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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE

CIUDAD JUREZ
MDICO CIRUJANO

MEDIOS DE CULTIVO

MICROBIOLOGA I
Catedrtico: M.C. Georgina Escudero Hermosillo
INTEGRANTES DEL EQUIPO DE LABORATORIO:

Sabrina Selene Lpez Contreras 128191


Victor Omar Gardea Granillo 128631
Brando Paul Merino Miramontes 128185
Rafael Macias Rubio

CONTENIDO:
1.Introduccin.
2.Agar Chocolate.
3.Agar CLED.
4.Agar BHI.
5.Agar cistina-telurito.
6.Agar Columbia.
7.Agar EMB.
8.Agar chocolate con Isovitalex y vancomicina.
9.Agar ADC.
10.
Agar Campy con sangre.
11.
Agar CNA.
12.
Agar glucosa de Sabouraud.
13.
Agar HE.
14.
Agar de MacConkey.
15.
Agar Mueller-Hinton.
16.
Agar nutritivo.
17.
Agar PEA.
18.
Agar SABHI.
19.
Agar salino manitol.
20.
Agar sangre.

22.Agar sangre con estra estafiloccica.


23.Agar sangre con disco de bacitracina.
24.Agar selectivo para estreptococos.
25.Agar Skirrow.
26.Agar SS.
27.Agar sulfito de bismuto.
28.Agar TCBS.
29.Agar Thayer-Martin.
30.Agar TSA.
31.Agar verde brillante.
32.Agar XLD.
33.Caldo con carne picada.
34.Caldo nutritivo.
35.Caldo para Gram negativos.
36.Caldo selenito f.
37.Caldo tetrationato.
38.Caldo tioglicolato.
39.Caldo tioglicolato Campy.
40.Caldo Todd-Hewitt con sangre y antibiticos.
41.Medio de Kligler .
42.
Bibliografa.

INTRODUCCIN
MEDIOS DE CULTIVO
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.
El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el
Medio de Cultivo.
El crecimiento de los microorganismos es el Cultivo.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de
cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son:
Temperatur
a

Grado de
humedad

Presin de
oxgeno

Acidez o
alcalinidad

Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de


crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.

Agar Chocolate

Componentes Principales Usos


Agar sangre, con la sangre
lisada (por calentamiento a
80C).
Los eritrocitos lisados liberan la
hemoglobina y otros nutrientes
como factor X (hemina) y factor
V (NAD).

Medio rico que permite el


crecimiento de una gran mayora
de los microorganismos, incluidos
los muy exigentes como Neisseria
y Haemophilus.

Agar CLED (cistina, lactosa, deficiente en


electrolitos)

Componentes
Principales
La
cistina
mejora
la
recuperacin
de
las
enterobacterias.
La lactosa y el indicador
permiten
distinguir
las
bacterias fermentadoras de
lactosa de no fermentadoras
de lactosa.
La deficiencia en electrolitos
limita el movimiento de
Proteus.

Usos
Es un medio diferencial
recomendado
para
el
anlisis bacteriolgico de
orina ya que en l crecen
profusamente
la
gran
mayora de las bacterias,
que provocan infecciones
urinarias.

Visualizacin De
Colonias
Fermentadoras de lactosa
se ven amarillas.
Las no fermentadoras se
ven incoloras.

Agar BHI brain-heart

Agar cistina-telurito

Agar Columbia

Agar EMB eosin-methylen blue

Agar chocolate con Isovitalex y vancomicina

Agar desoxicolato- citrato (ADC)

Agar Campy con sangre

Agar CNA (colistina, cido nalidxico)

Agar glucosa de Sabouraud

Aislamiento de hongos patgenos dermatofitos.


Selectivo.
No es diferencial.
Agentes inhibidores de bacterias:

Agar HE (agar entrico de Hektoen)


Aislamiento selectivo de Salmonella y
Shigella de muestras de heces o
hisopados rectales.
Selectivo
Diferencial
Inhibidores:

Incorpora lactosa y tiosulfato como agentes diferenciales.


