MEMBRANAS BIOLOGICAS Y TRANSPORTE DE SOLUTOS

La composicin qumica del interior de una clula es bien distinta del exterior

Esta observacin no solamente es vlida para el paramecium que nada libremente en las charcas de agua dulce, sino que tambin para una neurona que vive en un ambiente densamente poblado

Los procesos bioqumicos involucrados en la funcin de las clulas requiere de la mantencin de un ambiente intracelular precisamente controlado
El citoplasma es una solucin extraordinariamente compleja cuyos constituyentes incluyen

PROTENAS CIDOS NUCLEICOS AZUCARES IONES

Que las clulas sintetizan o acumulan a un costo metablico considerablemente grande La barrera es proporcionada por la membrana plasmtica, impermeable a molculas grandes como protenas y es selectivamente permeable a molculas pequeas tales como iones y diversos metabolitos. Sin embargo su funcin no termina ah

Estn presentes en ella una gran variedad de protenas, poros y sistemas de transporte que determinan la naturaleza de todas las comunicaciones entre interior y exterior, tales como Transporte selectivo de molculas hacia dentro y fuera de la clula

Comunicacin intercelular
Actividad enzimtica Reconocimiento celular por medio de antgenos de la superficie de la membrana plasmtica

Determinacin de la forma celular mediante la unin del citoesqueleto a la membrana plasmtica

ESTRUCTURA Y COMPOSICION DE LA MEMBRANA PLASMATICA

El entendimiento de la estructura de las membranas biolgicas se basa en el estudio experimental de los glbulos rojos a comienzos del siglo XX

Los glbulos rojos no tienen ncleo y otras estructuras intracelulares complicadas, caractersticas de la mayora de las clulas animales

Los glbulos rojos se pueden romper experimentalmente incubndolos en un medio hipotnico con lo cual liberan su contenido intracelular

La membrana plasmtica se recupera por centrifugacin, proporcionando una preparacin de membrana de superficie razonablemente pura, cuya estructura es similar a la mayora de las clulas de los animales superiores

protenas

Las membranas biolgicas estn compuestas

lpidos carbohidratos

En proporciones relativamente variables

iones

agua

Las proporciones relativas de lpidos y protenas varan con el tipo de membrana, lo que refleja la diversidad de sus funciones Por ejemplo, algunas neuronas tienen una cubierta de mielina la cual acta como una aislante elctrico

La cubierta de mielina consiste fundamentalmente de lpidos La razn en protenas lpido para la mielina en nervios perifricos es de 0,2/1

Mientras que la membrana interna de la mitocondria, el sitio de muchos procesos catalizados por enzimas, la razn protena lpido es 3,2/1

La mayora de las membranas biolgicas presentan variaciones de protena/lpido entre estos dos extremos
0,2/1-3,2/1

Los carbohidratos generalmente constituyen el 1-10 % del total del peso seco y se encuentran unidos covalentemente a lpidos y protenas

El agua es un importante constituyente de las membranas, las molculas de agua unida a la superficie de la membrana estabilizan la estructura bilipdica

Lpidos de la membrana

La caracterstica arquitectnica de las membranas biolgicas es una doble capa de lpidos que acta como una barrera al paso de iones y molculas polares

Los principales lpidos de membrana son los fosfolpidos o fosfoglicridos

Los fosfolpidos son molculas anfipticas que contienen una cabeza hidroflica cargada elctricamente o

polar

Y dos cadenas de cidos grasos que constituye la parte apolar de la molcula

La estructura de los fosfolpidos se basa en la molcula de glicerol que por una parte tiene unido un grupo fosfato esterificando una base hidroflica y por la otra, a dos molculas de cidos grasos de cadena larga
POLAR APOLAR

Los fosfolpidos son virtualmente insolubles en agua

Cuando se mezclan con agua forman espontneamente agregados microscpicos que los separa del medio acuoso

Cmo y por qu ocurre la formacin de una bicapa lipdica?

La clave es el agua

El agua es la sustancia ms abundante en los sistemas vivientes, el 70% o ms del peso de la mayora de los organismos es agua

Las uniones puente hidrgeno entre las molculas de agua proveen las fuerzas cohesivas que hacen al agua lquida, a temperatura ambiente, y favorecen el extremo ordenamiento en el agua como cristal cuando se encuentra en la forma de hielo Las molculas polares se disuelven fcilmente en el agua porque pueden reemplazar las interacciones agua-agua con interacciones soluto-agua energticamente estables

En contraste, las molculas apolares interfieren con las interacciones agua-agua pero no son capaces de formar interacciones agua-soluto, en consecuencia, las molculas apolares son poco o insolubles en agua y tienden a formar agregados

Estas propiedades son consecuencia de las atracciones entre molculas de agua vecinas que dan al agua lquida una gran cohesin

Son idnticas las dos monocapas de fosfolpidos?

