Espectro de absorcin UV-visible

La espectroscopia ultravioleta-visible (uv/vis) es una espectroscopia de emisin de fotones que utiliza radiacin electromagntica de las regiones visible , ultravioleta cercana (uv) e infrarrojo cerca (NIR) del espectro electromagntico, es decir una longitud de onda entre 380 y 780 nm.

La espectroscopia de fotoelectrones UV es una tcnica en la que se irradia una muestra con luz UV de alta frecuencia para iniciar la ionizacin de tomos por promocin y expulsin de electrones de valencia .

La radiacin absorbida por las molculas desde esta regin del espectro provoca transiciones electrnicas que pueden ser cuantificadas. La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos grupos funcionales de molculas y adems para determinar el contenido y fuerza de una sustancia

Se utiliza de manera general en la determinacin cuantitativa de los exponentes de soluciones de iones de metales de transicin y compuestos orgnicos altamente conjugados. Se utiliza extensivamente en laboratorios de qumica y bioqumica para determinar pequeas cantidades de cierta sustancias, como las trazas de metales en aleaciones ola concentracin de cierto medicamento que puede llegar a ciertas partes del cuerpo.

Especies Absorbentes El producto de la reaccin entre M y el fotn es una especie electrnicamente excitada que se representa por M* Se puede considerar que es un proceso en dos etapas La primera de las cuales presenta una excitacin electrnica como muestra la ecuacin

Caractersticas del sistema

Las muestras en solucin se ponen en una pequea celda de Si. Se utilizan dos lmparas: una de H o deuterio para la regin UV, y una de W / halgeno para la regin visible Se utiliza tambin una celda de referencia que contiene slo solvente. La luz pasa simultneamente por la celda de muestra y la celda de referencia. El espectrmetro compara la luz que pasa por la muestra con la que pasa por la celda de referencia. La radiacin transmitida es detectada y el espectrmetro obtiene el espectro de absorcin al barrer la longitud de onda de la luz.

PRINCIPIO FISICO

El principio de la espectroscopia ultravioleta-visible involucra la absorcin de radiacin ultravioleta visible por una molcula, causando la promocin de un electrn de un estado basal a un estado excitado, liberndose el exceso de energa en forma de calor. La longitud de onda () comprende entre 190 y 800 nm.

La luz visible o UV es absorbida por los electrones de valencia, stos son promovidos a estados excitados (de energa mayor). Al absorber radiacin electromagntica de una frecuencia correcta, ocurre una transicin desde uno de estos orbitales a un orbital vaco. Las diferencias entre energas varan entre los diversos orbitales. Algunos enlaces, como los dobles, provocan coloracin en las molculas ya que absorben energa en el visible as como en el UV, como es el caso del -caroteno.

Espectroscopia de IR

Inconvenientes y limitaciones de los mtodos IR cuantitativos

INCUMPLIMIENTO DE LA LEY DE BEER LA PROBABILIDAD DE SUPERPOSICIN PARCIAL DE LOS PICOS DE ABSORCIN LAS MEDICIONES DEPENDAN DE LA ANCHURA DE LAS RENDIJA LAS CUBETAS ESTRECHAS SON POCO PRACTICAS DE UTILIZAR Y ORIGINAN IMPORTANTES INCERTIDUMBRES ANALTICAS

Espectroscopia de IR cercano
Utilizada en la determinacin de protenas, humedad, Almidn, aceites, lpidos y celulosa en granos y semillas

700 NM A 3000 NM

Como fuentes se utilizan lmparas de tungsteno

Se utilizan cubetas de cuarzo o slice fundida

La longitud de las cubetas varia de 0,1 a 10 cm

Espectroscopia de IR lejano
SE UTILIZA EN LA DETERMINACIN COMPUESTOS INORGNICOS, TAMBIN PROPORCIONAN INFORMACIN TIL ACERCA DE LAS ENERGAS RETICULARES DE LOS CRISTALES Y LAS ENERGAS DE TRANSMISIN DE LOS MATERIALES SEMICONDUCTORES

106 Nm a 5x104 nm

La absorcin de esta regin corresponde a movimientos entre iones metlicos y ligandos

Tambin la absorcin se puede dar por los movimientos rotatorios de los gases que tengan dipolos permanentes Ejemplos: H2O, O3, HCl

