MHLW Japan Notification No. 499

Provisional Translation from Japanese Original
Ministry o f Health, Labour and Welfare Notification No. 499

The Minister of Health, L ab o u r and We l f a r e has partially revised th e
S p e c i f i c a tio n s a n d Stan d a r d s f o r F o o d , F o o d A d d i t i v e s , E t c . ( M i n i st r y o f H e a l t h a n d We l f a re N o t i f i c a tio n N o . 37 0 , 1 9 5 9 ) , a s g i v e n b e lo w, b a s e d o n th e p r o v i s i o n o f P a r a g r a p h 1 , A r t i cl e 11 o f t he F o o d S a n i t a t io n L a w; t h i s r e v i si o n w i l l tak e e ff e c t o n Ma y 2 9 , 2 0 0 6 . N o t w i t h s t an d i n g th i s n o ti f i c a tio n , f oo d p r o d u ct s th a t a r e ma n u f a c tu r ed o r p r o c e s s e d o n o r b e f or e M a y 2 8 , 2 0 0 6 ma y o b s e r v e th e e x i st i n g r e g u l a ti o n s , i n s t e ad o f th e r e g u l a t io n s t o b e ap p l ie d f r o m t h e g i v en d a t e . N o v e mb e r 2 9 , 2 0 0 5 Jiro Kawasaki M i n i s te r o f H e a l t h , Lab o u r an d We l f a r e
I t e m 1 i n S e c t i o n A G e n e r a l Co m p o s i t io n a l Sta n d a r d s f o r Fo o d , P a r t I F o o d s h a l l b e r ev i s e d a s f oll o w s : 1 . F o o d s s h a l l n o t c o n ta i n any a n t i b i ot ic s o r c h e mi c a l l y s y n t h e s iz e d a n t ib a c te r i a l s u b s ta n c e s ( s u b s t an c e s o b t ain e d b y i n st i g a ti n g c h e mi c a l r e a c t i o n s to e l e me n t s a n d /o r co mp o u n d s t h r o u g h c h e mi c a l me t h o d s , e x c e p t f o r d e co mp o s i t i o n ; t h i s a p p li e s h e r e i n a f t e r i n t h i s p a r a g r a p h ) , e x c e p t f o r th e f o l lo w i n g c a s e s : ( 1 ) W h e n t h e s u b s tan c e c o n c e rn e d i s id en t i c al t o th e f o o d ad d i ti v e d e t e r mi n e d b y th e M i n i s t e r o f H e al t h , L a bo u r a nd We l f a re a s h a vi n g n o p o t en t i al t o c a u s e d a ma g e t o h u ma n h e a lt h u n d e r A r t i c le 1 0 o f t h e F o o d S a n i t a ti o n L a w ( L a w N o . 2 3 3 , 1 9 4 7 , h e r e in a f t e r t h e L a w ) . ( 2 ) W h e n co mp o s i t i o n a l s t an d a r d s a r e s e t f o r t h in 5 , 6 , 7 , 8 o r 9 b el o w f o r the substance concerned. ( 3 ) W h e n th e f o o d p r o d u c t c o n c e rn e d h a s b e en ma n u f a c t u r e d o r p r o c e s s e d u s i n g a f o o d in g r e d ie n t t h a t me e t s t h e c o mp o s i t i o n a l s tan d a r d s g i v en in 5 , 6 , 7 , 8 o r 9 b e l o w ( e x c e p t f o r f o o d s c o n ta i n in g a n t ib i o t i cs o r c h e mi c a l l y s y n t h e s iz e d an t ib a c t e r i a l s u b s t a n ce s for which
c o mp o s i t i o n a l s t an d a rd s a r e n o t se t f o r t h in 5 , 6 , 7 , 8 o r 9 b e lo w. ) I n S e c t i o n A G e n e r a l C o m p o s i ti o n a l Sta n d a r d s f o r Fo o d , P a r t I F o o d, I t e m 2 s h a l l be d ele t e d an d r ep l a c ed b y I t e m 3 , a n d I t e ms 4 a n d 5 s h a ll b e r e n u mb e r e d t o 3 a n d 4 , r e s p e c t i v e ly, t o b e f o ll o w e d b y th e n e w I t em 5 s h o w n b e l o w.
