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Unidad de Investigacin Multidisciplinaria

Curso de Capacitacin en Espectroscopa Ultravioleta Visible

Ing. Lilia Palacios Lazcano

JUNIO 2011

CONTENIDO
I. II. Introduccin. Alcances

III.
IV. V. VI. VII. VIII. IX.

Interpretacin de resultados Cualitativos.


Diseo de curvas de calibracin. Uso de Derivadas Fundamentos de los accesorios. Aplicaciones. Cuidados y mantenimiento preventivo del equipo Parte experimental

I. INTRODUCCIN .

Lmpara

Muestra

Detector

Espectrograma

UV- VIS
ABSORCIN
ATMICA MOLECULAR

EMISIN
ATMICA MOLECULAR Fluorescencia Fosforescencia

ICP, ICP-MS Chispa Flama

II. ALCANCES

TRANSICIONES ELECTRNICAS
H H C H H

.. O ..

125 nm

180 nm

*
H H H

R
H

C
. . O. .

Energa

190 nm

220 nm

n
n *

n * *

Compuesto

Estructura

Transicin n n ------------* * * * mx
15530 20900 47000 7000 200 12590 10000 3981 1995 708

mx (nm) 135 184 227 240 Solvente


Vapor Hexano

Etano H3C CH3 Metanol H3C OH Trimetilamina (H3C)3 CNH2 Acetona Ar CO CH3 Grupo cromforo
>C=C< >C=C C=C <

Nombre
Etileno Butadien o Benceno

mx (nm)
171 217 184 202 256 474 444 415 394 375

Benceno

Naftacen o

ABSORCIN EN LA REGIN VISIBLE, COMPUESTOS COLORIDOS (ELEMENTOS DE TRANSICIN)

ALGUNOS REACTIVOS COLORIMTRICOS

REACTIVO H2O 2 Tiocianato Fenantrolina y derivados 8-Hidroxiquinolena Ditizona Dietilditiocarba mato de sodio Ditio (4-metil-1,2-dimercaptobenceno)

METALES Ti, V, Mo, U Fe, Co, Mo, W, U, Nb, Ti Fe, Cu, Ru Al, Ga, In, Mg, U, V Cu, Ag, Zn, Cd, Hg, Pb Bi, Cu Sn, Mo, W

Cu

Sal de Cobre

Sulfocianuro de fierro

Sulfato de Nquel

Calcita (Cobalto)

INSTRUMENTACIN
SISTEMA DE DOBLE HAZ

REFERENCIA MONOCROMADOR DETECTOR AMPLIFICADOR

LMPARA

SISTEMA DE LECTURA

Divisor de haz MUESTRA

Espejo

III. INTERPRETACIN DE RESULTADOS CUALITATIVOS.

MTODO SCAN

ASPIRINA DE BAYER

Pureza . Identidad. Tipo de estructura.

ANLISIS CUALITATIVO

Criterios de Identificacin.
Resolucin. Exactitud de longitud de onda. Coeficiente de absortividad. Informacin cualitativa.
Prediccin de insaturaciones. Presencia de heterotomos. Compuestos coloridos. Propiedades pticas (Reflectancia, transmitancia, textura).

POR COMPARACIN CON UN ESPECTRO PATRN

Vainillina
O CH

OCH3 OH

Frmula molecular: C9H8O3. Peso molecular: Fuente: 152.14 Givaudan-Delawanna, Inc.

