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TEJIDOS

NUCELARES
Juan Medina Payares


UNIVERSIDAD DE SUCRE
FACULTAD DE EDUCACIN Y CIENCIAS
PROGRAMA DE BIOLOGIA
CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES
BIOTECNOLOGIA
2013
NUCELA
Masa parenquimatosa.
Parte principal del vulo
Meristemticas.
Embriona nucelar
Forma de reproduccin: ctricos.
Adems de embrin fertilizado:
clulas somticas.
Embriones nucelares. Clulas 2n.
Apomixis: embriones en forma
asexual.
Sin fusin de clulas haploides.
Plantas nucelares: clones de los
padres.
Apomixis
Apo= sin, mixis=mezcla.
TIPOS:
Recurrente.
Embriones: ncleo de la ovoclula.
Diploide: no hay meiosis completa
Misma constitucin gentica.
No recurrente.
Embrin: ovoclula normal.
Haploide sin fertilizar.
Adventicia o nucelar.
Embriones fuera del saco embrionario.
Diploides genticamente idnticos a madre.
Poliembriona
Mas de un embrin en una semilla.
Embriones nucelares.
Embriones cigoticos: clulas del saco embrionario.
Primer caso: ctricos.
Monoembrinicas: clementinas.
7 o 9 embriones en semilla.
Proporcin por semilla: 1,5 plantas
Divisin de ovoclula: embriones cigoticos ident.
Poliembriona nucelar: aborto de embrin cigotico
Plantas nucelares
Citogenticamente iguales a la madre.
Vigor.
Rpido crecimiento.
Hojas y espinas de gran tamao.
Lentitud: produccin.
Plantas: propagacin por yemas. Enf. Virosas.
Por semillas: virus no llega al embrin.
Monoembrinicas: clementine, pomelo, cidro.
Monoembrinico + poliembrinico = 50% y 50%.
Ventajas e inconvenientes
Ventajas:
Libres de virus.
Vigor y productividad.
Desventajas:
Juvenilidad: espinas y demora en produccin.
Embriones nucelares ahogan a embriones cigoticos.
Difcil diferenciarlas (nucelares o hibridas).
Cruces: toronja + tangerina: hojas forma cuchara.
Polen de trifolio (poncirus trifoliata).
ESPECIES
MANDARINA KINNOW.
Hibrido: citrus nobilis lour x
Citrus deliciosa tenora.
Grande de color naranja.
12 a 25 semillas.
1.000 frutos por rbol.

Virus de la mancha anular
Hojas: mosaico amarillo intenso.
Reduccin del tamao de hojas.
Superficie foliar disminuye.
Deteccin del crecimiento de la planta.
Rendimiento menor que plantas sanas.
Frutos no aceptables para el mercado.
Aphis citricola, A. gossypii, A. craccivora, A. rumicis,
Myzus persicae, Acyrtosiphor solani, Hysteroneura
setariae, Toxoptera citricidus y Macrosiphun rosae.
Produccin in vitro de la planta de mandarina
Kinnow ( Citrus nobilis Lour x C. deliciosa Tenora)
libre del virus de la mancha anular en ctricos por
cultivo de embriones nucelares
B. Singh, S. Sharma , G. Rani , AA Zaidi , V. Hallan , GS Virk and A.
Nagpal , 2006. In vitroProduction of Indian citrus ringspot virus -free
Plants of Kinnow Mandarin ( Citrus nobilisLour xC. deliciosa Tenora)
by Nucellar Embryo Culture. Plant Pathology Journal, 5: 274-282.
METODOLOGIA
Seleccin de la planta madre.
ELISA indirecto y PCR.
Planta positiva para ICRSV: recoleccin de frutos
inmaduros. 100-120 das despus de polinizacin.
Preparacin del explante.
Extraccin de semillas (planta infectada).
Esterilizacin superficial de semillas: HgCl2 0.1%
Embriones nucelares se extraen desde extremo
micropilar de semillas: contienen de 7-8 embriones.
Induccin de callos.
E.N cultivados en medio MS. Varias concentraciones de 2,4-D
(4,51, 9,02, 13,54, 18,05, 22,57 mM)
extracto de malta (200, 300, 400, 500 mg L -1)
pH a 5,6 con NaOH 1 N. autoclave a 121 C y 15 l de presin
-
2
durante 20 min.
E. nucelar: 20 ml del medio. Para cada conjunto de
experimentos: 24 tubos por duplicado. Se repiti tres veces.
T=26 1 C, intensidad luminosa de 40 mol
m-2 s-1
y 16-h de
fotoperiodo.
Induccin de callos: despus de 4 semanas., frecuencia.

