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COMPLEJO MAYOR DE HISTOCOMPATIBILIDAD: MR1 NEFROLOGIA: JUAN PABLO ARAUJO ZUÑIGA
COMPLEJO MAYOR DE
HISTOCOMPATIBILIDAD:
MR1 NEFROLOGIA: JUAN PABLO ARAUJO ZUÑIGA

El MHC codifica tres clases de

El MHC codifica tres clases de

moléculas principales

moléculas principales

El MHC codifica tres clases de El MHC codifica tres clases de moléculas principales moléculas principales

MHC es un conjunto de genes dispuestos dentro de una tira continua de DNA en el cromosoma 6 en seres humanos. Este se

denomina complejo HLA en el ser humano.

El MHC codifica tres clases de El MHC codifica tres clases de moléculas principales moléculas principales
Las Las moléculas moléculas MHC MHC clase clase I I y y clase clase II II

Las Las moléculas moléculas MHC MHC

clase clase

I I

y y

clase clase

II II

comparten comparten características características estructurales estructurales

y y ambas ambas participan participan en en el el procesamiento procesamiento

y y

la la

presentación presentación

del del

antígeno. antígeno.

Al Al contrario contrario las las moléculas moléculas de de clase clase III III a a

cuyos cuyos lados lados se se encuentran encuentran las las regiones regiones

clase clase

I I

y y

clase clase

II II

codifica codifica

moléculas moléculas

críticas críticas para para la la función función inmunitaria inmunitaria pero pero

tienen tienen

 

poco poco

en en

común común

como como

las las

moléculas moléculas clase clase I I o o II. II.

REPRESENTACION ESQUEMATICA REGION HLA

REPRESENTACION ESQUEMATICA REGION HLA N Engl J Med 2000, 343(10)
REPRESENTACION ESQUEMATICA REGION HLA N Engl J Med 2000, 343(10)

N Engl J Med 2000, 343(10)

 

Locus genético (brazo corto del cromosoma 6) que codifica para los

Locus genético (brazo corto del cromosoma 6) que codifica para los

antígenos de histocompatibilidad

antígenos de histocompatibilidad

Locus genético (brazo corto del cromosoma 6) que codifica para los Locus genético (brazo corto del
Locus genético (brazo corto del cromosoma 6) que codifica para los Locus genético (brazo corto del
•Marcadores de "lo propio" (el yo Función Moléculas del inmunológico). MHC •Intervienen en la educación tímica
•Marcadores de "lo propio" (el yo
Función
Moléculas del
inmunológico).
MHC
•Intervienen en la educación tímica de los
linfocitos T
•Presentan los péptidos antigénicos para la
activación de los linfocitos T
CLASIFICACIÓN
Variabilidad
genética
Poligéni co
Poligéni
co

es

Polimórf co
Polimórf
co
Varios genes Estructur para cada al-mente clase de diferentes molécula
Varios genes
Estructur
para cada
al-mente
clase de
diferentes
molécula
Genes se heredan como haplotipo
Genes se
heredan como
haplotipo

Bloque de genes ,

poco

entrecruzamiento

Posee CLASE I CLASE II CLASE II Se encuentra en Se encuentra en Todas las células
Posee
CLASE I
CLASE II
CLASE II
Se encuentra en
Se encuentra en
Todas las células
Macrófagos y linfocitos B y
Macrófagos y linfocitos B y
excepto los hematíes
T estimulados por
T estimulados por
antígenos
antígenos
Codificados por el locus:
Codificado por el locus
TAP
TAP
HLA-A, -B y -C
HLA-D
Control de la
Codifica
Cadena pesada
Cadena ligera
respuesta
proteínas para
inmunitaria
procesar
Glucoproteína
-2-
antígenos
transmembran
microglobulina
Cadena pesada
Cadena ligera
a
(a)
(b)
b1 y b2
Reconocido por
a1: abierto
son
a2:
Linfocitos T
plegadas
plegado
CD8
De la
Reconocidos por
Subpoblació
n citotóxica
Linfocitos T
CD4
Regulador,
productor de
toxinas

