Implementasi alat baru dalam penelitian epidemiologi molekuler Echinococcus

granulosus sensu lato di Amerika Selatan

Héctor G. Avila, Guilherme B. Santos, Marcela A. Cucher, Natalia Macchiaroli, Matías
G. Pérez, Germán Baldi, Oscar Jensen, Verónica Pérez, Raúl López, Perla Negro,
Exequiel Scialfa, Arnaldo Zaha, Henrique B. Ferreira, Mara Rosenzvit, Laura
Kamenetzky

ABSTRAK
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui spesies dan genotipe
Echinococcus granulosus sensu lato pada host intermediat / perantara dan definitif dan
isolat manusia dari daerah endemik Argentina dan Brasil termasuk daerah dimana tidak
terdapat data molekuler dengan menggunakan kombinasi alat molekular klasik dan
alternatif. Sebanyak 227 sampel diisolasi dari manusia, host intermediat alami dan host
definitif. Amplifikasi fragmen subunit cytochrome c oksidase I dilakukan dan sebuah
kombinasi AluI digestion assay, High Resolution Melting (HRM) assay dan sekuensing
DNA diimplementasikan untuk penentuan spesies / genotipe Echinococcus. E.
granulosus sensu stricto (G1) ditemukan pada domba (n = 35), lembu (n = 67) dan
anjing (n = 5); E. ortleppi (G5) pada manusia (n = 3) dan lembu (n = 108); E.
canadensis (G6) pada manusia (n = 2) dan E. canadensis (G7) pada babi (n = 7). Kami
melaporkan untuk pertama kalinya adanya E. ortleppi (G5) dan E. canadensis (G6)
pada manusia dari San Juan dan Catamarca di provinsi Argentina dan E. canadensis
(G7) pada babi dari provinsi Cordoba Argentina. Dalam penelitian ini, kami
memperluas penelitian epidemiologi molekular dari E. granulosus s. l. di Amerika
Selatan dengan menganalisis beberapa isolat dari host definitif dan intermediat,
termasuk manusia dari daerah endemik, informasi semacam itu langka atau tidak
tersedia. Adanya berbagai spesies / genotipe di wilayah dan spesies host yang sama
memperkuat kebutuhan teknik yang cepat dan spesifik untuk penentuan spesies
Echinococcus yang akurat seperti yang diusulkan dalam penelitian ini.
Kata kunci: Echinococcus granulosus sensu lato; Amerika Selatan; genotipe; neglected
disease; echinococcosis
PENGANTAR
Cystic echinococcosis (CE) adalah zoonosis parasit kronis yang disebabkan oleh
tahap larva cestode Echinococcus granulosus sensu lato (s l), yang menyerang manusia,
mamalia domestik dan liar. E. granulosus s. l. membutuhkan dua host mamalia untuk
menyelesaikan siklus hidupnya: host definitif (biasanya anjing atau canidae lainnya)
dan host intermediat (mamalia liar atau ternak) menjadi host aksidental intermediat
manusia. Penyakit yang terabaikan ini endemik di Argentina, Brasil selatan, Uruguay,
Cile dan daerah pegunungan Peru dan Bolivia. Di negara-negara Amerika Selatan,
29.556 kasus manusia dilaporkan antara Januari 2009 sampai Desember 2014 dengan
tingkat kematian 2,9% (820 kematian) dan 3.000 hari rawat inap. E. granulosus s. l.
sekarang dianggap sebagai kompleks yang terdiri dari berbagai spesies dan genotipe.
Beberapa penelitian menunjukkan bahwa beberapa di antaranya berbeda dalam ciri
seperti komponen biokimia, morfologi kait / hook, perkembangan kista fertil pada
infeksi alami dan eksperimental, spesifisitas host intermediat, periode pra-paten,
antigenisitas, dan tingkat infeksi pada manusia (ditinjau dalam [8,9]). Beberapa alat
molekuler telah digunakan untuk analisis polimorfisme pada Echinococcus spp, seperti
restriction fragment length polymorphism (RFLP), multiplex-PCR, high resolution
melting analysis (HRM), loop-mediated isothermal amplification (LAMP), dan
amplifikasi gen PCR diikuti dengan sekuensing. Lokus gen yang paling sering
digunakan adalah gen mitokondria, seperti subunit sitokrom c oksidase 1 (cytochrome c
oxidase / COX1) dan nikotinamida dehidrogenase 1 (ND1). Baru-baru ini, analisis
filogenetik terhadap genom mitokondria lengkap diimplementasikan untuk menentukan
spesies dalam genus Echinococcus. Saat ini, E. granulosus s. l. dianggap genotipe
Echinococcus granulosus sensu stricto (genotipe G1, G2 dan G3), genotipe E. equinus
(G4 genotipe), genotipe Echinococcus ortleppi (genotipe G5), genotipe Echinococcus
canadensis (G6, G7, G8, G10) dan Echinococcus felidis ('strain singa'). Di Argentina,
total enam genotipe yang sesuai dengan tiga spesies beredar di peternakan:
Echinococcus granulosus s. s. G1 pada domba, lembu, kambing, dan babi (49,3%); E.
