UNIVERSIDAD NACIONAL

DE HUANCAVELICA
FACULTAD DE INGENIERIA
E.A.P. DE ZOOTECNIA

LUJAN ESPINOZA, Gladys Rufina.
PAITAN QUISPE, Tefilo.
VALENCIA ESCOBAR, Luz Mariza.

Microsatelites Polimrficos En
llama. Alpaca y Camello
BIOLOGIA CELULAR Y
MOLECULAR
Los Microsatelites O SSRs (simple sequence repeats) son
motivos repetidos de 1 a 6 nucletidos encontrados en
todos los genomas, tanto procariotas como eucariotas,
presentes en regiones del genoma tanto codificantes como
no codificantes, presentan un alto grado de polimorfismo
que los hace ptimos para utilizarlos como marcadores
moleculares en estudios de mapeo de genomas, estudios
forenses, o enfocados a la conservacin, tales como:
Medidas del flujo gnico e hibridacin entre poblaciones.
Asignacin de individuos a su poblacin de origen o
determinacin de la estructura poblacional.


Adems son selectivamente neutrales y co-dominantes, y se puede
trabajar con reducidas cantidades de ADN, sin que resulte
necesario el sacrificio de los animales porque se pueden amplificar
con la tcnica de la PCR.


Son muy frecuentes y estn repartidos en todo el genoma
eucariota.
Poseen una tasa de mutacin que oscila entre10
-3
-10
-5

Presentan herencia co-dominante y son fciles d e detectar
metodolgicamente.
Requieren de mnimas cantidades de material biolgico para su
anlisis, permitiendo incluso el anlisis de muestras degradadas.
Aportan un alto grado de informacin debido al elevado nmero
de alelos por locus que presenta.
Son biomoleculas que se pueden relacionar con un rasgo gentico que
pueden ser monomorficos o polimrficos en protenas (antgenos e
isoenzimas) y el DNA (genes conocidos o fragmentos de secuencia y
funcin desconocida),




Los marcadores son utilizados en diversos campos de la
produccin animal. Entre ellos destacan:
la identificacin de parentesco.
caracterizacin de la diversidad gentica.
la identificacin de genes responsables de caracteres de
inters.
el desarrollo de nuevos tratamientos de enfermedades,
etc.
tambin constituyen hoy una herramienta moderna y
poderosa para el viejo arte de la seleccin

MONOMORFISMO :

Es la ausencia de
variacin en una
poblacin dada que
se presenta por lo
general en regiones
genticas que
codifican para
regiones estructurales
bsicas de las
protenas.

POLIMORFISMO:

Es una variacin en
la secuencia de un
lugar determinado
del ADN entre los
individuos de una
poblacin ya sea en
el nivel gentico o
a nivel de las
protenas.
es una posicin fija sobre un cromosoma, como la posicin de un
gen o de un marcador gentico.
Una variante de la secuencia de ADN en un determinado locus se
llama alelo. La lista ordenada de loci conocidos para un genoma
particular se denomina mapa gentico, mientras que se denomina
cartografa gentica al proceso de determinacin del locus de un
determinado carcter biolgico.



un alelo es una variante de un gen, lo cual dar caractersticas
distintivas al individuo, al decir variante de un gen es que tendr
repercusiones en el fenotipo(el como te ves), para una
caracterstica distintiva los alelos vienen en pares los cuales son
provenientes por segregacin y son dados por el padre y por la
madre.


En este estudio, 32 nuevo loci de microsatlites
fueron seleccionados y secuenciados en base del
ADN genmico (gDNA) y entre los cuatro especies
amplificados tenemos:

7 Camelus bactrianus
8 Camelus dromedarius,
6 Lama glama (Llama).
4 Lama pacos (Alpaca).





El ADN genmico fue extrado de la sangre de las
cuatro especies:
Despus de ser aislados por fenol/cloroformo se
amplificaron en la Reaccin Cadena de la Polimerasa (PCR):
usando 25L de mezcla de reaccin que contiene un tampn
de Invitek, 1,5 mm MgCl2, , 0,1 mm de dNTP, 5-10 de cada
cebador, 1,25 U de Taq ADN polimerasa (Invitek) y 100 ng
gDNA.


1.- DESNATURALIZACIN.-En primer lugar, se
desnaturaliz el ADN este paso se realizo en el
termociclador a 94 C durante 5 min, 30 ciclos de
94C durante 45 s.

2.- ALI NEAMI ENTO O UNI N DEL CEBADOR.-La
segunda reaccin se realizo de 48-60C (de acuerdo con la
temperatura de hibridacin de los cebadores) durante 45 s,
consiste en la hibridacin de los primers. Para ello se baja
la temperatura y las condiciones sern tales que se facilitar
la unin de los primers a las cadenas.


Los fragmentos obtenidos se muestran en la siguiente tabla
de los loci polimrficos con similares longitudes de los
fragmentos allicas por locus por especie.
ENTRE LOS LOCUS AMPLIFICADOS EN LA PCR
TENEMOS:

SPECIES: CAMELUSBACTRIANUS
nombre del locus CMS3
microsatlites repetidos = (TTATAA) 9
Primer Forward (5'-3 ') GCTCTCTGTGCCTCAATATG
Cebador inverso (5'-3 ') ACCATAGTTCTGGGTAGCA
Temperatura de recocido 55 C.

SPECIES: LAMA GLAMA
Nombre del locus : CMS16
microsatlites repetidos = (TG) 34
Primer Forward (5'-3 ') ATTTTGCAATTTGTTCGTTCTTTC
Cebador inverso (5'-3 ') GAGTTTATTTGCTTCCAACACTT
Temperatura de recocido 60 C.





3.- EXTENSI N.- en la extensin la polimerasa lleva a cabo
su accin, insertando los diferentes nucletidos
complementarios en el orden que le va indicando la cadena
que acta como molde a 72C durante 30 s, seguido de una
extensin final a 72C durante 5 min.







Para la optimizacin, la temperatura y la concentracin de
MgCl2 se ajustaron para cada grupo de cebadores.

Luego de la PCR ya amplificados. Se separaron por electroforesis
en un 5% HYDROLINK geles utilizando un secuenciador. Los
tamaos de los fragmentos fueron analizados con el software
allelelinks .Anlisis de locus especficos tamaos de los fragmentos
allicas estimadas por el anlisis de las pruebas bsicas y
estadsticos se realizaron utilizando el software paquete BIOSYS .





Las diferentes especies tenan longitudes similares
de fragmentos por locus con ms similitudes
sorprendentes entre bactriano y el dromedario y
entre las llamas y alpaca.
Siete loci con ms de 10 alelos cada uno, nueve
fueron monomrficos en todas las especies
uno era monomrficos en camello bactriano y
polimrficos en Camelus dromedarius.
Fragmento de longitudes de los loci polimrficos
estn dadas en la Tabla 1