METANOL I

Concentraci n (g/L)
amx mx (nm)

0.0800

0.0800

0.0800

10200 308.5

10300 278

14800 230

Celda (cm)

pH

Solvente

LONGITUD DE ONDA

TEMPERATURA

FACTORES QUE AFECTAN LAS MEDICIONES DE LONGITUD DE ONDA Y CONCENTRACIN

ABSORBANCIA

Concentracin

Espesor de la celda

IV. DISEO DE CURVAS DE CALIBRACIN.

MTODO CONCENTRACIN

LEY DE BEER.
IA Io IT

Io

IA

IT

ABSORBANCIA

A =a b c
A a b c = Absorbancia (0 - 1.0) (sin unidades) = Coeficiente de absortividad = Trayecto ptico (cm) = Concentracin en g/L

Pendiente = b

CONCENTRACIN (g/L)

Cuando en lugar de a se tiene , c est en gmol/L

CONCENTRACIN CONSTANTE

b1 < b2
b1

A1 < A2
b2

ESPESOR DE CELDA CONSTANTE

C1 < C2 A1 < A2
C1

C2

Nivel de Ruido

Nivel de Ruido
0.0025

ppm
0.002
Absorbancia

A 0.0006 0.001 0.0005 0.0012 0.0007

1 2

0.0015 0.001 0.0005 0 0 2 4 6 8 10

3 4 5

6
7 8 9

0.001
0.0015 0.0009 0.002

Concentracin ppm

Intervalo Lineal
1.6 1.4 1.2
Absorbancia.

Intervalo Lineal

ppm 10 15 20 25 30 35 40
0 5 10 15 20 25 Concentracin ppm 30 35 40 45

A 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4

1 0.8 0.6 0.4 0.2 0

Lmite Superior
2.3 2.2 2.1

Lmite Superior

ppm 45 50 55

A 1.7 1.9 2.05 2.1 2.15 2.2 2.21 2.22 2.23 2.23 2.23

Absorbancia.

2 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 40 50 60

60 65 70 75 80 85 90
Concentracin ppm
70 80 90 100

95

LIMITE SUPERIOR

2.3

1.8

Absorbancia

1.3

0.8

0.3

-0.2

NIVEL DE RUIDO

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Concentracin ppm

CONDICIONES PTIMAS
SELECCIN DE LONGITUD DE ONDA ( ). CONCENTRACIN ADECUADA. Linearidad (lectura de absorbancia entre el lmite mnimo y mximo cuantificables) LUZ PARSITA (RUIDO DE FONDO). SELECCIN DEL SOLVENTE ADECUADO. a) Temperatura. b) pH. INTERFERENCIAS. a) Espectrales. b) Qumicas. TIEMPO DE ANLISIS. (Formacin de Complejos, desarrollo de color, reaccin de precipitacin)

V. USO DE DERIVADAS

DERIVADAS
A menudo las representaciones grficas de las derivadas revelan detalles espectrales que en un espectro comn no se distinguen. Es aplicable cuando se:: Medida exacta de mx.

Se tienen espectros solapados de mezclas multicomponentes.


En analito presenta una interferencia espectral (pureza) Hay dispersin de luz por soluciones turbias se reducen los detalles.

Las derivadas de absorbancia en funcin de la longitud de onda , se generan por la diferencia de seales alternas, que dan una buena aproximacin de las derivadas.

Y = A = %T X
La derivada de una funcin en un punto mide la pendiente de la tangente a funcin en dicho punto.

La importancia de definir el nmero de puntos.


A

1 2 3

A mayor nmero de puntos mayor definicin aunque no demasiados que se llegue al ruido.

10

Y X d1Y d1X

A A

%T %T

Tercer Derivada (Punto de Inflexin)

Primera Derivada (punto de inflexin)

d3 Y d3 X

2 A 2

2%T 2

=
=

Cuarta Derivada (mximo)

Segunda Derivada (mnimo)

d2Y d2X

1 A 1

=
A

1%T 1

d4 Y d4 X

3 A 3

3%T 3

* *

*
* *

Espectro normal
1. Derivada

Punto de inflexin

*
2. Derivada

mnimo

Primera Derivada

Primera Segunda Derivada

* * * * *

Multicomponentes
A

M+N

M ' ''

ESPECTRO DE ABSORCIN DE UNA MEZCLA BINARIA


Se establece que las absorbancias de cada componente son ADITIVAS (en la mezcla)

A = eM b cM + eN b cN
A = e M b cM + e N b cN
Donde:
A cM e cN b

( )
( )

= Absorbancia total a cada longitud de onda. = Concentracin de M en la mezcla. = Absortividad molar de cada componente. = Concentracin de N en la mezcla. = Espesor de la celda (constante).

