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Presentacin Internado

Parasitologa
Interna: Javiera Inostroza Ziga
Fecha: 16 de Octubre, 2014

Ascaris lumbricoides: Mimetismo


molecular por absorcin de
epitopes P1
Patricia Ponce de Len, Patricia Foresto, Juana Valverde

Acta Bioqum Cln Latinoam 2010; 44 (2): 253-7

Antecedentes

Ciclo biolgico de Ascaris lumbricoides

Cuadro clnico

Fase de migracin pulmonar:


Hemorragias y proceso inflamatorio
diseminado, eosinofilia local y sangunea.
Espasmos de tos, hemoptisis ocasional,
sibilancias, expectoracin mucosa
Erupciones cutneas y episodios
asmatiformes.
Fase Intestinal:
Carga parasitaria baja: signos y sntomas
son vagos o no los hay. Se han reportado
dolor abdominal, diarrea, anorexia.
Carga parasitaria es alta: la parasitosis se
asocia a dolor y distensin abdominales,
nusea, vmito, movimientos peristlticos
disminuidos.
Nios
con
abdomen
prominente.

Epidemiologa en Chile
Prevalencia quinquenal de
infecciones
Enteroparasitarias,
producidas por patgenos
en preescolares y escolares
de Talca,1980-2008

Evasin de la respuesta inmune


Mimetismo molecular: similitud antignica
Absorcin de molculas del hospedador sobre
la superficie tegumental.
Expresin sobre la superficie del parsito de
productos gnicos con similitud a molculas
del hospedador.

Objetivo
Estudiar la absorcin de epitopes P1 por
estadios larvales de A. lumbricoides, con el fin
de determinar el mecanismo de expresin de
este antgeno sobre la cutcula del nematode.

Materiales y mtodos
Concentracin de huevos: mtodo de
flotacin en salmuera.
Obtencin de estadios larvales: SO4H2 0.1 N
por 24 das a 30C.
Remosin de cubierta de huevos: hipoclorito
de sodio 1% (atmosfera de 5% de CO2) por 30
min a 30C.

Materiales y mtodos
Medio de eclosin: 1 ml de bisulfito de sodio
0.1 M + 1 ml de cloruro de sodio 0.25 M
(pregaseado, 0.0025% de Tween 80 y 0.1 M
de bicarbonato de sodio), por 0.5 ml de
suspensin de huevos.
Recoleccin de larvas en medio RPMI: Mtodo
de Baermann-Moraes.
Centrifugacin y recuento: 1100-1200
larvas/ml (suspensin de larvas).

Materiales y mtodos
Tubo

RPMI

2 ml

2 ml

3 ml

Suspensin de
larvas

1 ml

1 ml

1 ml

Sedimento de
eritrocitos P1

100 l

Cultivo

10 das a 30C (atmosfera N2-CO2-O2)

Separacin de
larvas

Mtodo de
Baermann-Moraes

Centrifugacin

Centrifugacin

Recuento del CL
(larvas/ml)

200-300

200-300

600

Inhibicin de la aglutinacin
semicuantitativa (IAS)

Inhibicin de la aglutinacin
semicuantitativa (IAS)
Anti-P1:
2-889
2-90
2-91
2-92

P1

P1

P1

P1

P1

P1

1/2

P1

P1

P1

P1

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

1/128

1/256

1/512

1/1024

P1

P1

P1

P1

P1

P1

P1

P1

P1

P1

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

1/128

1/256

1/512

1/1024

P1

P1

P1

P1

P1

P1

P1

P1

P1

P1

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

1/128

1/256

1/512

1/1024

30
12 min
hrs aa 4C
4C

+ 20l de SF

+ 20l de CL1

+ 20l de CL2

Inhibicin de la aglutinacin
semicuantitativa (IAS)
Serie 1
(SF)

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

1/128

1/256

1/512

1/1024

Serie 2
(CL1)

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

1/128

1/256

1/512

1/1024

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

1/128

1/256

1/512

1/1024

Serie 3
(CL2)