granulosus s. G2 pada domba dan lembu (1,7%); E. granulosus s. G3 pada domba
(0,3%); E. ortleppi G5 pada lembu (2,6%); E. canadensis G6 pada kambing dan lembu
(8,4%); dan E. canadensis G7 pada babi (37,7%). Pada manusia, tiga spesies yang
sesuai dengan empat genotipe dilaporkan, E. granulosus s. s. G1 dan G2, E. canadensis
G6 dan E. ortleppi G5. E. granulosus s. s. G1 adalah yang paling umum (54,2%, 45/83),
diikuti oleh E. canadensis (36,1%, 30/83). Sampai sekarang, hanya dua kasus E.
ortleppi (G5) pada manusia yang dilaporkan. Meskipun telah banyak jumlah sampel
yang dianalisis selama 10 tahun terakhir di Argentina, masih ada daerah yang tanpa
informasi genetik parasit. Populasi manusia yang tinggal di wilayah ini terkena
peningkatan risiko terinfeksi oleh Echinococcus karena rendahnya tingkat sosio
ekonomi mereka. Di Brasil, analisis genetika pada host intermediat alami hanya tersedia
untuk lembu dan babi. Dari total 815 isolat dari lembu yang ditinjau oleh Cucher dkk,
(2016), 58,2% adalah E. granulosus s. s. G1, 40,9% E. ortleppi G5 dan hanya satu isolat
E. canadensis G7. Pada babi, E. canadensis G7 dideskripsikan pada 3 isolat dan E.
granulosus s. s. G1 dalam dua isolat. Terlepas dari kenyataan bahwa hanya ada sedikit
kasus kistik echinococcosis manusia dengan informasi genotipe dari Brasil (N = 6), dua
spesies ditemukan, E. granulosus s. s. G1 dan E. ortleppi G5. Lebih banyak isolat dari
berbagai spesies dan asal geografis diperlukan untuk menggambarkan secara pasti
situasi epidemiologis echinococcosis di Brasil. Sebelumnya, anggota kelompok kami
telah mengembangkan alat molekuler yang cepat dan efektif berbasis HRM yang
memungkinkan diskriminasi di antara spesies dan genotipe dari genus Echinococcus
(Santos et al., 2013). Dalam penelitian ini, kami bertujuan untuk menentukan spesies
dan genotipe E. granulosus s. l. pada host intermediat, termasuk manusia, dan host
definitif dari daerah endemik Argentina dan Brasil selatan termasuk di antaranya yang
tidak memiliki data molekuler dan untuk mengevaluasi kegunaan teknik HRM dalam
kombinasi dengan alat lain untuk melakukan penelitian epidemiologi.

BAHAN DAN METODE

1. Material parasit
Sebanyak 227 sampel diisolasi dan DNA genomik diperoleh dari isolat segar
atau isolat yang diawetkan pada etanol 70% dari manusia dan hewan yang terinfeksi
secara alami di Argentina dan Brasil selatan. Material dari kista hidatid diamati di
bawah mikroskop cahaya untuk memverifikasi keberadaan protoscoleces. Dalam
penelitian ini, isolat E. granulosus s. l. dari host intermediat mengacu pada lapisan
protoscoleces atau germinal yang diperoleh dari kista hidatid tunggal. Pada host
definitif, isolat mengacu pada satu orang dewasa. Host dan asal geografis isolat yang
dianalisis dalam penelitian ini ditunjukkan pada Tabel 1 dan bahan pelengkap 1.
