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CROMATOGRAFIA DE FLUIDOS

SUPER CRITICOS
PROPIEDADES DE LOS FLUIDOS
SUPER CRITICOS
La temperatura crtica de una sustancia es la
temperatura por encima de la cual no puede existir en
fase lquida independientemente de la presin.
La presin de vapor de una sustancia a su temperatura
crtica es supresin crtica.
Una sustancia a temperaturas y presiones por encima
de su temperatura y de su presin critica (punto crtico)
se denomina fluido supercrtico.
Los fluidos supercrticos tienen densidades,
viscosidades y otras propiedades que son intermedias
entre las caractersticas de esa sustancia en estado
gaseoso y en estado lquido.

La Tabla 29-1 compara algunas propiedades de los
fluidos supercrticos con las de gases y lquidos tpicos.
La Tabla 29-2 relaciona las propiedades de cuatro de las
cerca de dos docenas de compuestos que han sido
empleados como fases mviles en cromatografa de
fluidos supercrticos. Obsrvese que sus temperaturas
crticas y las presiones a estas temperaturas quedan
dentro de las condiciones habituales de trabajo en
HPLC.
Una propiedad importante de los fluidos supercrticos,
que est relacionada con sus densidades elevadas (de
0,2 a 0,5 g/cm3), es su notable capacidad para disolver
molculas grandes no voltiles. Por ejemplo, el dixido
de carbono supercrtico disuelve fcilmente n-alcanos
que poseen entre 5 y 30 tomos de carbono, ftalatos de
di-n-alquilo en los cuales los grupos alquilo contienen
entre 4 y 16 tomos de carbono y diversos
hidrocarburos aromticos policclicos que presentan
varios anillos.
TABLA 29-1. Comparacin de las propiedades de los
fluidos supercrticos con las de gases y lquidos
Gas
Fluido
supercrtico
Lquido
Densidad (g/cm
3
) (0,6-2) x 10
-3
0,2-0,5 0,6-2
Coeficiente de difusin
(cm
2
/s)
(1-4) x 10
-1
10
-3
-10
-4
(0,2-2) x 10
-5

Viscosidad (g cm
-1
s
-1
) (1-3) x 10
-4
(1-3) x 10
-4
(0,2-3) x 10
-2

Es digno de sealarse que ciertos procesos
industriales importantes se basan en la elevada
solubilidad de las especies orgnicas en dixido
de carbono supercrtico. Por ejemplo, para la
extraccin de la cafena de los granos de caf y
obtener el caf descafeinado o de la nicotina del
tabaco se ha empleado este fluido supercrtico.
Una segunda propiedad notable de los fluidos
supercrticos es que los analitos disueltos en
ellos pueden ser fcilmente recuperados por el
procedimiento simple de permitir que las
disoluciones se equilibren con la atmsfera a
temperaturas relativamente bajas.

As, un analito disuelto en dixido de carbono
supercrtico, que es el usado ms
frecuentemente como disolvente, puede ser
recuperado sencillamente reduciendo la presin
y dejando que el fluido se evapore en las
condiciones ambientales del laboratorio. Esta
propiedad es particularmente importante en el
caso de que los analitos termolbiles. Otra
ventaja de muchos de los fluidos supercrticos
es que son baratos, inocuos y no son sustancias
txicas, por lo que se pueden dejar evaporar
libremente en la atmsfera sin efectos
ambientales dainos.
El dixido de carbono como fluido supercrtico
es especialmente til tanto para extracciones
como para cromatografa.
TABLA 29-2. Propiedades de
algunos fluidos supercrticos
Temperatura Presin Densidad en el Densidad a
Fluido crtica, C crtica, atm
punto crtico,
g/mL
400 atm, glmL
CO
2
31.3 72.9 0.47 0.96
N
2
O 36.5 71.7 0.45 0.94
NH
3
132.5 112.5 0.24 0.40
n-Butano 152.0 37.5 0.23 0.50
Adems, los fluidos supercrticos tienen la
ventaja de que las difusividades de los solutos
en ellos son un orden de magnitud ms altas
que en los lquidos y que las viscosidades son
un orden de magnitud ms bajas que las de los
disolventes lquidos. Como se mostrar en este
captulo, estas dos ltimas ventajas son
importantes, tanto en la cromatografa como en
las extracciones con fluidos supercrticos.
La cromatografa de fluidos supercrticos (SFC)
es una modalidad hbrida entre la cromatografa
de gases y la cromatografa de lquidos que
combina alguna de las mejores caractersticas
de cada una de ellas

