Universidad Alas Peruanas

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Farmacia y Bioquimica

Ingenieria Genetica
TECNOLOGIA
Tdel control y transferencia

ADN De un organismo

La ingenieria genetica, es tambien conosida como tecnologia del ADN reconbinante.

Obtetivo: Purificar Amplificar Modificar Expresar Secuencias geneticas especificas

OTRO
Lo que posibilita la crecion de nuevas especies, la correcion de efectos geneticos y la fabricacion de numerosos compestos . Siguiente

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Componentes bsicos de la Ingeniera Gentica

Vectores de clonacin y expresin se utilizan para introducir secuencias de ADN en el interior de bacterias y amplificar la secuencia deseada

Secuencia de ADN
que se desea amplificar y expresar

Enzimas de restriccion
Ligasa de adn.

Vectores
de clonacion y expresion.

Enzimas de restriccion: Se usan para degradar de forma reproducible la moelcula del ADN es unas secuencias determinadas.
Ligasa de ADN, une los fragmentos al vector de clonacion

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Componentes bsicos de la Ingeniera Gentica

En 1975 Daniel Nathans Y Hamilton O. Smith Descubrieron un tipo de protena: ENZIMA ENDONUCLEASA O ENZIMA DE RESTRICCIN Que actuan como tijeras moleculares, cortando la doble cadena de ADN a traves del esqueleto de fosfatos sin daar las bases.

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Componentes bsicos de la Ingeniera Gentica

Son enzimas que reconocen una determinada secuencia de ADN (secuencias cortas de 4 10 nt) y los cortan. Que siempre reconocen la misma secuencia y siempre la cortan en el mismo sitio y de la misma forma. Se extraen de bacterias, que las usan para defenderse de invasiones de ADN externo como los virus.

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Componentes bsicos de la Ingeniera Gentica

Las enzimas de restriccin cortan dejando extremos cohesivos o romos.

Extremos cohesivos

Extremos romos

Los extremos cohesivos son generados cuando la enzima corta las dos hebras asimtricamente, dejando los extremos de cada hebra, de simple cadena complementarios entre si.
Los extremos romos son generados cuando la enzima corta las dos hebras por si mismo lugar, generando dos extremos de doble cadena

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Componentes bsicos de la Ingeniera Gentica

Extremos cohesivos
Extremos cohesivos Extremos cohesivos Extremos cohesivos Extremos romos Extremos cohesivos

Extremos romos
Extremos cohesivos Extremos cohesivos

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Componentes bsicos de la Ingeniera Gentica

bacteriofago T4: Polipeptido de 68 000 daltons de P.M.
Usos: - Unir molculas de ADN con terminales cohesivos y romos ADN ligasa de E.coli : Uso : - Une molculas de ADN con terminales cohesivos

ADN LIGASA

Argument B

Argument B

Argument A

Argument A

ADN ligasa del bacteriofago T4: une terminales cohesivos y romos.

ADN ligasa de E.coli : une terminales cohesivos
B A

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AISLAMIENTO DE ADN

Gen deseado

Enzima de restriccin

Fragmentos de ADN

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Vectores
" Vector

Clonacin

"es un agente que puede llevar a un fragmento de ADN en una clula husped
Estos deben permitir que el ADN exgeno se inserte en su interior, pero conservando su capacidad de replicacin normal en el clula anfitriona bacteria o eucariota. Expresin

Vector

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Vectores
Un vector debe presentar las siguientes caractersticas:

Caracteristicas

Contener distintos puntos de ataque a enzimas de restriccin y que sean conocidos. Poder ser incluido en la clula anfitriona con facilidad.

Replicarse de forma independiente al ADN de la clula anfitriona.

Poseer un gen marcador con el que puedan identificarse y seleccionar las clulas. Un ejemplo de marcador puede ser la resistencia a un antibitico.

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Vectores de clonacin
En ingeniera gentica se entiende por clonacin la obtencin de mltiples copias de un gen especfico o de un fragmento de ADN en el interior de un organismo hospedador.

