1

CROMATOGRAFA DE GASES
Cristbal Caicedo M.
Departamento de Qumica
2
Definiciones:

En cromatografa de gases se hace
pasar el analito en forma gaseosa a
travs de la columna, arrastrado por una
fase mvil gaseosa, llamada el gas
portador, la cual percola a travs de la
fase estacionaria.
3
La muestra (el analito) puede ser un gas
o un lquido, el cual debe ser:
voltil
de bajo peso molecular,
trmicamente estable

El analito
4
La fase mvil denominada GAS
PORTADOR o GAS ACARREADOR,
es un gas inerte cuya finalidad es
transportar las partculas de la muestra
a travs de la columna.
5
La fase estacionaria puede ser un
slido (CGS) y la separacin se
fundamenta en la ADSORCIN sobre
la superficie slida activa.

Adsorbentes tales como carbn vegetal,
gel de slice y tamices moleculares son
las fases estacionarias en la CG.
6
La fase estacionaria puede ser tambin
un lquido de alto punto de ebullicin
(CGL), el cual se extiende en una fina
pelcula sobre un slido inerte que
rellena una columna, llamado soporte
slido o recubre la pared interna de una
columna (otc). La base de la separacin
es la PARTICIN o DISTRIBUCIN de
las partculas de la muestra dentro o
fuera de esta pelcula lquida.
7
Sistema de
introduccin
de muestras
Fuente de
fase mvil
Columna Sistema de
deteccin
Registrador
Pantalla teclado
Sistemas de manejo de
datos
Control de
temperatura
8
Principales componentes
Gas de acarreo
Controladores de flujo
Inyectores
Columnas
Detectores
Sistema de datos
9
ESQUEMA DE UN CROMATGRAFO DE GASES
10
LA FASE MVIL
11
LA FASE MVIL
La fase mvil viene en cilindros de
gases a una presin aproximada de
2500 psi (150-160 atm.)

El propsito del gas acarreador, es
transportar la muestra a travs de
la columna hasta el detector.

12
Caractersticas del gas
acarreador:
Inerte qumicamente.
Alta pureza: mayor del 99.9%
(Impurezas: aire y agua)
Grado: 4.5
Seco
Adecuado para el detector usado.
Se debe colocar un filtro de carbn activado y una
trampa para humedad antes de la entrada del gas al
instrumento

13
Gases y Detector
TCD He o H
2

FID He o N
2

ECD N
2
o Ar - Metano
14
Productores de gases especiales
para CG:
Aga-FANO, Aga Colombia, Divisin
Linde Gas del Grupo Linde.

Praxair (oxigenos de Colombia)

Cryogas (Grupo BOC)-(Grupo Linde)
15
GASES ACARREADORES MS COMUNES
Gas Pm Conductividad trmica
x 10

a 100C (g. Cal / s.cm.C)

Viscosidad
q x 10
6
a 100C (P)

Argn 39.95 5.087 270.2
CO
2
44.01 5.06 197.2
Helio 4.00 39.85 234.1
Hidrgeno 2.016 49.94 104.6
Nitrgeno 28.01 7.18 212.0
Oxgeno 32.00 7.427 248.5
16
Impurezas comunes en los gases (ppm)
GAS O
2
H
2
N
2
CO
2

Ar 5 5 200 *
He 5 5 100 *
H
2
10 * 1500 100
N
2
5 5 * *
17
CONTROLADORES DEL FLUJO
Regulador de presin en el cilindro.

Regulador de presin o de flujo en el
cromatgrafo.
18
REGULADORES DE PRESIN
El flujo en el cilindro se controla
mediante un regulador de presin de
dos niveles, vlvula de dos vas.
2500 psi 80 psi

Presin al cromatgrafo: 20 80 psi
19
MEDIDICIN DEL FLUJO
en el cromatgrafo:

Medidor de flujo de burbuja de jabn:
simplicidad
bajo costo
Independiente del tipo de gas usado.


20
21
Rotmetro.
ventajas:
muestra flujo continuo del gas
Desventajas:
depende del tipo de gas
mas caro que el de jabn.

Controlador electrnico de presin del flujo.

Caudales (mL/min): 15 80 mL (C. Empac.)
0.25-8 ml/min(C. Capilares)
22
FLUJOS PTIMOS DE GAS
PORTADOR
COLUMNA
GAS PORTADOR. FLUJO
mL/min
HELIO HIDRGENO
D.E. 60-80 30-40
1/8 D.E. 30-40 15-20
PLOT o SCOT 2-8 1-4
WCOT 0.5-5 0.25-2.5
23
SISTEMA DE INTRODUCCIN DE
MUESTRAS
INYECTORES
24
No hay sistema universal de introduccin de
muestras.
Las muestras se introducen al equipo de CG por
medio de vlvulas o jeringas que la colocan en
un puerto de inyeccin o inyector.
Muestras:
Gases
Lquidos
slidos (material vaporizable o soluble).
Muestras no vaporalizables, requieren algn
tipo de introduccin por pirlisis.
25
CARACTERSTICAS DE UN
INYECTOR
1. Calentamiento
2. Volumen pequeo
3. Barrido total del rea
26
Funciones de un inyector:
1. Recibir la muestra,
2. Vaporizarla inmediatamente,
3. Introducir la muestra vaporizada a la
cabeza de la columna como una
banda estrecha.

