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UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS PARA LA PRODUCCIN DE ETANOL A PARTIR DE DESECHOS DE PLTANO


TESIS
PRESENTA: BRENDA MANZANILLA VIVEROS
ASESORA: CARMEN BULBARELA SAMPIERI
XALAPA, EQUEZ, VER., 13 DE DICIEMBRE 2012 1

ANTECEDENTES
Fuentes energtica s Reduccin Desarrollo sostenible

Dependencia del petrleo

Biocombustibles

Contaminacin

Cultivos alimentarios (33.3 Mha)

Cambio climtico

Precios ms altos

Inseguridad alimentaria

CO2

Desechos agroindustriales (desechos slidos urbanos)

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS BIOCOMBUSTIBLES (AYCACHI, 2009; DI NICOLA, 2011)

Ventajas No aumenta los niveles de CO2 en la atmsfera.

Desventajas El costo de produccin es ms elevado que el de la gasolina. Se requiere de destilacin para obtener los alcoholes, lo que provoca una mayor emisin de CO2 con respecto a la gasolina.

Fuente de energa renovable.

Aprovechamiento de tierras de poco valor agrcola.

Su uso se limita a un tipo de motor automovilstico de bajo rendimiento y poca potencia. El proceso de produccin varia con la materia prima que se trabaje.
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alfalfa, sorgo dulce, yuca, abeto, sauce, alpiste, caa de azcar, remolacha, cereales, maz, patata, residuos slidos urbanos, entre otros

BIOETANOL

Biocombustibles

Bioetanol

Usos: Maz, Caa de Biomas a azcar

Biomasa lignocelulsica y desechos agroalimentarios

Bebidas Disolvente Aditivo (Oxigenante) Combustible (E85)

Producci n de Bioetanol

Solucin con azcares fermentables

Carbohidratos
pH

Fermentacin

Microorganismos

Temperatura
Presin

Separacin y Purificacin del etanol

Destilacin y deshidratacin

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

JUSTIFICACIN
Fuente de energa
Limpia Fcil Industria y sociedad Costo Barata

Bioetanol

Encontrar microorganismos que trabajen bajo condiciones menos controladas


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OBJETIVOS
GENERAL

Evaluar la capacidad de microorganismos nativos aislados de productos fermentados, para producir etanol por medio de la fermentacin no controlada de un hidrolizado de pltano.

ESPECFICOS

Aislar microorganismos a partir de los productos fermentados. Fermentar un medio de pltano hidrolizado bajo condiciones ambientales, con los microorganismos aislados. Determinar la produccin de etanol por parte de cada uno de los microorganismos encontrados. Identificar los microorganismos productores de etanol. Cuantificar la produccin de etanol de los microorganismos con mayor potencial.
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HIPTESIS

METODOLOGA
Medio de pltano 100 ml Hidrlisis Inoculacin Fermentacin

Saccharomyces cerevisiae
Microorganismos aislados Dicromato de potasio

modelo

Determinacin de etanol Cuantificacin de etanol Identificacin de cepas

Prueba de yodoformo Valoracin en retroceso (dicromato de potasio)

MATERIA PRIMA
Pltano
Variedad

Enano Gigante

Municipio de San Rafael


Tiendas y mercados de la zona centro Grado de maduracin Contenido de azcares
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MEDIO DE FERMENTACIN CON PLTANO


Solucin de pltano
10, 20, 30, 40, 50 y 60 % p/v Grados Brix ( 20 Brix) y azcares reductores

Hidrlisis
Trmica (autoclave:15 min a 120C)

Determinacin de etanol
Prueba de yodoformo

Inoculacin y Fermentacin (3 das)


Saccharomyces cerevisiae
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PRODUCTOS PARA LA OBTENCIN DE MICROORGANISMOS


Mercado municipal 2 muestras de Tepache

Capuln
Productos fermentados Masa agria Morita Noni Pltano

Elaboracin casera

Nanche
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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

Centrifuga (a 5000 rpm durante 5 min)

Siembra
Agar de Papa Dextrosa (PDA) 30C por 36 horas

Purificacin
Observacin en microscopio

Productos fermentados

Incubacin

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RESULTADOS Y DISCUSIN
PREPARACIN DEL MEDIO DE CULTIVO
Madurez
Estado de madurez del pltano
1 3 5

