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FOTOMETRIAS DE LLAMA

Bases, Instrumentacin y Aplicaciones en Laboratorio de Bioqumica Clnica

ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA


Es una tcnica para determinar la concentracin de un elemento metlico determinado en una muestra. Puede utilizarse para analizar la concentracin de ms de 62 metales diferentes en una solucin. Los elementos a analizar se encuentran en forma de vapor de tomos. Ahora bien, en absorcin atmica existe una fuente independiente de luz monocromtica, especfica para cada elemento a analizar y que se hace pasar a travs del vapor de tomos, midindose posteriormente la radiacin absorbida.

Para poder analizar la muestra es imprescindible tenerla atomizada utilizando un flujo de gas oxidante mezclado con gas combustible, es decir, que mediante un flujo la muestra lquida o en disolucin va a ser aspirada por un capilar; Cuando la solucin sale del capilar el gas la dispersa en forma de fina niebla. Para que la precisin de los anlisis sea buena hay que poder reproducirlas en todas las medidas: el flujo de los gases y el tamao de gota.

COMPONENTES EQUIPO

En esta atomizacin se dan 3 fases


DESOLVATACIN El liquido disolventes evapora y la muestra permanece seca. VAPORIZACIN La muestra slida se evapora a gas. ATOMIZACIN Los compuestos de la muestra se dividen en tomos libres.

En un espectrofotmetro de AA es necesario utilizar una llama aunque esta tambin la podemos sustituir por un horno de grafito. Las llamas utilizadas en la AA son similares a la tcnica de emisin de llama

Tipos de llamas
Llama de aire-hidrocarburos Llama de aire acetileno Llama de oxido nitroso-acetileno La temperatura de la llama es lo suficientemente baja como para no excitar los tomos de la muestra de su estado basal. Segn la temperatura encontramos tres tipos de llamas: llamas fras. llamas calientes. llamas mas calientes. La ms utilizada en analtica clnica es la Llama caliente ya que puede atomizar hasta 30 elementos

COMPONENTES:
Fuente de luz: lmpara de ctodo hueco que consiste en un nodo de wolframio y un ctodo cilndrico cerrados hermticamente en un tubo de vidrio lleno de nen/argn, y el ctodo est constituido con el metal cuyo espectro se desea obtener

Quemador: es un mechero en el cual se dan dos procesos; Nebulizacin y Atomizacin de la muestra para obtener una mayor sensibilidad.

Monocromador: son prismas o redes de difraccin que sirven para hacer pasar la luz atreves del sistema ptico.

Detector: el sistema de deteccin puede estar formado por foto celdas, fotomultiplicador, etc. Que reciben la energa lumnica proveniente de la muestra y la convierte en una seal elctrica proporcional a la energa recibida.

Diferencias equipos AA y EA

APLICACIONES
En qumica analtica se emplea para medir las concentraciones de elementos metlicos en los lquidos biolgicos, los principales metales que se miden son: Aluminio- arsnico-bario cadmio- calciocobre- cromo- hierro-litio-magnesiomanganeso-mercurio-nquel plata-platinoplomo -selenio y zinc.

FOTOMETRIA DE LLAMA o FOTOMETRIA DE EMISIN ATMICA


Es una tcnica de emisin que utiliza una llama como fuente de excitacin y un fotodetector electrnico como dispositivo de medida. Se pueden realizar anlisis monoelementales o multielementales, en este segundo caso se emplean sistemas selectores entre la muestra y el detector que son capaces de discriminar en un periodo de tiempo corto varias longitudes de onda de emisin de los diferentes elementos que se pretenden analizar en la muestra.

En la fotometra de llama se pueden realizar 2 tipos de anlisis:


ANALISIS CUALITATIVO Identifica los componentes de una muestra y examina las longitudes de onda del espectro de emisin (la muestra debe estar disuelta) ANALISIS CUANTITATIVO Es ms sencillo y preciso, sirve para detectar metales alcalinos o alcalino trreos tambin determina la cantidad de sustancias en una muestra.

El equipo de llama se compone de:


MONOCROMADOR: Prismas FOTODETECTOR: Dispositivo encargado de captar la seal ptica proveniente del monocromador y transformarlo en una seal electrnica capaz de ser convertida en un valor legible. MEDIDOR: Se encarga de tomar la D.O de la muestra. REGISTRADOR: convierte un resultado en valor numrico.