CROMATOGRAFIA DE FLUIDOS
SUPER CRITICOS
La cromatografa de fluidos supercrticos es de gran
importancia porque permite la separacin y
determinacin de un grupo de compuestos que no son
manipulados convenientemente ni por la cromatografa
de gases ni por la de lquidos.
Estos compuestos son: (1) los compuestos no voltiles o
trmicamente hbileso para los que la cromatografa de
gases es inaplicable
(2) los compuestos que tienen grupos funcionales que
no son detectables por las tcnicas espectroscpicas o
electroqumicas empleadas en cromatografa de
lquidos. Chester ha calculado que hasta de un 25 por
100 del total de los problemas de separaciones a los
que hacen frente los qumicos de hoy da son mezclas
que contienen tales especies de difcil tratamiento .
INSTRUMENTACION Y
VARIABLES DE OPERACION
las presiones y las temperaturas necesarias para
originar los fluidos supercrticos a partir de los diversos
gases y lquidos se ajustan bien dentro de los lmites de
trabajo de un equipo de HPLC corriente.
Primero, es necesario un horno, similar al empleado en
cromatografa de gases (Apartado 2711-3), para
mantener la columna termostatizada y adems,
proporcionar un control preciso de la temperatura de la
fase mvil; segundo, un restrictor o un dispositivo de
contrapresin, que se utiliza para mantener la presin en
la columna en el nivel deseado y para convertir el
eluyente, de fluido supercrtico en un gas, y arrastrarlo al
detector.
Un restrictor tpico para una columna tubular abierta de
50 a 100 -m consiste en un capilar de 2 a 10 cm de
longitud y 5 a 10 -m de dimetro, el cual est
directamente unido al extremo final de la columna.
En otros casos, el restrictor puede ser una parte
integrante de la columna formado por el alargamiento
del extremo de la columna al calentar sta en una llama.
El primero permite el empleo de restrictores
intercambiables que tengan dimetros de entrada
diferentes, proporcionando as un intervalo de caudales
para cualquier presin de bombeo dada.
Como se muestra en la Figura 29-1, un instrumento
comercial de SFC est equipado habitualmente con uno
o ms microprocesadores que permiten el control de las
variables instrumentales tales como la presin de
bombeo, la temperatura del horno y el funcionamiento
del detector.