Azul de bromotimol como indicador.

Agar de MacConkey
Aislamiento de bacterias gram negativas.
Selectivo y diferencial
Colorante
cristal
violeta
Sales
biliares

Gram positivas
Gram
positivas y
algunas gram
negativas

Agar Mueller-Hinton
Realizacin de las pruebas de sensibilidad a antibiticos
(Bauer-Kirby, dilucin en agar y test de psilon).

Agar nutritivo
Medio rico para el cultivo de microorganismos en
general, crecen una gran mayora, excepto algunos muy
exigentes.
No es diferencial.
Caldo nutritivo

Peptona
Triptona-soja
Infusin de cerebro y
corazn
Agar Brucella
Agar Columbia
Etc.

Agar

Agar PEA (alcohol feniletlico,


phenylethanol)
Aislamiento selectivo de cocos gram positivos.

Tambin para cocos gram positivos anaerobios


si se incuba en anaerobiosis.
Selectivo.
Si lleva sangre es diferencial.

Alcohol fenil-etilico

gram negativas

Tambin se puede aadir 5% sangre de


oveja.

Agar SABHI (agar base de Sabouraud,


infusin de cerebro y corazn)
Aislamiento optimo de Blastomyces
dermatitidis
e
Histoplasma
capsulatum.
Selectivo.
No es diferencial.

Agar salino manitol (SM, MS Manitol saline,


Medio de Champman
Medio selectivo para estafilococos debido a la
alta concentracin de cloruro sdico.
Sirve como indicativo de la presencia de
Staphylococcus aureus.

Agar sangre (AS BA, blood agar)


Aislamiento de la gran mayora de microorganismos, incluidos
algunos muy exigentes.
No permite el crecimiento de Neisseria y Haemophilus.
Diferencial.
Permite ver distintos tipos de hemolisis.

Agar sangre con disco de bacitracina

Agar sangre con estra estafiloccica


Compuestos: Agar sangre con una estra con
S.aureus. La beta hemlisis producida por S.
aureus libera factor V y factor X, permitiendo el
crecimiento de Haemophilus.
Uso: Identificacin de Haemophilus como colonias
satlites en la estra de Staphylococcus aureus.
Colonias: Colonias puntiformes satelitales de
Haemophilus.

Agar sangre con suplementos para


anaerobios
Es un medio rico, sin inhibidores, que permite el
desarrollo de gran cantidad de especies
anaerobias. Contiene un agar base, como el
agar Columbia, adicionado de sangre de oveja,
extracto de levadura, hemina y vitamina K.
Caractersticas: Diferencial, hemlisis.

Agar selectivo para estreptococos


Es una modificacin del agar sangre de
oveja. La beta hemlisis se observa
fcilmente. El medio es efectivo para la
siembra primaria de hisopos de garganta
para la deteccin de estreptococos del
grupo A.

Agar Skirrow
Preparado con una base como agar
brucela,
TSA
o
agar
Columbia,
enriquecida con sangre de oveja al 5% y
que
se
hace
selectivo
para
Campylobacter por la adicin de
vancomicina, polimixina y trimetoprim.

Agar SS (Salmonella-Shigella)
Medio de cultivo utilizado para el
aislamiento de Salmonella spp. y de
algunas especies de Shigella spp. a partir
de heces, alimentos y otros materiales en
los cuales se sospeche su presencia.
Es un medio de cultivo selectivo y
diferencial.

Agar sulfito de
bismuto
Medio para el aislamiento de Salmonella typhi. El
sulfato ferroso acta como indicador en la
produccin de sulfhdrico. El sulfito de bismuto y
el verde brillante inhiben considerablemente el
crecimiento de bacterias contaminantes.

S. typhi produce colonias con centro negro y


bordes claros que a las 48 horas adquieren halo
negro grisceo y brillo metlico.

