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HIS TORIA D EL

MIC RO SCO PIO I


• La curiosidad innata del hombre ha hecho
que este haya intentado saber más acerca
de los objetos más lejanos, pero también
de los más próximos, la astronomía es una
ciencia ligada al hombre desde que el
microscopista holandés Antonie van
Leeuwenhoeck nacido en Delft en 1632 )
quien, sin ninguna preparación científica,
puede considerarse el fundador de la
bacteriología.
• En 1665, Robert Hooke observó con
un microscopio un delgado corte de
corcho. Hooke notó que el material
era poroso. Esos poros, en su
conjunto, formaban cavidades poco
profundas a modo de cajas a las que
llamó células. Hooke había observado
células muertas.
• El microscopio se invento, hacia los
años de 1610, por Galileo, según los
italianos, o por Jansen, en opinión de
los holandeses. La palabra
microscopio fue utilizada por primera
vez por los componentes de la
"Accademia dei Lincei" una sociedad
científica a la que pertenecía Galileo y
que publicaron un trabajo sobre la
observación microscópica del aspecto
de una abeja.
• Sin embargo las primeras publicaciones
importantes en el campo de la microscopia
aparecen en 1660 y 1665 cuando Malpighi
prueba la teoría de Harvey sobre la
circulación sanguínea al observar al
microscopio los capilares sanguíneos y
Hooke publica su obra Micrographia.

• A mediados del siglo XVII un comerciante


holandés, Leenwenhoek, utilizando
microscopios simples de fabricación propia
describió por primera vez protozoos,
bacterias, espermatozoides y glóbulos
rojos
• Durante el siglo XVIII el microscopio sufrió
diversos adelantos mecánicos que
aumentaron su estabilidad y su facilidad
de uso aunque no se desarrollaron
mejoras ópticas.
• Las mejoras más importantes de la óptica
surgieron en 1877 cuando Abbe publica su
teoría del microscopio y por encargo de
Carl Zeiss mejora la microscopía de
inmersión sustituyendo el agua por aceite
de cedro lo que permite obtener aumentos
de 2000.
• Marcello Malpighi fue uno de los
microscopistas más grandes de la historia.
Sus primeros estudios los realizó con
pulmones de rana, pudiendo observar en
ellos una compleja red de vasos
sanguíneos, demasiado pequeños para ser
vistos por separado. Cuando siguió su
recorrido comprobó que se unían con
otros mayores, que eran venas en una
dirección y arterias en dirección contraria.
Por lo tanto, las arterias y las venas se
hallan unidos por una red de vasos
sanguíneos llamados capilares.
En el s ig lo XVIII ap ar eci eron un a g ra n
va rieda d de m icroscopi os.

Es tos s on a lgun os d e ellos :


Tipos d e m icr osc op io s

Existen diferentes tipos de microscopio:

• Óptico
• Electrónico
• Digital
• Cuántico
Micr osco pio s e lectr óni cos :

• Estos microscopios son grandes y


complejos. Utilizan electrones en vez de
luz y aumentan los objetos hasta 250.000
veces.
Las imágenes que se producen son en
blanco y negro y muchas veces tienen
colores falsos.
• El microscopio electrónico de transmisión
(T.E.M.) fue el primer tipo de microscopio
electrónico desarrollado este utiliza un haz
de electrones en lugar de luz para enfocar
la muestra consiguiendo aumentos de
100.000 X. Fue desarrollada por Max Knoll
y Ernst Ruska en Alemania en 1931.
Posteriormente, en 1942 se desarrolla el
microscopio electrónico de barrido(SEM).
• El microscopio electrónico de transmisión
(MET) trabaja “iluminando”, un ejemplar
en la platina con un haz de electrones y
enfocando y aumentando la “imagen” con
lentes magnéticas. Esta imagen
electrónica, que es invisible, se transforma
en una imagen normal, visible mediante
una pantalla especial.
• El microscopio electrónico de barrido
(MEB) sirve para examinar la superficie de
los objetos. Produce imágenes de gran
aumento (más de cien mil veces) y
muestra la forma real de los objetos.
Además de mostrar increíbles figuras, el
microscopio electrónico investigador
muestra detalles que pueden ser de vital
importancia para científicos en muchas
áreas, como la medicina. Trabaja
examinando la superficie de un objeto con
un delgado haz electrónico.
Micr os cop io d ig it al:

• Es un microscopio que utiliza una conexión USB


a la computadora para producir imágenes o
videos a todo color en la pantalla del monitor.
Las imágenes que se originan son digitales que
se pueden almacenar, borrar o editar,
imprimirlas; insertarlas en distintos tipos de
producciones: presentaciones multimedia,
documentos, sitio webs, a un mensaje
electrónico, etc.
Micr os cop io cu ántico:

• El microscopio cuántico es un microscopio


que forma parte de los instrumentos
llamados nanoscopios porque posibilitan
“ver” objetos del tamaño en nanómetros y
aún menores, se conoce como
"microscopio de barrido de efecto túnel"
(STM) y fue presentado en 1982 por
Binning y Röhrer. Ambos recibieron por
esto el Premio Nobel de Física en 1986.
FUNDAMENTOS
• Cuando se acerca un observador a un objeto,
crece el ángulo visual y ese objeto parece ser
mayor. Sin embargo, por debajo de una
determinada distancia (unos 25 cm) entre el ojo
y el objeto, éste no se ve con claridad. Este
límite se debe a la capacidad máxima de
deformación del cristalino. Si se sitúa entre le
ojo y el objeto un sistema óptico capaz de
aumentar el ángulo visual, se podrá ver el objeto
con mayor amplitud y claridad.
• Ese sistema óptico es el MICROSCOPIO.
Produce una imagen aumentada de un objeto
no visible de forma que sea perceptible por el
ojo humano. Se consigue mediante el uso de
lentes u otros sistemas.
• Esta ampliación de la imagen se puede
conseguir de dos formas:
- ondas luminosas: m. Óptico
- haz de electrones (é): m. Electrónico
Térmi nos que de scri be n l as caracterí sti cas
ópt icas del mi crosc op io
• AUMENTO: relación entre el tamaño a
simple vista y el tamaño observado con el
microscopio (es el número de veces que
se ve el tamaño de un objeto por encima
de su valor real). En el microscopio
compuesto se calcula multiplicando el
aumento individual del objetivo por el
aumento individual del ocular. Se expresa
mediante un número seguido del signo
“por” (x).
• CONTRASTE: diferencia en la absorción de luz
entre el objeto estudiado y el medio que lo
rodea. Puede aumentarse mediante
procedimientos de tinción.

• PODER DE RESOLUCIÓN: capacidad de mostrar


distintos y separados dos puntos muy
cercanos. Determina la máxima amplificación útil
del microscopio. Depende de la longitud de onda
(L) y de la apertura numérica (AN): cuanto
menor es L y/o mayor la AN, mayor es la
resolución. La resolución máxima de un
microscopio óptico es de 200 nm.
• d = (0 ,5 x L) / AN
• APERTURA NUMÉRICA: capacidad de la lente
para juntar los rayos de luz proyectados hacia
ella. Determina la eficacia del condensador y del
objetivo. La AN depende del índice de refracción
del medio que hay entre la muestra y la lente
(IR), y del seno de la mitad del ángulo del cono
de luz que penetra en la lente (sen α).
• AN = IR x s enα
• Si se rellena el espacio existente entre la
muestra y el objetivo no con aire, sino con una
sustancia de mayor IR (p.e. aceite), se consigue
que la mayor parte de los rayos perdidos por los
fenómenos ópticos ocasionados en el
condensador y en el portaobjetos, se refracten y
penetren en el objetivo, con lo que se
incrementa la resolución del microscopio.
• PROFUNDIDAD DE CAMPO: espesor de la
preparación enfocada en cualquier
momento. Será mayor cuanto menor sea el
aumento.
• ÁREA DEL CAMPO: es el diámetro de la parte de
la preparación que se está viendo. Será mayor
cuando menor sea el aumento.
Us os d el micros cop io

• Los microscopios poseen una importancia


enorme en la investigación científica y la
industria.
Medicin a:
• La cr eació n del micr oscopi o fue un impo rtan te
av an ce en el mu ndo d e l a medicin a.
• Al de scu br ir se las bact er ias se pu do av er igu ar la
causa de mu ch a en fermed ad es y así fabr ica r un a
cura.
• El tejid o human o tamb ién pud o se r exa min ad o y
se pudo de sc ubrir co mo fun cio na nue st ro cue rpo .
Ho y en día , se an al iz a teji do enf er mo en los
hosp it al es .
• Ta mb ié n se usan los mi crosco pi os en la conocida
“mi cro cirugí a” , cir ugía s mu y dif ícil es la s cu al es
no pu ede n lleva rse a cabo sin el mi crosco pi o.
Medicin a For en se:
• El microscopi o es pr otagoni st a en el
momento de r esolver crím enes.

• En la esce na del cri me n, el crim ina l s uele


deja r p eque ña s cl aves, como sa ng re,
vi dr ios rot os, ra st ros de ropa , cabel lo y
ot ros, qu e una v ez enco nt ra das con lup a
en el l ug ar , suelen ser ma nda dos a
ana lizar a un lab oratori o ci entí fi co. Aquí
se ana li za m ás d etall ada me nte, y s i se
encuentr a alg uno de est os ra st ros en un
sospec hoso, s erá una bu ena evi dencia
para i nculp arl o.
Geolog ía :

• Lo s ge ólo gos exam inan trozo s de


roc a pa ra a na liza rla ba jo el
mic rosc opio .