NO

Dinmica de las membranas biolgicas

Una caracterstica de las membranas biolgicas es su flexibilidad, es decir su habilidad de cambiar de forma sin perder su funcionalidad La base de esta propiedad radica en la interacciones no covalentes entre las molculas de lpidos en la bicapa y los movimientos moleculares de las molculas de lpidos

La flexibilidad de la bicapa lipdica depende de la temperatura y del tipo de fosfolpido del cual est hecha la bicapa

Protenas de la membrana

Las protenas confieren a las membranas biolgicas su funcionalidad

Son en muchos casos mediadoras de la transferencia de informacin desde el espacio extracelular. Por ejemplo receptores

Del transporte de iones y molculas. Por ejemplo canales y bombas

Actividad metablica. Por ejemplo, produccin de energa en las membranas de la mitocondria

Integrales
Las protenas de membrana se pueden dividir operacionalmente en dos grupos

Perifricas

Las protenas integrales de membrana se encuentran firmemente asociadas a la membrana

Slo se pueden remover con agentes que interfieren con las interacciones hidrofbicas

Las protenas perifricas se asocian con la membrana a travs de interacciones electrostticas

Pueden liberarse fcilmente con tratamientos suaves que interfieren con las interacciones electrostticas, tales como agentes quelantes, cambios en el pH

POTENCIAL ELECTROQUIMICO Y DIFERENCIA DE POTENCIAL ELECTROQUIMICO

TRANSPORTE DE MOLECULAS A TRAVES DE LA MEMBRANA

Todos hemos visto como fluye el agua de un lado al otro de un dique, y la nica condicin que se requiere es que exista una diferencia en los niveles del agua a ambos lados del dique, y por supuesto un agujero para que pase el agua Este flujo es pasivo

Y la fuerza motriz, es la presin que ejerce el agua sobre la pared izquierda del dique

Casi de la misma manera, una sustancia puede moverse pasivamente a travs de una membrana que separa dos compartimientos cuando hay una fuerza motriz favorable y una ruta abierta para que esta fuerza motriz produzca su efecto

Cuando existe una ruta para la transferencia de una sustancia X a travs de una membrana decimos que esa membrana es permeable La fuerza motriz que determina el transporte de solutos a travs de una membrana es el

Gradiente electroqumico o diferencia de potencial electroqumico que acta sobre el soluto entre los dos compartimientos

La diferencia de potencial electroqumico incluye

Diferencia de concentracin de soluto en ambos lados de la membrana Diferencia de potencial elctrico en ambos lados de la membrana

Este concepto de cmo la fuerza y la ruta determinan el movimiento pasivo de un soluto lo podemos ilustrar mediante el transporte pasivo no acoplado de un soluto X

Transporte pasivo, no acoplado, a travs de una membrana permeable significa que el movimiento del soluto X no est directamente acoplado al

movimiento de ningn otro soluto o reaccin qumica (por ejemplo la hidrlisis del ATP)

EQUILIBRIO IONICO Y POTENCIAL DE MEMBRANA EN REPOSO

Berne & Levy, cuarta edicin

Todas las clulas tienen una diferencia de potencial elctrico a travs de su membrana plasmtica que llamamos potencial de membrana

Por lo general el citoplasma es negativo respecto del lquido extracelular

0 -90 mV

Externo

Interno

Vm=Vi-Ve=-90 mV
-90

mV

Externo

Interno

Neuronas

Potencial de membrana en reposo es necesario para la excitabilidad de

Clulas musculares esquelticas

Clulas musculares lisas

Clulas cardacas

POTENCIAL ELECTROQUIMICO Y DIFERENCIA DE POTENCIAL ELECTROQUIMICO

1M X+

O,1 M X+

Una membrana separa dos compartimientos (A y B) que contienen soluciones de distintas concentraciones de un catin X+ En A su concentracin es 1 M, y en B 0,1 M

1M

O,1 M

X+

X+

Si no existe una diferencia de potencial elctrico entre ambos lados, X+ difundir desde AB, igual que lo hara una molcula no cargada elctricamente

Gradiente de concentracin

1M X+

Vm

Sin embargo, si el lado A es elctricamente negativo respecto del B, La tendencia de X+ a difundir de AB permanece, pero ahora X+ tiende tambin a difundir de BA, por la diferencia de potencial elctrico a travs de la membrana