LLAMA
La llama en el fotmetro durante el anlisis requiere combustible y oxidante. Estos mtodos a menudo son capaces de analizar elementos metlicos en ppm, billones e incluso hasta rangos ms bajos de concentracin. Se debe controlar las etapas necesarias de los tomos que constituyen una muestra hasta su estado fundamental, para ello; hay que sustituir la llama por una cmara de grafito y con esto aumenta tambin la sensibilidad. Es esencial que la temperatura de la llama se mantenga constante, para lo cual se precisan reguladores.

ATOMIZADORES CON LLAMA


Su funcin es convertir los tomos combinados de la muestra en tomos en estado fundamental, para ello es necesario suministrar a las muestras una cantidad de energa suficiente para disociar las molculas y romper sus enlaces.

FUNCIONES BASICAS DE LA LLAMA


Permite pasar la muestras a analizar de estado liquido a gaseoso. Descompone los compuestos moleculares en tomos individuales o molculas sencillas. Excita estos tomos o molculas. Las condiciones que debe cumplir una llama deben de ser, que tenga la temperatura adecuada y que en ella se forme un ambiente gaseoso que permita las funciones mencionadas. Adems el ruido de fondo de la llama no debe interferir en las observaciones.

APLICACIN:
Es una tcnica aplicable para la cuantificacin de diversos componentes como los elementos alcalinos o alcalinotrreos, aunque en realidad solo se miden concentraciones de sodio (Na) potasio (K) y litio (Li), pero suele utilizarse otras tcnicas para esta medicin ya que resulta ms econmicas; Las muestras habitualmente utilizadas son lquidos biolgicos que deben de estar en solucin acuosa con determinados diluyentes y estos suelen contener litio o cesio.

Zonas de la llama

- Zona o cono interno: hay una combustin parcial es decir sin equilibrio trmico en esta se forman productos de oxidacin intermedios, se produce una gran emisin de luz (proviene del combustible, no de la muestra), es muy poco utilizada en el trabajo analtico - Zona interconal: o llamada parte caliente de la llama y en ella tiene lugar una combustin completa. Es la ms utilizada en anlisis - Cono externo: es la zona de combustin secundaria. Se enfra por el aire circundante y es una zona poco til.

Atomizacin de la muestra
El proceso por el cual la muestra se convierte en un vapor atmico se denomina atomizacin. La precisin y exactitud de los mtodos atmicos dependen en gran medida de la etapa de atomizacin.

los atomizadores son de dos tipos


Atomizadores continuos La muestra se introduce en el atomizador a una velocidad constante y la seal espectral es constante con el tiempo. Los procesos que se distinguen durante la atomizacin son los siguientes: Nebulizacin: la solucin de la muestra se convierte en una niebla de pequeas gotas finamente dividas mediante un chorro de gas comprimido. A continuacin, el flujo de gas transporta la muestra a una regin calentada donde tiene lugar la atomizacin. Atomizacin. Se trata de un conjunto complejo de los siguientes procesos: La desolvatacin, en la que el disolvente se evapora para producir un aerosol molecular slido finamente dividido. La disociacin de las molculas conduce luego a la formacin de un gas atmico. A su vez, los tomos pueden disociarse en iones y electrones. Molculas, tomos e iones pueden excitarse en el medio calorfico, producindose as espectros de emisin moleculares y dos tipos de espectros de emisin atmicos.

Atomizadores discretos: Una cantidad medida de la muestra se introduce como un bolo de lquido o de slido. La seal espectral en este caso alcanza un valor mximo y luego disminuye a cero. La desolvatacin se lleva a cabo al aumentar la temperatura hasta el valor en el que tiene lugar la evaporacin rpida del disolvente. A continuacin, la temperatura del aparato se aumenta drsticamente de tal forma que las otras etapas de la atomizacin se producen en un breve perodo de tiempo. En estas circunstancias la seal espectral adquiere la forma de un pico bien definido.