Color de la cscara del fruto

% de azcares reductores

Verde Amarillo Amarillo con manchas negras

2.20 3.66 4.95


% de 5.6 azcares reductores 1.38 2.02 3.44

Estado 7 (negro)

Porcentaje de pltano

negro % de pltano Brix a 21C en la solucin 10 1.26 20 1.86 30 3.46 40


50 60

3.46
3.26 5.07

3.56
3.46 5.19
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OBTENCIN DE MICROORGANISMOS Y DETERMINACIN DE LA PRODUCCIN DE ETANOL


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Morfologa % de Productoras % de cepas

cepas
nativas Levaduras 13 cepas Bacterias 10 cepas 43.4 52.2

de alcohol

productoras de
etanol

6 26.1 0

5 levaduras se aislaron de tepache 1 levadura del fermentado de pltano


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IDENTIFICACIN DE LOS MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE ETANOL

MUESTRA:

CDIGO: 012

NOMBRE:

Fermentado de tepachel(1) Fermentado de tepache(2)

Zygosaccharomyc es bisporus
Zygosaccharomyc es rouxii

015

Pltano

001

Zygosaccharomyc es bisporus

Clave dicotmica de Pitt y Hocking


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CINTICA DE PRODUCCIN DE ETANOL Y CONSUMO DE AZCARES


Produccin a las 72 horas
NOMBRE Y CDIGO: Zygosaccharomyces bisporus Zygosaccharomyces rouxii 012 015 001 PRODUCCIN: 67.1 g/l

51.4 g/l 18.4 g/l 75.7 g/l 110.4 g/l

Zygosaccharomyces bisporus

Mismas condicione s (ambiente)

S. cerevisae Coronel y Oviedo et al. (2009) (bajo condiciones controladas)

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PRODUCCIN DE ETANOL Y CONSUMO DE AZCARES REDUCTORES DE LA Z. bisporus EN MEDIO FERMENTADO A TEMPERATURA AMBIENTE. .

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16 14 % Azcares
A. R. 12 Etanol 12

70
60 50 40 30 20 10 0 0 20 40 Tiempo (h) 60 80
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10

8
6 4 2 0

Etanol (g/l)

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COMPARACIN DE PRODUCCIN DE ETANOL ENTRE LAS CEPAS AISLADAS Y S. cereviseae (CONTROL POSITIVO, EN MEDIO
PF A TEMPERATURA AMBIENTE.)

80 70 60

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1

Z. bisporus Z. rouxii

Z. bisporus
S. cerevis ae

Etanol (g/l)

50

40
30 20 10 0 0 20

40 Tiempo (h)

60

80
20

CONCLUSIONES
Es posible encontrar cepas nativas que produzcan etanol en la regin de Xalapa, Ver., las cuales resultan ser adecuadas para realizar fermentaciones utilizando residuos tales como: el pltano. En este trabajo se encontraron 3 cepas: 2 provenientes del tepache (1 realizado de forma casera as como otro conseguido en el mercado local) y otra de la fermentacin del pltano. Respectivamente se identificaron las dos primeras como Zygosaccharomyces bisporus (cepa 001, y 012) y la ltima como Zygosaccharomyces rouxii (cepa 015). La capacidad de produccin de etanol de las cepas aisladas fue diferente, la primera se denomin 001 la cual produjo 18.4 g/l de etanol, la segunda cepa 012 con 67.1 g/l y la ltima 015 con 51.4 g/l, las cuales se compararon con la cepa muestra Saccharomyces cerevisiae que produjo 75.7 g/l.

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RECOMENDACIONES
Sera til probar otros mtodos para hidrolizar los almidones del pltano, como la enzimtica, para obtener mayor cantidad de azcares reductores y as aprovechar de manera eficiente el sustrato. Para la cuantificacin de azcares sera ptimo utilizar la tcnica de DNS, para eliminar el factor del error humano en las titulaciones de la tcnica de Fehling. Es conveniente estudiar bajo qu condiciones de presin, temperatura, y porcentaje de azcares trabajan de mejor manera. Realizar la cuantificacin de etanol mediante HPLC. Realizar la identificacin de los microorganismos aislados mediante tcnicas moleculares basadas en sondas genticas y ensayos basados en la reaccin en cadena de la polimerasa.
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