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LABORATORIO DE BIOPROCESOS
INTEGRANTES:
ABURTO RODRIGUEZ, Ruddy
CASTILLO MENDOZA, Abigail
DOCENTE:
CASTILLO CALDERN Augusto
Objetivos Generales:
Disear y realizar diferentes experiencias de estudios cinticos de
la enzima invertasa(2,1--D-fructan fructanohidrolasa (EC 3.2.1.7))
de un caldo crudo libre de clulas de kluyveromyces marxianus
NRRL Y-7571 en sus formas solubles e inmovilizada.
Objetivos Especficos:
Preparacin de reactivos y obtencin de curvas de calibrado de
protenas y DNS.
Obtencin del caldo crudo enzimtico kluyveromyces
marxianus ATCC-16045 por fermentacin en matraces.
Determinacin del rango de linealidad y actividad enzimtica
(actividades volumtrica y especfica) de la enzima en el caldo
crudo.
Determinar los parmetros cinticos de la enzima soluble.
Inmovilizar invertasa en geles.
Disear y montar el sistema mini-reactor con invertasa
inmovilizada, para determinar parmetros cinticos de la
1. DETERMINACION
LINIALIDAD
DEL
RANGO
DE
Abs
0,171
0,329
0,64
4
Tubos
0
1
2
3
4
0,972
Abs
0
0,419
0,646
0,925
1,2
X (g/L)
t
real
0
0
0,3526133 1,7630668
7
7
0,6562259
3,2811299
8
6,2692159
1,2538432
9
A2: dilucion
1:29,4590699
1,8918139
9
5X (g/L)
X (g/l)
real
0
0
0,829169869
1,65833974
1,26537279
2,53074558
1,801498847
3,60299769
2,329938509
4,65987702
X (g/l)
(min)
0
5
10
15
20
t (min)
0
5
10
15
20
Abs
X (g/l)
0,123
0,260376633
0,155
0,321867794
0,239
0,483282091
0,342
0,681206764
X (g/L)
real
0
1,0415065
3
1,2874711
8
1,9331283
6
2,7248270
6
t (min)
0
5
10
15
20
albumina
protenas
Sol. Tampn
Sol. Std uL
uL
100
80
20
10
0
0
20
80
90
100
de
Albmina
g/l
0,5
0,4
0,1
0,05
0
suero
0.5
g/l
ABS
595nm
0,344
0,199
0,044
0,016
0
DETERMINACIN DE
PROTENAS-MTODO
BRADFORD:
Curva de Calibrado y=0,6444x0,0147
ABS
0,070
Dilucin
1
e(g/l)
0,131440099
0,036
1/2
0,07867784
0,013
1/4
0,042985723
PROMEDIO
e(g/l)
-real
0,1314400
99
0,1573556
8
0,1719428
93
0,1535795
57
X (g/l)
0
5
0
9,632013836
10
19,24000769
Pendiente(gl/min) :
1,924
Dato:
e(mg/ml)
0,15357955
7
producto
(gr/l)
0,035
0,137
0,32
0,557
0,776
0,0913
0,2873
0,6389
1,0944
1,5152
producto
(gr/l)*
dilucion
0,1826
0,5746
1,2779
2,1887
3,0304
tiempo
(min)
resto(g/l)
0
2
6
10
15
0,1826
0,3920
1,0953
2,0061
2,8478
V1 =
1/V1 =
0,1839
5,4377
S1 =
1/S1 =
0,2500
So = 7.3 g/l
absorbancia
producto
(gr/l)
producto
(gr/l)*
dilucion
0,029
0,165
0,441
0,63
0,962
0,0797
0,3411
0,8714
1,2346
1,8726
0,1595
0,6822
1,7429
2,4693
3,7452
tiempo
(min)
resto
0
2
6
10
15
0,1595
0,5227
1,5834
2,3098
3,5857
V1 =
1/V1 =
0,228
4,3860
s1 =
1/S1 =
7,3
0,1370
1/V
5,4377
4,386
4,2571
3,4807
3,3818
3,0874
1/S
0,25
0,137
0,1075
0,0752
0,0654
0,0518
4 g/l
7.3 g/l
9,3
13,3
15,3