CLASE III

CLASE III

Codifica proteínas

Codifica proteínas

del complemento y

del complemento y

citocinas citocinas como
citocinas
citocinas
como

LP

LP

N Engl J Med, vol 343(10) N Engl J Med, vol 343(10)
N Engl J Med, vol 343(10) N Engl J Med, vol 343(10)
N Engl J Med, vol 343(10) N Engl J Med, vol 343(10)
N Engl J Med, vol 343(10)
N Engl J Med, vol 343(10)

Patrones de Expresión

 

HLA clase I: se expresan en casi todas las células nucleadas

HLA clase II: expresión restringida. Se encuentran en los Linfocitos

B, Linfocitos T activados, células dendríticas, células tímicas

epiteliales. Las células endoteliales pueden ser inducidos para que

las expresen.

MOLECULAS DEL CMH

MOLECULAS DEL CMH CAPACIDAD DE ASOCIAR PEPTIDOS Y PRESENTARLOS EN LA SUPERFICIE CELULAR

CAPACIDAD DE ASOCIAR PEPTIDOS

Y PRESENTARLOS

EN LA SUPERFICIE CELULAR

INTERACCION PEPTIDO Y MOLECULA HLA CLASE I

INTERACCION PEPTIDO Y MOLECULA HLA CLASE I
N Engl J Med 2000, 343(10)

N Engl J Med 2000, 343(10)

N Engl J Med 2000, 343(10)

N Engl J Med 2000, 343(10)

MOLECULAS HLA CLASE I Y

II

CLASE I CLASE II Heterodimero 44 kDa y 12 kDa Practicamente en todas las celulas Presenta
CLASE I
CLASE II
Heterodimero
44 kDa y 12 kDa
Practicamente en todas
las celulas
Presenta a LT CD8+
Une peptidos de 8-10
residuos

Heterodimero 32 kDa y 28 kDa LB, Macrofagos C Dendriticas, LT act Presenta a LT CD4+ Peptidos de 12- 25 residuos

TABLA 2 : CARACTERISTICAS DE PEPTIDOS QUE UNEN A MOLECULAS

HLA CLASE I Y II .

CARACTERISTICA

CLASE I

8-10

CLASE II

12-25

DE PROTEINAS FRECUENTES INTERACCION CHAPERONAS
DE PROTEINAS
FRECUENTES
INTERACCION
CHAPERONAS

LONGITUD DEL PEPTIDO

FUENTE DE DEGRADACION

CITOPLASMATICA

ENDOSOMAL/

LISOSOMAL

POSICIONES DE ANCLAJE DE

P2 y P8 (P9)

P1, P4, P6 y P9

CADENAS LATERALES MAS

INTERACCIONES CONSERVADAS

N y C TERMINAL

A LO LARGO DEL

PEPTIDO

RETICULO

ENDOPLASMICO

COMPARTIMENTO

ENDOCITICO

CALRETICULINA,

TAPASINA, TAP

CADENA INVARIANTE

HLA-DM

COMPLEJO MAYOR DE HISTOCOMPATIBILIDAD

COMPLEJO MAYOR DE HISTOCOMPATIBILIDAD POLIGENICO Varios genes MHC clase I y clase II codifican diferentes tipos

POLIGENICO

Varios genes MHC clase I y clase II codifican diferentes tipos de moléculas MHC

POLIMORFICO

Variación mayor de 1% en un locus, en una población de individuos.

Polimorfismo del MHC

Variación >1% en un locus, en una población

3005 2365 1848 A B C No de polimorfismos
3005
2365
1848
A
B
C
No de
polimorfismos

Cada variante polimórfica es llamada alelo

   

1546

 

Clase II

   

121

3

 

23

   

32 69

 
   
1546 Clase II 121 3 23 32       DR DR DP
   
1546 Clase II 121 3 23 32       DR DR DP
   
1546 Clase II 121 3 23 32       DR DR DP
 

DR

DR

 

DP

 

DQ

 

