BIOCONVERSIN DE HEMICELULOSA

Qumica Orgnica III

Alumna: Ana Mara Mndez
Doctora: Betty Matsuhiro Y.
Universidad de Santiago de Chile
Facultad de Qumica y Biologa
Licenciatura en Qumica

En la actualidad, la biomasa lignocelulsica y en especial los subproductos
agroindustriales han dejado de ser productos de desecho-problema, para
convertirse en materia prima potencial para diversos procesos tanto de tipo
agrcola como industrial, siendo la produccin de alcohol uno de los mas
importantes. Sin embargo, han sido y son muchos los limitantes que se han
presentado en torno a la obtencin de etanol a partir de este tipo de materiales,
debido a su estructura lignocelulosa de compleja degradacin. Por ello, han
surgido diversidad de trabajos e investigaciones, que abarcan distintas
problemticas y proponen alternativas de solucin y aportes enormes que poco a
poco han abierto el camino hacia la explotacin de la biomasa lignocelulsica
para este fin. El presente seminario, muestra el potencial uso para
biocombustibles (etanol), describiendo las caractersticas de las materias primas
en cuestin, su estructura, las etapas (pre-tratamiento, hidrolisis, detoxificacin y
fermentacin), al igual que los avances microbiolgicos que han logrado para la
incursin de los mismos en algunas de las etapas del proceso.


Resumen
Introduccin
En la actualidad la generacin de alternativas energticas distintas a las ya
convencionales obtenidas principalmente de la explotacin del petrleo, ha con
llevado al uso de materias primas naturales dando lugar a los llamados
biocombustibles dentro de los cuales destaca el bioetanol. Ello ha surgido a
raz de la necesidad de proteger el medio ambiente, preservar los recursos
tanto renovables como no renovables y maximizar el potencial uso de
productos agrcolas, y en especial de los subproductos que estos generan al
someterlos a distintos procesos agroindustriales, cuya disposicin final es un
gran problema ambiental. De estos subproductos o residuos en su mayora
corresponden a biomasa lignocelulsica rica en polmeros de celulosa y
hemicelulosa entre 75-80%, los cuales pese a su dificultosa degradacin, es
posible mediante procesos qumicos, fsicos y/o biolgicos desdoblarlos a
azucares monosacridos para su posterior conversin a etanol. Entre sus
aplicaciones esta la deslignificacin de la pulpa de la madera para hacer el
papel, aclaracin de jugos y la mejora de la consistencia de la cerveza.
Introduccin
Donde las enzimas que se degeneran o ayudan a degenerar la hemicelulosa
actan como blanqueador en la industria del papel, lo que hace ms pequeo
el consumo de cloro ambientalmente poco amistoso. Por ejemplo la Xilanasa
libre de celulosa puede facilitar la remocin de lignina de pulpa de madera sin
cualquier efecto daino. En esta presentacin se realizar una revisin de la
bioconversin de hemicelulosa, siendo los Xilanos los ms abundantes, peor
en particular los arabinoxilanos que se presentan en diversos residuos
agrcolas como la cascarilla del arroz, el bagazo de la caa de azcar, rastrojo
de la paja, trigo y fibra de maz en otros para la conversin en etanol, xilitol y
2,3-butanodiol.



Compuestos principalmente de tres tipos diferentes de polmeros,
celulosa, hemicelulosa y lignina, envueltos en una compleja estructura.
Este tipo de materiales son los mas abundantes en la naturaleza.

Caracterizacin de Subproductos de
Biomasa Lignocelulsica
LA CELULOSA Est formada por subunidades de D-Glucosa, unidades
por -1,4 glicosdicos, siendo un polisacrido homogneo de gran
importancia en la fermentacin. Es la base estructural en las plantas ya
que forma parte de los tejidos de sostn, siendo insoluble en agua, y
originando fibras compactas que constituyen la pared celular de las
clulas vegetales. Por ejemplo la pared de una clula vegetal joven
contiene aproximadamente un 40% de celulosa; la madera un 50 %,
mientras que el ejemplo ms puro de celulosa es el algodn con un
porcentaje mayor al 90%.Siendo la celulosa la biomolcula orgnica
ms abundante ya que forma la mayor parte de la biomasa terrestre.