Tipos y fuentes de espectros atmicos


Cuando una muestra se atomiza, una importante fraccin de los constituyentes metlicos se transforman en tomos gaseosos. Segn la temperatura del atomizador, una cierta fraccin de esos tomos se ionizan, originando as una mezcla gaseosa de tomos e iones elementales.

Espectros de emisin atmica


A temperatura ambiente, todos los tomos de una muestra se encuentran en el estado fundamental. Por ejemplo, el nico electrn externo del sodio metlico ocupa el orbital 3s. La excitacin de este electrn a orbitales ms altos se puede conseguir por el calor de una llama o un chispa o arco elctrico. El tiempo de vida de un tomo excitado es breve, y su vuelta al estado fundamental va acompaada de la emisin de un fotn de radiacin

Espectros de absorcin atmica


En el medio gaseoso a elevada temperatura, los tomos de sodio son capaces de absorber radiacin de las longitudes de onda caractersticas de las transiciones electrnicas del estado 3s a estados excitados ms elevados. De este modo, un espectro de absorcin atmico caracterstico consta predominantemente de lnea de resonancia, que son el resultado de transiciones del estado fundamental a niveles superiores.

Espectros de fluorescencia atmica


En una llama, los tomos pueden presentar fluorescencia cuando se irradian con una fuente intensa que contiene las longitudes de onda que se absorben por el elemento. La radiacin que se observa es, por lo general, el resultado de la fluorescencia de resonancia

ESPECTROSCOPA DE ABSORCIN ATMICA CON LLAMA Y ELECTROTRMICA

Instrumentos para la espectroscopia de absorcin atmica

Instrumentacin equipo AA

Fuente de radiacin
La fuente de radiacin caracterstica debe poseer tres propiedades fundamentales: Monocromaticidad: la lnea de resonancia se debe poder seleccionar con toda precisin exactamente a la longitud de onda del elemento a determinar. Intensidad: deber ser lo suficientemente intensa a la longitud de onda de inters. Estabilidad: suficiente como para poder realizar las medidas sin fluctuaciones considerables. Actualmente hay varias fuentes de radiacin utilizables: las de emisin continua, que abarcan el espectro desde el ultravioleta lejano hasta el visible y las fuentes de emisin discontinua, que emiten nicamente a longitudes de onda muy concretas.

En la figura se muestra una tipo de fuente de radiacin discontinua es decir, una lmpara de descarga sin electrodos o EDL

Las fuentes de emisin continua son muy buenas, pero necesitan un monocromador de un elevado poder de resolucin cuyo precio es muy alto. Por esta razn son ms utilizadas las fuentes de emisin discontinua, entre las que se pueden distinguir las lmparas de ctodo hueco y las lmparas de descarga sin electrodos. Tanto unas como otras requieren un perodo de calentamiento antes de comenzar las mediciones. Sin embargo, se debe destacar que las lmparas de descarga sin electrodos tienen un elevado precio y requieren un elevado tiempo de calentamiento, pero presentan la ventaja de alta intensidad de emisin frente a las lmparas de ctodo hueco.

Atomizadores con llama


Su funcin es convertir los tomos combinados de la muestra en tomos en estado fundamental, para ello es necesario suministrar a las muestras una cantidad de energa suficiente para disociar las molculas, romper sus enlaces y llevar los tomos al estado fundamental

etapas por las que pasa la muestra hasta obtener tomos en estado fundamental

Los componentes necesarios para obtener los tomos en estado fundamental son

Nebulizador: cuya misin en convertir la muestra aspirada en una nube de tamao de gota muy pequeo. Cmara de premezcla: donde penetra la muestra una vez se ha nebulizado. En ella se separan las pequeas gotitas que forman la niebla mezclndose la muestra nebulizada con el oxidante y el combustible ntimamente. Mechero. Se sita sobre la cmara de premezcla, y por l sale la llama con temperatura suficiente para poder comunicar a la muestra la energa suficiente para llevar los tomos a su estado fundamental. La llama es el medio de aporte de energa a la muestra. Entre las llamas se diferencia entre la de aire-acetileno y la de xido nitroso-acetileno

Zonas de la llama

Monocromadores
Tienen como funcin seleccionar la lnea de absorcin, separndola de las otras lneas de emisin emitidas por el ctodo hueco. Los aparatos comerciales suelen venir equipados con monocromadores del tipo de prisma o red de difraccin

