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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE INGENIERA QUMICA E INDUSTRIAS ALIMENTARIAS ESCUELA PROFESIONAL DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

ALUMNOS: Elas Portocarrero Edwin Guevara Coronel Nancy Pamela Snchez Estela Franklyn Taboada Garca Zusetti CURSO: Bioquimica General

ENZIMAS

Definicin de Enzimas
Una enzima es una molcula que se encuentra conformada principalmente por protena que producen las clulas vivas, siendo su funcin destacada la de actuar como catalizador y regulador en los procesos qumicos del organismo, es decir, cataliza las reacciones bioqumicas del metabolismo.

Son molculas de protenas particulares cuya funcin es facilitar o acelerar la mayora de las reacciones qumicas de la clula.

Son grandes protenas globulares que catalizan (aceleran) reacciones qumicas y son esenciales para las funciones celulares
La mayor parte de una enzima tiene funciones regulatorias o estructurales

La reaccin catalizada tiene lugar en una pequea parte de la enzima llamada sitio activo, el cual es formado por aproximadamente 2 - 20 aminocidos.

PROPIEDADES ENZIMTICAS
La presencia y el mantenimiento de un conjunto completo y equilibrado de enzimas son esenciales para la desintegracin de nutrientes a fin de que proporcionen energa y bloques de construccin qumicos. CONSTRUCCIN: protenas, DNA, membranas, clulas y tejidos. ENERGA: motilidad celular, funcin neural y contraccin muscular.

PROPIEDADES BIOQUMICAS:
Las enzimas tiene un enorme poder cataltico: aceleran reacciones multiplicando su velocidad por un milln de veces o incluso ms. Estn presentes en pequeas cantidades. No sufren alteraciones irreversibles en el curso de la reaccin: cada molcula de enzima puede participar en muchas reacciones individuales.

No tienen efecto sobre la termodinmica de la reaccin. Son catalizadores en las reacciones qumicas de los sistemas biolgicos. Poseen un elevado grado de especifidad de sustrato. Funcionan en soluciones acuosas en condiciones suaves de pH y temperatura.

SITIO ACTIVO
Las molculas enzimticas contienen hendiduras o cavidades denominadas sitio activo. Es un sitio de reconocimiento para sustratos y proporciona un ambiente tridimensional que protege sustratos contra solventes y facilita la catlisis.

FUNDAMENTACIN:

El sitio activo la enzima (E) une al substrato (S) formando un complejo enzima-substrato (ES). En el complejo ES, E transforma a S en l o los productos, formando el complejo enzima-producto (EP), finalmente la enzima libera del sitio activo a P, regenerndose.

CATALIZADORES EFICACES
Las enzimas que catalizan la conversin de uno o ms compuestos (sustratos) hacia uno o ms compuestos diferentes (productos) aumentan los ndices de la reaccin no catalizada de al menos 106 hasta 1014 veces ms rpido. Las enzimas no se consumen ni alteran de manera permanente como consecuencia de su participacin en una reaccin.

Enzima

Velocidad en ausencia de enzima 1.3 X 10 1 2.6 X 10 5 4.3 X 10 6 3.0 X 10 9 1.0 X 10 11 1.7 X 10 -13

Velocidad de reaccin catalizada 1.0 X 106 50 4300 578 60 95

Rendimiento 7.7 X 106 1.9 X 106 1.0 X 109 1.9X 1011 6.0 X 1012 5.6 X 1014

Anhidrasa carbnica Corismato mutasa Triosafosfato isomerasa Carboxipeptidasa A AMP nucleosidasa Nucleasa estafilococal

Tabla: Eficiencia de las reacciones catalizadas por algunas enzimas

ESPECIFICIDAD
Son catalizadores en extremo selectivos. Las enzimas son especficas tanto para el tipo de reaccin catalizada como para un sustrato nico o un pequeo conjunto de sustratos estrechamente relacionados. Esta propiedad confiere a las clulas vivas la capacidad para conducir de manera simultnea y controlar independientemente una amplia gama de procesos qumicos.