Clase I

NUMERO DE ALELOS HLA

NO CLASICOS

2006

LOCUS HLA-E HLA-F HLA-G HLA-DMA HLA-DMB ALELOS 8 20 23 4 7 TAP-1 7 TAP-2 4
LOCUS
HLA-E
HLA-F
HLA-G
HLA-DMA
HLA-DMB
ALELOS
8
20
23
4
7
TAP-1
7
TAP-2
4
MICA
60
MICB
25
DOA
12
DOB
9
NOMENCLATURA  SEROLOGICA: Antigenos y subtipos o split  BIOLOGIA MOLECULAR Grupos de alelos y alelos

NOMENCLATURA

SEROLOGICA:

Antigenos y subtipos o split

BIOLOGIA MOLECULAR Grupos de alelos y alelos

Alelo:aquel cuyo gen se ha secuenciado Uso de * para gen secuenciado

CLASIFICACION

SEROLOGICA

 

Los Antígenos son designados con números

Existen subtipos de antígenos:

A-19: A-29, A30, A31, A32, A33, A74

B-15: B62, B63, B75, B76, B77

DR3: DR17, DR18

Ej:HLA-A23(9)

23 SUBTIPO

9

ANTIGENO

NOMENCLATURA ALELOS HLA

HLA HLA-DRB1
HLA
HLA-DRB1

REGION HLA Y PREFIJO PARA UN GEN HLA

LOCUS HLA PARTICULAR

HLA-DRB1*13

GRUPO DE ALELOS QUE CODIFICAN ANTIGENO DR13

ALELO HLA ESPECIFICO

HLA-DRB1*1301

HLA-DRB1*130102 ALELO QUE DIFIERE EN UNA MUTACION SINONIMA

DESIGNACION DE ALELOS HLA. EJEMPLOS

DESIGNACION DE ALELOS HLA. EJEMPLOS ALELOS HLA ESPECIFICIDAD SEROLOGICA A*0101 al 0102 A*0201 al 0213 A*0301

ALELOS HLA

ESPECIFICIDAD

SEROLOGICA A*0101 al 0102 A*0201 al 0213 A*0301 al 0302

A1

A2

A3

A23(9)

A*2301

B*0701 al 0704 B*0801 al 0802

B7

B8

B*1401

B14

B65(14)

B*1402

DESIGNACION ALELOS HLA. EJEMPLOS

DESIGNACION ALELOS HLA. EJEMPLOS ALELOS HLA-DR ESPECIFICIDAD SEROLOGICA - DR1 DRA*0101 al 0102 DRB1*0101 al 0104

ALELOS HLA-DR

ESPECIFICIDAD

SEROLOGICA

-

DR1

DRA*0101 al 0102

DRB1*0101 al 0104

DRB1*1501 al 1504

DR15(2)

DR16(2)

DRB1*1601 al 1606

DRB3*0101

DR52

DRB3*0201 al 0202

DR52

DRB3*0301

DR52

ESQUEMA GENES HLA CLASE II

CLASE II

CLASE III

CLASE I

locus

DP

DQ

DR

C'

B

C

A

gen 

cadena

DPβ/DPα

DQ β/DQα

DR β/DRα

ESQUEMA GENES HLA CLASE II CLASE II CLASE III CLASE I locus DP DQ DR C'

Fenotipo: antígenos o alelos identificados

 Fenotipo: antígenos o alelos identificados  Genotipo : antígenos o alelos identificados asociados a un

Genotipo: antígenos o alelos identificados asociados a un cromosoma

Requiere estudio familiar Haplotipo: combinación de alelos en un cromosoma Desequilibrio de ligamiento

ENFERMEDADES ASOCIADAS A HLA

           

ENFERMEDAD DE BEHÇET’S

HLA-B51

ESPONDILITIS ANQUILOSANTE HLA-B27

HLA-DR3

DIBETES MELLITUS INSULINO DEPENDIENTE

HLA-DR4

HLA-DQ8

ARTRITIS REUMATOIDE DERMATITIS HERPETIFORME PENFIGO VULGAR MIASTENIA GRAVIS ESCLEROSIS MULTIPLE NARCOLEPSIA ENFERMEDAD CELIACA