19,3
tiempo (min)
resto(g/l)
resto(g/l)
resto(g/l)
resto (g/l)
resto(g/l)
resto(g/l)
0,1826
0,1595
0,1826
0,2210
0,1633
0,2018
0,3920
0,5227
0,4880
0,6226
0,3574
0,6687
1,0953
1,5834
1,7448
2,0907
1,7487
2,3098
10
2,0061
2,3098
2,7940
3,1975
2,9362
3,4589
15
2,8478
3,5857
3,5203
4,4043
4,4427
4,9654
1/Vmax=
Vmax =
1/V
5,4377
4,386
4,2571
3,4807
3,3818
3,0874
2,6824
0,37280048
1/S
0,25
0,137
0,1075
0,0752
0,0654
0,0518
Kmax/Vmax=
Kmax=
Curva de Calibrado-DNS
y=0,5621x-0,002
Tiempo
(h)
11,554
4,307
Absorba
Producto
ncia
Producto
real
X
ket/K
0,225938 0,225938 0,011296 0,063819
0
0,125
45
45
92
64
0,951787 1,903575 0,083881 0,477124
0,5
0,533
94
88
87
11
0,129781 0,741662
1
0,791
1,410781 2,821562
18
9
1,426792 5,707169 0,274061 1,592923
1,5
0,8
39
54
55
23
1,515744 6,062978 0,291851 1,700347
2
0,85
53
12
98
02
1,695427 10,17256 0,497331 2,997234
2,5
0,951
86
72
44
21
1,819960 10,91976 0,534691 3,247948
3
1,021
86
52
34
83
1,850204 18,50204 0,913805 6,694497
DATOS
3,5
1,038
59
37
2
Si (g/l)=
20 59
4,643603
1,912471
19,12471
Si/k 0,944938 7,287227
VR (ml)=
45
44
4
1,073
09
09
62
01
X(Pformad
o/Sinicial) 0,944938
ln (1-x) 2,899306
=
62
77
Kmax
0,944938
P/So
(g/l)=
4,307
62
Vmax=k.e
84,19014
t=
=
0,3728
68
Para grupo A3
Absorvanci
Tiempo (h)
a
0
0,032
0,5
0,35
1
0,622
1,5
0,469
2
0,614
2,5
0,513
3
0,514
3,5
0,314
4
0,342
Producto
0,06048746
0,62622309
1,11012275
0,83792919
1,09589041
0,91620708
0,91798612
0,56217755
0,61199075
Producto
Real
0,06048746
1,25244618
2,22024551
3,35171678
4,38356164
5,49724248
5,50791674
5,62177548
6,11990749
ket/K
0,00906858
0,17870446
0,32380181
0,49343768
0,64813706
0,8151057
0,81670604
0,83377632
0,90845878
13,33333
Si (g/l)=
33
VR
(ml)=
15
Kmax=
4,307
Vmax=
0,3728
0,03718389
0,75009401
1,39367385
2,20766052
3,05097454
4,21132273
4,22497005
4,37557195
5,20331406
Si/K=
3,095735
62
CONCLUSIONES
El Rango de Linealidad obtenido nos permiti conocer la actividad cataltica
que tiene la enzima a diferentes concentraciones, as como la afinidad que
esta tiene por el sustrato.
Se comprob que la actividad o poder cataltico de la enzima disminuye con el
paso del tiempo de la enzima sometida al medio de reaccin.
A mayor concentracin de enzima hay mayor hidrlisis, y a mayor tiempo de
hidrlisis, hay ms conversin de sacarosa en azcares reductores.
El valor de la constante de saturacin obtenido es de 4.307 gr/L
El valor de la velocidad mxima de reaccin fue 0.37280 gr/L*min.
La inmovilizacin de enzimas reduce la carga enzimtica inicial y aumenta las
restricciones difusionales internas, mientras que a concentraciones de
sustrato elevadas permite bajar o disminuir las restricciones difusionales
externas ofrecidas por el medio.