MTODO TIME DRIVE

Estabilidad Vida de anaquel


A C B A

Desarrollo de color.
Precipitados. Volatilidad.

t Determinar para cada caso el tiempo de la lectura donde no vare la absorbancia

VI. FUNDAMENTOS DE LOS ACCESORIOS

ESFERA DE INTEGRACIN

MODO ABSORBANCIA

Io
IA
MODO REFLECTANCIA

IT

Especular

Io

IA

IR

Difusa

Mediciones convencionales de A B S O R C I N

A = Absorbancia T= Transmitancia

Mediciones de R E F L E C T A N C I A

A = Absorbancia T= Transmitancia R= Reflectancia del rayo de la muestra en la superficie de la muestra.

El componente reflejado del rayo de la muestra es recogido por la esfera de integracin y descubierto por el detector de esfera

SISTEMA PTICO DE LA ESFERA DE INTEGRACIN


INTEGRATING SPHERE

SAMPLE BEAM

REFERENCE BEAM

MIRROR

REFLECTANCE SAMPLE HOLDER

TRANSMITTANCE SAMPLE HOLDER

M2

M3

Reference Beam

Transmittance Port

Integrating Sphere
Sample Beam

M1

Reflectance Port

Cuando mido transmitancia

Cuando mido reflectancia.

Transmitancia.

Detector

Detector

Reflectancia. Blanco

Muestra Blanco

Las industrias se preocupan por la apariencia de sus productos de consumo incluyendo todos los aspectos visuales que caracterizan a los objetos, tales como:
Color Brillo Forma Textura Neblina Transparencia Rugosidad Uniformidad Cuando los consumidores ven una diferencia entre los mismos productos, a menudo la diferencia est asociada con la mala calidad, por ello la importancia de los el estudio de estos aspectos.

Mediciones de color con esfera de integracin


Embalaje de Materiales Metales

Papel ( peridico) Cristal Productos farmacuticos

Alimentos

Pintura

Plsticos de alimentos Textil Lacas y Barnices

COLOR
Ah! Absorbe el azul

Color que veo

- Caroteno

FIBRA PTICA

La fibra ptica permite el muestreo in situ lejos del instrumento.

250 to 900 nm (UV/Vis) 2 m. de Longitud Material

FIBRA PTICA (PARA TOMAR LECTURAS A DISTANCIA)


EXIT SLIT MONOCHROMATOR

REFERENCE

DETECTORS

Y-SHAPED FIBER OPTIC BUNDLE

SAMPLE

INLET CROSS SECTION FIBER OPTIC BUNDLE

MONOFIBER IN OUT

TRANSPORTADOR LINEAL.

ACCESORIOS TERMOSTATADOS.

El kit para medir temperatura proporciona monitoreo de la temperatura dentro de la celda en tiempo real y se exhibe en UV WinLab.

CELDAS DE FLUJO Y SIPPER

SIPPER

VII. APLICACIONES

AMBIENTAL
FARMACUTICA CLNICA ALIMENTICIA COSMTICOS

PETROQUMICA
POLMEROS METAL MECNICA MINERA VITIVINCOLA

QUMICA GENERAL
QUMICA LEGAL

Determinacin de
Fenoles Cianuro Slice Sulfatos Fosfatos

Reactivo
4 aminoantipirina cido Piridn-Barbitrico Molibdato de Amonio Cloruro de Calcio Metavanadato de amonio

Mtodo
Colorimtrico Colorimtrico Colorimtrico Turbidimtrico Colorimtrico

Cromo Hexavalente
Fluoruros Sulfuros

Difenilcarbazida
Cloruro de Zirconilo Azul de metileno

Colorimtrico.
Colorimtrico. Colorimtico.