Agar TCBS (tiosulfato, citrato, sales biliares)


Medio selectivo para especies del gnero Vibrio debido a
las altas concentraciones de tiosulfato sdico, citrato
frrico y cloruro sdico que inhiben a la mayora de las
enterobacterias.
Por la presencia de sacarosa y el azul de timol y
bromotimol como indicadores, permite diferenciar los
microorganismos que fermentan este azcar, como V.
cholerae (colonias amarillas), de otros que no lo
fermentan, como V. parahaemolyticus (colonias verdes), y,
entre stos, los productores de sulfhdrico (generalmente
Proteus).

Agar Thayer-Martin
Este medio es una modificacin del agar
chocolate para que sea selectivo para las
neiserias patgenas. Estas modificaciones
incluyen la adicin de colistina (para inhibir otras
bacterias Gram negativas), vancomicina (para
inhibir bacterias Gram positivas) y nistatina o
anisomicina (para inhibir levaduras).

Agar triptona-soja (TSA)


Medio rico de uso general para el crecimiento
de una amplia variedad de microorganismos.
Con frecuencia se utiliza como agar base para
otros tipos de medios, como agar sangre.
En este medio pueden crecer algunos
microorganismos exigentes como ciertas
especies de Brucella, Corynebacterium, Listeria,
Neisseria y Vibrio.

Agar verde brillante


Medio altamente selectivo para el
aislamiento de especies de Salmonella
excepto S. typhi y S. paratyphi. El verde
brillante es el agente inhibidor. Las
colonias de Salmonella se ven de color
rosa o blanco, o transparentes, sobre un
fondo rojo.

Agar XLD (xilosa, lisina, desoxicolato)

Este medio es diferencial y selectivo para


Salmonella y Shigella. No necesita ser
esterilizado en autoclave.
Componentes: Inhibidores: sales biliares a
alta concentracin, citrato y tiosulfato.
Lactosa, sacarosa y xilosa como agentes
diferenciales. Lisina como agente diferencial.
Tiosulfato
y
citrato
como
agentes
diferenciales. Indicador: rojo fenol.

La fermentacin de la Xilosa, lactosa y sucrosa


genera la produccin de acido provocando un
cambio de color en el medio de rojo a amarillo.
Salmonella : Colonias rojas con centro negro.
Shigella: Colonias rojas.
E.coli: Colonias grandes, amarillas, algunas cepas
pueden ser inhibidas.
Enterobacter/ Klebsiella: Colonias amarillas,
mucoides.
Proteus: Colonias rojas a amarillas, muchas cepas
presentan centro negro.

Caldo con carne picada


Este medio se emplea para enriquecer y
conservar el desarrollo de bacterias
anaerobias. Los trozos de carne proporcionan
un sustrato proteico para las enzimas
proteolticas, que actan como sustancias
reductoras manteniendo un potencial de
xido-reduccin bajo y de algn modo evitan
que las bacterias de crecimiento rpido
sobrepasen a las formas ms lentas.

Caldo nutritivo
Medio de cultivo utilizado para propsitos
generales,
para
el
desarrollo
de
microorganismos con escasos requerimientos
nutricionales.
Su
uso
est
descripto
en
muchos
procedimientos para el anlisis de alimentos,
aguas y otros materiales de importancia
sanitaria.

Caldo para Gram negativos


Caldo
GN
de
enriquecimiento
est
recomendado para el cultivo selectivo de
microorganismos Gran-negativo a partir de
muestras clnicas.
Frmula (en gramos por litro):
Triptosa 20.00
D-Manitol 2.00
Citrato Sdico 5.00
Fosfato Monopotasico 1.50
Cloruro Sdico 5.00
Dextrosa 1.00
Fosfato Dipotasico 4.00
Desoxicolato Sdico 0.50
Final pH 7.0 0.2 a 25C

Procedimiento:
1.- Inocular e Incubar en condiciones
aerbicas a 35 2C durante 6-24
horas.
2.- Despus de incubacin, Subcultivar
en placas de Agar MacConkey, Agar SS,
Agar XLD Agar Cromogenico
Salmonella.
3.- Incubar a 35 2C durante 18 24
horas.