27
Tambin es preciso acomodar diversos
tamaos de muestra, desde de 1g
para columnas de tubo abierto hasta
gramos, para columnas a escala
preparativa.
28
Esquema de un inyector
29
INYECCIN DE MUESTRAS
GASEOSAS
Las muestras gaseosas pueden
introducirse por:

Jeringas (volumen: 0.001-50 mL).

Vlvulas (volumen o loop fijo: 1L-
100mL).
30
INYECCIN DE MUESTRAS
LQUIDAS
Debido a la expansin de los lquidos
cuando se vaporizan, se trabaja con
tamaos de muestra mucho ms
pequeas que en gases.

Jeringas (0.1 25L).
31
Jeringa de inyeccin
32
Vlvulas de introduccin de muestras
33
MODOS DE INYECCIN
1. En la cmara de vaporizacin

2. Directamente en la columna (on column)

La mejor tcnica de inyeccin depende
del tipo de columna y del tipo de anlisis:
isotrmico o de temperatura programada.
34
Inyeccin en la cmara de
vaporizacin.
La vaporizacin inmediatamente despus de
la inyeccin asegura la reproducibilidad en los
tiempos de retencin y una buena resolucin.

35
Cmara de vaporizacin
El vaporizador es un tubo de 2-4 pulg. de
longitud y 0.020-0.030 mm de d.i. (liner)
Ventajas:
Facilidad de cambiar el tubo para manejar
diferentes dimetros de columnas.
Elimina todo contacto de la muestra con el
metal del puerto de inyeccin o columna.
Facilidad de adaptar el inyector a un
sistema on-column cuando se usan
columnas de vidrio.
36
37
Inyeccin directa en la
columna (on-column)
La vaporizacin inmediata no es
satisfactoria para algunas muestras:
Compuestos sensibles al calor.
Muy diludas y requieran gran volumen
de inyeccin.
Compuestos o solutos con un amplio
intervalo de puntos de ebullicin.

38
INYECCIN DE MUESTRAS
SLIDAS
Disolver en un disolvente apropiado y se trata
como una muestra lquida a inyectar.
Requisitos del disolvente:
No debe reaccionar con ningn componente
de inters en el slido o en la columna.
si los componentes han sido extrados, el
disolvente debe ser miscible con el slido.
No debe co-eluir con ninguno de los
componentes de inters.

39
Sistemas automticos de
introduccin de muestras
Automatic samplers para lquidos,
slidos y gases.
Sistema de jeringa y de vlvulas
40
Muestreadores para gases
Headspace
1. Anlisis de etanol y otros voltiles en
sangre.
2. Anlisis de monmeros residuales en
polmeros (cloruro de vinilo en PVC).
3. Anlisis de compuestos responsables de
los aromas.
4. Trabajo forense.
41
Headspace
42
Sistema de inyeccin para c.c.
Tres formas de introduccin de
muestras son usadas en mas del 90%
en las columnas capilares.
1. Split injection.
2. Splitless injection o inyeccin directa.
3. cool on-column injection
43
Split injection
(Inyeccin con divisin de flujo)
muestras: 0.001 0.5 L



La relacin de flujo vara: 10 a 1000:1.
flujo (venteo)
relacin de divisin
flujo (columna)
=
44
Splitless injection
(Inyeccin sin divisin de flujo)

Anlisis de trazas
Programacin de temperatura es esencial
debido a la reconcentracin del vaporizado
en la cabeza de la columna.


45
46
On-column injection
(inyeccin directa en la columna)

Anlisis de trazas
La muestra se inyecta directamente en
la columna, sin la etapa de
vaporizacin.
Es el mtodo mas preciso y exacto de
introduccin de muestra.
47
On-column injection
1. La inyeccin debe realizarse a una
temperatura menor o igual a la de
ebullicin del solvente,
2. Inyeccin rpida,
3. Volumen de 2 L o menor.
48
Sistema de inyeccin on column para
columnas capilares de dimetro grande
49
Desventajas On-column injection
1. Los componentes no voltiles de la
muestra se depositan directamente en
la columna.
2. La tcnica no es automatizada.
50
VOLMENES DE MUESTRA PARA
DIFERENTES TIPOS DE COLUMNA

Tipo de Columna
Tamao de Muestra
Gaseosa Lquida
Preparativa (2.5cm DE,
20% Lquido)
0.05 1L 0.02 1mL
Analtica Regular (0.6cm
DE, 10% Lquido)
0.5 50mL 0.02 - 20L
Alta Eficiencia (0.3cm DE,
2% Lquido)
0.1 1mL 0.01 - 2L
Capilar (sin relleno)
(0.15 cm DE, 5.0m)
0.1 - 10L 0.001 0.5L
51
HORNOS Y COLUMNAS
52
HORNO Y COLUMNAS
El propsito primario del horno es
proporcionar a la columna una
temperatura constante.

