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BIOFERTILIZA

NTES

Alumna:

Diana

Definicin
Los biofertilizantes son
insumos formulados con
uno o varios
microorganismos, los
cuales, de una forma u
otra, proveen o mejoran la
disponibilidad de

Funciones

Fijadores de nitrgeno del medio


ambiente para la alimentacin de la
planta.
Protectores
de
la
planta
ante
microorganismos patgenos del suelo.
Estimulan el crecimiento del sistema
radicular de la planta.
Mejoradores y regeneradores del
Suelo.
Incrementan la solubilizacin y la
absorcin de nutrientes, como el

Fuentes De Nitrgeno

Ciclo del Nitrgeno

Tipos De Biofertilizantes

A. FIJADORES DE NITRGENO
Estos microorganismos tienen
la capacidad de transformar el
Nitrgeno atmosfrico a amonio
y suministrarlo a los cultivos
mediante varios procesos:

Simbiosis ms conocidas

Leguminosas y Rhizobium
Plantas actinorrzicas y Frankia
Helecho Azolla y Anabaena
Lquen y cianobacterias

Fijacin
Atmosfrica Del
N2
A partir del N2,las tormentas elctricas y el
agua de la atmsfera forman cido ntrico
que se incorpora al suelo con la lluvia. Este
proceso implica el 13% de la fijacin natural
total de nitrgeno (190 x 1012 g ao -1 )

Fijacin simbitica de N

Se presenta una relacin mutualista


entre el microorganismo (husped) y la
planta (hospedero).
El proceso de realiza en estructuras
especializadas
(ndulos).
Relacin
leguminosa y Rhizobium.
Puede suplir de 40 a ms de 300 kg de
N/ha/ao, dependiendo del cultivo.
Rhizobium es una bacteria que vive en
simbiosis en las races de las leguminosas

Fijacin no
simbitica de N

Este proceso se presenta sin necesidad de una


relacin mutualista.
La asociacin se encuentra en una amplia gama de
cultivos
de inters agrcola.
Dentro de los microorganismos que tienen sta
capacidad se encuentran:
Bacterias de vida libre
(Azotobacter, Azospirillum, Clostridium)
Algas azul verdosas
(Anabaena, Nostoc)

En el suelo fijan el
N2:
Bacterias libres
como

Azotoba
cter

Tambin hongos como Frankia,


ndulos en las races de algunos
rboles como el aliso.

Azotobacter
vinelandii
que

forma

Frankia es un hongo
pionero
en
suelos
pobres en nutrientes

Anabaena/Azoll
a

Microorganismos Fijadores De Nitrgeno

De vida libre: Nostoc, Anabaena


Simbiticos, sin ndulos: Anabaena
Azolla
Simbiticos, con ndulos: Nostoc
Cicadceas
De vida libre, aerobios : Azotobacter
De vida libre, anaerobios: Clostridium
Asociativos: Azospirillum

Tipos De Biofertilizantes
B. SOLUBILIZADORES DE FSFORO
Paso de formas orgnicas a inorgnicas, insolubles o
solubles mediado por microorganismos. Esta liberacin
de
fosfatos insolubles a formas disponibles para las
plantas se obtiene mediante los siguientes procesos:
I - Quelacin:
Quelatos
de
Ca,
Mg
y
Fe
hechos
por
microorganismos. Se logra desestabilizar el P mineral
y lo hace soluble.
II - Reduccin del Fe:
La forma de Hierro Fe+2 es ms soluble que Fe+3 , el
fosfato de Fe se desestabiliza y se libera el difosfato.

Algunos
Solubilizadores

Los microorganismos que actan en la


solubilizacin ocupan el 10% de la
poblacin del suelo.
Se encuentran en la rizosfera y algunos
gneros son:
Pseudomonas
putida,
Mycobacterium,
Micrococcus, Bacillus subtilis.
Thiobacillus, Penicillium bilaji, Aspergillus
niger.

Tipos De Biofertilizantes
C- CAPTACION DE FOSFORO
Otro
grupo
de
microorganismos,
ampliamente conocidos y estudiados,
tienen la capacidad de aumentar el rea
de
captacin y absorcin de nutrientes,
principalmente fsforo, a travs de las
races.