+ + + + +

O,1 M
X+

Gradiente elctrico

Gradiente de concentracin

1M X+

Vm

El sentido del movimiento neto de X+ depender de cual componente es mayor O, la diferencia de concentracin o, el potencial elctrico de la membrana

+ + + + +

O,1 M
X+

Gradiente elctrico

Gradiente de concentracin

1M X+

Vm

Comparando ambas tendencias se puede predecir el sentido del movimiento de X+

+ + + + +

O,1 M
X+

Gradiente elctrico

El valor cuantitativo que permite comparar las contribuciones de relativas de las diferencias de concentracin inica y de potencial elctrico se llama diferencia de

potencial electroqumico

1M X+

Vm

La diferencia de potencial electroqumico ( A - B = ) a ambos lados de la membrana indica el movimiento del ion)

+ + + + +

O,1 M
X+

1M X+

Vm

La expresin matemtica que define la diferencia de potencial electroqumico es

(X+) = A (X+) - B (X+) = RTln [X+]A [X+]B + zF (VAVB)

+ + + + +

O,1 M
X+

 (X+) = A (X+) - B (X+) = RTln

donde

[X+]A [X+]B

+ zF (VAVB)

= diferencia de potencial electroqumico entre A y B R = la constante de los gases ideales T = temperatura absoluta en grados Kelvin

ln

[X+ ]A [X+ ]B

+ = logaritmo natural de la relacin de concentracin de X a ambos lados de la membrana

Z = carga del ion F = constante de Faraday (c/mol) VA VB = diferencia de potencial elctrico a travs de la membrana (volt)

1M X+

Vm

(X+) = A (X+) - B (X+) = RTln

El primer trmino del lado derecho de la ecuacin (el logaritmo) es la tendencia de los iones X+ de moverse de AB por la diferencia de concentracin, y el segundo trmino, zF(VA-VB) es la tendencia de los iones de moverse de BA por la diferencia de potencial elctrico

+ + + + +

O,1 M
X+

B
[X+]A [X+]B

+ zF (VAVB)

1M X+

(X+) = A (X+) - B (X+) = RTln

Vm

Tendencia de X+ de moverse de AB

+ + + + +

O,1 M
X+

B
[X+]A [X+]B + zF (VAVB)

Tendencia de X+ de moverse de BA

 (X+) = A (X+) - B (X+) = RTln

[X+]A [X+]B

+ zF (VAVB)

Los iones X+ se mueven desde un potencial electroqumico mayor a uno menor A > B los iones tendern a moverse de A a B A < B los iones tendern a moverse de B a A A = B ( = 0) ambas fuerzas son iguales y opuestas

Diferencia de potencial electroqumico

Sus dos componentes

Diferencia de potencial qumico (energa acumulada en el gradiente de concentracin)

Diferencia de potencial elctrico (energa asociada al gradiente elctrico a travs de la membrana)

La diferencia de potencial electroqumico de un ion a travs de una membrana, representa la energa potencial que se puede utilizar para hacer trabajo

La ecuacin de Nernst

 (X+) = A (X+) - B (X+) = RTln

Tendencia de X+ de moverse de AB

[X+]A

[X+]B

+ zF (VAVB)

Cuando las dos fuerzas son iguales y opuestas (X+) = A (X+) - B (X+) = 0 RTln

Tendencia de X+ de moverse de BA

[X+]A
[X+]B

+ zF (VAVB) = 0

RT ln [X]B VAVB = [X]A zF

RT ln [X]B VAVB = [X]A zF Esta ecuacin permite calcular la diferencia de potencial elctrico (VA-VB) necesaria para producir una fuerza elctrica que exactamente equilibre a la fuerza de concentracin Este potencial elctrico se llama tambin potencial de equilibrio de un in particular en un sistema de dos compartimientos separados por una membrana. Es la diferencia de potencial elctrico que balancea exactamente el gradiente de concentracin de ese in Vequil RT ln [X]B = [X]A zF

Ejemplos de aplicaciones de la ecuacin de Nernst

Ejemplo 1

t=30 0C R=8,31 joule 0K /mol

VA-VB

RT ln [X]B [0,1]B (8,31 joule/ 0K mol)(303 0K) VAVB = ln [X]A VAVB = zF [1]A (1)(96500 c/mol)
Este ejemplo muestra que una diferencia de potencial elctrico de -60 mV equilibra una diferencia de diez veces mayor de un ion monovalente

VAVB = -0,06 volt

+ + + + +

El ion K+ se encuentra 10 veces ms concentrado en el lado A que en B. Calcular la diferencia de potencial elctrico que debe existir a ambos lados de la membrana para que el K+ est en equilibrio