Detectores
Miden la intensidad de la radiacin antes y despus de la absorcin por la muestra. A partir de los valores obtenidos se podr calcular la radiacin absorbida. En los aparatos comerciales se emplean tubos fotomultiplicadores

Modulacin
La llama emite energa continuamente a longitudes de onda no deseadas, produciendo interferencia y una gran inestabilidad en las lecturas. Los detectores que se utilizan son sensibles a determinadas frecuencias, ignorando las seales continuas ocasionadas por la llama. Por ello, se modula el sistema de alimentacin de las lmparas a la misma frecuencia que el tubo fotomultiplicador

Sistema ptico
Su funcin es conducir las radiaciones emitidas por la lmpara a travs del sistema de obtencin de tomos en estado fundamental y el monocromador hasta llegar al detector. El sistema ptico est formado por: - Espejos y lentes, que focalizan sobre la llama la mayor cantidad de energa emitida por la lmpara y la sitan a la entrada del monocromador. - Lminas planoparalelas, que se utilizan para aislar los dems elementos del exterior. - - Rendijas que se sitan una a la entrada para obtener un haz paralelo y estrecho procedente de la lmpara y otra a la salida para seleccionar la longitud de onda adecuada eliminando el resto de las emisiones

Uso de rendijas

Incremento de la sensibilidad
En ocasiones, las concentraciones que deseamos detectar son demasiado bajas, por lo que debemos recurrir a tcnicas especiales que requieren complementar el equipo con ciertos accesorios, los cuales mejoran notablemente la sensibilidad del equipo. Algunos ejemplos de ellos son los siguientes:

Cmara de grafito
El aporte energtico ms utilizado es la llama, pero en ocasiones se necesita mayor sensibilidad. Una forma de controlar las etapas necesarias para llevar los tomos que constituyen una muestra hasta el estado fundamental es suministrar la energa programadamente por medios electrotrmicos. Es decir, sustituimos la llama por la cmara de grafito. Con ello aumenta la proporcin de tomos en estado fundamental y, por tanto, la sensibilidad aumenta. Con la cmara de grafito, figura siguiente, se aumenta la sensibilidad unas 1000 veces la de la llama, pudindose llegar a detectar niveles de ng/L.

AA con cmara de grafito

Generador de hidruros
Utilizando otros reductores y una cmara de cuarzo calentada a una temperatura de unos 1000C, se pueden analizar los elementos capaces de formar hidruros voltiles como el As, Se y Sb, llegando a detectarse niveles de unos pocos ppb.

Tcnicas analticas de espectroscopia de absorcin atmica.

Interferencias
Se llaman interferencias a la influencia que ejerce uno o ms elementos presentes en la muestra sobre el elemento que se pretende analizar. La clasificacin de los distintos tipos de interferencias se muestra a continuacin:

Interferencias fsicas: Efectos causados por las propiedades fsicas de la muestra en disolucin. Interferencias espectrales: Producida por radiaciones que alcanzan al detector a una longitud de onda muy prxima del elemento que se investiga. Interferencias qumicas: Influencia que ejercen unos elementos sobre otros por formar, entre ambos, compuestos estables.

Interferencia por efecto de matriz: Debidas a la influencia que tiene el entorno que rodea a los tomos en estado fundamental que se pretende analizar. Interferencias por absorcin inespecficas: Se presenta un aumento de la seal originado por la dispersin de las radiaciones de la lmpara. Interferencias por ionizacin: Debida a que parte de los tomos pasan al estado excitado. Para evitar al mximo estas interferencias habr que optimizar el equipo eligiendo las condiciones ms adecuadas para cada elemento.

Mtodos
Para el anlisis de una muestra, lo primero que habr que hacer ser poner las condiciones especficas del elemento que vamos a analizar. Estas condiciones vienen especificadas por el fabricante. Una vez elegidas las condiciones de trabajo para el elemento en cuestin habr que calibrar el aparato. Parta ello se pueden seguir dos procedimientos, la realizacin de una curva de calibrado o bien el mtodo de adicin.

