PRACTICA #1

Mnica Dorado Martnez Jarumi Prez Garca Irma Lpez Daz

Vernica Segovia Tagle

Fundamento Terico
La microbiologa es el estudio de los microorganismos de tamao microscpico , que incluye bacterias, hongos, protozoos y ciertas algas, y la Microbiologa tiene ciertas aplicaciones importantes que producen impacto en nuestra vida diaria en diferentes reas como en la Medica, en la agrcola, en la industrial y en los alimentos. Para el estudio de esta ciencia es indispensable el uso de instrumentos, los cuales permitan presenciar una imagen mas clara de los MO y se denomina MICROSCOPIO

Metodologa del Trabajo

Identificar partes del Microscopio ptico. Identificarlos correspondientemente al sistema al que pertenezcan

Definir una funcin para cada parte del Micros.

Verificar el trabajo de un compaero de equipo Llenar los 4 objetivos con la informacin correcta. Calcular Propiedades pticas del Micros.

ptico , iluminacin, mecnico.

Objetivo, aumento, apertura numrica, aumento mximo y mnimo, aumento del ocular, cifra de campo ocular, dimetro del campo visual, aumento total, 2

Metodologa del Trabajo

Realizar la tcnica de iluminacin de kholer Preparaciones temporales y fijas. Agua estancada y moho Tomar una gota de agua y colocarla en el centro Para el moho tomar la muestra Cubrir y observar 10x, 40x
H2O, porta objetos

Definir una funcin para cada parte del Micros.

Verificar el trabajo de un compaero de equipo Llenar los 4 objetivos con la informacin correcta. Calcular Propiedades pticas del Micros.

Objetivo, aumento, apertura numrica, aumento mximo y mnimo, aumento del ocular, cifra de campo ocular, dimetro del campo visual, aumento total,

Anlisis de resultados
Mantenerlo en posicin vertical, cuando se transporta de un lado al otro tomarlo del brazo Limpiar la fuente de iluminacin con papel seda al inicio y al final limpiar todos los objetivos

Antes de trabajar en el limpiar todas las partculas de polvo Conectar el M. a una alimentacin de luz con un voltaje adecuado.

Mediante la Tecnica de ilumnacion de Kholer , obtuvimos un campo visual iluminado de manera uniforme , para la observacion de MO de una manera mas detallada , ya que esta tecnica regula la concentracion y la direccion de los rayos de luz

Anlisis de resultados
A travs del Microscopio compuesto , desde su punto de vista ptico pudimos ver el aumento en las imgenes, amplia la visin de MO no visibles a simple vista. El aceite de inmersin se usa en el objeto 100X, con este aceite se consigue una mejor resolucin, y tambin la visin del MO

Las tinciones frescas son aquellas en las que no se utiliza ningn tipo de colorante , ni tincin y su importancia en los estudios biologicos son amplios, un claro ejemplo es su utilizacion para observar estructuras, tamaos deMO. Su duracion es muy corta

Anlisis de resultados
Los resultados obtenidos en el laboratorio fueron de cierta manera satisfactorios, logramos el objetico, pero tambin con ciertos errores , desarrollamos el procedimiento conforme al metodo estndar ,por principio para la tcnica de kholer , repetimos el procedimiento ya que la primera vez fallo , ya que si no lo lograbamos no podria observar lo que se buscaba y asi obtener los resultados.

Terminada la tecnica observamos nuestras preparaciones, las que se nos proporcionaron en el laboratorio y las que preparamos con agua estacanda y moho

Conclusiones
Logramos identificar cada parte del microscopio

Tambin se logro realizar la tcnica de kholer mediante los pasos que conlleva. Y manejar el microscopio ptico para una mejor observacin de las preparaciones fijas y temporales.

PRACTICA #2

Mnica Dorado Martnez Jarumi Prez Garca Irma Lpez Daz

Vernica Segovia Tagle

Fundamento Terico
Los MO no son visibles a simple vista por lo que para observarlos en indispensable el uso del Microscopio Para obtener una buena observacin microscpica, es necesario valorar la preparacin de la muestra, debido a que los objetos deben tener un medio de contraste con el entorno, Una manera muy util para lograr este contraste se baso en las tinciones (Simples y diferenciales)

Metodologa del Trabajo Preparar y observar tinciones simples (C. Solido) En un portaobjetos limpio y seco, colocar una gota y la muestra.

Cultivo liquido se fijo con dos gotas de etanol

Tincion Simple, cubrir el frotis por 30 segundos, eliminar el colorante y dejar secar

Azul de metileno

Cargar el asa con la muestra y descargar en la gota en condiciones de esterilidad.