Espectroscopia de emisin IR
Las molculas que son capaces de absorber radiacin tambin pueden emitir energa IR al calentarlas
Para la identificacin de plaguicidas y para identificacin remota de los compuestos emitidos por las chimeneas de las industrias

Las muestras se preparan disolvindolas en un disolvente adecuado y se evapora en una placa de NaCl o KBr

La placa luego se calienta elctricamente cerca de la entrada del espectrofotmetro

ESPECTROSCOPIA DE MASAS

 La espectrometra de masas es una tcnica de anlisis que permite la medicin de iones derivados de molculas. El espectrmetro de masas es un artefacto que permite analizar con gran precisin la composicin de diferentes elementos qumicos e istopos atmicos, separando los ncleos atmicos en funcin de su relacin carga-masa (z/m). Puede utilizarse para identificar los diferentes elementos qumicos que forman un compuesto, o para determinar el contenido isotpico de diferentes elementos en un mismo compuesto.

 El espectrmetro de masas mide razones carga/masa de iones, calentando un haz de material del compuesto a analizar hasta vaporizarlo e ionizar los diferentes tomos, el haz de iones produce un patrn especfico en el detector, que permite analizar el compuesto. En la industria es altamente utilizada en el anlisis elemental de semiconductores, biosensores y cadenas polimricas complejas. Drogas. frmacos. productos de sntesis qumica. pesticidas, plaguicidas. anlisis forense. contaminacin medioambiental. Perfumes. y todo tipo de analitos que sean susceptibles de pasar a fase vapor e ionizarse sin descomponerse.

Historia El fenmeno de espectrmetro de iones secundarios fue observado por primera vez a comienzos del siglo XX. El primer instrumento similar a un espectrmetro de masas fue descrito en 1899 por el cientfico ingls J. J. Thomson, que estaba interesado en medir la relacin masa-carga del electrn. En 1918 y 1919, A. J. Dempster y F. W. Aston construyeron los primeros instrumentos capaces de actuar como un espectrmetro de masas.

El proceso de la espectrometra de masas comprende bsicamente cuatro etapas: Ionizacin de la muestra. Aceleracin de los iones por un campo elctrico. Dispersin de los iones segn su masa/carga. Deteccin de los iones y produccin de la correspondiente seal elctrica.

IONIZACIN DE LA MUESTRA La ionizacin de la muestra se consigue por bombardeo mediante electrones (e-).

B.

Aceleracin de los iones por un campo elctrico

Convertimos una fraccin significativa de los tomos formados en la etapa 1 en un flujo de iones, generalmente positivos y de carga nica. La velocidad que adquieren viene regida por la formula: v = [2eV/m]
Donde V es el potencial aplicado, e la carga del electrn y m la masa. Cuando las partculas aceleradas se someten a la accin de un campo magntico (H) describen una trayectoria circular de radio r alrededor de este campo, desarrollando una fuerza centrfuga mv2/r, la cual es igual a la fuerza de atraccin del campo Hev. De esto deducimos que el radio es igual a: r = (2Vm/H2e)

C. Dispersin de los iones segn su relacin masa/carga

Basndonos en la ecuacin anterior podemos calcular la relacin m/e que es: m/e = H2.r2/2V Dado que la mayora de los iones formados en la segunda etapa tienen una sola carga y que el resto de parmetros se mantienen constantes, la relacin m/e suele ser la masa del in. La utilidad analtica de un espectrmetro de masas depende de la resolucin del instrumento, o capacidad del mismo para separar dos partculas de diferente masa.

D. Deteccin de los iones y produccin de la correspondiente seal elctrica. El ordenador al que est conectado el aparato recoge las distintas seales y las reproduce en forma de espectrograma, formato de fcil interpretacin.

Bsicamente un espectrmetro de masas costa esencialmente de las siguientes partes: Sistema de entrada de muestras. Cmara de ionizacin. Acelerador.

Analizadores.
Detector.

 Sistema de entrada de muestras:

En el sistema de entrada de muestras, un micromol o menos de muestra se convierte al estado gaseoso por calentamiento a unos 400C y se introduce lentamente en la cmara de ionizacin.
La finalidad del sistema de entrada es permitir la introduccin de una muestra representativa en la fuente de iones con la mnima perdida de vaco.