Caracterizacin de Subproductos de
Biomasa Lignocelulsica
LA LIGNINA es un heteropolmero amorfo que no es soluble en agua, lo que
hace que su degradacin sea muy complicada. La lignina realiza mltiples
funciones que son esenciales para la vida de las plantas. Por ejemplo, posee un
importante papel en el transporte interno de agua y nutriente. Proporciona rigidez
a la pared celular y acta como puente de unin entre las clulas de la madera,
creando un material que es notablemente resistente a los impactos,
compresiones y flexiones. Realmente, los tejidos lignificados resisten el ataque
de los microorganismos, impidiendo la penetracin de las enzimas destructivas
en la pared celular.


Qu es la Hemicelulosa?
Las hemicelulosas son polmeros
heterogneos de pentosas (xilosa,
arabinosa), hexosas (la manosa, la
glucosa, la galactosa), y cidos de
azcar. A diferencia de la celulosa, las
hemicelulosas no son qumicamente
homogneas. Las hemicelulosas de la
madera dura contienen en su mayor
parte a xilanos, mientras que las
hemicelulosas de la madera blanda
contienen en su mayor parte a
glucomananos. En donde los Xilanos
pueden ser categorizados como lineal
como el homoxilano, tambin esta el
arabinoxilano, glucuronoxilano y
glucuronoarabinoxilano.
Por ejemplo Xilanos dependiendo de la fuente tales como hierbas, cereales y
maderas, ya sea dura o blanda digieren en su composicin. En la madera
abedul de xilano y xilosa contiene un 89,3%, el 1% de arabinosa, 1,4% de
Glucosa y 8,3% de acido anhidrournico.

En la madera del pino
insigne, las
hemicelulosas, que
forman parte de la matriz,
junto a la lignina, donde
reside la celulosa,
representan entre un 27 y
un 29% de la misma,
mientras que en la
corteza solo alcanzan un
15%. Las proporciones de
esta molcula varan
dependiendo de la edad y
variabilidad de las
especies cultivadas y
mejoradas.
Estructura
Las hemicelulosas son polmeros
heterogneos s de baja masa
molecular, asociados a las celulosas en
el tejido vegetal, por lo que muchos de
ellos son componentes estructurales de
la pared celular.

Existen hemicelulosas en las
plantas que no forman parte de
la pared celular, por lo tanto no
son componentes estructurales
siendo solubles en agua y
muchas de ellas no se conoce
su funcin definida en el rbol.


El Xilema del salvado de arroz contiene un 46% de Xilosa, 44,9% de
arabinosa, 6,1% de galactosa, 1,9% de Glucosa y 1,1% de c. anhidrournico.
El arabinoxilano de trigo contiene 65,8% de Xilosa, 33,5% de arabinosa,
manosa 0,1%, Galactosa 0,1% y 0,3% de Glucosa. Alrededor del 80% de la
cadena principal de Xilano, es altamente sustituido por cadenas laterales
monomricas de arabinosa o c. Glucurnico ligados a restos de Xilosa. En la
madera blanda estn los heteroxilanos, y residuos de arabinofuranosil
esterificados con cidos p-cumricos y c. ferlicos. Y en madera dura, el 60-
70% de los residuos de Xilosa son acetilados, siendo el grado de
polimerizacin de maderas duras de xilanos mayor que en maderas blandas.
Estructura
Estructura esquemtica de heteroxilano de
fibra de maz.
Modelo para las paredes celulares de fibra de
maz.

