Está en la página 1de 58

INTRODUCCION A LA MICROSCOPIA

Dr. Omar Tabarini

Microscopio Optico Compuesto:

Concepto Importancia del microscopio en la Biologa Celular y molecular Formacin de la imagen Partes pticas y mecnicas: localizacin y funcin Poder de resolucin Manejo del microscopio ptico compuesto Preparaciones temporales y permanentes Tipos de microscopio ptico y sus aplicaciones: Campo claro Contraste de fases Fluorescente Luz polarizada Campo oscuro Confocal Videomicroscopa digital

Microscopio electrnico:

Concepto Poder de resolucin Tipos de microscopio electronico y sus aplicaciones De barrido De transmisin.

Microscopio, del griego: "mikro" = pequeo y "scope" = mirar (para mirar cosas pequeas)

se clasifican en:
MICROSCOPA DE LUZ MICROSCOPA MICROSCOPA ELECTRNICA

Principios de optica

Elementos necesarios para formar una imagen:


Fuente de iluminacin Muestra Sistema de lentes

Optico

Electrnico Fuente de iluminacin: haz de electrones Sistema de lentes: electroimanes

Fuente de iluminacin: luz visible Sistema de lentes: lentes de vidrio

Puede ser descrita mediante dos modelos:

La naturaleza de la luz

Forma parte del espectro electromagntico

Por su forma de propagacin, naturaleza ondulatoria (James Clerk Maxwell) Por su forma de interactuar con la materia, naturaleza corpuscular fotnica (Albert Einstein)

Luz visible

Forma parte de una estrecha franja que va desde longitudes de onda de 400 nm (violeta) hasta los 700 nm (rojo). (0.4 0.7 mm)
ESPECTRO VISIBLE

ESPECTRO ELECTROMAGNTICO

Las Lentes

Objetos que concentran o hacen diverger los rayos de luz Existen dos tipos principales de lentes:
Lentes convergentes

Convergentes: forman imgenes reales Divergentes: forman imgenes virtuales

Lentes divergentes

Formacin de imagen real

Plano focal Objeto Punto focal Punto focal Imagen real

Lente

El objeto est fuera del plano focal, y la imagen se forma detrs de la lente, se observa aumentada e invertida.

Formacin imagen virtual

Lente divergente

Formacin imagen virtual

Objeto

Lente divergente

Formacin imagen virtual


Plano focal

Objeto

Lente divergente

Formacin imagen virtual


Plano focal

Imagen virtual

Objeto

Lente divergente

Formacin de imagen virtual


objeto

Imagen Plano focal virtual Punto focal Punto focal lente

El objeto est dentro del plano focal, la imagen se forma delante de la lente y se observa aumentada pero NO invertida.

El microscopio de luz

Instrumento ptico que se usa para aumentar o amplificar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. Se utiliza para examinar objetos transparentes o cortados en lminas tan finas que se transparentan
Est conformado por tres sistemas: 1. Iluminacin 2. ptico 3. Mecnico

Microscopio compuesto fabricado en 1751 por Magny.

El microscopio compuesto

Instrumento ptico que se usa para aumentar o amplificar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. Se utiliza para examinar objetos transparentes o cortados en lminas tan finas que se transparentan

Est conformado por tres sistemas:


1. Iluminacin 2. ptico 3. Mecnico

Partes del microscopio compuesto

Sistema de iluminacin: dirige la luz hacia el objeto, comprende: Fuente de luz Espejo Condensador (formado por lentes) Diafragma

Sistema ptico: reproduce y aumenta las imgenes, comprende: Lentes oculares Lentes objetivos Prismas

Sistema de iluminacin

FUENTE DE LUZ: Lmpara halgena de intensidad graduable. Situada en el pie del microscopio El microscopio utiliza la refraccin de la luz para la formacin de imgenes

Sistema de iluminacin

CONDENSADOR: Sistema de lentes situadas bajo la platina


Concentra la luz generada por la fuente de iluminacin hacia la preparacin

Sistema de iluminacin

DIAFRAGMA: Se encuentra en el interior del condensador Limita el haz de rayos de luz que atraviesa el sistema de lentes eliminando los rayos demasiado desviados

Sistema ptico

OBJETIVOS: Insertados en el mecanismo del revlver Generan una imagen real, invertida y aumentada. Los mas frecuentes son los de 4, 10, 40, y 100 aumentos. Este ltimo se llama de inmersin ya que para su utilizacin se necesita utilizar aceite de cedro

Sistema ptico

OCULARES: Su funcin es la de captar y ampliar la imagen formada en los objetivos. Los mas utilizados son los de 10X (producen un aumento de 10 veces).

Sistema mecnico: Posee los elementos que sostienen a las partes del sistema ptico y de iluminacin; comprende:

Base Brazo Platina Pinzas de sujecin Tubo del ocular

Mecanismo del revlver


Tornillos macro y micromtrico Tornillos del carro

Sistema mecnico

BASE: Sostiene al microscopio y en ella se integra la fuente luminosa

Sistema mecnico

BRAZO: Columna perpendicular a la base Puede ser arqueado o vertical y une a la base con el tubo

Sistema mecnico

PLATINA: Plataforma donde se coloca la preparacin, posee pinzas de sujecin y tornillos del carro.

Sistema mecnico

TUBO: Es una cmara oscura unida al brazo mediante una cremallera. Sostiene al mecanismo del revolver con los objetivos en su parte inferior y los oculares en el extremo superior.

