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GENOTECAS

Genotecas
Coleccin de Genes

ADN cADN

Tipos

Genmica Expresin

Vectores

Bacteriofagos Plasmidos

Ciclo de Vida de Lambda

Fago Lambda

Ensamblaje del Fago Lambda

Plasmidos

Genoteca de Expresin

Genoteca de Expresin
Purificar mARN maduro (Cromatografia de Afinidad) Sintesis de la Primera Cadena de ADN

Primer oligo dT y Transcriptasa Reversa Degradacin ARN (Alcali o Enzima) Adicion de poliG Adicion primer poliC ADN polimerasa

Sintesis de la Segunda Cadena de ADN

Proteger con EcoRI metilasa Adicionar EcoRI linkers (ligadores) Cortar con EcoRI

Purificar mARN

Cromatografa de Afinidad

Sntesis de la Primera Cadena ADN


Primer Oligo dT y Transcriptasa Reversa

Sntesis de la Segunda Cadena de ADN


Degaradacin ARN - Adicin poliG - Adicin del Primer poliC

Sntesis de la Segunda Cadena de ADN


DNA Polimerasa y Metilacin

EcoRI Linkers

Clivaje con EcoRI

Enzimas de Restriccin

Enzimas de Restriccin

Enzimas de Restriccin

Corte y Ligacin

Ligacin a Lambda y Empaquetamiento in vitro

Ligacin a Brazos de Lambda


Brazos de Lambda

Fosfatasa Alcalina

cADN

Ligasa

Ligacin cADN con brazos de lambda gt11.


5

B-Galactosidasa

Promotor lac

EcoRI Digestin con EcoRI

cDNA

Protena Fusin

EcoRI

EcoRI

Empaquetamiento in-vitro Infeccin a E. coli

Sntesis del cADN

Corte y Ligacin

Infeccin a E. coli
Tubo que
contiene fagos y la

bacteria E. coli

Infeccin a E. coli
Siembra en Agar LB
IPTG + X-gal

Infeccin a E. coli
Incubacin
A 37 C.

Lambda gt11

Cuestionario
Que es una genoteca de expresin?
Por que el material de partida debe ser mARN? Como se sintetiza el cADN:

La primera cadena? La segunda cadena? Que se usa como polimerasa y como primer en cada reaccin de sntesis Adems de polimerasa y primer que otras sustancias cree Ud deben estar en los tubos donde se realizan las sntesis?

Cuestionario

Para que se metila? Que son los linkers? Por que se digieren con EcoRI? Que es un empaquetamiento in vitro?

Clonacin en un Vector Plasmdico

Plsmidos en el Extracto Celular

Plasmidos en el Extracto Celular

Caractersticas de un Plsmido

Sitio de Restriccin

Corte Enzimtico

Plsmidos Cortados

Introduccin de los Fragmentos

Insercin del Fragmento de ADN

Ligacin

Ligacin

ADN Recombinante

Plsmidos Recombinantes

Transformacin
Tubo que contiene Plsmidos y la Bacteria E. coli

Transformacin

Algunas Clulas Incorporan un Plsmido

Seleccin
Siembra en LB-Agar ms Ampicilina

Siembra
Siembra en Caja

Incubacin
Incubacin a 37C

Transformacin

Seleccin

Seleccin

Replicacin del Plsmido

Plsmido Replicado

Replicacin del Cromosoma Bacteriana

Mitosis de la Clula Bacteriana

Colonias Bacterianas

Clonacin
Colonias Celulares

Librera Genmica

Librera Genmica

Librera Genmica en Plsmidos

Corte y Ligacin