INMUNOLOGA

Acosta Paz Mauricio Cano Gonzlez Liliana Chaparro Ortega Rosa Andrea Noyola Ramrez Gabriel Pea Hernndez Sergio

 Las gammaglobulinas son glicoprotenas formadas por cadenas, cuya principal funcin es defender a nuestro organismo de la presencia de sustancias extraas (antgenos).

Constitucin proteica del suero

Protenas totales: Tienen una concentracin de 6-8 g/dL y se dividen en albmina, globulinas alfa-1, globulinas alfa-2, globulinas beta y globulinas gamma. Albmina: Tiene la funcin de mantener la presin sangunea, se encarga de transportar molculas pequeas(bilirrubina, hormonas y frmacos), los valores normales estn entre 3.4-5.4 g/dL. Globulinas: Relacionadas fundamentalmente con mecanismos de defensa del organismo.

Propiedades

SEPARACIN DE GAMMAGLOBULINAS

Especficos
Tcnicas inmunolgicas
Transferencia Western Inmunoabsorcin

Inespecficos
Precipitacin

Dilisis

Cromatografa Inmunoprecipitacin

Electroforesis

Separacin de gammaglobulinas Mtodos inespecficos

Mtodo Fundamento La sal extrae el agua que solvata a la protena. Baja la constante dielctrica, entonces baja la capacidad de solvatacin del solvente. Las protenas con carga se repelen si se trabaja cerca del PI. Ventajas Desventajas

PRECIPITACIN
-SALINA Alto rendimiento Baja selectividad. Concentrar Necesario recurrir a diluciones diluidas. la centrifugacin. Purificar protenas a gran escala.

-ALCOHOLICA

Alta selectividad

Control de muchas variables (T, pH, ).

-ISOELCTRICA

Separacin de gammaglobulinas Mtodos inespecficos

MTODO

Fundamento Ventajas Separar molculas por sus diferencias en sus ndices de difusin. Eliminacin de sales

Desventajas No selectiva

DILISIS

Concentraci n de muestras
Eliminacin de solutos de pequeo tamao

Separacin de gammaglobulinas Mtodos inespecficos

Mtodo
CROMATOGRAFA - De intercambio inico Adsorcin reversible Alta capacidad que existe entre una Alta resolucin molcula con carga determinada. Separacin en funcin del tamao y forma Capacidad de unin a un determinando ligando. Se pueden cambiar los buffers La corrida puede afectar la actividad de la protena

Fundamento

Ventajas

Desventajas

-Exclusin molecular

Dilucin de la muestra

- De afinidad

Mayor separacin de molculas biolgicas

Depende de la presin y de la temperatura

- HPLC y FPLC

Acelerar el movimiento de las molculas con el uso de bombas de presin

Limitan el ensanchamiento por difusin de las bandas de protenas Alta resolucin Alta reproducibilidad

Muy costoso

ELECTROFORESIS DEL SUERO HUMANO

Tcnica basada en los movimientos de molculas cargadas en un campo elctrico, cada molcula se mueve hacia el electrodo de carga opuesta (ctodo y nodo), este movimiento es denominado electroforesis

Electroforesis del suero humano

Electroforesis del suero humano

Inmunoelctroforesis

APLICACIN DE LA ELECTROFORESIS

Fraccionamiento de las hemoglobinas Diferenciacin de la hemoglobina fetal Diagnstico de talasemias, anemias falciformes, etc

Protenas sricas Protenas urinarias Lipoprotenas cidos nucleicos Enzimas Inmunoelectroforesis Etc.

FENMENO DE SALTING OUT

La precipitacin de la globulina gamma por este mtodo se debe al fenmeno de "salting out", el cul consiste en que las molculas de agua que solvatan a la molcula de anticuerpo son desplazadas por los iones sulfato y amonio, que adems neutralizan los grupos cargados de la protena, la cual llega a su punto isoelctrico y precipita.

Fraccionamiento mediante Salting Out

Solucin Original

(Homogneo)

Separo el sobrenadante en un tubo nuevo y llevo a cabo el anlisis que deseo.

Se precipita de forma selectiva a la protena roja y se transfiere el sobrenadante a un nuevo tubo en el cual aumento lo [Sal] para dejar en el sobrenadante la protena deseada.

Fundamento de la precipitacin con sulfato de amonio

El sulfato de amonio va a interferir con las interacciones entre los grupos laterales de los aminocidos hidroflicos de la globulina y las molculas de agua, lo cual reduce la solubilidad de sta.

Tcnica de precipitacin con sulfato de amonio

solubilidad en agua, fuerzas inicas muy elevadas Solubilizacin salina a fuerza inica, es menor que CaCl2, KCl, NaCl Pp. mayor que con cloruros. Solubilizacin en un amplio rango [inicas], proporciona lmites mayores para pp.
Iones amonio interfieren en el anlisis directo del nitrgeno , dializar. Concentracin depende mucho de la temperatura. Pureza, evitar contaminantes de metales, iones pueden unirse a protenas y catalizar reacciones de oxidacin

Ventajas

Desventajas

Factores que afectan la precipitacin.

Concentracin de sales disueltas Polaridad del disolvente pH Temperatura

Mtodo para eliminar la sal empleada

Dilisis: Se refiere a la separacin de solutos grandes de los pequeos por difusin a travs de una membrana con permeabilidad selectiva.

Utilidad de los productos obtenidos

Teraputico: En pacientes con enfermedades del sistema inmunolgico que impiden la produccin endgena de gammaglobulinas, es posible administrarlas farmacolgicamente. Obtencin del suero de Coombs: Se pueden usar las gammaglobulinas humanas para administrarlas en animales sanos y obtener la antigammaglobulina.