UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIOSA CENTRO DE CINCIAS BIOLGICAS E DA SADE DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA E BIOLOGIA MOLECULAR BQI 220 - ENZIMOLOGIA

MIRELE LOPES - 73559 BRUNA MACHADO - 74216

INTRODUO:
Enzimas esto presentes no citoplasma e em organelas de clulas vivas. Interao enzima-biomolculas causa alterao na estabilidade da estrutura e na funo da enzima. -D-glucuronidase uma hidrolase que catalisa a clivagem do cido glucurnico. Polissacardeos reforam a estabilidade da enzima contra alteraes de presso e temperatura.

INTRODUO:
Polissacardeos foram escolhidos para preparar microcpsulas contendo enzimas.

Polissacardeos mantm a estrutura nativa das enzimas.

Polissacardeos hidroflicos formam uma camada de hidrato ao redor da enzima aumentando sua hidratao e sua estabilidade, reforando as interaes hidrofbicas.

INTRODUO:
Polissacardeos utilizados: Carboximetil-celulose de Sdio carregado negativamente (CMC); Metil-celulose descarregado (MC); Carboximetil-celulose carregado positivamente (CMCS). Substrato utilizado: Baicalin. Enzima utilizada: -D-glucoronidase (GUS).

OBJETIVO:
O objetivo desse estudo foi identificar a influncia de trs polissacardeos com estruturas moleculares parecidas, porm com diferentes caractersticas, na atividade cataltica e estabilidade da enzima modelo, a GUS. A partir dos resultados e da compreenso da interao enzimapolissacardeo em cada caso, podemos futuramente otimizar a atividade e estabilidade da GUS a partir de modificaes de seu microambiente.

METODOLOGIA:
Calormetro de varrimento diferencial (DSC):
Determina a propriedade termodinmica da GUS na presena ou ausncia de polissacardeos. Espectroscopia de dicrosmo circular (CD): Determina alteraes na estrutura secundria de GUS na presena ou ausncia de polissacardeos. HPLC: Bioconverso de baicalin baicalena catalisada por GUS na presena ou ausncia de polissacardeos. Determina a quantidade de baicalena produzida.

RESULTADOS E DISCUSSO:
Efeito de polissacardeos na atividade da enzima: Alterao da cor das solues. A mudana mais significativa: CMCS, foi devido estabilidade reduzida do baicalin.

Figura1: Efeito de polissacardeo na cor do lquido de reao.

RESULTADOS E DISCUSSO:
Efeito de polissacardeos na enzima:
Blank Enzyme activitya (relative activity, %) Denaturation temperatureb (C) Storage stabilityc (remaining activity, %) 0 day 10 days 26 days 100 74 4 100 115 41 100 57 7 100 97 94 100 103 CMC 112 110 MC 105 98 CMCS 96 100

Tabela 1:Efeito de polissacardeos na atividade relativa, na temperatura de desnaturao e na estabilidade de armazenamento de GUS.

RESULTADOS E DISCUSSO:
Efeito de polissacardeos na atividade da enzima:

Fig. 2. Efeito de polissacardeos nos espectros de CD de GUS.

RESULTADOS E DISCUSSO:
Efeito de polissacardeos na atividade da enzima:

Figura 3: Efeito de polissacardeos sobre a estabilidade trmica de GUS.

Figura 4: Efeito de polissacardeos nos espectros de CD de GUS aps incubao trmica.

Figura 5: Efeito de polissacardeos nos espectros de CD de GUS sob diferentes condies de pH.

RESULTADOS E DISCUSSO:

Figura 6: Efeito de polissacardeos sobre a estabilidade de pH de GUS.

RESULTADOS E DISCUSSO:
pH value

TrisHCl blank

4.0

5.0

6.0

7.0

8.0

CMC

6.5

6.7

6.7

7.0

7.5

MC

4.0

5.0

6.0

7.0

8.0

CMCS

7.2

7.5

7.5

7.5

7.5

Tabela 2: Efeito de polissacardeos no valor de 30 mmol / L de soluo tampo de Tris-HCl no pH.

Figura 7: Efeito de polissacardeos nos espectros de CD de GUS durante o armazenamento.

CONCLUSO:
Atividade enzimtica:

- CMC e MC: aumentou

- CMCS: diminuiu Estabilidade trmica:

- CMC: melhorou
Estabilidade de pH: - CMC e CMCS: melhorou

Estabilidade de armazenamento:
- CMC e CMCS: melhorou

CONCLUSO:
A presena de polissacardeos influenciou significativamente a atividade e a estabilidade da enzima pela interao eletrosttica entre o polissacardeo e a enzima. Considerando todas as influncias sobre a atividade enzimtica e estabilidade em presena dos trs polissacardeos carregados diferentemente no estudo, a CMC foi a mais favorecida. Este resultado est em conformidade com o microambiente de existncia natural de GUS.

GUS

FIM