2. Ekstraksi DNA
Isolasi DNA dari protosoleces dilakukan sebagai berikut: protoscoleces dicuci
tiga kali dalam PBS 1X dan kemudian dilisis dengan 100μl 100 mM Tris-HCl pH 8,
250 mM NaCl, SDS 0,5%, 100 mM EDTA dan 100 μg / mL proteinase K pada 56o C
selama 2 jam. Kemudian, DNA diekstraksi dengan menggunakan metode fenol-
kloroform, disuspensikan kembali ke dalam air bebas nuklease dan disimpan pada suhu
-20◦C. Isolasi DNA sampel dari cacing dewasa atau kista hidatid tanpa protoscoleces
dilakukan dengan DNeasy Blood & Tissue Kit® (QIAGEN) mengikuti petunjuk dari
pabrik. Konsentrasi DNA ditentukan dengan menggunakan Nanodrop 2000 dan
integritas DNA dinilai dengan elektroforesis dalam gel agarose 1,5% yang diwarnai
dengan GelRed® (Biotium). DNA yang dipersiapkan dari semua sampel yang dianalisis
tidak terdegradasi.
3. Genotip
3.1 Amplifikasi fragmen subunit sitokrom c oksidase I (cox1)
Amplifikasi gen COX1 mitokondria dibuat dengan PCR berdasarkan [19]
namun dengan sedikit modifikasi seperti yang dijelaskan pada [5]. Secara singkat,
fragmen gen cox 1 441bp diamplifikasi dengan menggunakan primer yang dijelaskan
pada (5): 5-TTTGGGCATCCTGAGGTT-3 (forward) dan 5 -
TAAAGAAAGAACATAATGAAAATG-3 (reverse) dalam campuran reaksi berikut:
30 ng DNA template, 5 mM dNTP, 5 pmol masing-masing primer, 1,2 mM MgCl2, 1 U
Taq DNA polimerase (Invitrogen, AS), 20 mM Tris-HCl (pH 8,4), 50 mM KCl, 2,5 μM
SYTO 13 (Life technologies®) dalam volume total 20 μL. PCR dilakukan pada 7500
thermal cycler (Applied Biosystems®) dengan strategi touchdown annealing primer,
dimulai dengan 55° C dan diturunkan 1° C setiap dua siklus selama 20 siklus pertama,
diikuti oleh 15 siklus lebih lanjut pada suhu 45° C, semua selama 30 detik. Langkah
denaturasi pertama (95° C) berlangsung 5 menit, dan 30 detik pada siklus yang tersisa.
Ekstensi dilakukan pada 72° C selama 60 detik dalam 34 siklus pertama dan selama 5
menit pada siklus terakhir.
3.1 AluI digestion assay
 Sebanyak 5μl produk PCR COX1 mengalami digesti dengan 4U AluI
(Invitrogen), 1X Buffer Tango dalam volume akhir 10μl. Sampel diinkubasi pada suhu
37o C selama 3,5 jam; langkah inaktivasi akhir dilakukan pada suhu 65° C selama 30
menit. Produk digesti enzim divisualisasikan dengan elektroforesis dalam gel agarose
3% yang diwarnai dengan GelRed® (Biotium).
3.2 High Resolution Melting Analysis
Produk PCR cox1 yang diperoleh diolah dengan teknik HRM menggunakan
7500 Fast (Applied Biosystems®). Dalam uji ini peleburan dilakukan dengan
meningkatkan suhu dari 60° C menjadi 99° C dengan ramping increment dari 0,05° C /
detik. Analisis HRM dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak HRM dari
Applied Biosystem (versi 3.0.1) dengan daerah normalisasi antara 79,1-79,4° C dan
87,1-87,4° C. Perbedaan kurva melting dibuat dengan E. canadensis (G7) sebagai
baseline.
3.3 Sequencing
Penentuan genotipe / spesies E. granulosus s. l. dilakukan dengan mengurutkan /
sequencing fragmen cox1 mitokondria. Sequencing dengan metode Sanger dilakukan
pada Macrogen (Macrogen, Korea Selatan). Sekuens diurutkan sesuai dengan urutan
genotipe referensi: M84661 (G1), M84662 (G2), M84663 (G3), M84664 (G4), M84665
(G5), M84666 (G6), M84667 (G7), AB235848 (G8) dan AF525457 (G10)
menggunakan perangkat lunak Clustal X dan diedit secara manual dengan perangkat
lunak BioEdit. Penentuan jenis genotipe / spesies dilakukan dengan metode Maximum
Likelihood menggunakan perangkat lunak MEGA6. Matriks jarak dibuat dan trees yang
diperoleh dievaluasi dengan bootstrap pada 500 replikat. Nilai nodus sesuai dengan data
yang diperoleh pada lebih dari 50% replikat.