Composicin de biomasa lignocelulsica
agrcola
Pretratamiento de la Hemicelulosa
Esta etapa es indispensable para el procesamiento de biomasa lignocelulsica.
Incluye diversos residuos agrcolas (paja, cscaras, tallos, etc.), residuos de la
industria de papel, variando la composicin de estos materiales. El componente
principal es la celulosa (35-50%), seguido de hemicelulosa (20-35%) y lignina
(10-25%). La biomasa lignocelulsica complementa la hidrlisis enzimtica y
posibilita la obtencin de altos rendimientos. Se hace necesario principalmente
porque la lignina en las paredes celulares de la planta forma unas barreras
contra el ataque enzimtico. Un pretratamiento ideal reduce el contenido de
lignina y disminuye la cristalinidad de la celulosa
Pretratamiento Mecnico
Trituracin mecnica: Molienda para reduccin de partcula del
tamao de malla inferior a 40, tiene un efecto mnimo en los
rendimientos de la hidrolisis, as como la tasa de hidrolisis de la
biomasa.
Ultrasonido: Es una tcnica empleada para extraer lignina y
hemicelulosa, se emplea este mtodo a 25C y diferentes periodos
de tiempo entre 10 a 60 min., encontrando que el mejor tiempo de
residencia fue de 30 min.; sin embargo, su efecto sobre la biomasa
es muy superficial comparado con mtodos como el pretratamiento
con H2O2.
Pretratamiento Trmicos
En este tipo de pretratamiento la materia prima es calentada en un rango de
150 a 180.C, donde la hemicelulosa y seguida a ella la lignina son
solubilizadas. Temperaturas superiores a 180 .C solubiliza la hemicelulosa.
Durante los procesos trmicos una parte de la hemicelulosa es hidrolizada y
forma cidos, estos son asumidos como catalizadores para hidrolizar la
hemicelulosa.
Explosin por vapor: La materia prima se somete a temperaturas entre 160-
260.C, mediante la inyeccin directa de vapor saturado, por un intervalo de
tiempo entre 1 y 10 minutos. Seguidamente se lleva el producto a una rpida
descompresin hasta presin atmosfrica. Como resultado se obtiene biomasa
con alteraciones fsicas (desagregacin y ruptura de las fibras), y qumicas
(despolimerizacin y rotura de enlaces) y una celulosa mas accesible a la
hidrolisis enzimtica. Las variables a controlar en este tipo de procedimiento son
la temperatura, el tiempo de residencia, el tamao de partcula, y la humedad.
Pretratamiento Trmicos
Agua liquida a alta temperatura (LHW): En este proceso se somete la
biomasa al efecto de agua caliente a una temperatura entre 170
230C por un tiempo de 46 min. El objetivo de este pretratamiento es
solubilizar principalmente la hemicelulosa de la celulosa para hacerla
mas accesible y evitar la formacin de inhibidores. Para evitar la
formacin de inhibidores, el pH debe mantenerse entre el 4 y 7 durante
el pretratamiento. Mantener el pH entre 4 y 7 minimiza la formacin de
monosacridos y, por lo tanto, tambin la formacin de productos
degradacin que puede seguir catalizando la hidrolisis del material
celulsico durante el pretratamiento.
Pretratamiento Fsico-Qumicos
Proceso de explosin de fibra con amoniaco (AFEX): El pretratamiento
con amoniaco se realiza con cargas de amoniaco en torno a 1:1 (amoniaco
kg/kg peso biomasa seca) a temperaturas que van desde la temperatura
ambiente con una duracin de 10 a 60 das, a temperaturas de hasta 120 .C,
con una duracin de varios minutos. Tambin se da un aumento de seis veces
la hidrolisis enzimtica y un rendimiento de 2,5 veces el rendimiento a etanol
despus de este pretratamiento.
Explosin con CO2: Se lleva a cabo con alta presin y altas temperaturas de
hasta 200 .C, con una duracin de varios minutos. Este pretratamiento produce