• En lo s pozos de pe tró leo, se ana li za


const ant ement e la roc a cont ra la
cua l se est a pe rfo ra ndo pa ra saber
de qu e esta com pue sta y, as í, saber
como debe n tra baj ar .
Arqu eo lo gía :
• Estos aparatos también son solicitados en las ruinas de
antiguas civilizaciones.

• Cuando se encuentran en una excavación arqueológica


distintos objetos, estos son analizados con un
microscopio para poder determinar el grado de cultura
que estos seres antiguos poseían. Si encuentran un
hueso de animal, se analizará para saber si era
doméstico o salvaje, y deducirán si eran cazadores o
agricultores, si encuentran restos de ropa sabrán si la
conocían y examinado sus construcciones podrán
recrearlas
Al imenta ci ón y
Pr ocesa mi en to:
• Lo s cie nt íf ic os usa n lo s
mic rosc opio s par a det erm inar la
caus a de l a m ue rte de muc ho s
cul ti vos , y b uscan enc ont ra r pl ant as
que so por ten el fr ío y la s di ve rsa s
ba cteri as .
Materi ales de i nvestig aci ón e
ind ustr ia :
• Los científicos ponen a prueba diversos materiales. Los
aplastan, los queman, los enfrían y hasta los tratan de
disolver con ácidos. Luego se colocan bajo la lente del
microscopio y se estudian si su estructura cambio.

• También existe una clase de control que se realiza una


vez ya terminado el objeto, esto es el control de calidad.
Se utiliza para determinar la causa de muchos
accidentes. Por ejemplo, los aviones cuando caen son
analizados para verificar el estado del metal. Si se
encuentran grietas es posible que estas hayan sido
causadas de una manera natural, sin embargo es
necesario no dejar pasar posibles accidentes.
Elect rónica :

• En algunas industrias se necesitan


microscopios en los procesos de
producción debido a que sus componentes
son pequeños.
Partes del Microscopio
Sis tema ópt ic o
• OCULAR Lente situada cerca del ojo del
observador. Amplía la imagen del objetivo.

• OBJETIVO Lente situada cerca del la


preparación- Amplía la imagen de ésta.
Sistema Luminoso
• CONDENSADOR Lente que concentra los rayos
luminosos sobre la preparación.

• DIAFRAGMA Regula la cantidad de luz que entra en el


condensador.

• FOCO Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.


Por lo general consta de un bombillo que puede ser de
tungsteno (halógeno), el cual es controlado por un
interruptor de encendido
Sis tema mecáni co

• SOPORTE Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el


pie y la columna.
• PLATINA Lugar donde se deposita la preparación.
• TUBO Contiene los sistemas de lentes
• REVÓLVER Permite, al girar, cambiar los objetivos.
• TORNILLOS DE ENFOQUE
macrométrico que aproxima el enfoque
micrométrico que consigue el enfoque correcto
NORMAS DE MANEJO DEL
MICROSCOPIO
PA RA TR AN SPORT E
• Para transportar el microscopio cogerlo
con las dos manos, con una se sujeta el
brazo y con la palma de la otra se sostiene
el pie o base.
• No se deben tocar las lentes con los
dedos.
Para enfocar:
• Girar el revolver para seleccionar el objetivo menor.
• Colocar la preparación en la platina, centrarla y sujetarla
con las pinzas.
• Observando por el ocular elevamos la platina con el
macrométrico.
• Sin dejar de observar, gira el micrométrico hasta
conseguir la máxima nitidez.
• Cuando ya hemos observado la imagen con el menor
objetivo, cambiamos a los superiores sucesivamente,
ajustando con el micrométrico.
• El aumento conseguido es el producto del aumento del
ocular y el aumento del objetivo.
OTR AS REC OMEN DA CIONE S

El microscopio debe ser cubierto con


cobertores de tela, no con plásticos, ya
que estos por el calor que producen,
permiten la formación de hongos en
los lentes.
b. Nunca debe ser expuesto directamente a
los rayos del sol, ni cerca de sustancias
tóxicas, ni cerca de lavaderos. Tampoco
deben estar en el mismo mueble donde se
encuentran equipos que producen
vibración.
c. El polvo se encuentra prácticamente en
todo lugar, ocasionando serios problemas
en las partes mecánicas que se deslizan
sobre guías con extrema precisión, si estas
guías están sucias, el polvo con la
lubricación hace las veces de esmeril o
lija, ocasionando desajustes en los
movimientos, por lo que será necesario
limpiar y lubricar periódicamente.
d. Verifique si su equipo funciona
correctamente:

• Revise en forma visual que el tomacorriente


macho se encuentre conectado al tomacorriente
hembra de la pared, de modo que se establezca
un buen contacto.
• Accione el interruptor (switch), compruebe que
la lámpara encienda. Mueva de izquierda a
derecha el regulador de intensidad y compruebe
su funcionamiento.
• Revise si las partes mecánicas y ópticas
funcionan adecuadamente: movimientos
macrométricos y micrométricos, desplazamientos
libres de la platina en cruz, portacondensador,
diafragmas y revolver.
• Cualquier anormalidad en el microscopio,
repórtela al Departamento de Mantenimiento.
• Nunca trate de corregirla o que la corrijan
personas que no poseen los conocimientos
técnicos necesarios.
e. No se debe fumar cerca del microscopio, ya que
eventualmente los lentes, llegan a cubrirse con
una capa de material no combustible, mezclado
con residuos de carbón. Lo que produce
decoloración y un campo borroso.
f. No se deben usar cantidades exageradas de
aceite de inmersión, pues si éste no se quita
cuando se termina el trabajo, se secará sobre
los lentes y producirá problemas para el
microscopista.
En la mayoría los casos, es suficiente usar una
gota de aproximadamente 5 mm de diámetro.
g. Cuando hay necesidad de movilizar el
microscopio de un sitio a otro, éste
debe sostenerse en posición vertical, y
tomarlo por el brazo y por la base, que
son las partes más sólidas del equipo.
La movilización inadecuada puede
desviar los prismas y su arreglo solo
puede hacerlo un experto.
h. Las lámparas no deben usarse al máximo
de intensidad, ya que se acorta su vida
útil. Lo que se debe hacer es centrar,
enfocar y subir el condensador o
diafragmas para lograr optimizar al
máximo la luz.
Mant enim iento pr eve nt ivo de l
ope rado r

a. Limpie la superficie del equipo con un trapo


humedecido con agua, no use alcohol, acetona u
otra sustancia demasiado fuerte, ya que la
pintura puede desprenderse.
b. Verifique que el cable de conexión no presente
ningún deterioro en su aislante, especialmente
en sus extremos, si se presenta cámbielo o
repórtelo a Mantenimiento.
c. Compruebe el buen funcionamiento de él
o los diafragmas, y el correcto montaje del
condensador. Céntrelo si es necesario.
d. Verifique los desplazamientos mecánicos
de la platina y el portaobjetos; limpie y
lubrique con grasa fina las cremalleras o
guías visibles.
e. Es recomendable tener a la mano un
bombillo de repuesto, para no interrumpir
el trabajo cuando se queme el que está en
uso.
f. Desmontar los objetivos y oculares para su
limpieza, según se detalla:
f.1 Objetivos:
− Con un ocular en posición invertida observar
el lente externo del objetivo, conservando un
ángulo de aproximadamente 30º, para detectar
partículas de polvo o aceite, rayones u hongos.
− Con un hisopo humedecido ligeramente en
agua destilada frotar el lente externo del
objetivo en forma circular y luego pasarle un
hisopo seco para secar el lente.
− Con una perilla insufladorasopletear cualquier
partícula de polvo o algodón interna y
externamente del objetivo.
− Por ningún motivo desarme el objetivo, porque
puede dañarlo o hasta desajustarlo.
− Si la suciedad persiste, repórtelo de inmediato al
Departamento de Mantenimiento.
f.2 Ocul ar es :
− Para determinar si los oculares se encuentran
sucios, montar una lámina con cualquier
muestra en el portaobjeto de la platina y
observarla con el objetivo 40x, una vez enfocado
el objeto hacer girar un ocular a la vez y si se
observan partículas que giran, es signo de
suciedad en los lentes de los oculares.
- Cuando se retiren los oculares, cubrir los
orificios donde estos se encuentran para
que no entre
polvo en los prismas del cuerpo binocular
del microscopio.
− Sobre una franela o pedazo de tela
desarme cuidadosamente el ocular,
teniendo especial cuidado de conservar el
orden y posición en la que se encuentran
los lentes y separadores.
- Cada lente debe limpiarse con un pedazo
de algodón ligeramente humedecido con
agua destilada y luego secarlo con
algodón seco, teniendo el cuidado de no
tocar los lentes con la yema de los dedos,
porque quedaran impresas sus huellas
digitales.
− Con la pera insufladora sopletear
los lentes para retirar cualquier
partícula de polvo o algodón.
- Armar cuidadosamente de nuevo el ocular,
conservando el orden, de manera inversa a la
cual se desarmó.
− Nunca use sustancias como acetona, xilol,
alcohol 90º, éter u otro para limpiar los lentes;
estas sustancias solamente son usadas por
personal de Mantenimiento técnicamente
capacitados.
− Si la suciedad persiste y dificulta demasiado la
visualización del objeto, repórtelo al
Departamento de Mantenimiento del Hospital.

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