En la columna, es donde ocurre el
proceso de separacin. La columna es
el corazn del proceso cromatogrfico.
53
El horno:
1. Intervalo de temperatura de operacin
grande (-50 a 400C y 5 o 10 a
400C).
2. La temperatura en el horno y en toda
la columna debe ser uniforme. La
diferencia de temperatura entre la
ms alta y la ms baja debe ser
mnima

54
3. Libre de influencias de cambios de
temperatura ambiental o de voltaje de
lnea elctrica.
4. La temperatura no debe ser afectada
por el calentamiento de inyector o
detector.
5. De fcil acceso para instalar columnas
y accesorios.
6. Permitir realizar separacin a
temperaturas programadas.
55
TEMPERATURA

El tiempo de retencin se duplica por
cada 30C, que disminuye la
temperatura de la columna.
Corrida Isotrmica
Temperatura Programada.

56
Operacin isotrmica
1. En muestras desconocidas, los
componentes de alto punto de
ebullicin no son detectados.
2. Los primeros picos son finos, muy
cercanos y pobremente resueltos,
mientras los ltimos sern bajos,
anchos y excesivamente resueltos.
57
Temperatura Programada
1. En muestras desconocidas se puede
obtener informacin de los puntos de
ebullicin e informacin cualitativa y
cuantitativa. Adems:
2. Es rpida,
3. Se minimiza la transformacin de material
inestable.
4. Es requerida para algunas aplicaciones con
columnas capilares (on-column in)
5. Es un excelente medio para limpiar la
columna.
58
59
TEMPERATURA ISOTRMICA Y
TEMPERATURA PROGRAMADA
Aspecto Isotrmica Temp. programada
Intervalo de ebullicin
de la muestra
Limitado hasta
100C
80 400C
Inyeccin de la
muestra
Debe ser rpida No necesita ser rpida
Fase estacionaria Amplia seleccin Seleccin restringida
Pureza del gas
portador
No crtica Esencial la alta pureza
Hornos separados para
columna y detector
Conveniente Esencial
Control de caudal Suficiente presin
constante
Se requiere regulador
diferencial de caudal
60
COLUMNA CROMATOGRFICA
La columna cromatogrfica contiene la fase
estacionaria lquida o slida, es el lugar
donde se realiza el proceso de separacin;
la columna es el corazn de la
Cromatografa.

En CG se usan dos tipos de columnas: las
rellenas o empacadas y las capilares.

61
Columnas empacadas o rellenas
62
MATERIALES DE LAS COLUMNAS
Acero Inoxidable
Aluminio
Cobre
Plstico
Vidrio
Slica fundida

63
TAMAO DE LAS COLUMNAS
La longitud es variable: desde 1.5 m hasta 50
o mas metros.

Dimetro tambin es variable: desde 100 o
150 m de d.i. en las columnas capilares,
hasta 4 de d.e. en las empacadas.
64
TAMAO DE LAS COLUMNAS
Las dimensiones de una columna empacada oscilan
entre:

2 y 4.6 mm de dimetro interno (DI) y de 1/8
a 1/4 de pulgada de dimetro externo (DO).

Longitud entre 6 y 30 pies para las ms comunes.
65
TAMAO DE LAS COLUMNAS
66
67
CLASIFICACIN DE LAS
COLUMNAS CAPILARES
68
69
70
FASE ESTACIONARIA LQUIDA
Propiedades:
1. Baja volatilidad
2. Estabilidad trmica
3. Qumicamente inerte
4. Caractersticas de disolvente (k y o)
71
Fases estacionarias para CG
72
Fases estacionarias para CG
73
Polidimetilsiloxano
74
Polietilenglicol
75
Fases estacionarias para CG
76
Fases estacionarias para CG
77
78
79
80
SISTEMA DE DETECCIN
El detector cromatogrfico es un
dispositivo que mide la concentracin
de cada uno de los componentes de la
muestra y genera una seal elctrica
proporcional a dicha concentracin.
81
CARACTERSTICAS DE UN
DETECTOR
1. PRIMARIAS.
Sensibilidad: denota la cantidad de seal
generada para determinada concentracin
de una muestra.
Ruido: se refiere a la respuesta del detector
de corta duracin y al azar, determinada
por las propiedades elctricas, la
temperatura, las impurezas o la sensibilidad
al caudal.
82
Respuesta:
Universal: significa que el detector
genera una respuesta para todos los
componentes de la muestra,
exceptuando el gas portador.
Selectiva: significa que le detector solo
responde a determinados tipos de
compuestos; por ejemplo, responde a
compuestos que contiene tomos de S y
P o N.
83
Recorrido lineal: es la regin sobre la
cual la seal del detector es
directamente proporcional a la
concentracin de la muestra.
84
2. SECUNDARIAS.
Simplicidad
Costo
Disponibilidad
Durabilidad
85
DETECTORES MS COMUNES
Detector de conductividad trmica, TCD
Detector de ionizacin de llama, FID
Detector de captura de electrones, ECD
Detector de nitrgeno y fsforo, NPD
Detector fotomtrico de llama, FPD
Detector espectromtrico de masa, MSD
Detector infrarrojo, IRD