LOS COFACTORES SE ASOCIAN DE MANERA REVERSIBLE CON ENZIMAS O SUSTRATOS


Los cofactores desempean funciones similares a las de grupos prostticos, pero se unen de manera transitoria y disociable a la enzima o sustrato, como ATP. Para que ocurra catlisis debe haber cofactores en el medio que rodea a la enzima. Los cofactores ms comunes son iones metlicos. Las enzimas que requieren un cofactor in metlico se llaman enzimas activadas por metal (Zn2+ o Fe2+ )

A la enzima en ausencia de su cofactor (cuando lo tiene), se le denomina apoenzima, en presencia de su cofactor (cuando lo tiene), se le denomina holoenzima. La apoenzima generalmente carece de actividad biolgica.

REGULACIN
La actividad enzimtica puede ser regulada. Dependiendo de los requerimientos metablicos, las enzimas son activadas o inhibidas, para acelerar o disminuir la velocidad con la que catalizan la reaccin, respondiendo as a las diferentes necesidades de sus productos en la clula. La regulacin ms comn es modificando la concentracin de su(s) substrato(s).

LOCALIZACIN CELULAR
En clulas eucariotas muchas enzimas se localizan en organelos especficos. Esta compartamentalizacin ayuda a aislar los substratos de la reaccin o productos de la misma, de tal forma que no hay competencia de reacciones, de esta manera se provee un medio favorable para la reaccin, de tal forma que es posible localizar diferentes partes del metabolismo en diferentes organelos. CLULA = ENTIDAD ORGANIZADA

CLASIFICACIN
Las enzimas son protenas que incrementan la velocidad de una reaccin qumica y no se consumen durante la misma (algunos tipos de ARN pueden actuar como enzimas, usualmente rompen y sintetizan enlaces fosfodiester:ribozimas ). Los nombres de uso de enzimas describen el tipo de reaccin catalizada, seguido por el sufijo asa. La IUB (International Union of Biochemists) cre un sistema de nomenclatura, en el cual cada enzima tienen nombre y cdigo singular que identifica el tipo de reaccin catalizada.

1. OXIDORREDUCTASAS Catalizan oxidaciones y reducciones

4. LIASAS Catalizan divisin de C-C , C-O , C-N , y otros enlaces mediante la eliminacin del tomo, dejando dobles enlaces 5. ISOMERASAS Catalizan cambios geomtricos o estructurales dentro de una molcula 6. LIGASAS Catalizan la unin de dos molculas acopladas a la hidrlisis de ATP

2. TRANSFERASAS Catalizan transferencia de porciones (grupos glucosilo, metilo o fosforilo) 3. HIDROLASAS Catalizan divisin hidroltica de CC , C-O , C-N , y otros enlaces

ENZIMAS: Cintica
1) 2) 3) 4) 5) 6) Ensayos enzimticos: Factores que afectan su reaccin. Cintica de la catlisis enzimtica: Factores que afectan su reaccin. Reacciones con un sustrato. Reacciones con multisustrato. Mecanismo qumico. Inhibicin enzimtica

ENSAYOS ENZIMTICOS
Curva de progreso de una reaccin enzimtica. La pendiente representa, en el perodo inicial, la velocidad de la reaccin. La zona de la meseta representa el equilibrio de la reaccin (no confundir con la saturacin).

se puede medir la velocidad de una reaccin enzimtica. Los ensayos enzimticos ms sensibles utilizan lseres para observar los cambios producidos en enzimas individuales cuando catalizan una reaccin

EXISTEN DIVERSOS MTODOS PARA REALIZAR ESTAS MEDIDAS.


La espectrofotometra: detectan cambios en la absorbencia de luz por parte del sustrato o del producto permiten medir la velocidad de la reaccin de forma continua.

La radiometra: implica incorporacin de radiactividad para medir la cantidad de producto obtenido por tiempo. Estos ensayos son sensibles y permiten detectar niveles muy bajos de actividad enzimtica.

FACTORES FSICO-QUMICOS QUE PUEDEN MODIFICAR LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Temperatura: Las enzimas son sensibles a la temperatura pudiendo verse modificada su actividad por este factor. Normalmente, a medida que aumente la temperatura, una enzima ver incrementada su actividad hasta el momento en que comience la desnaturalizacin de la misma, que dar lugar a una reduccin progresiva de dicha actividad.

pH: Si el pH del medio se aleja del ptimo de la enzima, esta ser modificada su carga elctrica al aceptar o donar protones, lo que modificar la estructura de los aminocidos y por tanto la actividad enzimtica.