HLA-DR4

HLA-DR3

HLA-DR4

HLA-DR3 HLA-B8

DR2

HLA-DQB1*0602/ DQA1*0102 HLA-DQB1*0201/ DQA1*0501

LABORATORIO DE TRASPLANTES DE ORGANOS
LABORATORIO DE
TRASPLANTES DE ORGANOS

TRASPLANTE

TRASPLANTE ES LA TRASFERENCIA DE CELULAS, TEJIDOS U ORGANOS VIVOS DE UN DONANTE A UN RECEPTOR

ES LA TRASFERENCIA DE CELULAS, TEJIDOS U ORGANOS VIVOS DE UN DONANTE A UN RECEPTOR CON LA INTENCION DE MANTENER LA INTEGRIDAD FUNCIONAL DEL MATERIAL TRASPLANTADO EN EL RECEPTOR

TIPOS DE TRASPLANTE POR EL LUGAR - ortotópico: se transfere a una zona anatómica normal (corazón,

TIPOS DE TRASPLANTE

POR

EL LUGAR

-

ortotópico: se transfere a una zona anatómica

normal (corazón, córnea)

 

-

heterotópico:

se

transfere

a

una

zona

anatómica distinta (riñón en fosa ilíaca)

TIPOS DE TRASPLANTE

TIPOS DE TRASPLANTE especie POR RELACION GENETICA - Autoinjerto (autólogo): transferencia del propio tejido de un

especie

POR RELACION GENETICA

- Autoinjerto (autólogo): transferencia del propio tejido de un lugar a otro (injerto óseo, piel)

- Singénico (isoinjerto): entre gemelos idénticos

(homoinjerto):

distintos

entre

pero

de

miembros

la

misma

- Aloinjerto

genéticamente

- Xenoinjerto (heteroinjerto): entre miembros de especies diferentes

TIPOS DE TRASPLANTES POR EL TIPO DE DONANTE - Vivo relacionado: hermanos, padres - Vivo no
TIPOS DE
TRASPLANTES
POR EL TIPO DE DONANTE
-
Vivo relacionado: hermanos, padres
-
Vivo
no
relacionado:
registros
internacionales
-
Cadavérico

nacionales,

PRUEBAS HLA Y TRASPLANTE

PRUEBAS HLA Y TRASPLANTE Cuando se trasplanta un tejido se transfere Ag diferentes para el receptor

Cuando se trasplanta un tejido se transfere Ag

diferentes para el receptor y esto induce

respuestas inmunes de tipo humoral y celular

que conducen al rechazo del trasplante

PRUEBAS HLA Y TRASPLANTE

La - - -
La
-
-
-

gravedad

del

rechazo

puede

reducirse

mediante:

Pruebas de compatibilidad entre el donante y

receptor

Administración de esteroides para disminuir la

respuesta humoral

Inhibición de la respuesta inmune celular con

Ciclosporina A

FUNCION BIOLOGICA DE LAS MOLECULAS DE HISTOCOMPATIBILIDAD

FUNCION BIOLOGICA DE LAS MOLECULAS DE HISTOCOMPATIBILIDAD Las moléculas del CMH están implicadas en la regulación

Las moléculas del

CMH

están implicadas en la

regulación de la

respuesta inmune. El reconocimiento de Ag extraños requiere la

presentación del Ag procesado por parte del CMH en la

superficie celular y una ulterior interacción intercelular

PROCEDIMIENTOS EN EL LABORATORIO DE HISTOCOMPATIBILIDAD

3.- Suero
3.- Suero

TOMA DE MUESTRA

1.- Sangre desfbrinada

Linfocitos totales

HLA clase I

2.- Sangre anticoagulada

Linfocitos B

HLA clase II

panel inmunológico

SEPARACIONDE LINFOCITOS

TOTALES

Separación por gradiente de densidad

eritrocitos

granulocitos

linfocitos

plaquetas

1.093 – 1.096 1.087 – 1.092

1.077

1.040

SEPARACIONDE LINFOCITOS TOTALES Separación por gradiente de densidad eritrocitos granulocitos linfocitos plaquetas 1.093 – 1.096 1.087