86
NIVEL MNIMO DE
DETECCIN
Es la cantidad mnima detectable de
una sustancia que genera una seal (S)
dos veces mayor que su nivel de ruido
(N).
S/N = 2
NMD: g/s, g/mL, moles/s, moles/mL.
87
TCD
Utilizado particularmente con columnas
empacadas, detecta H
2
O, CO, CO
2
e H
2
.
Mide la conductividad trmica de un
analito en un gas acarreador.
La velocidad de prdida de calor de un
cuerpo caliente hacia un cuerpo ms
fro es proporcional a la conductividad
trmica del gas que separa estos
cuerpos.
88
TCD
89
FID
Consiste de una llama de hidrgeno-aire
y una placa colectora. El efluente de la
columna pasa a travs de la llama, que
ioniza las molculas orgnicas. Los iones
se recogen en un electrodo de
polarizacin negativa y producen una
seal elctrica. El FID es
extremadamente sensible y es el
detector ms ampliamente utilizado, su
desventaja es que destruye la muestra.

90
FID
91
ECD
Utiliza un emisor beta radioactivo
(electrones) para ionizar parte del gas
portador y para producir una corriente
entre un par de electrodos. Cuando las
molculas orgnicas que contienen
grupos funcionales electronegativos, tales
como halgenos, fsforo y grupos nitro,
pasan por el detector, capturan algunos
de los electrones y reducen la corriente
medida entre los electrodos.

92
93
NIVEL MNIMO DE DETECCIN PARA
LOS DETECTORES MS COMUNES
Detectores NMD Compuesto
TCD 5 x 10
-10
g/mL

Propano
FID 10
-12
g(C)/s

Propano
ECD 10-
16
moles/mL

Lindano

FPD
10
-10
g(S)/s Tiofeno
2 x 10
-12
g(P)/s Tributilfosfato

NPD
5 x 10
-14
g(N)/s Azobenceno
5 x 10
-15
g(P)/s tributilfosfato
94
REGISTRO
La principal funcin de los aparatos de
registro es reproducir grficamente la
salida del detector tan exactamente
como sea posible para obtener un
registro permanente de los resultados
(cromatograma)
95
APLICACIONES DE LA CG

96
ANLISIS CUALITATIVO Y
CUANTITATIVO POR
CROMATOGRAFA DE
GASES
97
La Qumica Analtica es la ciencia de la
produccin e interpretacin de seales
Erno Pugno.
Seal = CROMATOGRAMA
Tres datos importantes del
Cromatograma:
1. Tiempo de retencin
2. Tamao del pico
3. Forma del pico
98
Anlisis Cualitativo
99
1. DATOS DE RETENCIN.

El anlisis cualitativo por CG se refiere a
la comparacin de los datos de
retencin de una muestra problema con
los de una muestra conocida.
100
Tres aspectos relacionados con los
tiempos de retencin deben ser
conocidos y entendidos:
1. Si los tiempos de retencin de los
componentes A y X son iguales bajo
las mismas condiciones del anlisis
cromatogrfico, esto no indica
necesariamente, que el componente A
sea X.

101


2. Si el tiempo de retencin del
componente A no es igual al tiempo
de retencin del componente X, con
toda seguridad se puede concluir que
los componentes A y X son sustancias
diferentes.
102

3. Si en el cromatograma no aparece un
pico discernible con el tiempo de
retencin del componente A, se puede
concluir con toda certeza que el
componente A NO est presente en la
mezcla en la concentracin detectable
(el nivel mnimo de deteccin) para un
sistema cromatogrfico dado.
103
Algunos factores pueden afectar el
tiempo de retencin de los
componentes:
Control de la temperatura: un
cambio en la temperatura de aprox.
30C cambia el tr por un factor de 2.
Para mantener la repetibilidad en los
tr debe mantenerse la temperatura de
la columna en un intervalo de 0.3C.
104
Flujo del gas acarreador: una variacin en
el flujo de un 1% afecta el tr en aprox. 1%.
Tamao de la muestra: desplazamiento
del tr por sobrecarga o saturacin de la
columna.
Tiempo de retencin relativo:
comparacin de los tr relativos de un
componente dividido por el tiempo de
retencin ajustado de un material de
referencia, corridos en dos columnas
diferentes.
105
2. GRFICO DE log DE RETENCIN
Vs NMERO DE TOMOS DE
CARBONO.
Existe una diferencia lineal entre el
logaritmo del tiempo de retencin de los
compuestos de una serie homloga y el
nmero de tomos de carbono presente en
la molcula.

106
Esta relacin ha sido demostrada en
series homlogas de: alcanos,
olefinas, cetonas, alcoholes, acetatos,
acetales, steres, sulfxidos,
nitroderivados, aminoalifticos,
piridina, hidrocarburos aromticos,
dialquil teres, tioles, alquilnitratos,
tetrahidrofurano sustituidos y furano.