PRINCIPIO Y APLICACIN CALDO GN DE


ENRIQUECIMIENTO
Fue desarrollado por Hajna para el
aislamiento y cultivo de microorganismos
Gram-negativos. Est recomendado para
la deteccin de Salmonella y Shigella a
partir de muestras clnicas.

Caldo selenito F
Fundamento:
Este
caldo
selectivo
favorece
el
crecimiento
de
Salmonella.
spp.
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo
bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, el selenito de sodio inhibe la flora
Gram positiva y la mayora de la flora entrica excepto Salmonella spp. durante las primeras 812 horas de incubacin.

Siembra:
Frmula (en gramos por
litro):
Peptona 5.0
Lactosa 4.0
Fosfato de sodio 10.0
Selenito de sodio 4.0
pH final: 7.0 0.2

Materia fecal: a un tubo con 10-15 ml de


caldo selenito, agregar 1-2 ml de una
suspensin de materia fecal.
Tejido infectado: macerar 1-2 g de tejido en
10-15 ml de caldo selenito, usando una
varilla estril.
Orina: a un tubo con unos 5 ml de caldo
selenito doble concentracin, agregar igual
volumen de orina.

Caractersticas del medio:


Medio preparado: mbar claro,
traslcido.

Incubacin:
A 35-37 C, durante 16-24 horas,
en aerobiosis.

Caldo tetrationato
Medio de cultivo utilizado para el
enriquecimiento selectivo de Salmonella
spp. a partir de heces, orina, alimentos y
otros materiales de importancia sanitaria.
Fundamento:
El medio de cultivo contiene peptona que provee los nutrientes necesarios
para el desarrollo bacteriano, y carbonato de sodio que neutraliza y
absorbe metabolitos txicos.

Frmula (en gramos por


litro):

Peptona 5.0
Sales biliares 1.0
Carbonato de calcio 10.0
Tiosulfato de sodio 30.0

pH final: 8.4 0.2


Solucin iodo iodurada:
Iodo 6.0
Ioduro de potasio 5.0
Agua 20.0

Siembra:
Puede realizarse la
siembra partiendo de
un
caldo
de
preenriquecimiento o
en
forma
directa
conservando
la
proporcin 1:10.

Incubacin:

Caractersticas
medio:

Durante 12-24
horas a 35-37
C,
en
aerobiosis.

Medio
suspensin
lechosa.

del

preparado:
blanco

Caldo tioglicolato
Este medio
de cultivo
fue
descripto
originalmente por Brewer. En microbiologa
clnica se usa por su capacidad de favorecer el
desarrollo
de
una
gran
variedad
de
microorganismos aerobios y anaerobios.
Fundamento:
Tiene por sus componentes la
calidad nutricional del caldo triptena
soya. Este permite el desarrollo de
una
amplia
variedad
de
microorganismos,
incluidos
los
nutricionalmente exigentes.

Frmula (en gramos por


litro):
Triptena 17.0
Peptona de soya 3.0
Glucosa 6.0
Cloruro de sodio 2.5
Tioglicolato de sodio 0.5
Agar 0.7
L-cistina 0.25
Sulfito de sodio 0.1
pH final: 7.0 0.2

Incubacin:
El tiempo, temperatura y condiciones de
incubacin dependern del microorganismo
que
se
quiera
recuperar.

Siembra:
Segn la muestra a analizar:
Muestras lquidas: agregar 1 o 2 gotas de la
muestra a tubos conteniendo medio de
cultivo.
Tejidos y otras muestras slidas: macerar
en caldo estril. Luego sembrar de la misma
manera que para muestras lquidas.
Hisopos: insertarlos en el medio de cultivo,
luego de haber sembrado el medio slido
apropiado.
Para el cultivo de anaerobios, antes de
sembrar, eliminar el oxgeno presente,
mediante el hervido de los tubos con las
tapas flojas, y luego enfriarlos a temperatura
ambiente con las tapas bien cerradas.

