CAPACIDAD DE TAMPONAMIENTO CO2/HCO3- DEPENDIENTE

La capacidad tamponamiento intracelular de H+ ha sido estimada por titulacin compartimiento citoplsmico con acido, mediante una reduccin gradual en concentracin del ion amonio.

Capacidad tamponamiento Ph intracelular: Muestra una cada del Phi, se us un protocolo de extraccin de amonio por etapas (a) produce cambios graduales en pHi En B se mide la capacidad intrnseca y total de buffering respectivamente, los datos de la capacidad de tamponamiento se representan en unidades mmol (eje interno) o mmol. Se ve que la diferencia entre los dos conjunto de datos donde el estimado intracelular en presencia de CO2/HCO3- fue mayor que cuando utiliz HEPES y era independiente del pHi, el aumento de la B se debe a un buffering adicional (extrnseco) de CO2/HCO3- intracelular, dado porque el CO2 equilibrio instantneo a travs de la membrana del GR

Fue posible la caracterizacin del flujo de H+ equivalente, producida por AE1 en presencia o ausencia de buffer CO2/HCO3-, al usar estimaciones de capacidad tamponamiento y tiempo recuperacin de cargas acido/base de pHi. El flujo de H+ se increment considerablemente en presencia de buffer CO2/HCO3-. La dependencia del flujo H+ indica que el transportado AE1 no esta regulado forma cooperativa por los iones H+ intracelular = falta de control alostrico del transportador pHi Dado AE1 no transporta iones H+ directamente, la relacin flujo H+ -pHi describe la dependencia de sustrato de H + transmembrana equivalente al flujo. El sustrato H+ equivalente transportado en AE1 es HCO3Se ha visto que en condiciones en que [Cl -]o y [HCO3 - ]o son constantes, flujo a travs de AE es ms probable que sea instruido por [HCO3 - ]i. seria de esperarse un alta [HCO3 ]i debido a la saturacin de la unin al sitio de transporte, y posiblemente un extremo de pHi , debido a los cambios en [Cl - ]i que surgen de las limitaciones establecidas por la estabilidad osmtica y elctrica de los glbulos rojos. Conclusin: hay concordancia la simulacin y los datos experimentales es de nuevo consistente con una falta de cooperatividad de y la habilidad de AE1 para producir cido o extrusin de base dependiendo de la prevalencia de los gradientes transmembrana para HCO 3 - y Cl - .

FLUJO EQUIVALENTE H+ A TRAVES INTERCAMBIO ANIONES Y DEPENDENCIA DE pHi

RESPUESTA DE pHi A CAMBIOS EN ClEXTRACELULAR

glbulos rojos, superfused con soluciones tamponadas-Hepes a 37 C (pH O 7.4), se expusieron a solucin en la que 100 mM Cl- se reemplaz con 100 mM gluconato (Gluc ).La rpida reduccin de la [Cl - ]o / [Cl - ]i relacin hacia cero produce una reduccin paralela en la [H + ] i / [H + ]o relacin (de ah celular alcalinizacin) a travs de la actividad de AE. Esta fue abolida por DIDS (300 M). Se muestra la distribucin de frecuencias de pHi, medida por citometra de flujo (medio tamponado con Hepes, 25 C, pHo 7.4), en condiciones de reposo y despus de 10 minutos despus de la exposicin gluconato. pHi en respuesta a la sustitucin extracelular Cl - con gluconato (a) y la evolucin en el tiempo previsto de [Cl -] intracelular (b). C, los experimentos de superfusin se repitieron con 5% de CO2/22mM HCO3- soluciones- tamponada a 37C (pHO 7.4). Alcalinizacin de la clula era considerablemente ms rpido que en la ausencia de HCO3 - , y se redujo, pero no se bloquea completamente, por 300 M DIDS.