Concentracin salina: Una elevada concentracin o una ausencia de sales en el medio pueden impedir la actividad enzimtica, ya que las enzimas precisan de una adecuada concentracin de iones para mantener su carga y su estructura.

CINTICA DE LA CATLISIS ENZIMTICA


Las enzimas proporcionan estados de transicin alternos. Los estados de transicin enzima-sustrato estn en niveles de energa menores que los de estados de transicin que se forman en la misma reaccin en ausencia de catlisis enzimtica. Las enzimas disminuyen la barrera energtica de una reaccin, en consecuencia una mayor proporcin de las molculas del sustrato es capaz de reaccionar.

Las enzimas no afectan la : + + + + La expresin de la : = Se reduce a una expresin idntica a la que corresponde a una reaccin que produce en ausencia de la enzima, quedando: =

Las enzimas catalizan la formacin o ruptura de los enlaces covalentes. Para la reaccin de transferencia de grupo: + +

El grupo G se transfiere de un donador al aceptor A. La reaccin involucra la ruptura del enlace , y la formacin de un nuevo enlace .

Las reacciones de transferencia de grupo, catalizadas por enzimas pueden representarse como sigue:

Lo anterior enfatiza tres caractersticas importantes de las reacciones de transferencia de grupo, catalizadas por enzimas.

1. Cada reaccin parcial implica tanto la ruptura, como la formacin de un enlace covalente. 2. La enzima es un reactante que interacta tanto con como con A. 3. En tanto que para la reaccin en conjunto la enzima acta de manera cataltica, para cada reaccin parcial, constituye un reactante estequiomtrico.

REACCIONES CON UN SUSTRATO


Existen ciertas reacciones enzimticas de un nico sustrato que no pertenece a la categora convencional de mecanismos, como es el caso de la reaccin catalizada por la catalasa. La catalasa reacciona inicialmente con una molcula de perxido de hidrgeno y queda en un estado oxidado tras liberar el producto (agua) y, posteriormente, es reducida por una segunda molcula de sustrato.

Cintica de Michaelis-Menten
Si la velocidad inicial de la reaccin se mide a una determinada concentracin de sustrato ([S]), la velocidad de la reaccin (V) aumenta linealmente con el aumento de la [S], como se puede ver en la figura. Sin embargo, cuando aumentamos la [S], la enzima se satura de sustrato y alcanza su velocidad mxima (Vmax), que no sobrepasar en ningn caso, independientemente de la [S].

Primeramente, tiene lugar una reaccin qumica bimolecular entre la enzima E y el sustrato S, formndose el complejo enzima-sustrato ES. k2 tambin llamado kcat o nmero de recambio, hace referencia al mximo nmero de reacciones enzimticas catalizadas por segundo. Aumentando la [S] tambin aumentamos la [ES] a expensas de la [E], desplazando el equilibrio de la reaccin hacia la derecha.

la velocidad de reaccin depende de la [ES]. la velocidad es sensible a pequeos cambios en la [S]. Sin embargo, a altas [S], la enzima se satura y solo queda la forma unida al sustrato ES. Bajo estas condiciones, la velocidad de la reaccin (v k2[E]tot = Vmax) deja de ser sensible a pequeos cambios en la [S]; por lo tanto la concentracin total de enzima ([E]tot) es aproximadamente igual a la concentracin del complejo ES:

En la situacin ms comn, donde k2 > k1, en el perodo inicial, la velocidad de la reaccin es ms o menos constante, indicando que la [ES] tambin se mantendr constante:

De esta forma, la concentracin de ES viene dada por la siguiente expresin:

Despus de operar obtenemos finalmente una ecuacin general:


ECUACIN DE MICHAELISMENTEN

La constante de especificidad kcat / Km mide la eficiencia con la que una enzima convierte un sustrato en producto.

Utilizando la definicin de la constante de Michaelis Km, la ecuacin de MichaelisMenten podra escribirse de la siguiente forma:

DONDE: [E] es la concentracin de enzima libre. As, la constante de especificidad se convierte en una constante bimolecular efectiva de la enzima libre que reacciona con sustrato libre para formar producto.

