EL MICROSCOPIO

Del micro- (pequeo) y scopio, (observar)

Instrumento ptico destinado a observar de cerca objetos u organismos extremadamentes pequeos. Es la herramienta bsica para el estudio de la Biologa.

Para el estudio del material biolgico se dispone de varios tipos de microscopios, lo cuales se pueden clasificar bsicamente de acuerdo al tipo de fuente luminosa que usan: pticos o luminosos: - Campo claro - Campo oscuro - Contraste de fases - Fluorescencia - Ultravioleta Electrnicos - Barrido - Transmisin

El microscopio ptico convencional es compuesto porque posee dos sistemas principales de lentes convergentes (ocular y objetivo). La mayora de los modelos actuales son binoculares, aunque tambin los hay monoculares. El microscopio compuesto convencional se denomina "de campo claro" o "de campo brillante" porque todo el campo se ilumina con una lente condensadora comn que proyecta luz fotonica.

Microscopio ptico o de campo claro

Sistema mecnico: sostiene al sistema ptico y aloja los elementos necesarios para la iluminacin y enfoque del preparado. Sistema de iluminacin: lo integran aquellos componentes encargados de colectar la luz, dosificarla y dirigirla a travs del preparado Sistema ptico: incluye todos los elementos que colaboran en la ampliacin de la imagen.

El condensador proyecta un cono de luz sobre las clulas que estn siendo examinadas en el microscopio. Despus de atravesar a las clulas, ese haz luminoso, en forma de cono, penetra en el objetivo; el objetivo proyecta una imagen aumentada en el plano focal del ocular, que nuevamente la amplia. Por fin la imagen provista por el ocular puede ser percibida por la retina del ojo

Limite de resolucin: es la menor distancia que debe existir entre dos objetos para que puedan visualizarse por separado. Cuando se ilumina un objeto, los puntos de su superficie reflejan las ondas luminosas. Dos puntos prximos de la superficie se vern como distintos si la distancia que los separa es grande comparada con la longitud de onda que reciben. Si la distancia que los separa es inferior a la longitud de onda que los ilumina aparecern a nuestra vista como dos puntos unidos.

Comparacin de limites de resolucin entre microscopio ptico, electrnico y ojo humano.

Clculo del lmite de resolucin

LR= C/NA

Donde: = longitud de onda de la luz (en m) C= constante de proporcionalidad NA= abertura numrica

Longitud de onda
La longitud de una onda es la distancia entre dos crestas consecutivas, en otras palabras describe lo larga que es la onda. En el espectro visible, las diferencias en longitud de onda se manifiestan como diferencias de color. Si el espcimen se ilumina con luz blanca, se considera la longitud de onda del verde amarillo (0,55 m)

Constante de proporcionalidad
Constante de proporcionalidad esta relacionada con el grado de superposicin de dos puntos para que puedan ser resueltos por el ojo humano.
Esta constante es 0,61

Abertura numrica
Es una medida de la capacidad del microscopio de agrupar las refracciones de la luz producidas por los finos detalles del objeto, debido a que determina el tamao del haz de luz que es captado por el objetivo luego de a travs del objeto. Es una caracterstica propia de cada objetivo, es por estoque forma parte de las inscripciones grabadas en los objetivos.

La calidad de un objetivo es tanto mayor cuanto ms elevada es su apertura numrica.

Clculo de la abertura nmerica

NA=n sen
Donde: n es el ndice de refraccin del medio en el que la lente se encuentra es la mitad del ngulo de aceptancia mximo que puede entrar o salir de la lente.

Calcular el limite de resolucin de los diferentes objetivos del microscopio ptico

10 x LR= C/NA LR= 0,55 m(0,61) / 0,30 LR= 1,12 m 40 x LR= C/NA LR= 0,55 m(0,61) / 0,65 LR= 0,52 m

Calcular el limite de resolucin de los diferentes objetivos del microscopio ptico

100x LR= C/NA LR= 0,55 m(0,61) / 1,30 LR= 0,26 m

Los microscopios pticos modernos tienen un limite de resolucin de 0,2 a 0,4 um, aproximadamente l/20 del dimetro de un eritrocito humano normal

Para disminuir el LR podemos utilizar una fuente con menor longitud de onda (el caso extremo es el de los microscopios electrnicos) o bien aumentar n, para lo que podemos intercalar entre la preparacin y el objetivo un medio ms denso que el aire.

Caractersticas del ME que lo diferencian de la microscopa de luz y que permite mejorar el lmite de resolucin de este ltimo. Se logran haces de electrones con una longitud de onda de 0,05 nm, cuyo poder de resolucin es de 0,2 nm mientras que la longitud de onda de la luz visible oscila alrededor de 500 nm y su poder de resolucin es de 0,2 m

Caractersticas importantes del microscopio

Aumento total Poder de penetracin Distancia focal Poder definidor Poder de resolucin