Determinacin de Cianuro Mtodo colorimtrico


Solucin de cido piridn-barbitrico: cido barbitrico + Piridina

@ 578 nm.

Determinacin de Fenoles
El mtodo esta basado en la destilacin de los fenoles y la subsecuente reaccin de estos con 4-aminoantipirina a un pH de 10 0.1 en presencia de ferricianuro de potasio, formando compuestos de un color amarillo intenso a rojo

Reacciona con 4-aminoantipirina

510 nm

Determinacin de Slice Mtodo colorimtrico

El mtodo se basa en la coloracin amarilla que se desarrolla cuando a una muestra de agua con pH de 1.2 Con reactivo de Molibdato de Amonio: (NH4)6H07O24.4H2O)

Se lee la absorbancia, despus de 2 minutos y sin exceder los 15 minutos.

410 nm

Determinacin de Fosfatos Mtodo Colorimtrico

El molibdato de amonio reacciona en condiciones cidas con el vanadato para formar un heteropolicido, cido vanadomolibdofosfrico. En la presencia de vanadio, se forma cido vanadomolibdofosfrico de color amarillo.

Metavanadato de amonio (NH4VO3)

690 nm

Determinacin de Sultatos Mtodo Turbidimtrico

El ion sulfato precipita con cloruro de bario, en un medio cido (HCl), formando cristales de sulfato de bario de tamao uniforme.

BaCl2

@ 420 nm BaSO4

FSFORO TOTAL EN FERTILIZANTES


Mtodo espectrofotomtrico fosfatovanadomolibdico

Boro en Fertilizantes.

Longitud de onda 420 nm.

Biuret en Fertilizantes

Frmula del Biuret

Longitud de onda 555 nm.

Malatin
El malatin es un insecticida organofosforado sinttico, lquido e incoloro.

230 nm.

Diuron
Es un polvo blanco, cristalino, utilizado como herbicida en agricultura para controlar malezas en plantaciones de, banana, Citrus, caa de azcar y otros

Espectro ultravioleta en etanol @ 250 y 287 nm.

250 nm

287 nm

Endosulfan
El endosulfn es un insecticida y acaricida organoclorado. se ha usado en agricultura alrededor del mundo para controlar plagas de insectos incluyendo las siguientes; moscas blancas, fidos, langostas, escarabajo de la papa, gusano de la col

215 nm

Paratin
Es un extremadamente potente insecticida y acaricida muy txico para las aves tales como nade real, pichones, codorniz, gorriones y urogallo entre otros.

Espectro Ultravioleta en etanol @ 274 nm

274.0 nm

C10H14NO5PS = 291.3

Metoxicloro
Es usado como insecticida contra moscas, mosquitos, cucarachas, larvas de caros etc. Se usa en cosechas agrcolas y ganado, y en graneros, depsitos de cereales, jardines domsticos y en animales domsticos

Espectro Ultravioleta en hexane @ 276 y 283 nm.

276 nm.

283 nm.

REA FARMACUTICA.

IDENTIFICACIN DE PRINCIPIOS ACTIVOS

Clorhidrato de Papaverina. 251 nm Medio cido Clorhdrico 0.1 N pH: 3.0 a 4.5

Naproxeno Tabletas Longitud de onda 332 nm.

Acido acetilsaliclico

276.00 nm.

cido Benzico

FORMACIN DE COMPLEJOS

Por medio de espectrofotometra se pueden determinar concentraciones muy bajas de iones metlicos mediante la formacin de complejos con un ligando que producen un cambio espectral. Determinacin de Fe III con la 1,10 fenantrolina
Hg II con la difeniltiocarbazona.

N Fe2

FORMACIN DE COMPLEJOS

La presencia de agentes quelantes (molculas orgnicas o inorgnicas que pueden combinarse con iones metlicos o tomos metlicos neutrales), permite el transporte de compuestos frricos a travs de la membrana celular en varios grupos de microorganismos

CINTICAS ENZIMTICAS

ENSAYO DE DISOLUCIN

Estudio Comparativo de Comprimidos de Loratadina Se cuantific por espectrofotometra UV a 280 nm. Debe disolverse no menos del 80% (Q60) del valor declarado en 60 min.