EFECTO DE LA PRESION
Las variaciones de presin en cromatografa de fluidos
supercrticos tienen un efecto muy marcado sobre el
factor retencin o de capacidad, k'.
Este efecto es una consecuencia del incremento de la
densidad de la fase mvil a medida que aumenta la
presin. Tal incremento de la densidad origina un
aumento de la capacidad disolvente de la fase mvil, lo
cual acorta los tiempos de elucin.
La mayora de los perfiles de presin utilizados
normalmente en cromatografa de fluidos supercrticos
son: presin constante (isobrico) para un perodo de
tiempo dado seguidos de un aumento lineal o asinttico
de la presin hasta alcanzar el valor de la presin final.
FASES ESTACIONARIAS
En SFC se emplean tanto las columnas abiertas
como las columnas rellenas, aunque
normalmente las primeras son las ms
empleadas.
Las columnas abiertas son similares a las
columnas de slice fundida con recubrimientos
internos de varios tipos de siloxanos enlazados
y de enlaces cruzados.
Las columnas tienen normalmente una longitud
de 10 a 20 m y un dimetro interno de 0,05 a
0,10 mm.
El espesor de la pelcula vara entre 0,05 y 1 -m.
Las columnas rellenas semejantes a las utilizadas en
cromatografa de reparto, tambin se utilizan en SFC.
Estas columnas tienen dimetros que varan entre 0,5
mm o menos y 4,6 mm, con dimetros de partcula que
oscilan entre 3 y 10 -m. Los recubrimientos son similares
a los utilizados en HPLC de reparto.
FASES MOVILES
La fase mvil utilizada ms ampliamente en cromatografa de
fluidos supercrticos es el dixido de carbono.
Es un disolvente excelente para un conjunto de molculas
orgnicas no polares. Adems, es una sustancia transparente
en el ultravioleta, es inolora, no txica, fcilmente disponible y
muy barata cuando se compara con otras fases mviles
cromatogrficas.
La temperatura crtica del dixido de carbono es 31 C y su
presin crtica 72,9 atmsferas, lo cual permite jugar con una
banda amplia de temperaturas y presiones sin superar las
condiciones de operacin de un equipo de HPLC moderno.
En algunas aplicaciones, en concreto con analitos polares, se
pueden introducir modificadores polares orgnicos como el
metanol, en pequeas concentraciones (- 1 por 100), para
modificar los valores de a de los analitos.
Un gran nmero de sustancias como etano, butano, xido
nitroso, diclorodifluorometano, ter dietlico, amonaco y
tetrahidrofurano han sido utilizadas como fases mviles de
cromatografa de fluidos supercrticos.
DETECTORES
La principal ventaja de la SFC frente al HPLC es que se
pueden utilizar como en la cromatografa de gases,
detectores de ionizacin de llama este detector es de
respuesta universal a compuestos orgnicos, de elevada
sensibilidad y exento de problemas, en general.
Los espectrmetros de masas tambin se pueden
adaptar como detectores ms fcilmente para SFC que
para HPLC.
Muchos de los detectores utilizados en cromatografa de
lquidos se emplean tambin en SFC, entre ellos
detectores de absorcin en el ultravioleta y en el
infrarrojo, de emisin de fluorescencia, termoinico y
fotomtrico de llama.

COMPARACION DE LA SFC CON
OTRAS CROMATOGRAFIAS
En consecuencia, este nuevo tipo de cromatografa combina
algunas de las caractersticas tanto de la cromatografa de
gases como de la de lquidos. Por ejemplo, al igual que en la
cromatografa de gases, la cromatografa de fluidos
supercrticos es intrnsecamente ms rpida que la
cromatografa de lquidos debido a que la viscosidad ms baja
hace posible obtener velocidades de flujo ms elevadas.
Las velocidades de difusin en la cromatografa de fluidos
supercrticos son intermedias entre las de los gases y las de
los lquidos.
En consecuencia, el ensanchamiento de banda es mayor en los
fluidos supercrticos que en los lquidos, pero menor que en
los gases. Las difusividades y las viscosidades intermedias de
los fluidos supercrticos deberan, en teora, dar lugar a
separaciones ms rpidas que las que se obtienen con la
cromatografa de lquidos, a la vez que deberan acompaarse
de un ensanchamiento de zona ms bajo que el que se obtiene
en cromatografa de gases.
Las Figuras 29-3 y 29-4 comparan las caractersticas de
resolucin de una columna rellena cuando la elucin se
desarrolla con dixido de carbono supercrtico y una
fase mvil lquida convencional.
En la Figura 29-3 se puede ver que a una velocidad
lineal de la fase mvil de 0,6 cm/s, la columna del
equipo de SFC rinde una altura de plato de 0,013 mm
mientras que la altura de plato con un eluyente lquido
es tres veces mayor, esto es 0,039 mm.
Y as, debera obtenerse una reduccin de la anchura de
pico por un factor de 3.
Por otra parte, hay una ganancia de 4 en la velocidad
lineal a la altura de plato correspondiente al mnimo de
la curva en HPLC; esta ganancia tendra como resultado
una reduccin de los tiempos de anlisis a la cuarta
parte. Estas ventajas se reflejan en los cromatogramas
que se muestran en la Figura 29-4.
APLICACIONES
La cromatografa de fluidos supercrticos
se ha aplicado a la separacin de un
amplio conjunto de sustancias, entre los
que se cuentan productos naturales,
frmacos, alimentos, pesticidas y
herbicidas, tensioactivos, polmeros,
aditivos de polmeros, combustibles fsiles
y explosivos y propelentes.