Ventajas y desventajas.
Ventajas Puede analizar hasta 82 elementos de forma directa. Sus lmites de deteccin son inferiores a la ppm. Tiene una precisin del orden del 1% del coeficiente de variacin. La preparacin de la muestra suele ser sencilla. Tiene relativamente pocas interferencias. Su manejo es sencillo. El precio es razonable. Existe abundante bibliografa.

Desventajas Slo pueden analizarse las muestras cuando estn en disolucin Tienen diferentes tipos de interferencias. Solo pueden analizar elementos de uno en uno. No se pueden analizar todos los elementos del Sistema Peridico. Por ser una tcnica de absorcin, sus curvas de calibrado slo son lineales en un corto rango de concentracin.

Aplicaciones de espectroscopia de absorcin atmica


La espectroscopia de absorcin atmica se ha usado para analizar trazas de muestras geolgicas, biolgicas, metalrgicas, vtreas, cementos, aceites para maquinaria, sedimentos marinos, farmacuticas y atmosfricas. Las muestras lquidas generalmente presentan pocos problemas de pretratamiento; entonces todas las muestras slidas son primero disueltas. Las muestras gaseosas son casi siempre pretratadas extrayendo el analito por burbujeo del gas en una solucin y analizando entonces esa solucin, o absorbiendo los analitos en una superficie slida y ponindolo entonces en solucin por lixiviacin con los reactivos apropiados. El muestreo directo de slidos puede efectuarse con un horno electrotrmico.

ESPECTROSCPA DE EMISIN ATMICA DE LLAMA

Instrumentacin
Los instrumentos para trabajar con emisin de llama son similares a los instrumentos de absorbancia de llama, excepto por el hecho de que en los primeros la llama acta como fuente de radiacin. En la espectrofotometra de emisin de llama, la muestra en solucin es nebulizada e introducida dentro de la llama, en donde es desolvatada, vaporizada y atomizada, todo esto en rpida sucesin. Subsecuentemente, los tomos y las molculas se elevan a estados excitados por colisiones trmicas con los constituyentes de los componentes de la llama parcialmente quemados.

Durante su regreso a un estado electrnico basal o ms bajo, los tomos y molculas emiten la radicacin caracterstica de los componentes de esa muestra. La luz emitida pasa por un monocromador que aisla la longitud de onda especfica para el anlisis deseado. Un fotodetector mide la potencia radiante de la radiacin seleccionada, que entonces es amplificada y enviada a un dispositivo de lectura: medidor, registrador o sistema con microcomputadora.

Diagrama de un equipo de EA

Comparacin AA y EA
Instrumentos. La principal ventaja de los procedimientos de emisin consiste en que la llama acta como fuente. Por el contrario, los mtodos de absorcin necesitan de una lmpara diferente para cada elemento. La calidad del monocromador de un instrumento de absorcin no tiene que ser tan alta para alcanzar el mismo grado de selectividad. Habilidad del operador. Los mtodos de emisin requieren un mayor grado de habilidad por parte del operador. Correccin del fondo. La correccin de los espectros de banda se realizan con mayor facilidad y por lo general con ms exactitud en los mtodos de emisin. Precisin y exactitud. En manos de un operador experto, la incertidumbre es la misma para ambos procedimientos (0,5 a 1% relativo). Con personal menos entrenado, los mtodos de absorcin atmica presentan menos problemas. Interferencias. Ambos mtodos sufren interferencias qumicas semejantes. Lmites de deteccin. Ambos procedimientos presentan unos lmites de deteccin complementarios.

ESPECTROSCOA DE EMISIN ATMICA BASADA EN LA ATOMIZACIN CON PLASMA (ICP)

Un plasma es una mezcla gaseosa conductora de la electricidad que contiene una concentracin significativa de cationes y electrones. En el plasma de argn que se utiliza en los anlisis de emisin, los iones de argn y los electrones son las principales especies conductoras, aunque los cationes de la muestra tambin estn presentes en menor cantidad. Los iones argn, una vez que se han formado en un plasma, son capaces de absorber suficiente potencia de una fuente externa, como para mantener un nivel de temperatura en el que la ionizacin adicional sustenta el plasma indefinidamente.