Sistema mecnico

TORNILLO MACROMETRICO Y MICROMETRICO: Permiten enfocar al mover la platina hacia arriba y hacia abajo. El macromtrico lo hace de forma rpida y el micromtrico de forma lenta. Llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura.

Formacin imagen microscpica

Formacin de la imagen
FUENTE DE LUZ

Imprescindible para que funcione el microscopio

CONDENSADOR

Concentra los rayos dispersos e ilumina solo la muestra

LENTE OBJETIVO

Amplifica la imagen y forma: IMAGEN REAL E INVERTIDA

LENTE OCULAR

Amplifica la imagen anterior y forma una IMAGEN VIRTUAL

LENTE INTRAOCULAR

Genera la imagen sobre la retina que es la que el cerebro interpreta

Formacin de la imagen en el microscopio

OBSERVADOR

Objeto 1
Imagen virtual Imagen real (Objeto 2)

Lente Objetivo (convergente)

Lente Ocular (divergente)

Conceptos en microscopia
Amplificacin: aumento del tamao de la imagen. Amplificacin total: Dado por el producto de la lente ocular por el objetivo. Amplificacin vaca: incremento de la imagen sin que pueda percibirse mayores detalles.

Amplificacin de imagen

Amplificacin vaca imagen

Poder de resolucin

Distancia mnima entre dos objetos para que sean percibidos como objetos separados.

La mayora de clulas eucariticas miden entre 3 y 10 veces menos el poder de resolucin del ojo. Ojo humano Microscopio compuesto 100 mm 0. 2 mm 200 nm 0.1 mm Microscopio electrnico 0.2nm 2 A

Poder de resolucin

La resolucin
Depende de:

Calidad de la lente objetivo Longitud de onda de la luz empleada ndice de refraccin del medio

Indice de refraccin

Medida de la variacin de la velocidad de la luz al atravesar de un medio a otro.


Aire: 1.0 Aceite: 1.5

Medidas en Microscpia

Milmetro: milsima parte del metro (mm) Micrmetro: milsima parte del milmetro (mm) Nanmetro: milsima parte del micrmetro (nm)

Angstrom: dcima parte del nanmetro (A)

TEMPORALES

Muestra +Colorante + Medio de Montaje

FIJAS

Muestra + Fijadores + Tincin + Medio de Montaje

Cubreobjeto
Portaobjeto

Tipos de Microscopios de luz

De campo claro (brillante): El contraste lo provee la tincin de las muestras

Tipos de Microscopios de luz

Contraste de fases: Permite observar muestras vivas, o carentes de color

Imagen con microscopio de contraste de fases

Tipos de Microscopios de luz

Fluorescente: Utiliza luz de longitud de onda corta para excitar los electrones de la muestra

Fibroblastos teidos con el fluorocromo FITC

Bacillus subtilis esporulando teidos con FITC, DAPI y galactosidasa.

Tipos de Microscopios de luz

Luz polarizada: Utiliza filtros polarizantes para observar estructuras con birrefringencia (emite brillantez)
Cristales de cido urico observados con microscopio de luz polarizada

Tipos de Microscopios de luz

De campo oscuro: para muestras no teidas, objeto se observa brillante sobre un fondo oscuro

Treponema pallidum observado con


microscopio de campo oscuro

Tipos de Microscopios de luz

Tridimensional Confocal: Utiliza muestras de cortes seriados teidas con fluorescencia, para reconstruir una imagen tridimensional

Microscopio confocal.

CAMPO CLARO

Requiere tinciones Permite diferenciar densidades, no tinciones Utiliza luz UV, usa fluorocromos Produce birrefringencia Permite ver muestras vivas, no tinciones

CONTRASTE DE FASES

FLUORESCENCIA

MICROSCOPIA OPTICA DE LUZ POLARIZADA

CAMPO OSCURO

CONFOCAL

Forma imgenes 3D

Videomicroscopia digital

Permite el registro y almacenamiento electrnico de imgenes microscpicas poniendo una cmara de vdeo en el plano de la imagen producida por la lente ocular.

Microscopio electrnico

Utiliza electrones en lugar de fotones para formar imgenes de objetos muy pequeos Funciona con un haz de electrones de alto voltaje Utiliza lentes magnticas para formar la imagen sobre una pantalla

Microscopa Electrnica

Aumenta la imagen desde 1000 hasta 250000 veces Posee mayor poder de resolucin que el microscopio ptico, cerca de 2 000 veces.

Existen dos tipos de microscopio electrnico:


MTE (microscopio de transmisin electrnica) electrones transmitidos a travs de una muestra.

MET (microscopio electrnico tridimensional o de barrido) los electrones rebotan de la superficie de la muestra.

Microscopia electrnica de transmisin.

Microscopia de un alga roja antes de formar su pared

Microscopia electrnica de barrido.


vulo de hamster sin zona pelucida con espermatozoides

Criofractura de epitelio gstrico vista por microscopia de barrido

DE TRANSMISION

Permite ver el interior de las estructuras

MICROSCOPIA ELECTRONICA

DE BARRIDO

Permite ver la superficie de las estructuras

Lmite de resolucin y magnificacin


Resolucin Ojo humano 0.1 mm Magnificacin no produce

Microscopio ptico

200 nm

1000 2000 veces

Microscopio Electrnico

3 5 A

250,000 veces

Gracias.