lquidos que pueden ser cidos, estos cidos hidrolizan especialmente la
hemicelulosa.
Pretratamiento Qumicos
Hidrolisis acida: Es un proceso qumico que emplea catalizadores cidos para
transformar las cadenas de polisacridos que forman la biomasa (hemicelulosa
y celulosa) en sus monmeros elementales. Este tipo de hidrolisis utiliza
diferentes clases de cidos: sulfuroso, clorhdrico, sulfrico, fosfrico, ntrico y
frmico. Siendo solamente usados a nivel industrial los cidos clorhdrico y
sulfrico. Los mtodos industriales de hidrolisis acida se agrupan en dos tipos:
los que emplean cidos concentrados (10-30%), trabajan a bajas temperaturas
(170-190.C) y mayor tiempo de residencia; y los que utilizan cidos diluidos (1-
5%), a temperaturas mas altas (160-240.C), y tiempo de reaccin de 6-12
segundos.. La hemicelulosa puede ser sometida a reacciones hidroliticas
produciendo monmeros, como furfural, HMF y otros productos. Durante el
pretratamiento cido la lignina es rpidamente condensada y precipitada en
ambientes cidos.
Pretratamiento Qumicos
Oxidacin hmeda: Un pretratamiento oxidativo consiste en la adicin de un
compuesto oxidante, como el perxido de hidrogeno o acido peracetico a la
biomasa, que esta sumergida en el agua. Durante el pretratamiento oxidativo
puede tener lugar reacciones como sustitucin electrofilica, el desplazamiento
de cadenas laterales, rompimientos de vnculos de alquil, aril, eter o de nucleos
aromticos.
Hidrolisis con lcalis: Se lleva a cabo con NaOH diluido donde se sumerge el
material lignocelulsico, a 60.C por 24 horas, produciendo un hinchamiento de
la biomasa, teniendo lugar reacciones como solvatacin y saponificacin. Esto
provoca un estado de inflamacin de la biomasa, lo que la hace mas accesible
para enzimas y bacterias. Disoluciones de lcalis fuertes dan lugar a hidrolisis
alcalina, degradacin y descomposicin de polisacridos y rompimiento de
radicales finales. La perdida de polisacridos es causada principalmente por el
rompimiento de radicales finales y reacciones hidroliticas.
Pretratamiento Qumicos
Tratamiento con solventes orgnicos: En el proceso, un compuesto orgnico o
acuoso se mezcla con un acido inorgnico (HCl o H2SO4), este se utiliza para
romper el interior de la lignina y puentes de hemicelulosa. Se emplean disolventes
orgnicos como metanol, etanol, acetona, etilenglicol, trietilenglicol y alcohol
tetrahidrofurfurilico. cidos orgnicos como oxlico, acetilsalicilico y
salicilico tambin puede ser utilizados como catalizadores en el proceso. A
temperaturas altas (por encima de 185 C), el uso de catalizadores es innecesario
para la deslignificacin.
Denominado as porque su aplicacin busca eliminar todas aquellas
substancias que pudieron formarse durante el sometimiento de la materia
prima al pre-tratamiento y la hidrolisis enzimtica, y que resultan toxicas e
inhibitorias en la fermentacin. Dichas substancias suelen formarse debido a
las altas temperaturas y condiciones acidas en las que se desarrollan las
anteriores etapas. De igual manera, busca evitar la formacin de otras
substancias durante el proceso de fermentacin que afecte la
produccin de etanol.
Detoxificacin
Existen distintas clasificaciones que agrupan este tipo de sustancias
inhibidoras, los principales tres grupos: derivados del furano (generados a partir
de la hidrolisis de hemicelulosa), cidos alifticos de bajo peso molecular
(degradacin de furanos) y derivados fenlicos (provenientes de la degradacin
de la lignina). Cualquiera de estas clasificaciones es valida, ya que renen
todos los compuestos txicos conocidos en este tipo de proceso.