4. Spesies / genotipe Echinococcus dan kepadatan ternak
Hubungan antara kelimpahan masing-masing spesies / genotipe Echinococcus
dan kepadatan ternak dianalisis dengan menggunakan uji korelasi Spearman, dan nilai-
nilai ini divisualisasikan sebagai diagram bintang. Data kepadatan ternak dikumpulkan
pada unit subnasional orde kedua (Departemen atau Kotamadya) dari Dirección de
Análisis Económico Pecuario, Dirección Nacional de Estudios y Análisis Económicos
del Sektor Pecuario (2016) Existencias Ganaderas. Buenos Aires, Argentina: Dirección
Nacional de Sanidad Animal (SENASA) dan Instituto Brasileiro de Geografia e
Estatística (IBGE) (2013) Pesquisa Pecuária Municipal 2013.

HASIL
Sebanyak 227 sampel dari manusia, lembu, babi, domba dan anjing dianalisis.
Kami menggunakan kombinasi tiga metode dari sekuens gen cox1 untuk penentuan
molekul spesies Echinococcus (Gambar 1). E. granulosus s. s. (G1) ditemukan pada
domba (n = 35), lembu (n = 67) dan anjing (n = 5); E. ortleppi (G5) pada manusia (n =
3) dan lembu (n = 108); E. canadensis (G6) pada manusia (n = 2) dan E. canadensis
(G7) pada babi (n = 7) (Tabel 1).
AluI digestion assay dapat membedakan E. granulosus s.s. dari spesies
Echinococcus lainnya karena adanya situs AluI pada sebagian besar E. granulosus s. s.
(G1-G3) cox1 yang dilaporkan sejauh ini. Fragmen DNA yang diperoleh setelah digesti
cox1-AluI adalah dua produk masing-masing 208 bp dan 233 bp (Gambar 2A).
Sebanyak 219 sampel dianalisis dengan AluI deigestion dan 99 sampel (45,2%) di
antaranya menunjukkan dua pita yang menunjukkan adanya E. granulosus s. s. (G1-G3)
dan memungkinkan kita untuk mengasumsikan bahwa 54,8% (120 sampel) sampel yang
dianalisis bukan bagian dari spesies E. granulosus s. s. Kemudian, dengan HRM assay
tiga kurva melting diperoleh, masing-masing milik E. granulosus s. s, E. ortleppi, dan
E. canadensis (Gambar 2B), memungkinkan identifikasi pada tingkat spesies. Sebanyak
215 sampel berhasil diidentifikasi dengan metode ini (bahan pelengkap 1) yang
menunjukkan potensi teknik HRM untuk penelitian epidemiologi dengan jumlah sampel
tinggi. Terakhir, semua sampel manusia dan subset isolat dari hewan, dengan total 36
sampel, dikonfirmasi dengan sekuens cox1. Hasil penelitian menunjukkan bahwa 66,7%
(24/36) isolat yang dianalisis berasal dari E. granulosus s.s. (G1), 8,3% (3/36) dari E.
ortleppi (G5), 5,6% (2/36) E. canadensis (G6) dan 19,4% (7/36) E. canadensis (G7)
(Gambar 2C) sesuai dengan digesti AluI dan HRM (bahan tambahan 2). Teknik
alternatif, uji digesti AluI dan HRT, yang digunakan dalam penelitian ini berguna untuk
identifikasi spesies / genotip dalam waktu kurang dari 48 jam. Asal geografis dan host
sampel juga dianalisis. Menariknya, sampel yang diperoleh representatif terhadap
daerah Argentina dan Brasil Selatan yang luas (Gambar 3). Dalam penelitian ini kami
melaporkan untuk pertama kalinya adanya E. ortleppi (G5) dan E. canadensis (G6)
pada kasus manusia dari provinsi San Juan dan Catamarca. Juga, ini adalah pertama
kalinya adanya E. canadensis (G7) pada babi dilaporkan di provinsi Cordoba.