Este mtodo de identificacin, es
vlido solo para miembros de una
serie homloga o una serie
pseudohomloga.
107
log tr
400 600 800 1000
600
800
1000
1200
400
n- Alcanos
1,n- Olefinas
2,n- Cetonas
1,n- Alcoholes
ndice de Kovats
No. de carbonos 4 6 8 10
108
3. NDICE DE KOVATS.
El ndice de retencin:
Ayuda a confirmar la estructura de las
molculas orgnicas.
Utiliza una serie de alcanos normales
como referencia base y un compuesto
problema como en el mtodo de la
retencin relativa.
109
En la identificacin se utiliza el ndice de
retencin:




n t N t
n t x t
n Ix
' log ' log
' log ' log
100 100

+ =

n y N es la parafina mas pequea y ms grande
respectivamente y x es el analito.
110
Los ndices de retencin para n- alcanos
son definidos como 100 veces el
nmero de tomos de carbono de la
molcula para cada temperatura y para
cada lquido. Ejemplo: Octano = 800,
Decano= 1000.

En la prctica, el ndice de retencin es
derivado de un grfico del log tr Vs 100
veces el nmero de tomos de carbono
(ndice de Kovats).
111
600 500 700 800
log t'r
ndice de Kovats
IK= 78.0
5 6 7
8
No. de carbonos
112
4. COLUMNAS MLTIPLES
El uso de dos o ms columnas mejoran la
probabilidad de identificar un componente
desconocido si presenta el mismo tiempo de
retencin de un compuesto conocido. Sin
embargo, estos datos no son pruebas
concluyentes.
La confiabilidad de la identificacin de la
eficiencia y la polaridad de la columna y la
polaridad de la columna usada (selectividad).
113
5. RESPUESTA RELATIVA DEL
DETECTOR.
Detectores Selectivos:
La comparacin de la respuesta relativa de
dos o ms detectores puede ayudar a la
clasificacin o identificacin de un
componente desconocido.
Generalmente, el componente es
cromatografiado sobre una columna y el
efluente se divide y se hace pasar por dos o
ms detectores al mismo tiempo.
114
Las clases de detectores comnmente
usados son:
FPD ECD, FID RADIOACTIVIDAD,
FID NPD.
ECD: P, O, N y X
FPD: P, S
FID: compuestos orgnicos (CH).
115
6. ACOPLAMIENTO GC Y OTRAS
TCNICAS INSTRUMENTALES.
GC MS
Disminucin del costo de los equipos.
Incremento de la sensibilidad.
Reduccin del tiempo de barrido del
espectrofotmetro.
Obtencin del espectro de masa de un pico y
de porciones del pico.
Comparacin del espectro con el de un
estndar.
116
GC IR
La segunda tcnica instrumental ms
usada es el espectro IR.
117