Tiempo Recogida
de extraccin, independiente
Material Analito* SF min (1) y en lnea (2)
Suelos Pesticidas CO
2
20 1
Sedimentos fluviales PAH CO
2
/5 % MeOH 120 1
Humo, polvo urbano PAH CO
2
15 2
Lecho de la va frrea PCB, PAH C02/MeOH 45 1
Alimentos Grasas CO
2
/MeOH 12 1
Saborizantes, chicles Aromas y fragancias CO
2
10 2
Suero Colesterol CO
2
30 1
Carbn, cenizas en PCB, dioxinas CO
2
15 2
suspensin
Polmeros Aditivos y oligmeros CO
2
15 2
Tejidos animales Residuos de medicamentos CO
2
9 1
1. La SFE, en general, es rpida. La velocidad de
transferencia de masa entre la matriz, la muestra y un
fluido de extraccin se determina por la velocidad de
difusin de la especie en el fluido y por la viscosidad del
fluido; a mayor velocidad de difusin y ms reducida
viscosidad, la velocidad de transferencia de masa ser
mayor. Como ya se ha sealado anteriormente, ambas
variables son ms favorables para los fluidos
supercrticos que para un disolvente lquido tpico. En
consecuencia, la extraccin con fluidos supercrticos se
completa, generalmente, entre 10 y 60 minutos,
mientras que las extracciones con lquidos orgnicos
pueden necesitar varias horas e incluso das.

2. El poder disolvente de un fluido supercrtico puede
modificarse por los cambios en la presin y, con menor
alcance, en la temperatura. Por el contrario el poder
disolvente para un lquido orgnico es esencialmente
constante e independiente de las condiciones. Esta
propiedad permite que las condiciones para la
extraccin con fluidos supercrticos puedan ser
optimizadas para una clase de analitos dada.
3. Muchos de los fluidos supercrtico son gases a
temperatura ambiente. As, las recuperaciones de los
analitos son sencilllas comparadas con las de los
lquidos orgnicos que deben vaporizarse por
calentamiento, lo que lleva a una posible
descomposicin en el caso de los analitos trmicamente
inestables o bien a prdidas en el caso de los analitos
voltiles. En contraposicin, un fluido supercrtico puede
ser separado simplemente por descenso de la presin.
Adems, la corriente del analito puede hacerse
borbotear atravs de un pequeo vial que contenga un
buen disolvente para el analito, el cual se disolver en
un pequeo volumen de disolvente.


4. Algunos fluidos supercrticos son baratos,
inertes y no txicos. Por tanto, se les puede
eliminar fcilmente una vez finalizada la
extraccin dejndolos que se evaporen a la
presin atmosfrica.
La cromatografa de fluidos supercrticos se
caracteriza por una mayor resolucin y rapidez,
con relacin a la cromatografa de lquidos,
porque los coeficientes de difusin de los
solutos son mayores en fluidos supercrticos.
(No obstante, la rapidez y resolucin son
inferiores a la que se consigue en cromatografa
de gases.)
A diferencia de los gases, los fluidos
supercrticos pueden disolver solutos no
voltiles.