Micorrizas
Asociacin simbitica donde la
micorriza aumenta la velocidad de
captacin de P y otros nutrientes (N, Fe
y Cu).

Tipos De
Biofertilizantes
D- PROMOTORES DE CRECIMIENTO
Estos son microorganismos que durante su
actividad metablica, son capaces de producir
y
liberar
sustancias
reguladoras
de
crecimiento para las plantas.
ALGUNOS MICROORGANISMOS
Gibberella(Fusarium moniliforme) giberelina
Anabaena, Nostoc cido indolactico
Diplodia macrospora auxinas
Phomopsis auxinas
Trichoderma giberelinas

Comerciales De
Microorganismos
Inoculados
Al Suelo
USO0
DESCRIPCIN
ORGANISMO
FIJACIN DE N

SIMBITICA
NO SIMBITICA

SUMINISTRO DE
P
FACTORES DE
CRECIMIENTO

MICORRIZAS
SOLUBILIZADOR
ES
PRODUCTORES
DE HORMONAS

BIODEGRADADO
RES

ACEITES,
GRASAS

Rhizobium,
Frankia
Azotobacter
Glomus
Bacillus
Azotobacter
Rhizobium
Pseudomonas
Flavobacterium

microorganismos
fijadores de N y
suplidores
de P
Inoculacin
a la semilla
Inoculacin al suelo
Compatibilidad con agroqumicos
Eficacia en cultivos

Por Qu No Usar
Biofertilizantes
Qumicos?

Elusodefertilizantesqumicosconstituyeundaobiol
gicoalos suelos deteriorando la calidad de los mismos:
Inducen el aumento de acidez y salinidad eliminando
el humus y suavizando los tejidos de la planta,
Provoca que sta sea menos resistente y saludable;
Eliminan el ecosistema natural de suelo, desarrollando
plantas ms vulnerables.
La salud y calidad del cultivo disminuye.
Adems la absorcin del fertilizante es menor, es decir
antes de que la planta tenga tiempo de absorberlos,
sus componentes se evaporan, ejemplo larea puede
perder un80% desu contenido denitrgeno.

apartir de cepas
Azotobacter spp.
Aisladas
deplantaciones de
Stevia Rebaudiana

Antecedentes

Fritz Haber (1913) descubri un proceso para la sntesis de


amoniaco.
Carl Bosch (1930) lo adopt en forma comercial.
Burdmann (2000) experiment con Azospirillum brasilense
En Mxico los estudios realizados con Rhizobium, aumento
la absorcin de nitrgeno hasta en un 81% en las
leguminosas.
El Azotobacteres el gnero que segn estudios realizados
ha demostrado tener el rendimiento de absorcin a nivel de
la rizosfera ms alto que los otros microorganismos
analizados para la elaboracin de biofertilizantes.

Fijacin Industrial
Del Nitrgeno
MTODO DE HABER-BOSCH:
Vapor
CH4
H2
Calor
450 C, 200 atm
N2 + 3H2
2NH3
El H2 y la energa necesaria
para generar
temperaturas
Catalizador
de Fe3O4
tan elevadas proceden de los combustibles fsiles. A
medida que aumenta el precio de la energa se
incrementa el precio del nitrgeno fertilizante. Este
proceso genera la mayor parte los fertilizantes

Produccin de un Biofertilizante
apartir de cepas Azotobacter
spp. Aisladas deplantaciones de
Stevia Rebaudiana

Stevia:

Es
un
gnero
de
plantas
fanergamas
perteneciente a la familia de las asterceas. Son
hierbas y arbustosde la familia del girasol
(Asteraceae), nativa de regiones subtropicales y
tropicales de Amrica del Sur y Amrica Central.
La especie Stevia rebaudiana Bertoni,conocida
comnmente como dulce hoja, o, simplemente,
stevia, es ampliamente cultivada por sus hojas
dulces. Como un sustituto del azcar.