Anlisis Cuantitativo
118
La cromatografa de gases
tiene los siguientes atributos:
Fcil operacin
Tcnica analtica simple
Relativo bajo costo del instrumento
Capacidad de analizar amplio rango de
tipos de muestra
Proporciona una respuesta a Cunto
hay?
119
Para responder a la pregunta Cunto
hay? a partir de la informacin
suministrada en el cromatograma, la CG
se sustenta en el principio de que el
tamao del pico cromatogrfico es
proporcional a la cantidad de sustancia.
120
Los conceptos bsicos que se usan en
la determinacin del tamao (rea) del
pico son:
Medida de la altura del pico
Medida del rea del pico
La relacin entre estas dos magnitudes
y la cantidad de componente en la
muestra.
121
MEDIDA DEL REA DE LOS
PICOS
El tamao (rea) de los picos se pueden
medir por:
Mtodos manuales
Integracin automtica (integradores
mecnicos elctricos)
122
Altura del pico
Altura y ancho a la mitad de la
altura
Triangulacin
Planimetra
MTODOS MANUALES
123
1. Altura del Pico.
La altura del pico es proporcional a la
cantidad de soluto o del componente
que contribuye al pico. Si no hay ningn
cambio en el sistema, que pudiera
producir cambios en el ancho del pico,
la altura ser proporcional a la cantidad
de soluto.
124
2. Altura y ancho a la mitad
de la altura.
El mtodo consiste en considerar que el
rea de un pico es proporcional al
producto de su altura por su ancho a
una fraccin constante, generalmente a
la mitad de su altura.
El mtodo es fcilmente aplicado a
curvas Gaussianas.
125
Como los picos normales se asemejan a
un tringulo, se obtiene el rea
aproximada multiplicando la altura
por la base a la mitad de la altura.
No se usa la base normal del pico
debido a las colas.
Esta tcnica es rpida y sencilla.
126
E
C
K
H
J
D G M B A L F
127
3. Triangulacin.
En el mtodo de la triangulacin se supone que el
rea del pico es proporcional al producto de su
altura por el ancho de la base.
Este procedimiento exige la construccin
geomtrica de un tringulo trazando la tangente a
los puntos de inflexin de cada rama del pico.
Se calcula el rea mediante la frmula del rea del
tringulo:
2
bxa
A =
128
4. Planimetra.
El mtodo consiste en medir los reas de los
picos en un planmetro.
El planmetro es un dispositivo mecnico que
mide superficies recorriendo el permetro el
pico. Las superficies son las reales aunque el
pico est distorsionado. La superficie se
registra digitalmente sobre un cuadrante.
La tcnica es tediosa, lenta y es poco prctica
en los anlisis de sustancias que implican
muchas medidas.
129
5. Cortado y pesado del
papel.
El mtodo consiste en pesar los picos en una
balanza analtica despus de recortarlos del
cromatograma.
No exige la condicin de simetra de los picos.
El mtodo es lento, pero puede ser bastante
preciso, est limitado por la falta de
uniformidad del papel.
No es recomendable porque se destruye el
cromatograma.
130
Como la CG exige la realizacin
rpida de medidas de reas, se ha
fomentado el desarrollo de mtodos
de integracin automtica, que son
los preferidos por su rapidez y
precisin.
INTEGRADORES
131
Integradores Mecnicos
El ms extendido es el de disco, cuyo
funcionamiento est basado en
transformar el desplazamiento de la
aguja del registro grfico en un
movimiento oscilatorio trazado en el
papel. El movimiento es ms frecuente
pero las desviaciones ms elevadas
corresponden a mayores alturas de
picos.
132
Integradores Electrnicos.
Los integradores electrnicos emplean
un convertidor de voltaje a frecuencia,
que transforma en impulsos la seal de
salida del detector, a una velocidad que
es proporcional al rea de los picos.
La integracin de los impulsos da un
valor proporcional al rea de los picos
que se registra con un impresor.
133
Los integradores diferencian las fluctuaciones
de la red y el ruido del detector de las
seales correspondientes a los picos y
corrigen automticamente ka deriva de la
lnea base.
Estos integradores miden las reas de los
picos parcialmente resueltos y tambin los
tiempos de retencin.
Su mayor inconveniente es su precio, ms
elevado que el de los dems tipos de
integradores.
134
INTEGRADORES ELECTRNICOS Y
COMPUTADORES
La mayor ventaja del integrador
electrnico, es la velocidad y exactitud
con que es medida el rea.
Operan con la seal del detector y son
limitados solamente por el detector.
Amplio rango dinmico (trazas y
componentes).
135
Muchos integradores tienen la
capacidad de almacenar datos de
calibracin y emiten reportes que dan
informacin de la altura del pico, de los
tiempos de retencin, del rea de los
picos y de la concentracin final de uno
o ms componentes de la muestra,
utilizando cualquiera de los tcnicas
presentadas anteriormente.
136
COMPARACIN DE LAS MEDIDAS
DEL TAMAO DEL PICO
McNair y Bonelly. (Basics Gas Cromatography, Varian
Aerograph. Walnut Creek, C.A. 1968. p. 156), Reportaron
un estudio comparando diversas
tcnicas de medida de reas en un
sistema cromatogrfico.
Ellos analizaron una mezcla de ocho
componentes (hidrocarburos).
137
La desviacin estndar de 10 rplicas
utilizando los diferentes tcnicas se
registr en el cuadro siguiente.
Mezcla: propano, isobutano, n-butano,
1-buteno, isobuteno, trans-2- buteno,
cis-2-buteno, 1,3-butadieno.
138
Tcnica de medida

Precisin
Desviacin estndar
relativa (%)

Tiempo (minutos)

Planmetro

4.06

45-60

Triangulacin

4.06

45-60

Altura por ancho a la mitad de
la altura


2.58


50-60

Cortado y pesado

1.74

100-200

Integracin de disco

.29

10-20

Integrador electrnico

0.44

5-10

139
ANLISIS CUANTITATIVO
CLCULOS
140
1. Medida del tamao (rea o altura) de
los picos (por cualquier tcnica).
2. Convertir el tamao del pico en una
medida de la cantidad de soluto o
componente particular en la muestra.
3. Conocer la cantidad de muestra
inyectada para ser analizada.
4. La composicin de la muestra se
determina relacionndola con el
tamao del pico de una cantidad
conocida de patrn o estndar.
141
Tres tcnicas analticas de
estandarizacin son utilizadas y
en cada una se utilizan
estndares.
142
1. Normalizacin de reas
Normalizacin interna
2. Estandarizacin interna
3. Estandarizacin externa
143
1. NORMALIZACIN INTERNA.
Por normalizacin interna o
normalizacin de rea, se entiende el
clculo de la composicin porcentual de
la mezcla, mediante la medicin del
rea de cada pico referida al rea total
de los picos:

i
i
i
A
p x100
A
=

144
donde P
i
representa el tanto por ciento
de cada componente en la mezcla, y A
i

el rea de cada pico.
145
La aplicacin de este mtodo supone
dos situaciones:
1. En el cromatograma se encuentran
registrados los picos de todos los
componentes de la muestra
problema, por lo tanto la suma de
sus reas es 100.
2. La respuesta del detector a todos los
componentes de la muestra es la
misma.
146
Como en la prctica esto no ocurre
as, se hace necesario compensar las
diferencias, introduciendo un factor de
correccin:



donde f
i
es el factor de rea en
mg/cm
2
i i
i i
f A
x100
f A
i
p =

147
Los factores de correccin o factores de
respuesta, se determinan inyectando
cantidades conocidas de compuestos
puros o estndares y calculando la
relacin porcentual en peso para cada
componente:
i
i
i
p
f
A
=
148
En la prctica se registran
cromatogramas de una mezcla patrn
que contiene un peso w
i
de cada
componente que da lugar a un rea A
i



i i
i
i i
w A
f
w A
= =

149
A partir de los factores de correccin de
cada componente, se calcula el tanto por
ciento corregido:


'
i i
f
i
p p =
150
Ejemplo:
Supongamos una muestra que contiene
4 componentes A, B, C y D de la cual
queremos calcular su concentracin, o
sea su composicin porcentual.
En primer lugar se prepara un estndar
por adicin de pesos conocidos de los
componentes A, B, C y D puros, se
calcula su porcentaje en peso.
151
Luego, se corre el cromatograma del
estndar, en el cual se registra el rea
de cada pico, segn los datos
siguientes:
152
ESTNDAR
Comp. Peso(g) rea del
pico

