covalente de la enzima)
Por regulacin alostrica

ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIN


Interaccin estereoespecfica con el sustrato
No hay productos colaterales

ALTA
ESPECIFICIDAD
DE REACCIN
INTERACCIN
ESTEREO
ESPECFICA
CON SU
SUSTRATO

Los Substratos
se acercan a la Enzima
(sitio Activo)
Substratos
HO-

HEnzima

Los reactivos
interaccionan
con la enzima
(sitio activo)

Cambia la
configuracin de la
enzima

Substrato
de glucosa

Sitio de
enlace

La unin del sustrato produce un cambio conformacional


de la enzima hexoquinasa (cinasa), la cual es monomrica.

Se realiza la
reaccin
cataltica

Concent.

Leonor Michelis y Maud Menten (1913)

Tiempo

ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN
Vo = V

max

[S]

Km + [S]

Cintica enzimtica en funcin de la


concentracin de sustrato

Vmax

KM

Km de algunas enzimas
ENZIMA
Catalasa

SUSTRATO
H2O2

Hexoquinasa

Anhidrasa carbnicoa
Quimotripsina

Km (mM)
25.0

ATP

0.4

D-Glucosa

0.05

D-Fructosa

1.5

HCO3-

9.0

Gliciltirosinilglicina

108.0

N-Benzoiltirosinamida

2.5

-Galactosidasa

D-Lactosa

4.0

Treonina deshidrogenasa

L-Treonina

5.0

La KM es un parmetro de
Actividad Enzimtica
La KM es inversamente proporcional
con la actividad de la enzima.
Valor de KM grande, baja actividad
Valor de KM pequeo, alta activida

Enzimas: pueden catalizar reacciones donde hay 2 S =


Hexocinasa

ATP + Glucosa ADP + 6-fosfato de glucosa


2 Rutas
Desplazamiento Simple, los 2 S se unen a la E
A + B + E

EAB C + D

Doble desplazamiento o ping-pong


A + B + E AE BE + C
D

Determinacin Cuantitativa de la Cintica Enzimtica


1. La reaccin global
2. Procedimeinto analtico para determinar elS que
desaparece o el P que aparece
3. S el E requiere Cofactores (ines o coenzimas)
4. La dependencia de la actividad enzimtica con la
[S] o se la KM del S.
5. El pH ptimo
6. Un intervalo de temperatura en la que la E es
estable y muestra actividad elevada.

Actividad enzimtica y variacin del pH

Enzima

Vo

11

14

pH

Vo

Pepsina

1.5

Tripsina

7.7

Catalasa

7.6

Arginasa

9.7

Fumarasa

7.8

Ribonucleasa

7.8

Vo

37
85
Temperatura oC)

pH ptimo

Vo

10

50
100
Coenzima

10

30 50 70 100
Tiempo (min)

1.0 Unidad de Actividad Enzimtica (U):


La cantidad que transforma 1.0 mol (10-6 M) de S /min,
a 25 0C, en las condiciones de medida ptima.
Actividad especfica:
Es el no. de U de una E / mg de protena.
Es decir: una medida de la pureza de la E.
Al purificarla, el valor llega a un mximo y es estable.
Nmero de recambio
No. de molculas de S transformadas /unidad de tiempo,
por una molcula de E ( o por un solo sitio cataltico)
Enzima

No. de Recambio

Anhidrasa carbnica
B-Amilasa
B-Galactosidasa
Fosfoglucomutasa

36 000 000
1 000 000
12 000
1 240

Vmax?
KM?

Transformacin de los Dobles Recprocos


(Lineweaver-Burk)

pendiente

Grfica de Eadie-Hofstee
Vmax

Vo

V max
KM
Vo
[S]

Cuando:
Vo= Vmax Todos los sitios activos estn
ocupados y no hay molculas de E libre.
KM= [S] S... Vmax
KM representa la cantidad de sustrato
necesaria para fijarse a la mitad de la E
disponible y producir la mitad de la Vmax
KM representa la concentracin del sustrato en
una clula

Inhibidores
Reactivos qumicos especficos que pueden
inhibir a la mayor parte de las enzimas.
Irreversibles
INHIBIDORES
Reversibles

Inhibidor Irreversible
Inhibicin permanente
Unin irreversible por medio de enlaces covalentes.
Modificaciones qumicas de los gps. catalticos.
Modificada la enzima, est siempre inhibida.
Para distinguirlo de los reversible se someten a
dilisis y si no se separan enzima e inhibidor, ste es
permanente.

Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo
(DFP)
Acetilcolina

Acetilcolinesterasa

Acetato + Colina

Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo
(DFP)

Acetilcolinesterasa
Tripsina
Elastasa
Fosfoglucomutasa
Cocoonasa (larvas de
gusanos de seda
Malatin

Fluorofosfato de diisopropilo
(DFP)

Iodoacetamida

Serina

Cistena
Histidina

Inhibidor Reversible
La unin del inhibidor y la enzima es
reversible.
Al quitar el inhibidor del medio, se recupera la
actividad.
Hay 3 tipos:
Competitiva
No Competitiva
Acompetitiva (Alostrica)

Antibiticos
Insecticidas
Hervicidas
Venenos
Diferentes Medicamentos

Inhibicin
enzimtica Dolor
Inflamacin
Infecciones virales
Cncer

Inhibicin Competitiva

Vmax igual
KM diferente

Inhibidores Competitivos
Malonato
Malonato

Deshidrogenasa
Deshidrogenasadel
delcido
cidosuccnico
succnico

Sulfas
Sulfas

Infecciones
Infeccionesmicrobianas
microbianas

Antihipertensores:
Antihipertensores:Captopril
CaptoprilyyEnalopril
Enalopril
Alopurinol
Alopurinol

Controla
Controlalalagota
gota

Fluoruracilo
Fluoruracilo

Cncer
Cncer

Inhibicin No Competitiva
El inhibidor NO se une al sitio activo

NO se puede revertir con un exceso de sustrato

Vmax diferente
KM igual

Cinticas de Inhibicin
Competitivo
Vmax igual
KM diferente

1
V

No competitivo
Vmax diferente
KM igual

No inhibitor

1/[S]

Inhibicin acompetitiva
El inhibidor se une a una SUBUNIDAD reguladora

La subunidad cataltica
une al sustrato y
cataliza la reaccin