CULTIVO DE

PROTOPLASTOS
 Para el éxito del cultivo
• Tipo y edad del material de origen de los
protoplastos.
• Sistema de cultivo y la densidad de los
protoplastos contenidos en él.
• Adecuada composición del medio.
• En células jóvenes es posible manejar
fácilmente la inducción y el mantenimiento
de la actividad mitótica que en las células
altamente especializadas.
SISTEMAS DE CULTIVO

• MEDIO LIQUIDO
• MEDIO SÓLIDO
 MEDIO LIQUIDO
• se usa colocándolo en capas delgadas o
en gotas de 50 a 250 ul.

MEDIO SÓLIDO
• se usa mezclando en él los protoplastos
cuando tenga de 35-40°C, depositándolo,
en capas delgadas, en las cajas petri.
• Frecuentemente los protoplastos se
cultivan en medio liquido y las células en
división o las microcolonias derivadas se
cultivan en medios sólidos.
• Adams et al (1983) utilizaron un medio
solido para cultivo de protoplastos;
cuando las colonias se habían
desarrollado, el medio se volvió a derretir
a 40°C y las colonias se transfirieron por
medio de una pipeta.
 MEDIOS
• Entre los medios de cultivo que se han
utilizado con éxito están:
• Medio 8p. De Kao et al (1975)
• Medio de Kao
• Medio To de Caboche (1980)
• Medio Nagata et al (1971)
 Sales orgánicas
• Bajos niveles de nutrimentos, puesto que
los protoplastos aislados tienen una
eficiente camptación.
ESTABILIZADORES OSMOTICOS
• Para evitar el estrés celular y como
resultado una baja eficiencia del cultivo

• Se usan generalmente azúcares

 REGULADORES DE
CRECIMIENTO
• Generalmente requieren auxinas y
citocininas, para la división celular.

• Las auxinas también pueden ocasionar la

vacuolización y ruptura de los
protoplastos.