%Peso %rea %Peso-
rea
Factor de
respuesta
(f)
A 0.3786 4231 21.74 22.41 0.005138 1.000
B 0.4692 5087 26.94 26.94 0.005296 1.031
C 0.5291 5691 30.38 30.14 0.005338 1.039
D 0.3648 3872 20.94 20.51 0.005408 1.053
Total 1.7414 18881 100.00 100.00
153
Ahora se inyecta la muestra problema y
se obtiene el cromatograma, el cual
registra las reas de los picos, segn los
datos siguientes:

154
MUESTRA
Comp. rea del pico Factor de respuesta
(f)
rea x f %Peso
A 3862 1.000 3862 19.66
B 5841 1.031 6022 30.66
C 4926 1.039 5118 26.06
D 4406 1.053 4639 23.62
Total 19035 _______ 19641 100.00
155
Otro ejercicio:
Calcular el % en peso de cada componente para
una mezcla de alcoholes n-butlico, iso-butlico,
sec-butlico y ter-butlico, de cuyo cromatograma
se obtuvieron las siguientes reas de picos:
1.731, 3.753, 2.845 y 1.117 cm
2
.
Para la obtencin del factor de respuesta se
inyectaron las siguientes cantidades de patrones
y se obtuvieron de los cromatogramas las reas
relacionadas a continuacin: n-butlico 0.1731g,
3.023 cm
2
; iso-butlico 0.1964g, 3.074 cm
2
;
sec-butlico 0.1514g, 3.112 cm
2
y ter-butlico
0.1826g, 3.004 cm


156
2. ESTANDAR EXTERNO
Es un mtodo de cuantificacin muy
utilizado en Cromatografa en general.
Consiste en preparar estndares de
concentracin semejante al analito en la
muestra y realizar en ensayo cromato-
grafico del estndar y de la muestra en
las mismas condiciones operativas.
157
Se establece una relacin directa entre el
rea del pico y la composicin de uno o
mas componentes de la muestra.
La concentracin del analito se determina
comparando el rea del pico en cuestin
con el rea correspondiente al estndar de
referencia.

100
m S
S
A C
p
A
=
158
La concentracin del analito en la
muestra puede obtenerse matemtica-
mente, por aplicacin de la frmula, o
bien, grficamente, utilizando para ello
una curva de calibracin.
El tamao del pico (rea) se grafica
contra la cantidad absoluta de cada
componente o su concentracin en la
matriz. CALIBRACIN ABSOLUTA
159
CALIBRACIN ABSOLUTA
En este mtodo se calcula la relacin
entre el rea o altura del pico y la
cantidad de muestra inyectada.
Este tipo de calibracin se emplea
mucho en la Industria en equipos
automticos y en Laboratorio para
calcular recorridos lineales de respuesta
de los detectores.
160
El mtodo consiste en construir una
curva de calibracin a partir de las
reas o alturas de los picos generados
por la inyeccin de cantidades exactas
de un compuesto puro o patrn.
Se grafica peso de componente contra
rea o altura del pico y se obtiene una
curva de calibracin que debera pasar
por el origen (no hay muestra, no hay
respuesta).

161
Luego se inyecta una cantidad exacta
de la muestra problema, se mide su
rea o altura del pico y a partir de la
curva de calibracin se calcula la
cantidad de muestra presente en el
problema.
100 x
inyectados gramos
rea
g
A x de rea
A de %peso =
162
Peso del componente
rea del pico
163
DESVENTAJAS DE LA
CALIBRACIN ABSOLUTA
Debe conocerse la cantidad de muestra
inyectada.
Se requiere algn tiempo considerable
para la calibracin.
La sensibilidad del detector debe
mantenerse constante.
164
3. ESTNDAR INTERNO
Calibracin Relativa o Indirecta.
Cuando no se han registrado todos los picos
en el cromatograma, no es vlida la
normalizacin de rea.
Para la determinacin de la composicin
porcentual de los componentes, entonces se
pude utilizar el mtodo del estndar interno,
el cual permite calcular exactamente el tanto
por ciento de los componentes o de algn
componente particular de inters.
165
El mtodo del estndar interno consiste
en agregar cantidades exactamente
medida de una sustancia as
denominada, la cual no se encuentra en
la muestra, tanto a la muestra, como a
un estndar que contiene el analito,
preparado con la misma concentracin
de la muestra.
166
Con los datos de las reas de los picos
expresados en el cromatograma y
conociendo los pesos de la muestra y
del estndar, se puede determinar el
factor de respuesta o factor de
correccin y el porcentaje de un
componente determinado en la muestra
problema.