Plasmidios (Bacterias)

Bacteriografos (Virus)

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Vectores de Clonacin
Los plsmidos son molculas de ADN extra cromosmico circular o lineal que se replican y transcriben independientes del ADN cromosmico bacteriano.

Plasmidios Estn presentes normalmente en bacterias, y en algunas ocasiones en organismos eucariotas como las levaduras. Su tamao vara desde : 1 a 250 kb (kilobase) par de ADN O ARn

pUC18
-

Puede transportar fragmentos de ADN relativamente grandes (de unos 10.000 pares de bases).

Puede producir hasta 500 copias de los fragmentos de ADN insertado por clula.

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Caractersticas generales de los plsmidos como vectores de clonado:

Sitios de restriccin nicos

Marcadores genticos

Origen de replicacin

PLSMIDOS

VIDEO 1

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Tipos de Vectores de Clonacin

Los bacterifagos (tambi n llamados fagos ) son virus que infectan exc lusivamente a bacterias.

Bacteriografos

BACTERIOGRAFO

VIDEO 2

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El fago o bacterifago lambda que infecta a la E. coli. Sus extremos de su material gentico son cohesivos Los vectores fgicos pueden transportar fragmentos de hasta 20 kb ( kilobases).

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Clulas usadas como huspedes de clonacin

Celulas eucariontes - levaduras

Saccharomyces cerevis

Celulas Procariotas Echerichia coli Bacillus subtilis -

Ventajas: Estas celulas realizan modificaciones post traduccionales (ej. Fosforizaciones y glicosilaciones) que son importantes para la atividad de muchas proteinas de eucariotas

Ventajas: Crecimiento rapido Cultivo agares comunes

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Vectores de expresin
El promotor es la secuencia que seala el comienzo de la transcripcin del ADN a ARN, y es por ello el lugar de enlace de la ARN polimerasa

El origen de Replicacion

Un sitio de Clonacion multiple

Marcador

La ARN polimerasa es la enzima encargada de la transcripcin. Realiza una copia de ADN a ARN, de ah que sea dependiente de ADN

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Vectores de expresin
El promotor es la secuencia que seala el comienzo de la transcripcin del ADN a ARN, y es por ello el lugar de enlace de la ARN polimerasa
Sitio de clonacion multiple

Resistencia a los antibioticos

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Vectores de expresin
El promotor es la secuencia que seala el comienzo de la transcripcin del ADN a ARN, y es por ello el lugar de enlace de la ARN polimerasa
Sitio de clonacion multiple

Lac O (operador)
Resistencia a los antibioticos

Lac I (represor)

OPERON LAC

VIDEO 2

AMPc: Adenosn monofosfato cclico ADN: cido desoxirribonucleico ARN: El cido ribonucleico

CAP: protena activadora de catabolitos. Plac: promotor de l operon lac O: operador

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Vectores de expresin

Escherichia coli Cepa BL21 (DE3)

P lac (promotor) Lac O (operador) T7 ARN polimerasa (terminador) Lac I (represor)

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Tipos de Vectores de expresin

Hospederos para sistemas de expresin Escherichia coli Saccharomyces cerevisiae Picchia pastoris Baculovirus Cultivos celulares (lneas celulares de mamferos) Animales o plantas transgnicos

Escherichia coli Cepa BL21 (DE3)

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Tipos de Vectores de expresin

El promotor es la secuencia que seala el comienzo de la transcripcin del ADN a ARN, y es por ello el lugar de enlace de la ARN polimerasa

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OBTENCIN DE PROTENAS DE MAMFEROS

Insulina H. Del crecimiento F. De coagulacin

Tienen un inters mdico y comercial muy grande.

En la actualidad, gracias a la tecnologa del ADN recombinante, se clonan los genes de ciertas protenas humanas en microrganismos adecuados para su fabricacin comercial.

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Ingeniera Gentica
La insulina es el primer caso de protenas producidas en la ingeniera gentica aprobada para uso en humanos, desde 1982. En la actualidad, varios laboratorios farmacuticos producen insulina humana, tanto a partir de bacterias como de levaduras y sin ningn riesgo para la salud

TERAPIA GNICA

VIDEO 3

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