Problemas de enzimas

Modelo de la reaccin)
Segn la hiptesis del estado estacionario, la [ES] es pequea y constante a lo largo de la reaccin
Leonor Michaelis (1875-1949)

sustrato producto

ES
Maud Menten (1879-1960)

enzima

Modelo cintico de Michaelis-Menten

Problemas de enzimas
Cuando la [S] es pequea, la reaccin enzimtica es de orden 1 Cuando la [S] es grande, la reaccin enzimtica es de orden 0

Verificacin del modelo cintico de Michaelis-Menten

Problemas de enzimas

Clculo de KM y Vmax

Problemas de enzimas

Estimacin grfica de los parmetros cinticos

Clculo de KM y Vmax

Problemas de enzimas

Representacin doble recproca (1/v vs. 1/[S])

Representacin de Lineweaver-Burk
Representacin de Lineweaver-Burk (doble recproca)

Problemas de enzimas
La estimacin de los parmetros cinticos se hace a partir de una lnea recta y permite calcular KM y Vmax con mayor exactitud

v vs. [S]

1/v vs. 1/[S]

Clculo de KM y Vmax (mtodo alternativo)

Problemas de enzimas
Una enzima que cataliza la reaccin sustrato producto (S P) se ensaya con distintas concentraciones iniciales de sustrato ([S]0), y se anota la correspondiente velocidad inicial (v0). Los valores obtenidos experimentalmente son: a) Determinar la KM y la Vmax que se puede conseguir con la concentracin de enzima utilizada. b) Cul ser la velocidad inicial (v0) a [S]0 de 2,5 10 -5 M; y de 5 10 -5 M? c) Cul ser la v0 a [S]0= 0,02 M? d) Cul sera la v0 a [S]0 de 10 -4 M si se duplica la concentracin de enzima? e) Si la [S]0 fuese de 0,04 M, cul sera la SOLUCIN (sin hacer grfica) concentracin de producto al cabo de 3 a) Vmax = 75 mmoles/L min minutos? c) v0 = 75 mmoles/L min a) KM = 2,5 10 -5 M d) v0 = 120 mmoles/L min b) v0 = 37,5 mmoles/L min e) [P] = 2,25 10 -4 M b) v0 =50 mmoles/L min

Problema 1

Problemas de enzimas
Se mide la velocidad inicial de una reaccin enzimtica (v0) para una serie de distintas [S]0 (en condiciones ptimas de pH, temperatura, fuerza inica, y concentraciones saturantes de sustrato y cofactores). Los datos obtenidos son:

Calcular la KM y la Vmax para el par enzima-sustrato.

SOLUCIN KM = 4 10- 5 M

Vmax = 80 mmoles/L min

Problema 2

Problemas de enzimas
Se mide la velocidad inicial de una reaccin enzimtica (v0) para una serie de distintas [S]0 (en condiciones ptimas de pH, temperatura, fuerza inica, y concentraciones saturantes de sustrato y cofactores). Los datos obtenidos son:

Calcular la KM y la Vmax para el par enzimasustrato.

SOLUCIN KM = 2,13 10- 3 M Vmax = 0,5 mmoles/L min

Problema 3

Problemas de enzimas
Se mide la velocidad inicial de una reaccin enzimtica (v0) para una serie de distintas [S]0 (en condiciones ptimas de pH, temperatura, fuerza inica, y concentraciones saturantes de sustrato y cofactores). Los datos obtenidos son:

Calcular la KM y la Vmax para el par enzimasustrato.

SOLUCIN KM = 9,86 10- 6 M Vmax = 140,8 mmoles/L min

Problema 4

Problemas de enzimas
Un extracto de E. coli, sin clulas contiene 24 mg de protena /ml. Veinte l de este extracto en un volumen de reaccin de 0,1 ml (en condiciones ptimas de pH, temperatura, fuerza inica, y concentraciones saturantes de sustrato y cofactores) catalizan la incorporacin de glucosa al glucgeno con una velocidad de 1,6 moles/min. Calclese la velocidad de la reaccin en (a) moles/min (b) moles/litro min (c) moles/ mg de protena min. Calclese tambin (d) la actividad del enzima en unidades/ml y (e) su actividad especfica.

SOLUCIN
a) v = 1,6 mmoles/min b) v = 16 mmoles/litro min c) v = 3,33 mmoles/mg prot min d) Actividad enzimtica = 80 U/ml e) Actividad especfica = 3,33 U/mg prot

Problema 5

Problemas de enzimas
Un extracto libre de clulas contiene 20 mg de protena por mililitro. Diez litros del extracto en un volumen total de reaccin de 0,5 ml catalizan la produccin de 3 moles totales de producto en un minuto (en condiciones ptimas de pH, temperatura, fuerza inica, y concentraciones saturantes de sustrato y cofactores). Calcular : (a) la velocidad inicial (v0) de la reaccin catalizada por el enzima en moles/litro minuto (b) velocidad en moles/litro minuto si la misma cantidad de extracto (10 l) fuese ensayada en un volumen de reaccin de 1 ml (c) concentracin del enzima en el extracto en unidades por ml (U/ml) (d) actividad especfica del extracto en U/mg de protena.

SOLUCIN
a) v = 6 mmoles/litro min b) v = 3 mmoles/litro min c) Actividad enzimtica = 300 U/ml d) Actividad especfica = 15 U/mg prot

Problema 6