METODOLOGIA
Formacin de embriones somticos y la germinacin.
callos embriognico: se subcultivaron en medio MS.
Diferentes [ ] de extracto de malta (200-600 mg
L-1)
por s
solos y en combinacin [ ] de cido abscsico (3,78, 7,56,
11,34, 15,12 mM) para embriognesis somtica.
Cultivos con desarrollo del e. somtico se registr despus de
4 semanas de inoculacin.
E. somticos en etapa de cotiledones se transfirieron a MS,
MS y cuarto medio MS suplementado con NAA (10,74 mM)
para la germinacin.
Para cada conjunto de experimentos, se inocularon 24 tubos
por repeticin y los experimentos se repitieron tres veces.
METODOLOGIA
METODOLOGIA
Endurecimiento y trasplante.
Las plntulas: se lavaron con agua: eliminar agar.
Se transfirieron a macetas. Esterilizacin: autoclave
mezcla de tierra de jardn, arena y vermiculita en la
proporcin de 03:01:01.
Endurecimiento de plntulas: sala de cultivo fijado en 26 2
C, 16 h-da-longitud (40 mol
m-2 s-1)
cubiertos con bolsas de
polietileno.
12-15 das, b. de polietileno se eliminaron por (15-30 min)
todos los das durante una semana.
Tiempo de exposicin: 30 min para cada da. Se eliminaron
bolsas de polietileno a los 20 das. Plntulas se transfirieron a
las vasijas de barro que contienen slo tierra de jardn.
RESULTADOS
Induccin de callos.
Tabla 1: Efecto de diferentes
concentraciones y combinaciones
de extracto de malta y 2,4-D en la
induccin de callos a partir de
embriones nucelar cultivadas en
medio MS que contena agar al
0,8% y 3% de sacarosa.
(Observaciones registrados
despus de 4 semanas de cultivo)
RESULTADOS
Tabla 2: Efecto de diferentes
concentraciones de extracto de malta
solo o en combinacin con ABA en
la embriognesis somtica a partir de
callos embriognicos nucelar
cultivaron en medio MS que
contena agar al 0,8% y 3% de
sacarosa. (Observaciones registrados
despus de 4 semanas de cultivo)
RESULTADOS
Electroforesis en gel de agarosa de producto
de PCR (gen de protena de revestimiento
parcial, 539 pb) de ICRSV (carril 1. Cultivo de
embriones nucelares levant plntula
acclimatizated a los dos aos de edad que
crecen en invernadero de malla, Lane 2. M =
100 pb marcador escalera, carril 3. ICRSV
vegetal infectado como control)
Efecto de diferentes concentraciones de medio MS con NAA a lo largo
de (10,74 mM) en germinacin de los embriones somticos registr
despus de 3 semanas de cultivo
DISCUSIN
Embriones somticos: requiere diferentes suplementos
reguladores de crecimiento en diferentes etapas: induccin de
callo, embriognesis somtica y la germinacin.
2,4-D y/o extracto de malta: proliferacin de callos.
extracto de malta+ [ ] ABA: embriognesis somtica.
Fitohormona ABA: desarrollo de semillas. Maduracin de E.S.
ABA: eliminar para germinacin.
NAA: germinacin de embriones somticos.
Plantas nucelares: negativas para ICRSV.
Cultivo de embriones nucelares: produccin de plantas libres de
virus.
FUTURO
El cultivo de tejidos a partir de embriones
nucelares representa una buena tcnica para
erradicar virus que afectan a los ctricos. Por lo
tanto, tendra buenos resultados en el rescate
de plantas infectadas que en un futuro puedan
estar en peligro de extincin.
REFERENCIAS
M. Charles. Cultivo de ctricos. 2da edicin. Instituto
interamericano de ciencias agrcolas. 1980.
J. Len. Botnica de los cultivos tropicales. 3ra edicin.
Costa Rica, 2000.
Paginas web consultadas:
Apuntes de clases tericas. Clones nucelares en ctricos.
[Consulta: 24 de septiembre de 2013]. Disponible en la
web:
http://es.scribd.com/doc/18009325/22/CLONES-
NUCELARES-EN-CITRICOS-Ventajas-e-
inconvenientes