SEPARACION DE LINFOCITOS B

Perlas inmunomagnéticas con Ac anti-linfocitos B

SEPARACION DE LINFOCITOS B Perlas inmunomagnéticas con Ac anti-linfocitos B Consiste en microesferas paramagnéticas que tienen

Consiste en microesferas paramagnéticas que tienen adheridas en su

superficie anticuerpos monoclonales específicos para HLA clase II que

se encuentran en los linfocitos B (CD19) y luego de ser sometidos a un

campo magnético van a ser separados de los demás elementos celulares

SEPARACION DE LINFOCITOS B Perlas inmunomagnéticas con Ac anti-linfocitos B Consiste en microesferas paramagnéticas que tienen
SEPARACION DE LINFOCITOS B Perlas inmunomagnéticas con Ac anti-linfocitos B

SEPARACION DE

LINFOCITOS B

Perlas inmunomagnéticas con Ac anti-linfocitos B

SEPARACION DE LINFOCITOS B Perlas inmunomagnéticas con Ac anti-linfocitos B
SEPARACION DE LINFOCITOS B Perlas inmunomagnéticas con Ac anti- linfocitos B

SEPARACION DE

LINFOCITOS B

Perlas inmunomagnéticas con Ac anti- linfocitos B

SEPARACION DE LINFOCITOS B Perlas inmunomagnéticas con Ac anti- linfocitos B

PRUEBA DE LA MICROLINFOCITOTOXICIDAD

Es una reacción Ag-Ac dependiente de complemento.

PRUEBA DE LA MICROLINFOCITOTOXICIDAD Es una reacción Ag-Ac dependiente de complemento. Se enfrentan los linfocitos cuyo

Se enfrentan los linfocitos cuyo HLA se quiere determinar con una

batería de antisueros específicos (anti HLA).

Si los linfocitos poseen el Ag reconocido por el Ac se formará un

complejo Ag-Ac el mismo que en presencia de C’ activará la cascada

con el consiguiente daño de la membrana celular

PRUEBA DE LA MICROLINFOCITOTOXICIDAD Es una reacción Ag-Ac dependiente de complemento. Se enfrentan los linfocitos cuyo
Esta reacción se evidencia incorporando un colorante de exclusión vital. Las células lisadas incorporan el colorante
Esta reacción se evidencia incorporando un colorante de exclusión vital. Las células lisadas incorporan el colorante

Esta reacción se evidencia incorporando un colorante de exclusión vital. Las células lisadas incorporan el colorante y las células que no poseen el Ag permanecerán intactas

5 ul parafina líquida 1 ul antisuero específico 1 ul suspensión celular Reposo 30’ a T°
5
ul parafina líquida
1
ul antisuero específico
1
ul suspensión celular
Reposo 30’ a T° ambiente
5
ul complemento
Reposo 60’ a T° ambiente
Coloración
Lectura e interpretación

TECNICA DE MICROLINFOCITOTOXICIDAD

5 ul parafina líquida 1 ul antisuero específico 1 ul suspensión celular Reposo 30’ a T°

COLORACION DE LINFOCITOS AISLADOS POR GRADIENTE DE DENSIDAD

- -
-
-

Se agrega un colorante de exclusión vital como la Eosina Y que tiene

la propiedad de penetrar en las células cuya membrana celular ha

sido dañada (cél. muertas) y no en aquellas células que mantienen

su membrana intacta (cél. vivas).

Se utiliza Microscopio de Contraste de Fase de Objetivos Invertidos.

Células muertas: - membrana celular dañada

  • - ingresa el colorante

  • - aumentan de tamaño

  • - opacas y oscuras

Células vivas:- membrana celular intacta

  • - no ingresa el colorante

  • - mantiene su tamaño

  • - refringentes

COLORACION DE LINFOCITOS AISLADOS POR PERLAS INMUNOMAGNETICAS

COLORACION DE LINFOCITOS AISLADOS POR PERLAS INMUNOMAGNETICAS Se utiliza una mezcla doble de colorantes fluorescentes. Se

Se utiliza una mezcla doble de colorantes fluorescentes.

Se utiliza Microscopio de Fluorescencia.

