Faculdade de Cincias da Universidade de Lisboa Enzimologia Ano letivo: 2013/2014 Docentes: Ana Ponces Freire e Marta Sousa Silva

A Qualitive Approach to Enzyme Inhibition

Grover L. Waldrop

Alunos: - Diogo Martins, n41880 - Patrcia Marques, n42629

Inibio Enzimtica
A atividade dos enzimas pode ser inibida atravs da ligao de pequenas molculas ou ies, sendo que a inibio enzimtica se baseia na interao entre o inibidor e o enzima.
A inibio enzimtica um mecanismo de controlo em sistemas biolgicos. Muitos efeitos fisiolgicos, tanto txicos como funcionais, so resultantes da atividade enzimtica.
Reversvel

Inibio Enzimtica

Irreversvel

Inibidores
Os inibidores so molculas que interferem com a catlise,

no a permitindo ou diminuindo a sua velocidade.

Competitivos
Reversveis Inibidores

Anticompetitivos
Mistos

Irreversveis

Aplicaes: Agentes farmacuticos para humanos; Agentes farmacuticos para medicina veterinria; Herbicidas e pesticidas.

Inibidores
Abordagem usual Os diferentes tipos de inibidores reversveis distinguem-se atravs da variao da constante Michaelis (Km) e da velocidade limite (Vmax). [] = + []
Equao 1 - Equao Michaelis-Menten.

Abordagem qualitativa Esta abordagem serve para interpretar os padres Lineweaver-Burk e os mecanismos dos tipos de inibidores. Segundo esta abordagem, as constantes fundamentais so a velocidade mxima (Vmax) e a razo Vmax/Km.

 most of the understading derived from the kinetic studies comes from the patterns rather than the actual numbers
W. W. Cleland

Ilustrao 1 - William Wallace Cleland

Parmetros cinticos
Os

parmetros independentes.

Km

Vmax

no

so

parmetros

Os

parmetros Vmax e Vmax/Km so parmetros independentes e representam as constantes de uma reao enzimtica a elevada e baixa concentrao de substrato, respetivamente.

Ilustrao 2 Representao dos parmetros cinticos Vmax/Km e Vmax.

Parmetros cinticos
Os parmetros fundamentais da cintica michaeliana de

uma reao enzimtica correspondem aos parmetros fundamentais da linearidade de um diagrama LineweaverBurk.
O ponto de intercepo no eixo

dos yy representa a constante de uma reao enzimtica quando as concentraes de substrato so elevadas. O slope representa a constante de uma reao enzimtica quando as concentraes de substrato so baixas.

Ilustrao 3 Representao do slope e do ponto de interceo no eixo yy.

Inibio Competitiva
Os inibidores competitivos alteram o slope de uma Lineweaver-

Burk mas no alteram o ponto de interceo do eixo dos yy.

Um inibidor competitivo s se liga ao enzima quando as

concentraes de substrato so baixas, caso no seja esse o caso, no se liga. Assim, existe efeito no parmetro Vmax/Km (aumento) mas no no Vmax (constante), com o aumento da concentrao de inibidor.

Ilustrao 4 Lineweaver-Burk de uma inibio competitiva.

Inibio Anticompetitiva
Os inibidores anticompetitivos afetam apenas o ponto de

interceo no eixo dos yy da Lineweaver Burk.

Um inibidor anticompetitivo s se liga ao complexo enzima-

substrato quando as concentraes de substrato so elevadas, caso no seja esse o caso, no se liga. Assim, existe efeito no parmetro Vmax (decresce) mas no no Vmax/Km (constante), com o aumento da concentrao de inibidor.

Ilustrao 5 Lineweaver-Burk de uma inibio anticompetitiva.

Inibio Mista
Um inibidor misto liga-se quer ao enzima no estado livre,

quer ao complexo enzima-substrato, sendo que afeta quer o ponto de interceo do eixo dos yy e o slope da LineweaverBurk.
Este inibidor liga-se ao enzima independentemente da

concentrao de substrato existente.

Ilustrao 6 Lineweaver-Burk de uma inibio mista.

Inibio do timidilato sintase por 5fluorouracil e leucovorina

Timidilato sintase catalisa um passo essencial na replicao do DNA, inibindo a reao e abrandando o crescimento rpido de clulas tais como alguns tipos de cancros.
Target para as drogas anti cancro como 5fluorouracil (5-FU) e leucovorina.

Leucovorina: frmaco, anlogo do N5, N10-metileno, frequentemente administrado juntamente com 5-FU para melhorar a sua citotoxicidade.

Reao catalisada pelo timidilato sintase

Ilustrao 7 Representao da reao catalisada pelo timidilato sintase .

Inibio do timidilato sintase por 5fluorouracil e leucovorina

Timidilato sintase: catalisa a transferncia de um grupo metilo a partir de N5 , N10 -metileno- tetrahidrofolato para dUMP para formar dTMP e 7,8- dihidrofolato. dUMP: (anlogo do 5- FU3) inibidor baseado no mecanismo onde o enzima forma um intermedirio covalente, no qual, a sequncia da reao interrompida e o inibidor permanece ligado covalentemente, sendo o timidilatosintase inibido. Inibio anticompetitiva.

O anlogo estrutural do N5 , N10 -metileno- tetrahidrofolato, 10 -metil- tetra-hidrofolato , que no reativo, exibiu inibio competitiva com o composto N5 , N10 metileno- tetrahidrofolato.

Representao Final dos Resultados Obtidos

a b

Ilustrao 7 Representao de uma inibio competitiva (a) e de uma inibio anticompetitica (b).

Inibio Competitiva

Inibio Anticompetitiva

Concluso
Para interpretar um grfico Lineweaver-Burk de uma

inibio necessrio saber que:

slope corresponde razo Vmax/Km que o parmetro

afetado quando a concentrao de substrato baixa. ponto de interceo no eixo dos yy corresponde ao parmetro Vmax que o parmetro afetado quando a concentrao de substrato elevada.

Se um inibidor afeta o parmetro slope, significa que o

inibidor se liga ao enzima no estado livre.

Se um inibidor afeta o ponto de interceo no eixo yy,

significa que o inibidor se liga ao complexo enzimasubstrato.

Referncias
Artigo

A Qualitive Approach to Enzyme Inhibition. WALDROP, Grover L. . The International Union of Biochemistry and Molecular Biology, 2009.

QUINTAS, Alexandre; FREIRE, Ana Ponces; HALPERN,

Manuel J. . Bioqumica Organizao Molecular da Vida. Lidel, 2008.

NELSON, David L.; COX, Michael M.. Lehninger -

Principles of Biochemistry. W.H. Freeman and Company, 2008.