Caractersticas del medio:


Medio preparado: mbar claro
ligeramente opalescente.

Caldo tioglicolato Campy

Medio de apoyo selectivo para la


recuperacin
de
especies
de
Campylobacter. Se trata de un caldo
tioglicolato suplementado con una
concentracin aumentada de agar y
antibiticos.

Caldo Todd-Hewitt con sangre y antibiticos

Fundamento:
Suplemento estril liofilizado que contiene sulfato de colistina y cido
nalidxico y al ser agregado el contenido de un vial al Caldo Todd
Hewitt se obtiene una concentracin final de colistina 10 ug/ ml y cido
nalidxico 15 ug/ml.

Uso:
El agregado de antimicrobianos al caldo Todd Hewitt, se utiliza para
favorecer la recuperacin del Estreptococo Grupo B cuando se
procesan muestras de tracto genital femenino.

Frmula (en gramos por litro):


Siembra:

Infusin cerebro corazn 3.10


Peptonam20.0
Glucosa 2.0
Cloruro de sodio 2.0
Fosfato disdico 0.4
Carbonato de sodio 2.5
Sulfato de colistina 0.010
Acido nalidxico 0.015

Las
muestras
clnicas
recomendadas son el hisopado de
introito vaginal y el hisopado
anorectal. Tambin se puede
realizar el hisopado de fondo de
saco posterior .Colocar el hisopo
en medio de transporte Stuart o
Amies para mantener la viabilidad
de los microorganismos durante su
envo al laboratorio. Descargar el
contenido del hisopo en el caldo.

pH final: 7.8 0.2


Caractersticas del producto:
Color
blanco,
homogneo.

aspecto

Almacenamiento:
10-35 C.

Interpretacin de los resultados:


El crecimiento microbiano se observa por turbidez.

Medio de Kligler
Medio de cultivo frecuentemente usado en
microbiologa
de
alimentos
para
la
diferenciacin de enterobacterias, en base a la
fermentacin de glucosa y lactosa, y a la
produccin de cido sulfhdrico.

Siembra:
Frmula (en gramos por litro):
Peptona de carne 13.0
Cloruro de sodio 5.0
Lactosa 10.0
Tripteina 10.0
Glucosa 1.0
Citrato de hierro y amonio 0.5
Tiosulfato de sodio 0.3
Rojo de fenol 0.025
Agar15.0
pH final: 7.3 0.2

A partir de un cultivo puro del


microorganismo en estudio, sembrar el
medio de cultivo, picando el fondo y
extendiendo sobre la superficie del
medio.

Incubacin:
A 35-37C durante 24 horas, en
aerobiosis.
Caractersticas
Medio preparado: rojo

del

medio:

Resultados:
1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el
microorganismo
solamente
fermenta
la
glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el
microorganismo
fermenta
glucosa,
y
lactosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el
microorganismo
es
no
fermentador
de
azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo,
indica
que
el
microorganismo
produce
gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo
produce cido sulfhdrico.

Bibliografa:
LABORATORIOS BRITANIA SOCIEDAD ANONIMA, 2014, productos de
cultivo,
http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/nutritivocaldo.htm
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/verdebriagar.htm
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/tripteinasoyagar.htm
http://www.britanialab.com.ar/espanol/k05_02.html
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/tcbsmedio.htm
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/salmoshigagar.htm
Luis Felipe Higuita Gutirrez Escuela de microbiologa, 2013, Bacitracina,
http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/file.php/743/Bacteriologia
Pruebas_de_laboratorio/Bacitracina.html
Universidad de Sevilla, 2012, medios de cultivo,
http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/34/medios-de-cultivo.pdf