Azotobacter spp

De vida libre, aerobios, Gram negativos, hetertrofos, formadores de


quistes.
Crece mejor en suelos neutros-alcalinos, mesoflicos. No prolifera a
pH menor de 6.
Azotobacter spp. fija en promedio 1 - 5 Kg de nitrgeno por hectrea
por ao en estado libre, mientras que asociado a gramneas fija 20 Kg
N ha-1;
Estos microorganismos en determinadas condiciones solubilizan
fosfatos y sintetizan sustancias estimuladoras del crecimiento
vegetal, tales como, vitaminas y hormonas vegetales que intervienen
directamente sobre el desarrollo de las plantas (Ardila, 2007).

Caldo Pikovskaya

El caldo Pikovskaya modificado es un medio no


selectivo pero permite el crecimiento rpido de las
bacterias y requiere un gasto de energa menor.
Composition per liter:
Agar ........................................... 15.0g
Glucose ........................................... 10.0g
Ca3(PO4)2................................ 5.0g
Yeast extract.................................... 0.5g
(NH4)2SO4 ........................................... 0.5g
KCl...................................... 0.2g
MgSO47H2O............................... 0.1g
MnSO42H2O............................... 0.1mg
FeSO4.................................... 0.1mg

Caldo Ashby

Es un medio de cultivo selectivo para Azotobacter


debido a que no contiene nitrgeno. Su ventaja
es que al ser un medio selectivo el crecimiento es
lento, es observable a partir de los 3 5 das de
realizada la siembra lo que implica un mayor
gasto de energa para la produccin.
En ambos casos se necesitan reactivos qumicos
que implican un costo alto adecuadosolo para
producciones pequeas a escala de laboratorio,
por este motivo se formula unmedio de cultivo
alternativo a base de melaza tomando al caldo
Pikovskaya modificadocomo patrn

Muestreo Del
Suelo

De cada cultivo de Stevia se toman cinco muestras


de 500g a una profundidad de 10 a 15cm, el
muestreo se realiza en forma de zigzag a lo largo
del cultivo. Las muestras se empacan con papel.

Procesamiento
De Muestras

Una vez en el laboratorio, las muestras de suelo


se tamizan, con el fin de obtener grnulos
uniformes, para realizar el aislamiento primario.

MEDICIN DE ph DE LAS
MUESTRAS DEL SUELO
Se coloca en un frasco de vidrio limpio suelo
tamizado y agua destilada en proporcin 1:1 p/v.
Posteriormente, la suspensin se deja precipitar
durante 5 min.

Aislamiento
Primaria

A partir de cada muestra de suelo obtenida en los


diferentes cultivos, se realiza el aislamiento
primario, empleando la tcnica de grnulos de
suelo; que consiste en colocar 20 grnulos en
placas de Agar AshbySacarosa (medio especfico
para Azotobacter spp) a una distancia aproximada
de 1 cm. Se incuban a 28C por 7 das hasta
observar alrededor de los grnulos colonias
translucidas y mucilaginosas.

Aislamiento
Secundario

Se realiza mediante siembra por agotamiento en


placas con Agar AshbySacarosa a partir de las
colonias obtenidas en el aislamiento primario. Las
placas son incubadas por 7 das a 28C,
posteriormente se observa el crecimiento en el
medio selectivo AshbySacarosa, la morfologa de
la colonia y de las clulas por medio de la
coloracin de Gram.

Pigmentacin De
LosAislamientos

Con el fin de observar la produccin de pigmentos


en medio slido, de cada aislamiento se realiza una
siembra en agar diferencial Ashby con 5 g/l de
benzoato, remplazando la fuente de carbono
(sacarosa) en placas petri para observar la
pigmentacin en las colonias. La siembra se realiza
tomando una colonia de cada aislamiento y
realizando una estra en toda la placa, se incuba a
28C por 7 das y se observa pigmentacin.

Biofertilizante A
Nivel De
Laboratorio

Reactivacin De
LasCepas
Bacterianas
Para reactivar
a lasbacterias se utiliza elcaldo
Pikosvscaya modificado liquido, ideal para el
crecimiento de Azotobacter spp. El caldo
correctamente preparado se vierte en tubos de
ensayo (5 ml/tubo) y se esteriliza. Luego se
inocula cada tubo con la cepa madre bajo
condiciones de esterilidad y se incuba a 30C por
24 horas.