Analisis korelasi antara spesies / genotipe E. granulosus s.l. dan kepadatan
ternak (Gambar 4 dan bahan pelengkap 3) menunjukkan bahwa E. granulosus s. s. (G1)
terdapat di daerah dengan kepadatan domba yang tinggi (koefisien korelasi = 0,68),
mendukung peran utama spesies ternak ini sebagai host intermediat. Di sisi lain, daerah
dimana kami menemukan E. ortleppi (G5) memiliki kepadatan lembu dan domba yang
tinggi (koefisien korelasi = 0,45 dan 0,33, masing-masing), keduanya sebelumnya
digambarkan sebagai host paling sering dari spesies parasit ini. E. canadensis (G6),
ditemukan pada manusia, berkoinsidensi dengan distribusi ternak kambing dan unta
Amerika (walaupun koefisien korelasi tidak signifikan mungkin karena rendahnya
jumlah sampel dari spesies ini dalam kumpulan data kami. Terakhir, E. canadensis (
G7) ditemukan di daerah dengan kepadatan babi yang tinggi (koefisien korelasi = 0,46)
seperti yang telah dijelaskan, tetapi juga di daerah dengan kepadatan unta Amerika yang
tinggi yang mendorong penelitian baru tentang peran unta Amerika Selatan sebagai host
intermediat dari spesies / genotipe ini.

DISKUSI
Sampel E. granulosus s. l. dari host intermediat (termasuk manusia) dan host
definitif dan daerahnya diidentifikasi dalam penelitian ini. Sampel yang dianalisis
mewakili variabilitas yang luas di wilayah Argentina dan Brasil selatan. Di sini kami
melaporkan untuk pertama kalinya adanya manusia yang terinfeksi E. ortleppi (G5) dan
E. canadensis (G6) di provinsi San Juan dimana tidak ada data epidemiologi molekuler
sebelumnya yang diterbitkan. Ini juga merupakan laporan pertama E. ortleppi (G5) pada
manusia yang terinfeksi di Provinsi Catamarca. Hasil ini menunjukkan perlunya
memperluas repertoar genotip kista hidatid dari rumah pemotongan hewan (host
intermediat) dan cacing dewasa dari pembersihan arecoline / feses yang dikumpulkan
(host definitif) untuk menentukan apakah siklus hidup spesies ini terdapat di San Juan
dan Catamarca. Jenis penelitian ini harus diperluas ke semua provinsi dimana genotipe
yang beredar tidak diketahui, atau dimana data masih langka, seperti di provinsi
Cordoba dimana adanya E. canadensis (G7) pada babi sebelumnya tidak diketahui.
Hasil yang diperoleh dari provinsi lain yang dianalisis (Santa Fe, Buenos Aires,
Catamarca dan Chubut) konsisten dengan yang dilaporkan sebelumnya. Juga untuk
isolat yang dikumpulkan dari Brasil, spesies / genotipe yang diperoleh di sini konsisten
dengan yang dijelaskan oleh [32].
Dalam penelitian ini kinerja HRM dan AluI digestion assay, sebagai alat
alternatif untuk sequencing juga dievaluasi. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa
ini adalah teknik yang cepat dan efektif yang memungkinkan identifikasi E. granulosus
s. s. (G1-G3), E. ortleppi (G5), dan E. canadensis (G6-G7) dalam jumlah sampel tinggi
(lebih dari 200) dari lokasi yang berbeda. Selain itu, AluI digestion assay
memungkinkan identifikasi cepat spesies E. granulosus s. s. dengan konsentrasi DNA
rendah yang memungkinkan analisis sampel dengan beberapa bahan parasit yang
tersedia. Sementara teknik ini memungkinkan identifikasi E. granulosus s. s. yang cepat
dan sederhana, namun gagal untuk membedakan spesies ketika tidak terdapat situs AluI
dalam sekuens cox1, seperti pada haplotypeΩ E. canadensis, E. ortleppi dan beberapa
E. granulosus s. s. dengan mutasi pada situs AluI. Untuk alasan ini, disini kami
mengusulkan bahwa alat ini dapat digunakan sebagai skrining cepat, diikuti dengan
analisis kurva sekuensing atau HRM jika negatif (sekuens tanpa situs AluI). Dari
temuan ini, sebuah protokol identifikasi molekuler spesies / genotipe termasuk teknik
alternatif yang digunakan dalam penelitian ini diusulkan (Gambar 1). Sebuah poin
penting adalah bahwa alat alternatif yang dikembangkan / dievaluasi dalam penelitian
ini memungkinkan identifikasi sampel Echinococcus kurang dari 48 jam.