Significativo:
diferencia de ttulo
de 2 o ms
diluciones entre la
serie 1 con respecto
a las series 2 y 3

Resultados de la IAS para investigar la expresin


de epitopes P1 en CL1

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

1/128

1/256

1/512

1/1024

Materiales y mtodos
Tubo

RPMI

2 ml

2 ml

3 ml

Suspensin de
larvas

1 ml

1 ml

1 ml

Sedimento de
eritrocitos P1

100 l

Cultivo

10 das a 30C (atmosfera N2-CO2-O2)

Separacin de
larvas

Mtodo de
Baermann-Moraes

Centrifugacin

Centrifugacin

Recuento del CL
(larvas/ml)

200-300

200-300

600

IAS: investigacin de productos de


excrecin-secrecin smil P1

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

1/128

1/256

1/512

1/1024

Resultados
Larvas de A. lumbricoides absorben epitopes
P1 de los eritrocitos agregados al medio de
cultivo.
Mimetismo que involucra P1 se debe a
absorcin y no a expresin de productos
gnicos similares.

Discusin y conclusiones
P1 antgeno de alta frecuencia y expresado en
muchas clulas sanguneas: molcula
comnmente involucrada en mimetismo
molecular.
Mimetismo importante en parsitos
extracelulares.
Productos de excrecin-secrecin:
posibilidades diagnsticas y rol en respuesta
inmune.

Discusin y conclusiones
No se identificaron productos de excrecinsecrecin smil P1:
Sin produccin
Cantidad de larvas insuficientes

Mimetismo asociado a grupo ABO


2000-2006: Se identificaron los mismos
epitopes del Sistema ABO en extractos de A.
lumbricoides y en sus respectivos
hospederos.
2009: larvas absorben epitopes A, B y H de los
eritrocitos y se identificaron sustancias Tipo A
y B en los productos de excrecin/secrecin.

Mimetismo asociado a grupo ABO


2011: A. lumbricoides puede absorber
determinantes antignicas ABH a partir de
antgenos solubles.

Larva L4 conserva epitopes absorbidos hasta


adulto?
Larvas y adultos pueden absorber epitopes?

Bibliografa

Ponce de Len P, Foresto P, Valverde J. IdentiMcacin de epitopes Tipo Grupo Sanguneo ABO en larvas de Ascaris
lumbricoides mantenidas in vitro. Acta Bioqum Cln Latinoam2009; 43 (1): 21-6.
Ponce de Len P, Valverde J. P System antigenic determiners expression in Ascaris lumbricoides. Rev Inst Med
Trop S Paulo 2003; 45 (1): 53-4.
Ponce de Len P, Valverde J. ABO System: Molecular mimicry of Ascaris lumbricoides. Rev Inst Med Trop S.Paulo 2003; 45
(2): 107-8.
Ponce de Len P, Foresto P, Valverde J. H Antigen presence in an Ascaris lumbricoides extract. Rev Inst Med
Trop S Paulo 2005; 47 (3): 159-60.
Ponce de Len P, Foresto P, Valverde J. Ascaris lumbricoides: heterogeneidad en la expresin de epitopes ABO. Rev Invest
Cln 2006; 47: 385-93.
Ponce de Len P, Foresto P, Valverde J. Ascaris lumbricoides: Capacidad Inhibitoria relacionada al Antgeno P1. Acta Bioqum
Cln Latinoam 2007; 41: 225-8.
Ponce de Len P, Foresto P, Valverde J. Ascaris lumbricoides: Mimetismo molecular por absorcin de epitopes P1. Acta
Bioqum Cln Latinoam 2010; 44 (2):253-7.
Ponce de Len P, Di Vita S, Valverde J. Absorcin de antgenos solubles ABH por larvas de Ascaris lumbricoides in vitro. Acta
Bioqum Cln Latinoam 2011; 45 (1):125-31
Vidal s., Toloza L. y Cancino B. Evolucin de la prevalencia de enteroparasitosis en la ciudad de Talca, Regin del Maule,
Chile. Rev Chil Infect 2010; 27 (4): 336-340