Ejemplo 2

t=30 0C R=8,31 joule 0K /mol

VA-VB = +100 mV

RT ln [X]B VAVB = [X]A zF

VAVB =

(8,31 joule/ 0K mol)(303 0K) (-1)(96500 c/mol) VAVB = +0,06 volt

Una diferencia de potencial de +60 mV entre A y B equilibrar la tendencia del HCO3- a desplazarse de A a B por su diferencia de concentracin. Sin embargo, VA-VB es en realidad +100 mV. Por lo tanto, la fuerza elctrica es 40 mV mayor que la calculada y determinar flujo neto de B a A, espontneamente

- + - + - + - + - +
ln
[0,1]B [1]A

La ecuacin de Nernst puede predecir si el HCO3- se encuentra en equilibrio. Si no lo est, la ecuacin permite predecir la direccin del flujo neto de HCO3-

En resumen

RT ln [X]B VAVB = [X]A zF

En resumen, la ecuacin de Nernst se puede usar para predecir el sentido en el que tienden a fluir los iones

1M

X+

VA-VB (medido) = -60 mV

VA-VB (calculado) = -60 mV

Si la diferencia de potencial medida a travs de una membrana es igual a la diferencia de potencial calculada por Nernst, para un ion concreto, entonces ese ion est en equilibrio electroqumico a travs de la membrana y no existe un flujo neto a travs de ella

+ + +

X+

0,1 M

1M

X+

VA-VB (medido) = -75 mV

VA-VB (calculado) = -60 mV

Si el potencial elctrico medido es del mismo signo que el calculado por Nernst, para un ion determinado, pero tiene mayor magnitud que este valor, entonces la fuerza elctrica es mayor que la fuerza de concentracin y el flujo neto del ion tender a producirse en el sentido determinado por la fuerza elctrica

+ + +

X+

0,1 M

1M

X+

VA-VB (medido) = -62 mV

VA-VB (calculado) = -87 mV

Cuando la diferencia de potencial elctrico medida es del mismo signo pero de valor menor que la calculada por Nernst, entonces la fuerza de concentracin es mayor que la fuerza elctrica y el flujo neto de ese ion tender a producirse en el sentido de terminado por la diferencia de concentracin

+ + +

X+

0,1 M

1M

X+

VA-VB (medido) = +60 mV

VA-VB (calculado) = -87 mV

Si la diferencia de potencial elctrico medida a travs de la membrana es de signo opuesto a la calculada por Nernst, para un ion particular, entonces la fuerza elctrica y de concentracin tienen el mismo sentido. Por lo tanto ese ion no puede estar en equilibrio y se desplazar en el sentido determinado por ambas fuerzas

+ + +

X+

0,1 M

Carga elctrica
Sabemos que las cargas elctricas estn asociadas a partculas sub-atmicas. Recordemos que las cargas elctricas interaccionan con fuerzas de atraccin o repulsin y su magnitud est dada por:

Esto significa que se requiere de una apreciable cantidad de energa para juntar o separar cargas elctricas Recordemos que la cantidad de carga se mide en Coulomb (C)

Con estos antecedentes en mente podemos calcular cuanta carga elctrica est contenida en un mol de Na+
1 Cada ion Na+ tiene la carga elemental de un electrn: e = 1,62 x 10-19 C

2 Un mol de iones monovalentes corresponde al nmero de Avogadro de iones: No = 6,02 x 1023 iones 3 De 1 y 2 tenemos: No x e = 96.500 C/mol

Este valor (96.500 C/mol) se llama la constante de Faraday y corresponde a la carga elctrica por mol equivalente de un ion monovalente

Q = zF

Corriente
El movimiento de cargas elctricas genera una corriente elctrica que es la cantidad de cargas que se mueven por unidad de tiempo:

i = q/t (Amperes)
La corriente fluye de un punto a otro porque existe una diferencia de potencial entre esos puntos (el potencial elctrico se mide en Volt). El potencial lo puede generar una pila para mover las cargas en un circuito elctrico. La energa empleada ser equivalente al trabajo para mover la carga entre dos puntos con diferente potencial.