Berbeda dengan laporan sebelumnya, kasus manusia yang dianalisis dalam
penelitian ini tidak menunjukkan spesies utama yang menginfeksi manusia di seluruh
dunia, E. granulosus s. s. (G1), namun menunjukkan E. canadensis (G6) dan E. ortleppi
(G5) sebagai agen penyebab echinococcosis (Tabel 1). Mengkhawatirkan bahwa semua
kasus manusia berasal dari orang muda (7, 9, 12, 20 dan 29 tahun) yang menunjukkan
bahwa parasit ini secara aktif menginfeksi manusia di Argentina. Terutama, E. ortleppi
(G5) dianggap kurang menginfeksi manusia karena hanya ada sembilan kasus manusia
yang dilaporkan sejauh ini. Penemuan tiga kasus manusia baru dari spesies ini,
sayangnya anak-anak, menunjukkan bahwa itu adalah spesies yang muncul di Amerika
Selatan. Di provinsi Catamarca kasus anjing dengan E. ortleppi (G5) dan E. canadensis
(G6) dan manusia dengan E. canadensis (G6) dilaporkan. Diketahui bahwa kambing
adalah hospes intermediat dari E. canadensis (G6), namun, juga dapat bertindak sebagai
reservoir E. ortleppi (G5) karena 3 ekor kambing dari Kenya telah ditunjukkan memiliki
kista fertil dari spesies parasit ini. Akan menarik untuk mengevaluasi kambing dari
provinsi Catamarca untuk menjelaskan situasi epidemiologi di wilayah pegunungan
provinsi ini dengan kepadatan kambing yang tinggi. Juga, situasi epidemiologis serupa
dapat ditemukan di provinsi San Juan, di mana manusia dapat terinfeksi E. ortleppi
(G5) dan E. canadensis (G6) dan kambing adalah spesies ternak yang paling umum. E.
canadensis (G6), ditemukan pada manusia, bertepatan dengan distribusi ternak kambing
dan unta Amerika. Dengan demikian, akan menarik untuk menganalisis lebih banyak
manusia dan ternak dari wilayah yang sama untuk mengevaluasi apakah spesies host ini
adalah reservoir alami E. canadensis (G6), seperti yang kami tunjukkan sebelumnya.
Juga, penting untuk meningkatkan jumlah analisis sampel dari unta Amerika Selatan,
untuk menyimpulkan apakah binatang ini bertindak sebagai reservoir E. granulosus s. s
(G1), seperti yang telah dijelaskan di 4 alpacas di Peru; atau beberapa spesies lain
seperti E. canadensis (G6-G7), seperti yang dilaporkan untuk unta Timur Tengah yang
diulas di [8]. Sampel yang dianalisis dari Brazil mengkonfirmasi hasil yang diperoleh
Balbinotti dkk. (2012) yang mengindikasikan bahwa lembu mengandung E. ortleppi
(G5) dan E. granulosus s. s. (G1). Sayangnya, tidak ada kasus manusia yang masuk akal
untuk diambil sampel dari negara ini namun mengingat adanya E. ortleppi (G5) pada
manusia dari Argentina, lembu harus dianggap sebagai reservoir Echinococcus yang
aktif dan upaya pengendalian yang lebih besar harus diterapkan pada jenis ternak ini.
Juga, lebih banyak spesies ternak dari provinsi San Juan dan Catamarca harus dianalisis
untuk menentukan semua reservoir alami E. ortleppi (G5) yang mungkin.
Diketahui bahwa variasi intraspesifik terdapat pada genotipe E. granulosus s. l.
dapat mempengaruhi pola siklus hidup seperti spesifisitas host, kecepatan
perkembangan, patogenisitas dan antigenisitas. Hal ini mungkin memiliki konsekuensi
penting dalam perancangan dan pengembangan vaksin, strategi diagnostik dan terapi
dan penerapan program pengendalian echinococcosis. Selain itu, penting untuk
memperluas pengetahuan epidemiologis dan molekuler masing-masing daerah. Semua
jenis kemajuan dalam memahami epidemiologi molekuler, mengingat keragaman
genetik yang menghadirkan masing-masing spesies, dapat membantu program
pengendalian untuk menerapkan alat yang kuat melawan spesies yang mempengaruhi
setiap wilayah geografis. Dalam penelitian ini, kami menunjukkan kemungkinan
melakukan penelitian epidemiologi molekuler dengan menggabungkan teknik klasik
dan alternatif yang memberikan informasi mendasar untuk dipertimbangkan dalam
program pengendalian echinococcosis kistik.

Diterjemahkan dari:
Avila et al. Implementation of new tools in molecular epidemiology studies of
Echinococcus granulosus sensu lato in South America. Parasitology International:
2016. 10.1016/j.parint.2017.02.001