De todos estos los mas reconocidos son el furfural formado a partir de la
degradacin de las pentosas (xilosa y arabinosa) y el hidroximetil furfural
(HMF), formado como consecuencia de la degradacin de las hexosas
(glucosa, manosa y galactosa).
Inhibidores
Hidrlisis enzimtica
Proceso catalizado por enzimas denominadas celulasas, cuyo propsito es la
degradacin de la celulosa (los autores). El uso del pre-tratamiento como se
explicaba anteriormente, facilita el desarrollo de esta etapa. Cabe destacar que en
la mayora de procesos existe un primordial inters por los azucares provenientes
de la celulosa, sin embargo, la tendencia actual es el aprovechamiento integral de
la biomasa, y en especial de otros azucares como las pentosas, provenientes de la
hemicelulosa, conllevando al uso de enzimas que acten sobre dichas substancias
como es el caso de las xilanasas y las xilasas.

Para el caso de la hemicelulosa esta corresponde a un heteropolisacrido, ya que
sus ramificaciones estn compuestas por mas de un tipo de monmero o
polisacridos como es el caso de la xilosa (principal constituyente), arabinosa,
galactosa, manosa, glucosa y acido glucornico, a su vez unidos por un solo tipo
de monosacridos unidos por enlaces (1-4), que forman cadena lineal
ramificada. Entre los cuales destacan la glucosa, la galactosa o la fructosa
(dependiendo del tipo de material a emplear. Por ello, con el fin de aprovechar la
fraccin de hemicelulosa se suelen emplear enzimas tales como xilasas, xilanasas,
-l arabinofuranosidasa, -xylosidasa, entre otras.
La biodegradacin total del xilano requiere endo--1,4-xilanasa, -xilosidasa y varias
enzimas accesorias, que son necesarias para la hidrlisis de diversos xilanos
sustituidos.

Las cadenas laterales debe escindirse antes de la cadena principal de xilano y as
pueden ser completamente hidrolizado.

Aunque la estructura de xilano es ms compleja que la celulosa y requiere varias
enzimas diferentes con especificidades diferentes para la hidrlisis completa, el
polisacrido no forma estrechamente empaquetados estructuras cristalinas como la
celulosa y es por lo tanto ms accesible a la hidrlisis enzimtica.

El procedimiento que arroja mejores resultados en la sacarificacin enzimtica de la
hemicelulosa implica el pretratamiento de fibra de maz (15% de slidos, w / v) con
cido diluido (0,5% H2S04, v / v) a 121 cc por 1 h, la neutralizacin a pH 5,0, a
continuacin, sacarificacin del material de fibra de maz pretratado con celulasa
comercial y preparaciones -glucosidasa.Este procedimiento no gener inhibidores
tales como furfural y HME. Por lo tanto, un tratamiento previo con cido diluido a una
temperatura relativamente baja para minimizar la formacin de compuestos inhibidores,
seguido por sacarificacin enzimtica de la porcin celulsica, es un excelente proceso
viable para la generacin fermentable azcares de la fibra de maz.

La produccin de etanol combustible a partir de la
hemicelulosa hidrolizado

La utilizacin de los azcares de hemicelulosa es esencial para la conversin
eficiente y rentable de material lignocelulsico en combustible etanol. En el ao
2002. Ms de 2 mil millones de galones de etanol se produjeron, principalmente,
por la fermentacin de maz almidn. La demanda de etanol combustible se espera
que aumente muy fuertemente como una alternativa ms segura al metil terciario
butil ter (MTBE), el aditivo ms comn a gasolina utilizada para proporcionar una
combustin ms limpia, ya que el MTBE se ha encontrado que contamina las
aguas subterrnea. Varios residuos lignocelulsicos y subproductos agrcolas
pueden servir como materia prima de bajo costo para produccin de etanol
combustible.


La produccin de etanol combustible a partir de la
hemicelulosa hidrolizado




La mezcla de azcar puede contener cualquier combinacin de xilosa, arabinosa,
glucosa, galactosa, manosa, fucosa y la ramnosa dependiendo de la fuente.