* REACCIONES CON MULTISUSTRATO

- Mecanismo de complejo terniario


- Mecanismo de ping-pong

Las reacciones multisustrato siguen una serie de complejas ecuaciones que describen cmo se unen los sustratos y en qu orden lo hacen. El anlisis de estas reacciones es mucho ms sencillo si la concentracin del sustrato A se mantiene constante y la del sustrato B vara. En estas condiciones, la enzima se comporta igual que una enzima de nico sustrato, por lo que en una grfica de velocidad la concentracin de sustrato dar unos valores aparentes de las constantes cinticas, Km y Vmax, para el sustrato B. Si se realizan una serie de medidas a diferentes concentraciones fijas de sustrato A, los datos obtenidos permitirn saber a qu tipo de mecanismo pertenece la reaccin enzimtica. Para una enzima que una dos sustratos A y B, y los transforme en dos productos P y Q, existen dos tipos de mecanismos descritos hasta ahora.

Mecanismo de complejo ternario

Mecanismo de complejo ternario al azar para una reaccin enzimtica. La enzima E une los sustratos A y B y libera los productos P y Q en un orden no definido

Las enzimas (E) que presentan este mecanismo de reaccin unen al mismo tiempo los dos sustratos (A y B), dando lugar a un complejo ternario EAB. El orden secuencial de unin de los sustratos puede ser al azar (mecanismo al azar) o seguir un orden en particular (mecanismo ordenado). Si fijamos la concentracin del sustrato A y variamos la de B, y representamos grficamente el comportamiento de la enzima mediante un diagrama de Lineweaver-Burke, obtendremos una serie de rectas con un punto de interseccin comn a todas ellas. Entre las enzimas que presentan este mecanismo podemos encontrar la glutation Stransferasa, la dihidrofolato reductasay la ADN polimerasa.Los siguientes enlaces muestran animaciones del mecanismo de complejo ternario de la dihidrofolato reductasa y de la ADN polimerasa

Mecanismo de ping-pong
las enzimas con un mecanismo de ping-pong pueden presentar dos estados, la conformacin normal (E) y la conformacin modificada qumicamente (E*) o conformacin intermedia. En este tipo de mecanismo, el sustrato A se une a la enzima E, que pasa a un estado intermedio E*, por ejemplo, por transferencia de un grupo qumico al centro activo de la enzima, pudiendo ya ser liberado en forma de producto P. nicamente cuando el sustrato A ya ha sido liberado del centro activo de la enzima puede unirse el sustrato B, que devuelve a la enzima modificada E* a su estado original E, y liberarlo en forma de producto Q. Si fijamos la concentracin de A y variamos la de B, y representamos grficamente una enzima con mecanismo de ping-pong en un diagrama de Lineweaver-Burke, obtendremos una serie de rectas paralelas entre s.

Mecanismo de ping-pong para una reaccin enzimtica. La unin de los sustratos A y B tiene lugar en un orden definido y secuencial, por medio de un intermediario enzimtico modificado, E*.

Entre las enzimas con este tipo de mecanismo podemos encontrar alguna oxidorreductasa, como latiorredoxima peroxidasa,transferasas, como la acil-neuraminato citidil transferasa, yserin proteasas, como la tripsina y la quimiotripsina. Las serin-proteasas conforman una diversa familia de enzimas muy comunes, que incluyen enzimas digestivas (tripsina, quimiotripsina y elastasa), varias enzimas del proceso de coagulacin y muchas otras. En las serin-proteasas, el estado intermedio E* es una especie acilada en una serina del centro cataltico de la enzima. El siguiente enlace muestra una animacin del mecanismo cataltico de la quimiotripsina

MECANISMO QUIMICO
Mecanismo qumico es la serie de reacciones que tiene lugar desde reactivos a productos, es decir, durante una reaccin qumica. Por ejemplo la reaccin de la respiracin celular C6H12O6 + 6O2 6CO2 + 6H2O , se lleva a cabo en los pasos generales de glucolisis, ciclo de Krebs y cadena transportadora de electrones.

