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Qumica Biolgica

Seminario Espectrofotometra
Algunos conceptos previos .
Una radiacin electromagntica tiene una
naturaleza dual


Las molculas tienen un
estado energtico que puede
ser alterado por una
radiacin electromagntica


Cada molcula tiene estados
excitados que la distingue del
resto de molculas
Espectrofotometra
Es un conjunto de tcnicas analticas cuali y
cuantitativas

Se basa en la interaccin de las molculas y las
radiaciones electromagnticas.

La cantidad de luz absorbida por una sustancia a
distintas l es como una huella digital y se llama
espectro de absorcin
Espectrofotometra

Cualitativa Cuantitativa
Espectro de
absorcin
La cantidad de
radiacin absorbida
depende de la
concentracin
Espectro de Absorcin
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
Longitud de onda (nm)
l
A
A
B
Transmitancia y absorbancia

I
o
= I
a
+ I
t
Puedo cuantificar
la luz transmitida
(transmitancia) o
la absorbida
(absorbancia)
Transmitancia y absorbancia









T = ( It / Io) x 100 Transmitancia
A= - Log T

Absorbancia
A= log ( 100 / %T)
. empleamos la absorbancia
Absorbancia
Ley de Lambert y Beer
A= abc
A: absorbancia
a: absortividad especfica de cada soluto
b: distancia recorrida por el haz de luz en cm
c: concentracin de la solucin
A= abc
Conc. Prob = (A Prob/A Patrn)(Conc. Patrn)
Espectrofotmetro

Parte prctica
Objetivos:
Aprender el uso del espectrofotmetro.

Realizar espectro de absorcin de sustancias
puras: soluciones de azul de metileno.

Realizar una curva de calibracin para
determinar la concentracin de una muestra
problema de azul de metileno
Pasos para determinar la concentracin de una
muestra problema
Calibracin del equipo

Espectro de absorcin
l

No cumple con la ley de LB


Curva de calibracin
Calibracin del espectrofotmetro

Prender el equipo y esperar 15 minutos para
que los circuitos alcancen temperatura.

Elegir la longitud de onda deseada con el
selector.

Verificar 0% de T. Se realiza en modo
transmitancia y colocando un cuerpo negro
Espectro de absorcin de solucin de
azul de metileno

Se emplea para identificar una sustancia y para
determinar la l a la cual la absorbancia es mxima

Utilizar la solucin de 5mg/l.

Llevar a cero de absorbancia con agua
destilada.

Medir las absorbancias a distintas l
Espectro de Absorcin
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
Longitud de onda (nm)
l
A
25 mM
5 mM
l Max
Curva de calibracion
Curva de calibracin

A partir de la solucin patrn de 5 mg/l realizar cinco
diluciones: 1/2; 1/4; 1/5; 1/6; 1/8; 1/10; 1/15.

Medir sus absorbancias y la de la muestra problema a la
longitud de onda seleccionada

Graficar absorbancia versus concentracin.

Determinar con la grfica anterior la concentracin de la
muestra problema.
Curva de calibracin