Naranja de acridina

490 nm 535 nm fluorescencia verde

Bromuro de etidio

490 nm 605 nm fluorescencia roja

-Células vivas:

verde

-Células muertas:

roja

CELULAS VIVAS

( REACCION NEGATIVA )

CELULAS VIVAS ( REACCION NEGATIVA )

CELULAS MUERTAS ( REACCION POSITIVA )

CELULAS MUERTAS ( REACCION POSITIVA )
INTERPRETACION Células muertas SCORE Reacción 0 – 10 % 1 Negativo 11 – 20 % 2
INTERPRETACION
Células muertas
SCORE
Reacción
0 – 10
%
1
Negativo
11 – 20
%
2
Negativo
21
– 50 %
4
Dudoso
51
– 80
%
6
Positivo
débil
81 – 100
%
8
Positivo
Se obtiene una especificidad ó tipificación antigénica cuando la
cantidad
de células muertas supera el 50% (puntaje 6 – 8)
MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 1

MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 1

MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 1
MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 2

MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 2

MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 2
MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 4

MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 4

MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 4
MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 6

MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 6

MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 6
MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 8

MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 8

MICROLINFOCITOXICIDAD SCORE 8

PANEL INMUNOLOGICO

Esta
Esta

prueba

permite

categorizar el

nos

comportamiento inmunológico del paciente, es decir, clasificarlo según su nivel de respuesta en tres grupos:

no respondedores:

0 % < 50 % > 50 %

respondedores:

hiperrespondedores:

Panel Anticuerpos Anti HLA

Panel Anticuerpos Anti HLA
Panel Anticuerpos Anti HLA
Panel Anticuerpos Anti HLA

Panel Anticuerpos Anti HLA

0/48 = 0% No Respondedor
0/48 = 0%
No Respondedor
Panel Anticuerpos Anti HLA 0/48 = 0% No Respondedor 12/48 = 25% 16/48 = 33% 40/48

12/48 = 25%

Panel Anticuerpos Anti HLA 0/48 = 0% No Respondedor 12/48 = 25% 16/48 = 33% 40/48

16/48 = 33%

Panel Anticuerpos Anti HLA 0/48 = 0% No Respondedor 12/48 = 25% 16/48 = 33% 40/48

40/48 = 83%

Respondedor

Respondedor

Hiper

Respondedor

SEROTECA

SEROTECA La seroteca es de suma importancia porque nos permite contar con los sueros de los

La seroteca es de suma importancia porque nos permite contar con los sueros de los pacientes en lista de espera para un eventual operativo de trasplante con donante cadáver, además nos permite realizar estudios retrospectivos.

Los sueros serán preservados en pequeñas alícuotas a T° entre -20 a -60°C, debidamente identificado y organizados en cajas.

Ejemplo:

Paciente: Antonio Pinto Pineda

Fecha: 14.12.2008 Caja N° 15 posición D5 A B C D E F G H 1
Fecha: 14.12.2008
Caja N° 15 posición D5
A
B
C
D
E
F
G
H
1
2
3
4
5
X
6
7
8
CROSS MATCH Es la prueba para identificar Ac citotóxicos específicos en el receptor contra los Ag

CROSS MATCH

Es la prueba para identificar Ac citotóxicos específicos en el receptor contra los Ag de sus posibles donantes

El suero linfocitos

del receptor se hace reaccionar

con

los

del donador

y

se

sigue

la

técnica

de

microlinfocitotoxicidad

CROSS MATCH

de tales anticuerpos se ha asociado
de
tales
anticuerpos
se
ha
asociado
La presencia
La
presencia

a

rechazos

hiperagudos ó acelerados, por lo que una prueba cruzada positiva se

considera una contraindicación para llevar a cabo el trasplante.

CROSSMATCH

TRASPLANTE RENAL Crossmatch Crossmatch Negativo Negativo Procede Procede trasplante trasplante Crossmatch Crossmatch Positivo Positivo Contraindicación Contraindicación
TRASPLANTE
RENAL
Crossmatch
Crossmatch Negativo
Negativo
Procede
Procede trasplante
trasplante
Crossmatch
Crossmatch Positivo
Positivo
Contraindicación
Contraindicación