REA CLNICA

GLUCOSA EN SANGRE

Mtodo de la Orto toluidina Reaccin de Benedict Leer a 630 nm. Es estable 20 min.
Valores normales Suero o plasma: 70 a 100mg de glucosa/100ml.

DETERMINACIN DE UREA

La urea se hidroliza por accin de la ureasa en presencia de agua para producir amoniaco y dixido de carbono.

En una reaccin de Berthelot modificada los iones amonio reaccionan con Hipoclorito y salicilato para formar un complejo verde. El aumento de la Absorbancia a 578 nm. es proporcional a la concentracin de la urea en la muestra. Linealidad Suero/plasma hasta 400 mg/dl 66.6 mmol/l (urea)

Orina

hasta 400 g/L

6660 mmol/L (Urea)

CREATININA

Determinacin de Creatinina con cido Pcrico: a 520 nm.

Fosfato Inorgnico

Determinacin de Fosfato Inorgnico con Molibdato a 750 nm.

REA ALIMENTOS

ALIMENTOS

NITRITOS (280nm)

Inhibe el crecimiento de la bacteria botulnica.

Causa:hipotensin moderada, taquicardia, hipotensin ortosttica, convulsiones, colapso cardiovascular.

ALIMENTOS
ANTIOXIDANTES

Un modo sencillo de evitar que las manzanas se pongan marrones es rociarlas con un poco de zumo de limn (cido ascrbico)

CAPSAICINA EN CHILES ( 286 nm )

ALIMENTICIA

Bondades: * Le da el grado de picor al chile * Ayuda a aliviar el dolor llamado neuralgia, el dolor de la osteoartritis reumatoide, comezn de la piel

C18 H27 NO3

CUANTIFICACIN DE TANINOS EN EL ESTRATO ACUOSO DE ROMERILLO a 700 nm

El cido tnico est compuesto por glucosa y cidos fenlicos, suelen acumularse en las races y cortezas de plantas y frutos. (Presentes en el vino tinto, caf, t, espinacas y pasas negras)

APLICACIONES VARIAS.

QUMICA GENERAL
PULPA Y PAPEL
( PULPA BLANQUEADA AL SULFITO 450 nm ) BLANCOS: FLUORESCENTES, MATES, BRILLANTES TiO2 , PARA BLANQUEAR

% DE LUZ REFLEJADA
% DE LUZ ABSORBIDA PROPIEDADES PTICAS

TOLUENSULFONATO DE SODIO 261 nm

TRANSMITANCIA DE MATERIALES

Determinacin de Naftalenos en turbosina


Conforme al Mtodo de la American Society for Testing and Materials ASTM-D-1840

PETROQUMICA

NAFTALENOS ( 285 nm C10- C13)

SURFACTANTES Dodecil bencen sulfonato

DODECIL BENCEN SULFONATO DE TRIETALONAMINA

DODECIL BENCEN SULFONATO DE SODIO

VIII. CUIDADOS Y MATENIMIENTO PREVENTIVO

CUIDADOS Y MANTENIMIENTO PREVENTIVO.

El espectrofotmetro debe estar libre de:

Atmsferas corrosivas. Vibraciones. Polvos.

Luz de da demasiado directa.


Debe tener voltaje regulado. Tierra fsica.

IX. PARTE EXPERIMENTAL

Manejo del Software UV- WINLAB

MODO SCAN

MODO TIME DRIVE

MODO WAVE PROG

MODO CONCENTRATION

GRACIAS

ING. LILIA PALACIOS LAZCANO


EMAIL: l_palacios8@yahoo.com.mx

M en C. Jess H Rodrguez: jhrh76@yahoo.com.mx


Ing. Sara Corts: rscp_86@hotmail.com