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Mtodos ortogonales secundarios para asegurar la separacin de todas las impurezas y sustancias desconocidas Un mtodo nico para productos de diferentes formulaciones y concentraciones
cualitativo
Cuantitativo
preparativo
Linealidad 50-150%
Resolucin >1.5
Precisin <1-2%
Especificidad
Sensibilidad
Recopilacin de informacin
Detector de UV/Vis Detector de ndice de refraccin (RI) Detector evaporativo de dispersin de luz (ELSD) Espectrometra de masas (MS)
Columna C18 o C8 Empaquetadas con 3-5micras de slice Las dimensiones de la columna se sugieren las siguientes:
50-100 mm 4,6 mm d.i . para muestras simples (por ejemplo, ensayos de un componente principal) 100-150 mm 3.0-4.6 mm d.i. para las pruebas de pureza o pruebas multi-componente de una muestra compleja 20-150 mm 2,0 mm columnas para LC / MS
Lograr una resolucin adecuada de todos los analitos con suficiente precisin y sensibilidad en un plazo de tiempo razonable. Obtener las condiciones de separacin iniciales. Ajustar cada parmetro para cumplir todos los objetivos requeridos.
1. 2.
La co-elucin de los analitos se corrigen mediante el ajuste de los parmetros de separacin, principalmente la selectividad
Se debe de tomar en cuenta que se tienen que mejorar otras medidas del mtodo tales como la sensibilidad, la forma del pico, robustez, y el tiempo de anlisis, este proceso es anlogo a la validacin del mtodo.
Parmetros modificados:
En la fase mvil porcentaje disolvente orgnico (B%) tipo de buffer y la concentracin pH tipo de disolvente
La fase mvil controla la retencin y la selectividad, esta se puede ajustar continuamente para mejorar el mtodo
La reduccin de la fuerza disolvente puede dar lugar a la distorsin de la forma de pico causada por la baja solubilidad de los analitos en las fases mviles.
Los buffers en la fase mvil se requieren para controlar la separacin de analitos cidos o bsicos. Las concentraciones de buffers de 1025 mM niveles suelen ser suficientes. Tampones voltiles (formiato, acetato, carbonato, bicarbonato, amonaco) son necesarios para la MS.
Parmetros de funcionamiento
En un anlisis isocrtico no afecta mucho a retencin (k *) y la selectividad (), pero en gradiente si lo hace
El aumento de la temperatura de la columna (T) generalmente reduce la retencin en RPC y puede tener algunos efectos en la selectividad Tg es tiempo de gradiente, que junto con (rango de porcentaje del disolvente fuerte ) define la pendiente de gradiente.
Column a
Tradicionalmente, C8, C18, ciano y fenilo dan selectividad distinta Dimensin de columna (L, dp, dc) tambin se puede optimizar para mejorar la eficiencia, la velocidad o la sensibilidad. El uso de software de simulacin es particularmente til para encontrar la dimensin de columna ptima para una separacin.
Factor Columna
Sugerencias y comentarios Columnas modernas empaquetadas con C8 o fases C18 de 3 o 5 micras de slice de alta pureza El uso de PDA para evaluar max de todos los analitos. Seleccione max del componente principal o de gran longitud de onda UV (200-230nm). MPA: Agua para analitos neutros o acidificadas a pH 2-4 para analitos cidos o bsicos MPB: MeOH o ACN Uso de gradiente para la evaluacin inicial Evaluar un primer cromatograma para definir rango del gradiente . Establecer T = 30 C, F est definida por dC Evaluar mtodo con un "cctel" de impurezas y placebo. Modificar tipo de disolvente pH, T y TG para mejorar la resolucin
Fase mvil
Funcionamiento Condiciones
Mtodo de desarrollo y optimizacin Mtodos Isocrticos o de gradientes Fase mvil y las condiciones de operacin
Detector y muestra
Cuando la solicitud De amplio gradiente. de un nuevo Compatible con SM frmaco est Respaldado por un mtodo secundario bloqueda (ortogonal)
Neutro
Alcalino
Impurezas
Frmaco con 2 APIs Fases mviles con alto pH y optimizacin de pH, modificador orgnico y columna