Las levaduras Pachysolen tannophilus, Pichia stipitis, Candida y shehate tienen la
capacidad para fermentar la xilosa a etanol.

Sin embargo. xilosa puede convertirse en xilulosa utilizando la enzima xilosa
isomerasa y levaduras tradicionales puede fermentar xilulosa al etanol, aunque el
proceso no es rentable.

Algunas bacterias. como la Escherichia coli. Klebsiella. Envinia. Lactobacillus.
Bacillus. y clostridios. puede utilizar azcares variadas, pero solo producen una
limitada cantidad de, etanol. Estas bacterias generalmente producen cidos mixtos
(acetato, lactato, succinato de propionato, etc)

El xilitol. Un azcar de cinco carbonos alcohol. Ha atrado mucho atencin debido
a su potencial uso como un alimento natural edulcorante. Un reductor de caries
dental. Y un sustituto de azcar para los diabticos. En la actualidad se produce
por reduccin qumica
en condiciones alcalinas de la xilosa derivado principalmente de hidrolizado de
madera

La mayor parte de xilitol producida se consume en diversos productos
alimentarios, tales como goma de mascar, caramelos, refrescos y helados, ya
que da una agradable sensacin de frescura.

Algunas levaduras conocidas para producir xilitol son: Candida boidini,
Guillermondii Candida, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, y Debaryomyces
hansenii.


La produccin de xilitol a partir de la hemicelulosa
hidrolizado

Para obtener mayor la productividad de xilitol, hidrolizados tratados se concentr
por evaporacin a vaco en un rotavapor para proporcionar mayor concentracin
de xilosa inicial. La tasa de xilitol aumento de la produccin al aumentar la
concentracin inicial de xilosa

Mayerhoff evaluaron 30 cepas diferentes de levadura que pertenecen a cuatro
gneros diferentes (Candida, Debaryolllyces, Hansenula y Pichia) para la
produccin de xilitol a partir de la paja de arroz. El mejor desempeo fue
Candida mogii.
La produccin de xilitol a partir de la hemicelulosa
hidrolizado

2,3-butanodiol. Tambin conocido como 2,3-butileno glicol (2,3-BD) es un
material de alimentacin qumico valioso debido a su aplicacin como un
disolvente de combustible, lquido, y como un precursor de muchos polmeros
sintticos y resinas

Tambin tiene uso como un aditivo de combustible lquido. La deshidratacin
de los 2,3-BD produce el disolvente industrial como la metil etil cetona, que es
mucho ms adecuado como un combustible debido a su punto de ebullicin
bajo. Otro producto de la deshidratacin es el 1,3- butanedieno, que es el
material de partida para la sntesis caucho.

Durante la Segunda Guerra Mundial, fue necesario para la conversin de 1,3-
butanedieno. Metil etil cetona puede ser hidrogenado para producir ismeros
alto octanaje adecuado de alta calidad de los combustibles de aviacin.

El alto punto de ebullicin de 2,3-BD, su alta afinidad por el agua, y las
sustancias disueltas y slidas de la fermentacin hacen difcil del 2,3-BD estar
purificado.
produccin de 2,3-butanodiol a partir de hidrolizado de
hemicelulosa

Importancia Industrial de la Hemicelulosa
La conversin de la hemicelulosa en el valor agregado til de
productos por las rutas enzimticas y / o de fermentacin tiene
fuerte promesa para el uso de una variedad de residuos agrcolas
para fines prcticos. Algunos de los emergentes mtodos de
pretratamiento, tales como perxido alcalino y AFEX con enzimas u
otros medios con el fin de producir azcares fermentables.

Con el desarrollo de un adecuado mtodo de tratamiento previo,
minimizando la formacin de compuestos inhibidores de
microorganismos fermentativos y con la combinacin adecuada de
enzimas.

Muchas investigaciones se deben hacer para desarrollar un
pretratamiento eficiente y rentable, para la conversin de
hemicelulosa a escala industrial, de una manera competitiva en
costos.

Observaciones finales