INHIBICION ENZIMATICA
La actividad enzimtica se puede inhibir, es decir, reducir o eliminar la actividad enzimtica o cataltica de enzimas especficas. La inhibicin puede ser: IRREVERSIBLE - el inhibidor se une covalentemente a la enzima, casi siempre a un grupo de la cadena lateral de los amino cidos en el foco activo. La enzima queda inactiva permanentemente. Por ejemplo, la aspirina o cido acetilsaliclico (ASA) inhbe irreversiblemente la accin de la sintetasa de prostaglandina:

Algunas prostaglandinas producen dolor e inflamacin. Al quedar bloqueada su sntesis se reduce la inflamacin y se alivia el dolor.

REVERSIBLE: el inhibidor puede disociarse de la enzima porque no se une


por enlaces covalentes. Esta inhibicin puede ser competitiva o no-competitiva. (a) Inhibicin Competitiva - el inhibidor competitivo es muy similar al sustrato normal de la enzima. Dada esa similitud estructural, este tipo de inhibidor se une reversiblemente al foco activo de la enzima.

El inhibidor forma un complejo enzima-inhibidor equivalente al complejo enzimasustrato:

Como hay un equilibrio, entonces la rapidez de ambas reacciones se iguala: R1 = R-1


por lo que: k1[ E ][ I ] = k-1[ EI ]

donde KI es la constante de disociacin de EI (o constante de inhibicin). Esta constante se usa para describir cun fuerte se une el inhibidor a la enzima.

De acuerdo a esta expresin

por lo que [ EI ] es directamente proporcional a [ I ] e inversamente proporcional a KI. O sea, a mayor valor de KI , ms dbil la unin del inhibidor con la enzima, el complejo EI se disocia fcilmente, y el foco activo vacante puede estar disponible para unirse a su sustrato.

No hay reaccin productiva mientras el inhibidor se une a la enzima,por lo que la actividad de la enzima declina. El efecto del inhibidor competitivo en la actividad enzimtica se revierte por un aumento en la concentracin del sustrato: a altas concentraciones todos los focos activos se combinan con el sustrato y la actividad enzimtica se normaliza. La Vmax se mantiene constante con o sin inhibidor competitivo. Sin embargo, cuando est presente el inhibidor Km aumenta y Vmax nunca se alcanza:

Por la grfica de Lineweaver Burk observamos que, como la inhibicin competitiva no afecta la Vmax: el intercepto en "y" (1/Vmax) es identico para todas las posibles concentraciones del inhibidor competitivo; todas la lneas intersectan el el mismo punto en el eje de "y":

A baja [S] ([S] <<Km), la enzima est predominantemente en la forma libre, E. El inhibidor competitivo puede combinarse con E, por lo que la presencia del inhibidor disminuye la rapidez cuando [S] es baja. A estas condiciones la expresin de rapidez es:
vo = Vmax[S]/Km

Como la rapidez inicial es proporcional a Vmax/Km, la presencia del inhibidor afecta la pendiente de la lnea de la grfica de Lineweaver-Burke, que es precisamente el recproco de Vmax/Km,o sea,(Km/Vmax). El valor de la pendiente aumenta. Tambin hay un aumento en Km segn aumenta [ I ]. Aumentando [ I ] causa un aumento en Km/Vmax. Por lo tanto, en la inhibicin competitiva se afecta la pendiente pero no hay efecto en Vmax.

(b) Inhibicin No-Competitiva: el inhibidor se combina con la enzima en un lugar distinto al foco activo. Tanto EI como EIS se forman:

La unin del inhibidor afecta la configuracin tridimensional de la enzima y bloquea la reaccin. Este tipo de inhibidor no compite directamente con el sustrato para unirse a la enzima (no afecta la unin ES), por lo tanto, este tipo de inhibicin no es reversible cuando aumenta la concentracin del sustrato.

Inhibicion Incompetitiva: el inhibidor se combina slo con ES (no con la enzima), por lo que el inhibidor ejerce su efecto slo a altas concentraciones de sustrato en las que hay gran cantidad de complejo enzima-sustrato (ES). Por lo tanto, variando la [S] no afecta o evita la unin con el inhibidor. Por otro lado, es evidente que el sustrato y el inhibidor se combinan con la enzima en lugares diferentes.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
HARPER, Bioqumica Ilustrada 28 Edicin Dr. Edgar Vsquez-Contreras. Qumica y biologa molecular en lnea Instituto de Qumica, UNAM

http://www.oocities.org/pelabzen/inhenz.html

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