167



p es el porcentaje del analito, R
m
y R
s

son las relaciones de rea de analito a
estndar interno en la muestra y el
estndar respectivamente y C
s
es la
concentracin del estndar.

100
m s
s
R C
p
R
=
168
En el ejemplo anterior: supngase que
solo el componente C es el compuesto
de inters y que la muestra problema
no contiene el componente A.
169
Estandarizacin Interna
Comp. Peso (g) rea Relacin de
peso C/A

Relacin de
rea C/A

f= Relacin
rea/Relacin
peso
A 0.3786 4231
1.398 1.345 0.962
C 0.5291 5691
170
Se observa que:






C
C A
C
A C
A
C C
A A
A
A W A
W
A W
W
W A
W A
A
f
f
= =
=
171
donde: W
C
y W
A
son los pesos de C y A
respectivamente; A
C
y A
A
las reas de C
y A respectivamente y f el factor de
respuesta.

172
Como el peso del patrn A es conocido,
el peso de C en la muestra puede ser
calculado:


Y como el peso de la muestra es
conocido:
C A
C
A
A .W
W
A .f
=
x100
muestra la de Peso
W
%C
C
=
173
Ejemplo:
Suponga que 100 mg de un estndar
interno, se adicionan a 1.00 g de la
muestra que contiene tres componentes.
El cromatograma muestra las reas (en
unidades arbitrarias) para los
componentes y el estndar en el siguiente
orden: A
1
: 27, A
estd
: 80, A
2
: 20, A
3
: 70 y
la suma de las reas: 197.
Cul ser la cantidad del componente 3
en la muestra?
174
Solucin:








| |
=
|
\ .
| |
= =
|
\ .
| |
= =
|
\ .
3
3
70
100 mg 87.5
80
87.5 g
% del componente 3 100 8.75%
1000 g muestra
est
est
A
W W
A
W mg
175
El clculo tambin se puede hacer
grficamente, construyendo una curva de
calibracin, en lo que se denomina

CALIBRACIN RELATIVA O INDIRECTA.

176
En la prctica se preparan varios
estndares del compuesto A y C por
ejemplo, y se construye un grfico de la
relacin de rea en la ordenada y la
relacin de peso en la abcisa.
El grfico debe ser lineal para el
sistema particular y la pendiente de la
curva es el factor de respuesta f
i
.
177
Ejemplo:
A una muestra problema de 5mL se
aaden 5mL de una disolucin que
contiene el patrn a una concentracin
de 100 g/mL. Despus de realizar la
cromatografa de la muestra, se
observa que la relacin de las reas es
8. Cul es la concentracin de la
sustancia en la muestra?
178
Solucin:
Al construir la curva de calibracin, se
observa que si la relacin de reas es 8, la
relacin en peso es 7.

179
0 2 4 6 7 8 10 12
2
4
6
8
10
12
Peso
(componente/patrn)
rea
(componente/patrn)
180
Solucin:
Como la concentracin del patrn es
100g/mL, entonces la concentracin del
componente es 700g/mL.

Como se agregan 5mL de la solucin
estndar, entonces la cantidad total de la
sustancia desconocida es:
5 mL x 700 g/mL=3500 g 3.5 mg
del volumen de la muestra original.
181
El mtodo del estndar interno requiere
de patrones de referencia y del uso de
otra sustancia, el estndar interno, cuya
pureza no tiene que ser tan controlada
como la del patrn de referencia, pero
debe cumplir algunos requisitos.
182
REQUISITOS PARA EL ESTNDAR
INTERNO.
El patrn interno debe cumplir las
siguientes condiciones:
1. No debe estar presente en la muestra.
2. Debe tener similitud estructural con la
sustancia que se determina.
3. Debe tener una concentracin aproximada
a la sustancia que se determina.
4. Debe resolverse completamente
5. Debe ser estable y qumicamente inerte.
( )
1.5
S
R >
183
REQUISITOS PARA EL ESTNDAR
INTERNO.
6. Debe responder en forma semejante al
analito con el detector seleccionado.
7. Eluir lo ms cerca posible del componente
de inters e idealmente antes del ltimo
pico de la muestra.
8. Ser lo suficientemente no voltil para que
permita su almacenamiento y conservacin
cmo estndar por un perodo de tiempo
significante.
184
EJEMPLO DE APLICACIN
En una separacin por CG, se prepararon
estndares cuya composicin y reas
obtenidas del ensayo cromatogrfico,
fueron las siguientes, en el orden de
aparicin en el cromatograma:
Pico 1: 20.5 g/100 mL, 10580 unidades
Pico 2: 11.0 g/100 mL, 5370 unidades
Pico 3: 40.5 g/100 mL, 21582 unidades
185
El ensayo cromatogrfico de la muestra,
mostr las siguientes reas:
Pico 1: 10477 unidades
Pico 2: 5293 unidades
Pico 3: 24033 unidades
Calcular la composicin porcentual de la
muestra, haciendo uso de los tres
mtodos considerados.