La antorcha (ICP 10.000 K)

La fuente de plasma acoplado inductivamente consiste en tres tubos concntricos de cuarzo a travs de los cuales fluye una corriente de argn con un caudal total comprendido entre 11 y 17 L/min. El dimetro del tubo ms grande es aproximadamente de 2.5cm. Rodeando la parte superior de este tubo se encuentra una bobina de induccin refrigerada por agua, alimentada por un generador de radiofrecuencia capaz de producir una potencia de 2kW a unos 27MHz. La ionizacin del argn que fluye se inicia por medio de una chispa que proviene de una bobina Tesla

Generador de radiofrecuencia
El generador de frecuencia produce un cambio magntico oscilante con el que interaccionan los iones resultantes y los electrones asociados a la ionizacin del argn.

Bobina de induccin
Dentro de la bobina de induccin se produce la interaccin entre los iones y los electrones y como consecuencia, estos iones y electrones se mueven en trayectorias anulares cerradas; el calentamiento atmico es una consecuencia de la resistencia a este movimiento. La temperatura del plasma as formado, es suficientemente elevada como para hacer necesario el aislamiento trmico del cilindro externo de cuarzo. Para lograr este aislamiento, se hace fluir argn en forma tangencial alrededor de las paredes del tubo. El caudal de esta corriente de argn es de unos 5 a 15ml/min. Este flujo tangencial enfra las paredes inferiores del tubo central y centra el plasma radialmente.

Sistemas de introduccin de muestras


La muestra se introduce dentro del plasma caliente por el extremo superior de los tubos mediante un flujo de argn de 0.3 a 1.5 L/min a travs del tubo de cuarzo central. La muestra puede ser un aerosol, un vapor generado trmicamente por una chispa, o un polvo fino. El dispositivo que ms se utiliza para la inyeccin de las muestras, tiene una construccin semejante a la de los nebulizadores que se emplean en los mtodos de llama. Otro mtodo que se puede utilizar para la introduccin de muestras lquidas y slidas en un plasma es la vaporizacin electrotrmica. En este caso, la muestra se vaporiza en un horno el cual slo se utiliza para la introduccin de la muestra y no para la atomizacin de la muestra.

Tipos de instrumentos
Instrumentos secuenciales Son menos complejos y, por lo tanto, ms baratos. Miden intensidades de lnea una por una. Se programan para ir de la lnea de un elemento a la de otro, parando el tiempo suficiente para obtener una relacin seal/ruido satisfactoria. Instrumentos multicanal Se disean para medir simultneamente las intensidades de las lneas de emisin de una gran nmero de elementos. Cuando se han de determinar varios elementos, es evidente que el tiempo de excitacin ser bastante mayor con los instrumentos secuenciales; por ello, aunque estos instrumentos son ms simples, resultan caros en trminos de consumo de muestra y tiempo.

Ventajas e inconvenientes ICP


Ventajas: - Menor interferencia entre elementos consecuencia directa de sus temperaturas ms elevadas. - Se pueden obtener buenos espectros para la mayora de los elementos con unas mismas condiciones de excitacin, y en consecuencia, es posible registrar simultneamente los espectros para docenas de elementos. - Permiten la determinacin de bajas concentraciones de elementos que tiende a formar compuestos refractarios, esto es, compuestos que son muy resistentes a la descomposicin trmica, tales como B, P, U, Zr Nb. - Permiten la determinacin de no metales como Cl, Br, I y S. - Son aplicables en unos intervalos de concentracin que abarcan varios rdenes de magnitud. - Menos tiempo de anlisis. Desventajas: - Equipo ms caro. - Mayor coste de operacin que la espectroscopia de absorcin atmica. - Menor precisin que la espectroscopia de absorcin atmica.

Aplicaciones
Esta tcnica se emplea para una amplia variedad de aplicaciones, ya que un gran nmero de elementos pueden ser determinados rpidamente a niveles traza (ppm, ppb), y porque una amplia variedad de tipos de muestras pueden ser analizados utilizando esta tcnica.

Biologa y clnica:
El mayor problema de los ensayos de esta campo, est en la contaminacin de las muestras antes del anlisis. Ejemplos de determinaciones: - Cr, Ni y Cu en orina. - Al en sangre. - Cr en heces. - Ni en leche materna. - B, P y S en huesos.

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