En los espectrmetros de masas ms modernos encontramos diferentes tipos de sistemas de entrada: Sistemas indirectos de entrada: es el sistema ms clsico y el ms simple, en el cual la muestra se volatiliza externamente y se introduce en la regin de ionizacin que esta a baja presin. Entrada por sonda indirecta: los lquidos y los slidos no voltiles se pueden introducir en la regin de ionizacin mediante un soporte para muestra o sonda, el cual se inserta a travs de un cierre de vaco. Sistemas de entrada cromatrogrficos y de electroforesis capilar. Es un tipo de sistema de entrada especial, esta indicado su uso cuando al espectrmetro de masa va acoplado un sistema de cromatrografa de gases o de lquidos de alta eficacia o a columnas de electroforesis capilar que permiten la separacin y determinacin de los componentes de mezclas complejas.

 Cmara de ionizacin:

Las fuentes de iones de los espectrmetros de masas, todas tienen las mismas caractersticas comunes, pese a la variabilidad de tipos existente y es que todas transforman los componentes de una muestra en iones.
En muchos casos el sistema de entrada y la fuente de iones estn combinados en un nico componente. En todos los casos, se obtiene un haz de iones positivos o negativos (normalmente positivos) que posteriormente se acelera hacia el interior del analizador de masas o sistema separador a travs del acelerador.

TIPOS DE CAMARAS DE IONIZACIN Impacto de electrones (EI). Fuentes de ionizacin qumica (CI). Fuentes de ionizacin por campo (FI). Fuentes De Desorcin Fuentes de desorcin por campo (FD). Desorcin/ionizacin por lser asistida por una matriz (MALDI).

Ionizacin por electronebulizacin (ESI/MS).

Fuentes de bombardeo con tomos rpidos (FAB). Desorcin por plasma (PD). Espectrometra de masas de iones secundarios (SIMS). Ionizacin por termonebulizacin (TS).

 Sistema acelerador: En el sistema acelerador las partculas ionizadas producidas por el impacto de los electrones son obligados a atravesar una primera ranura aceleradora por una pequea diferencia de potencial. Entre esta primera y una segunda ranura existe una diferencia de potencial muy elevada que imprime a las partculas su velocidad final. Una tercera ranura acta como colimador del haz de partculas.

 Analizadores de masa:

Para la separacin de iones con diferente relacin m/e se dispone de varios dispositivos. Lo ideal es que el analizador fuera capaz de distinguir entre diferencias muy pequeas de masa. Adems, los analizadores deberan de permitir el paso del nmero suficiente para producir corrientes inicas fciles de medir. Al igual que sucede con los monocromadores pticos, a los que los analizadores son anlogos, estas dos propiedades no son compatibles y se debe de llegar a un equilibrio que esta regido por la resolucin del espectrmetro de Masa.
Existen diferentes tipos de analizadores de masas: Analizadores de sector magntico Espectrmetros de doble enfoque Espectrmetro de masa cuadrupolar Analizadores de masas de tiempo de vuelo (TOF) Analizadores de trampa de iones Transformada de Fourier (FT)

 Detectores: Los iones procedentes del sistema acelerador llegan al detector el cual generalmente esta constituido por un ctodo emisor que al recibir el impacto producido por las partculas cargadas emite electrones. Estos electrones son acelerados hacia un dnodo el cual emite varios electrones ms al recibir el impacto de cada electrn. Este proceso se repite varias veces hasta obtenerse una cascada de electrones que llega al colector logrndose una corriente fuertemente amplificada, por un procedimiento muy similar al que se utiliza en los tubos fotomultiplicadores.

 APLICACIONES: Las aplicaciones son muchas y abarcan tantos campos que resulta complicado Mensionarlas todas, a continuacin veremos las ms caractersticas: Elucidacin de la estructura de molculas orgnicas y biolgicas. Determinacin del peso molecular de pptidos, protenas y oligonucleicos. Identificacin de los compuestos de cromatogramas en capa fina y papel. Determinacin de secuencias de aminocidos en muestras de polipptidos y protenas. Deteccin e identificacin de especies separadas por cromatrografa y electroforesis capilar. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Aplicaciones cualitativas: Determinacin del peso molecular Determinacin de la formula molecular. Identificacin de compuestos por su fragmentacin patrn Identificacin de productos de reaccin o de productos metablicos Caracterizacin y anlisis de polmeros Anlisis de sangre Estudiar la abundancia de istopos

Aplicaciones cuantitativas: 1) Determinacin cuantitativa de especies moleculares o tipos de especies moleculares en muestras orgnicas, biolgicas y ocasionalmente inorgnicas 2) Determinacin de la concentracin de elementos en muestras inorgnicas y, en menor medida, de muestras orgnicas y biolgicas

ESPECTROSCOPIA RMN

 es

una tcnica espectroscpica basada en las propiedades magnticas de la materia y aplicada a cualquier sustancia qumica en estado lquido o slido que contenga ncleos con espines nucleares.