La energa (en joule) para llevar una carga Q desde un potencial cero a un punto de potencial V es:

Eelec = QV

R
+

Ley de Ohm V = iR

Recproco de R es la conductancia g: g = i / R (Siemens)

i = V/R La ley de Ohm puede escribirse: i = gV

i
+

+ -

C = A/d (Farad) Si se aplica una diferencia de potencial en el condensador, la cantidad de carga Q almacenada en las placas del condensador es directamente proporcional a la diferencia de potencial V y a la capacidad C del condensador:

Q = CV

La diferencia de potencial electroqumico para un soluto X a travs de una membrana es un parmetro til porque permite predecir si X se encuentra en equilibrio a ambos lados de la membrana de una clula, o no Mientras el movimiento de X no est acoplado al movimiento de otro soluto o de alguna reaccin qumica, el nico factor que determina la direccin del movimiento es

La habilidad de predecir el movimiento de X es independiente de cualquier conocimiento detallado de cmo est ocurriendo este movimiento. En otras palabras podemos entender la energtica del transporte sin conocer el mecanismo de transporte

TRANSPORTE DE SOLUTOS

DIFUSION SIMPLE

El mecanismo ms simple de transporte es el de difusin simple que consiste el paso de una sustancia no cargada elctricamente, a travs de la bicapa lipdica

JX = Px([X]e - [X]i)
Flujo de entrada

JX ei = Px[X]e JX ie = Px[X]i

Flujo de salida

Ce > Ci

Richard H Foster Fisiologa & Biofsica

Ce = Ci

J = P(Ce Ci)

Se

Richard H Foster Fisiologa & Biofsica

Si

TRANSPORTE MEDIADO

Debido a que la mayora de los iones y solutos de inters biolgico tienen un coeficiente de particin muy bajo, dentro de la bicapa lipdica, la difusin simple de estos solutos, a travs de la bicapa lipdica, es despreciable El transporte a travs de la membrana plasmtica requiere de rutas especializadas que permiten el paso a travs de la membrana. Estas rutas estn formadas por protenas integrales de la membrana

Se reconocen tres tipos de rutas mediadas por protenas integrales de membrana

POROS CANALES

TRASNPORTADORES

POROS

La protena de membrana forma un poro que est siempre abierto. Ejemplos son las porinas que se encuentran en la membrana externa de la mitocondria, citotoxinas secretadas por los linfocitos como las perforinas, acuaporinas en el tejido renal

Porinas Perforinas Acuaporinas

Richard H Foster Fisiologa & Biofsica

Gradiente de concentracin

Se encuentran siempre abiertos

Espacio extracelular

Espacio intracelular

CANALES

La protena de membrana forma un canal que oscila entre una forma cerrada y una abierta, esta equipado de una compuerta movible. Ejemplos son ; los canales de Na+, K+, Ca2+, Cl-

Canal abierto
Canal cerrado

TRANSPORTADORES

TRANSPORTADORES PASIVOS ACTIVOS SECUNDARIOS

TRANSPORTADORES ACTIVOS

ACTIVOS PRIMARIOS

TRANSPORTADORES PASIVOS

Richard H Foster Fisiologa & Biofsica

Se

Si

La protena de membrana forma un transportador que rodea un conducto que nunca ofrece un camino continuo. Est equipado con sitios de unin para el soluto. Ejemplos son muchos; tales como el transportador de glucosa, el de aminocidos, fosfato, oxalato

TRANSPORTADORES ACTIVOS

ACTIVOS SECUNDARIOS

En el transporte activo secundario, la fuerza motriz proviene del acoplamiento entre el movimiento de un soluto cuesta abajo para el cual existe una diferencia de potencial electroqumico favorable, con el movimiento de un soluto cuesta arriba para el cual existe una diferencia de potencial electroqumico desfavorable

COTRANSPORTE

Richard H Foster Fisiologa & Biofsica

CONTRATRANSPORTE

Richard H Foster Fisiologa & Biofsica

TRANSPORTADORES ACTIVOS
ACTIVOS PRIMARIOS

Richard H Foster Fisiologa & Biofsica

El soluto es transportado cuesta arriba, a travs de una membrana, en contra de un gradiente electroqumico

Richard H Foster Fisiologa & Biofsica

En el transporte activo primario, la fuerza motriz, para la transferencia neta de un soluto, en contra de su gradiente electroqumico, proviene de la energa liberada por la hidrlisis del ATP, por eso se llama transporte activo primario.

Richard H Foster Fisiologa & Biofsica

ATP

ADP

Richard H Foster Fisiologa & Biofsica

La bomba de Na-K

Richard H Foster Fisiologa & Biofsica

3 Na+
Potencial de membrana -50 a -70 mV

+ + + + ATP ADP + P + + + + + + + + + + + 2K + + + + + - + + + + + + + + + + + + Intracelular [K ] = 140 mM + + + [Na+]= 12 mM + -- + + + + + +

+ + +

+ + +

+ +

+ + + + ++ + + ++ + + + + ++ + + + + + + + Extracelular [K+] = 4 mM [Na+]= 145 mM