Obtencin Del Pre


Inculo
Para la preparacin del pre inculo se toman en cuenta los
siguientes requisitos:
1.- El cultivo debe estar metablicamente activo y libre de
contaminantes. Para ello se trabaja bajo normasestrictasde
esterilidad yse realiza uncontrol permanente decultivo mediante
la observacin directa al microscopio de las caractersticas del
microorganismo utilizando tcnicas microbiolgicas.
2.- El inoculo debe estar en su fase exponencial (grado mximo de
desarrollo). Para ello se evala el crecimiento bacteriano durante
30 horas que es el tiempo estimado que tarda en alcanzar la fase
exponencial. Se procura obtener preinculos con una concentracin
de biomasa del orden de 108-109 clulas/ml.
3.- Se debe dispones de una cantidad de cultivo suficiente para
inocular el volumen demedio liquido a utilizar en la fermentacin,
el cual debe estar entre el 310 % delvolumen total a fermentar. En
este caso se trabaja con un volumen equivalente al 10%
delvolumen total a fermentar.

Procedimiento

Con las cepas reactivadas anteriormente se realiza


un pool bacteriano.
10 ml de pool se inoculan en 90 ml de caldo
Pikovskaya modificado (10% de volumen total a
fermentar obtenindose un volumen final de 100
ml de cultivo por cada caldo de fermentacin.
Posteriormente se incuban a 30C por 24 horas y
150 rpm en matraces de 250 ml.

Fermentacin Discontinua

Una vezobtenidos los preinoculos, estos se


inoculan en900ml de CPMy 900de CA.
Luego , son incubados a una temperatura
promedio de 28C por 72 horas.
El oxigeno se suministra utilizando un
aireador para pecera con un flujo de aire
aproximado de 1 m3 /h en matraces de 2000
ml.
El
esquema
del
proceso
global
de
produccin de Azotobacter spp a nivel de
laboratorio.

producto en
condiciones
Para determinar la viabilidad del producto se
delaboratorio
almaceno
el producto terminado en envases

plsticos cerrados y se los coloca en refrigeracin


(4C) bajo condiciones higinicas para evitar la
contaminacin. Cada semana se evala el estado
del producto mediante observacin directa al
microscopio. Se evala la poblacin microbiana,
la actividad y la contaminacin por un periodo
establecido de tiempo. Adems se deben realizar
conteos de colonias en caja con el medio Ashby
como medio de cultivo selectivo

Produccion De
Biofertilizantes A
Gran Escala

Produccion De Biofertilizantes A Gran Escala


FASE I: SOPORTES O SUSTRATOS

PROTECCION

LATENCIA

MANEJO

FASE II: MULTIPLICACION

INOCULO INICIAL EN MEDIOS SOLIDOS

RECUENTOS

PRODUCCION A GRAN ESCALA


(FERMENTADORES)

FASE III: FORMULACION

MEZCLA
EMPAQUE
RECUENTOS (CONTROL DE CALIDAD)
ALMACENAMIENTO

Indicaciones Y Usos
A-En su etiqueta se indica el tipo y nmero de
microorganismos que contienen.
B-Los microorganismos se pueden indicar por grandes
grupos ( bacterias) o por su clasificacin taxonmica
(Azotobacter).
C-Junto a su nombre aparecer la concentracin en el
producto.
D-La concentracin de microorganismos vara de
acuerdo a las recomendaciones de uso del producto.}
E-Se aplican al suelo directamente antes o despus de la
siembra del cultivo, mediante aspersin o en el surco de
siembra o sobre toda la superficie. Otros se mezclan con
la
semilla.

Recomendaciones Para
El Uso
De Los Biofertilizantes

1-No deben exponerse a altas temperaturas ni a la luz directa


del sol.
2-Si se aplican a la semilla, se debe sembrar inmediatamente
o a ms tardar dentro de las prximas 24 horas.
3- Si el producto se aplica al suelo hacerlo en las primeras
horas del da o en la tarde.
4-Asegrese de la buena preparacin del producto antes de
colocarlo en el equipo de aspersin.
5- Use la cantidad apropiada del producto.
6-Lavar adecuadamente el equipo de aspersin antes de
adicionar el producto.
7-Utilizar el producto antes de su fecha de vencimiento.
8-Almacenar el producto a las temperaturas indicadas en la
etiqueta hasta su empleo.
9-No aplicar si la humedad del suelo es deficiente.