Fundamentos fsicos la espectroscopia de RMN

Desarrollada a finales de los 40 1951 descubrieron que la espectroscopia rmn podra determinar la estructuras de compuestos orgnicos.

 Se

utiliza para estudiar ncleos atmicos con num. Impar de protones y neutrones(o de ambos). ausencia de campo magntico los espines se orientan al azar.

En

Existen ms ncleos en el estado de espn que en el pero aunque la diferencia de poblacin no es enorme s que es suficiente para establecer las bases de la espectroscopia de RMN. La diferencia de energa entre los dos estados de espn y , depende de la fuerza del campo magntico aplicado H0.

Cuando una muestra que contiene un compuesto orgnico es irradiada brevemente por un pulso intenso de radiacin, los ncleos en el estado de espn son promovidos al estado de espn Cuando los ncleos vuelven a su estado inicial emiten seales cuya frecuencia depende de la diferencia de energa (E) entre los estados de espn y .

ESPECTROSCOPIA DE RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR DE CARBONO-13

LA RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR DE CARBONO-13 SE ESTUDIO POR PRIMERA VEZ EN 1957, PERO NO SE UTILIZO AMPLIAMENTE HASTA PRINCIPIOS DE LOS AOS SETENTA. LA RAZN DE ESTE RETRASO FUE EL TIEMPO QUE SE NECESITO PARA DESARROLLAR INSTRUMENTOS SUFICIENTEMENTE SENSIBLES QUE PERMITIERAN LA DETECCIN DE LAS DBILES SEALES DE NMR DEL NCLEO 13C. LA ESPECTROSCOPIA DE RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR (RMN) ES UNA TCNICA EMPLEADA PRINCIPALMENTE EN LA ELUCIDACIN DE ESTRUCTURAS MOLECULARES, AUNQUE TAMBIN SE PUEDE EMPLEAR CON FINES CUANTITATIVOS Y EN ESTUDIOS CINTICOS Y TERMODINMICOS.

Desacoplamiento DEL PROTON

Dos mtodos comunes para el desacoplamiento del protn en NRM de 13C son: Desacoplamiento de Banda Ancha: es un tipo de desacoplamiento heteronuclear en el que se evita el desdoblamiento de las lneas de 13C por los ncleos del 1H, mediante la irradiacin de la muestra con una seal de radiofrecuencia de banda ancha abarca la regin espectral completa del protn, mientras que el espectro de 13C se obtiene de la forma usual. Desacoplamiento sin Resonancia: en esta tcnica, la frecuencia de desacoplamiento se ajusta a unos 1000 o 2000 Hz por encima de la regin espectral del protn, lo que origina un espectro parcialmente desacoplado en el que estn ausentes todo los desplazamientos de espn-espn excepto los mas grandes.

ESPECTROMETRO DE RMN
Un espectrmetro de RMN consta de las siguientes partes fundamentales:

Un imn que genere un campo magntico estable, el cual puede ser de una intensidad variable, definiendo la frecuencia de resonancia de cada ncleo. Generalmente se identifica cada espectrmetro por la frecuencia de resonancia del protn, as en un imn de 7.046 Tesla, los ncleos de 1H resuenan a 300 MHz, y por tanto sera un espectrmetro de 300 MHz. Por el momento el imn de mayor campo magntico del mundo lo ha instalado Bruker en la Unviersiad de ciencia y tecnologa Rey Abdullah en Arabia Saudita, de 950 MHz (22.3 Tesla). Una sonda, que se sita dentro del imn, en la que se introduce la muestra y que consta de las bobinas responsables de emitir y recibir las radiofrecuencias (RF). El nmero de bobinas y su disposicin determinan el tipo y las aplicaciones de cada sonda. Una consola en la que se generan los pulsos de RF y se controla el resto de la parte electrnica del espectrmetro Un ordenador que sirve de interfaz con el espectrmetro y con el que se analiza toda la informacin obtenida.