Se fijo al calor. Pasandolo 2 veces por la flama de la lampara y se dejo secar al aire

Preparar Cultivo liquido.

En un portaobjetos limpio y seco, colocar una gota de agua

en condiciones de esterilidad acercar el tubo con el cultivo , extender sobre la caja de petri, y dejar secar al aire

Metodologa del Trabajo Preparar y observar tincione diferenciales, selectiva y negativa Con los cultivos preparados anteriormente de cultivo solido. Cubrir el frotis por 30 s y despues lavar Antes de secar agregar colorante por otros 30 s y lavar
E. Coli staphyloc ocus

dejamos secar y aplicamos

Tincin de Capsula

Dos gotas de safranina

Aplicamos al portaobjetos una gota de agua destilada

Cristal violeta

Lugol

En condiciones de esterilidad acercar el tubo con el cultivo y descargar en la gota previamente puesta en el portaobj. Sin dejar secar, colocar tinta china y quitar el sobrante con un cubreonjetos. Dejar secar y obervar

E. Coli

Metodologa del Trabajo

En el caso de las endosporas se logro ver la endospora pero no le da la manera reportada en literatura, debido al medio en el que se llevaron a cabo, las tinciones de Gram y Gram negativa no fueron hechas debido a la falta de distribucin de tiempo en el laboratorio, Las especies del genero bacillus tienen la propiedad de formar endosporas que son formas de resistencia , se forma dentro de una clula y protege a la bacteria de las condiciones adversas En esta practica calentamos la muestra hasta la emisin de vapores alrededor de 10 min esto con el fin de que el calor ayude a que el colorante atraviese la pared de la endospora. Al aadir la safranina lo que se busco fue teir la celula distinta a la endospora

Metodologa del Trabajo

En el caso de las endosporas se logro ver la endospora pero no le da la manera reportada en literatura, debido al medio en el que se llevaron a cabo, las tinciones de Gram y Gram negativa no fueron hechas debido a la falta de distribucin de tiempo en el laboratorio, Las especies del genero bacillus tienen la propiedad de formar endosporas que son formas de resistencia , se forma dentro de una clula y protege a la bacteria de las condiciones adversas En esta practica calentamos la muestra hasta la emisin de vapores alrededor de 10 min esto con el fin de que el calor ayude a que el colorante atraviese la pared de la endospora. Al aadir la safranina lo que se busco fue teir la clula distinta a la endospora

Anlisis de resultados
Al utilizar el objetivo de inmersin, se logro con el aceite de inmersin que se eliminaran los rayos entre el aire y el objetivo aumento la luminosidad y por consiguiente se logro una imagen mas especifica de la endospora.

Conclusiones
Fue posible llevar a cabo la observacin de la endospora no se tiio del color esperado , sin embargo fue favorable el resultado en cuanto a observado

Conclusiones
Se logro ver la endospora en la parte inferior izquierda de la clula, se logro ver el proceso llamado esporulacin

En el caso de la capsula no se tio del color esperado con el color verde de malaquita debido a que se seco la muestra al ser sometida al calor.

PRACTICA #3

Mnica Dorado Martnez Jarumi Prez Garca Irma Lpez Daz

Vernica Segovia Tagle

Introduccin
Para verificar el proceso de esterilizacin existen elementos que nos permiten verificar el cumplimiento de parametros predeterminados , algunos de ellos son compuestos qumicos hechos principalmente a base de sales de diferentes metales , otros son indicadores biolgicos, pueden ser tiras de papel impregnadas con esporas, en envases individuales Ampollas con tiras de papel inoculadas de esporas Provistas de un medio de cultivo incorporado

Metodologa del Trabajo

b.1 Preparacin del material para esterilizacin: Primera sesin Actividad 1. Lavado del material a esterilizar
1.- Lavamos el material con agua y jabn (pipetas, tubos, y matraces) 2.- Enjuagamos los materiales con abundante agua destilada y dejamos secar Actividad 2. Preparacin del material para esterilizar por calor hmedo 1.- elaboramos 10 tapones de algodn envueltos en gasa 2.- Elaboramos 10 gorros de papel kraft para los matraces 3.- Envolvimos 5 cajas de Petri y etiquetamos sobre el papel, colocamos la cinta indicadora 4.- Con las pipetas, en la boquilla de cada una de ellas colocamos un tapn de algodn 5.- envolvimos cada una de las pipetas con papel kraft

