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APLICACIONES

PERSPECTIVAS
Allasi Canales Nataly Olivia 08100015
Lvano Snchez Gloria Mara M. 08100097

DESVENTAJAS
PROBLEMA
S :
Niveles de expresin.
Escapes gnicos al medio ambiente.
Efectos de posicin y del silenciamiento gnico.
Transformaciones solo con un gen.

Elysia
chlorotica
Vaucheria litorea
Protenas con alta tasa de
recambio codificadas en el
genoma nuclear
1.-introduccin del transgn en el tejido
blanco apropiado
2.-seleccin de las clulas que integraron
el transgn en su genoma
3.- regeneracin de plntulas
transformadas con capacidad para ser
propagadas por reproduccin asexual o
sexual

:
Compartimentalizacin
de la protena
recombinante
Alta acumulacin de
protenas forneas
(47% de protenas
solubles.
Herencia parental materna.
Porcentaje de escape una
de cada 100 000
polinizaciones
La replicacin del DNA
cloroplastdico no est acoplada a
la replicacin del genoma nuclear
REPLICACIN DEL ADN
Caracterstica
s

El genoma de los cloroplastos
Secuencias altamente
conservadas
REGIONES INTERGNICAS
14 regiones
intergnicas
No tienen
propiedades
especiales
Flujo de la informacin gentica en
el cloroplasto
.
Genes transcriptos:
Clase I
Clase II
Clase III
Genes
transcritos en
operones(un
promotor, >1
gen)
Transferencia de los transgenes. 0,006%
T7 ARN polimerasa
Genes plastdicos pueden tener mltiples
promotores
Elevada regulacin transcripcional de los
promotores plastdicos:
Distintos promotores activos
Regulacin de la intensidad de un promotor
Fuerte regulacin transcripcional por factores
ambientales (luz)
atpB-atpE codifican dos subunidades de la ATP sintasa
Ausencia de glicosilacin.
Plegamiento y
formacin de
puentes disulfuro
Para la integracin del ADN en el plastoma se requiere superar de
forma fsica varias barreras: la pared celular, el citoplasma y la
doble membrana plastidial del cloroplasto.


Arabidopsis 1 lnea transplastomica 40-151 bombardeos
Infrtil
Papa 1 lnea 25 bombardeos
Tomate : 1 lnea 10 bombardeos
Soya : 1 lnea 984 bombardeos
Arroz : alta heteroplasmia y los transgnicos no pueden ser llevados a la
siguiente generacin
Tecnologa no
rutinaria.
Tabaco
Chlamydomonas
Estudiada
s
Los prolongados
perodos de
seleccin
requeridos para
alcanzar el estado
homoplstidico y el
gran porcentaje de
escapes
galinstano (una aleacin
de galio, indio y estao).
Capilar de 0,1mm
Ejem :Phormidium laminosum con el gen
bla y la transformacin con el gen gfp de
cloroplastos de hojas de tabaco
1.- Heteroplasmia interplastdica
2.- Heteroplasmia intraplastdica
El objetivo es conseguir
plantas transformadas y
homoplsmicas
Estado heteroplsmico
Mltiples eventos de
recombinacin homloga
La homoplasta se obtiene por sucesivas rondas de regeneracin en medio
de seleccin
Primera ronda de regeneracin
Control de regeneracin Control de seleccin Transformacin
Segunda ronda de regeneracin
Planta
transplastmic
a
Genes selectores: betana aldehido deshidrogenas
Control 1o seleccin 2o seleccin Control 1o seleccin 2o
seleccin
Espectinomicina Betana aldehido
La actividad enzimtica de
BADH
es dosada por formacin de
NADH.
Y, D, M y O representan las
hojas
jvenes, en desarrollo,
maduras
y viejas, respectivamente
Seleccin fenotpica
por restauracin
de la pigmentacin
y
la fotosntesis
ELIMINACIN DE GENES
SELECTORES
Eliminacin
de genes
selectores por
recombinacin
P1 y T1:
secuencias
cortas repetidas
directas
s1: seleccin
con
espectinomicina
s2: seleccin
con
glufosinato
Eliminacin de genes selectores mediante el sistema cre/loxP
Cotransformaci
n