Metodologa del Trabajo

Iniciando por la punta y fijando el extremo del papel con una cinta indicadora 6.- En dos matraces Erlenmeyer colocamos 5 mL de una solucin salina al 0.85% 7.-Tapamos matraces con tapones de algodn y con los gorros de papel 8.-Etiquetamos los matraces con nuestros datos y colocamos una cinta indicadora 9.-Envolvimos unas tijeras y unas pinzas en papel kraft , colocamos la cinta indicadora y etiquetamos Actividad 3. Preparacion del Material para esterilizar por calor seco. 1.- Etiquetamos dos tubos de ensaye y los colocamos en una lata de aluminio. 2.- colocamos 5 cajas en un cilindro metalico para cajas de petri, y colocamos una etiqueta al cilindro 3.-Colocamos todas nuestras pipetas no envieltas en papel, en un pipetero metalico, y etiquetamos el cilindro

Metodologa del Trabajo

Colocamos en l tapa de dos matraces de 125mL una tapa de papel aluminio yb los qtiquetamos, 5.- envolvimos en papel aluminio unas pinzas y tijeras y etiquetamos b.2 Segunda Sesion Actividad 4. Realizar las pruebas de esterilidad Reduccion de la carga microbiana 1.-Preparamos dos tubos de ensaye con tres mL de agar nutritivo sin esterilizar y los etiquetamos 2.-En el tubo uno colocamos una tira de esporas (Testigo positivo) y en el tubo dos una tira de esporas, le colocamos un tapon de algodn y lo pusimos a una tempertura de 110 grados Actividad 3. en un tercer tubo con 3 mL de agar nutritivo esteril, lo usamos como testigo negativo lo incubamos 55 grados 6.-anotamos nuestras observaciones.

Metodologa del Trabajo

Esterilizacin por calor hmedo 1.-Preparamos la autoclave con las indicaciones y cuidados indicados en la bitacora 2.-Preparamos un tuvo de ensaye con 3Ml de agar nutritivo estril y lo etiquetamos 3.-Colocamos en el tuvo una tira de esporas y tapamos el tuvo con una tira de algodn y la pusimos en la autoclave a 121 grados durante 15 min. En este punto colocamos el material preparado para esterilizacion por calor humedo. 4.-Incubamos los tuvos a 55 grados Esterilizacin por calor seco 1.-Precalentamos el horno a 170 grados 2.- E un tuvo sin esterilizar, colocamos una tira de papel filtro que contenia esporas y cubrimos la boca con un papel aluminio 3.-Apagamos el horno y esperamos a que el termometro indicara la temperatura ambiente

Metodologa del Trabajo

Ya que esto sucedi, retiramos el material y el tuvo de ensaye 4.- Incubamos a 55 grados

Filtracin a travs de la membrana 1.-Colocamos 1 mL de la sustancia a filtrar en una jeringa 2.-Ensamblamos la jeringa al portamembrana previamente esterilizada 3.-Filtramos gota a gota y vaciamos el filtrado en un tuvo de ensaye de 16x150mm

Anlisis de resultados
Al analizar los resultados de los diferentes tubos en los dias de incubacion se determino que el crecimiento de E. Coli fue favorable respecto al agar nutritivo ya que este es un medio de cultivo compuesto principalmente de estracto de carne, agua y peptona, este ultimo derivada de la leche animal que o contiene pequenos peptidos y muchos otros compuestos biolgicos. La peptona se usa en la bacteriologa como medio de cultivo para el desarrollo de bacterias y hongos por esto el resultado fue optimo. Mientras tanto la ausencia de crecimiento se debi a que el cultivo no tuvo las condiciones para que la muestra se desarrollara, los testigos negativos no presentan cambios, solo disminuye suy volumen esto se debi al crecimiento del MO.

Anlisis de resultados
La cinta indicadora colocada en el material a esterilizar msnifiesta si la esterilizacin de ha llevadon a cabo correctamente y que nuestro material se encuentra completamente estril, se puede observar que el material ha quedado esteril cuando las franjas indicadoras en la cinta despues de sacar el material del horno, y de la autoclave, se observaron de un color caf mas obscuro.

Conclusiones
Se esterilizo adecuadamente el material para preparacin de un cultivo en condiciones esteriles , el proceso de esterilizacin para la mayora de los tubos tuvo un buen resultado en cuanto a la ausencia de MO. Mientras que en el caso de la membrana se noto un cambio, con el cual concluimos que no tuvo la esterilizacin correcta, ya sea por el radio del medio estril que manejamos.