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5 . F o o d s sh a l l n o t co n t a in s ub s ta n c e s ( in c lu d i ng su b s ta n c e s p r o du c e d b y c h e mi c a l t r a n s f o r ma t i o n : t h i s a p p l i e s h e r e in a f t e r i n t h i s p a r a g r a p h ) u s ed a s i n g r e d i en t s o f a g r ic u l tu r a l c h e mi c a l s a n d o t h e r c h e mi c a l s u b s t a n c e s l i s t e d i n th e t ab l e i n ( 1 ) b e l o w. T h e ag r ic u l tu r a l c h e mi c a l s a n d o th e r c h e mi c a l s u b s t a n c e s st a t e d a b o v e, h e r e a n d a l s o la t e r in th i s p a r ag r a p h , r e f e r t o s u b s t a n ce s u s e d f o r p u r p o s e s d e s ig n a te d b y t h e A g r i c u l t u r e , F o r e s t r y a n d F i s h e r i e s M i n i s t e r i al O r d i n an ce a c co r d i n g to th e p r o v i s io n o f P a r a g r a p h 3 o f A r t i c l e 2 o f t h e L a w C o n ce r n i n g S a f e t y A s s u r a n c e a n d Q u a l i t y I mp r o v e me n t o f A g r i c u l t u r a l C h e mi c a l s an d F ee d s ( L a w N o . 3 5 , 1 9 5 3 ) , w h i c h i s s t i p u l a t ed u n d e r P a r a g r a p h 1 o f A r t i c l e 1 - 2 o f t h e A g r i c u l t u r al C h e mi c a l s R e g u l at i o n L a w ( L a w N o . 8 2 , 1 9 4 8 ) , w i t h s u ch a i ms a s a d d i n g to , mi x i n g w i th , o r in f i l t ra t i n g in t o f e e d s ( t h e f e e d s s t i p u la t ed u n d e r P a r ag r a p h 2 o f A r t i c l e 2 o f L a w N o . 3 5 ) , o r me d i c a l p r o d u ct s to b e u s ed f o r a n i ma l s , w h i c h a r e s t i p u la t ed in P a r a g r a p h 1 o f A r t i c l e 2 o f t h e P h a r ma c e u t i c a l A ff a i r s L a w ( L a w N o . 1 4 5 , 1 9 6 0 ) . I n a s s o c i a t io n w i t h t h i s r e g u l at i o n , a s a mp l e o f t h e f o o d s l i s te d i n t he f o o d s c o lu mn i n t h e t a b l e in ( 2 ) b e l o w s h a l l be t e s te d u s i ng t he p a rt l i s t e d i n th e s a mp l e s c o l u mn i n t h e t ab l e b y th e t e s t i n g me t h o d s d e s c r i b ed in ( 3 ) t o ( 1 5 ) b e l o w. N o i n g r e d ie n t s o f a g ri c u l tu r a l ch e mi c a l s o r o t h e r che mi c a l s u b st a n c e s s ha ll b e d e t ec t ed i n t h e s e te s t s . ( 1 ) S u b s t a n c e s u s ed a s i n g r ed i en t s o f a g r ic u l tu r a l c h e mi c a l s a n d o th e r c h e mi c a l s u b s t a n c e s th a t a r e s ti p u l a t ed to be N o t d e t ec t e d i n f oo d s 1. 2, 4, 5-T 2 . A z o c yc lo t i n a nd c yh e x at i n 3 . A mi t r o l 4. Captafol 5 . C a r b ad ox 6 . C ou ma p h o s 7 . C hl o r a mp h e ni c ol 8. Chlorpromazine 9 . D i e t h y l st i l b e st r o l 1 0 . D i me t r i d a z o l e 11 . D a mi n o z i d e 1 2 . N i t r o f ur a n s 1 3 . P r o p h am 1 4 . Me t r o n i d a zo l e 1 5 . Ro n id az o l e
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( 2 ) S a mp l e s Food Barley and buckwheat W h e a t an d r y e R i c e ( b r o wn r i c e ) C o r n ( ma i z e ) S a mp l e ma t e r i a l T h r e s h e d se e d s H u s k e d s e ed s H u s k e d s e ed s S e e d s w i t h t h e h u s k s , th e s i lk a n d t h e co r e s r e mo v e d T h r e s h e d se e d s S e e d s w i t h o u t th e p o d s
O t h e r c e r e al g r a i n s Peas, beans (dry)(including butter b e a n s , c o wb e a n s ( r e d b e a n s ) , l e n ti l , l i ma b e a n s , p e g ia , s u lta n i , s u l t ap y a a n d w h it e b e a n s ) * , b r o a d b ea n s and soybeans (dry)) Peanuts O t h e r l e g ume s / p u l s e s A p r i c o t , mu me p l u m, c h e r r y, J a p a n e s e p lu m ( i n c l u d in g p r u n e ) a n d n e c ta r i n e Peach
Wi t h t h e s h e l l s r e mo v e d S e e d s w i t ho u t th e p o ds Wi t h t h e p ed u n cl e an d t h e s e ed s r e mo v e d
Wi t h t h e s k i n s a n d t h e s e e d s r e mo v e d Whole fruit
O r a n g e ( i n c l u d i n g n av e l o r a n g e ) , g r a p e f r u i t , c i t r u s n a t su d a id a i ( w h o l e ) , l ime a n d l e mo n C i t r u s n a t su d a id a i ( p u l p ) a n d u n sh u o r a n g e ( p u lp ) C i t r u s n a t su d a id a i , p ee l s Other citrus fruits P e a r, J a p a n e s e p e a r, q u i n ce a n d a p p le L o q u at
Wi t h t h e p ee l s r e mo v e d
Wi t h t h e c al y x e s r e mo v e d Whole fruit Wi t h t h e b l o s s o m s c a r s , t h e c o r e s a n d th e p e d u n c le s r e mo v e d Wi t h t h e p ed u n cl e s , th e s k i n s an d t h e s e ed s r e mo v e d Wi t h t h e s ee d s r e mo v e d Wi t h t h e s k i n s r e mo v e d Wi t h t h e c al y x e s r e mo v e d
Av o c a do a nd ma n g o Kiwifruit Guava
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Date Pineapple P a s s i o n f r u i t a n d p ap ay a B a n a na St r a w b e r r y, c r a n b e r r y, h u c k l e b e r r y, b l a ck b e r r y a n d b l u eb e rr y Raspberry Other berries J a p a n e s e pe r s i m mo n Wa t e r me l o n , m a k u w a u r i me l o n an d me l o n s Grape Other fruits Tu r n i p ( r o o t s ) a n d J a p a n e s e r a d i s h ( r o o t s , i n clu d i ng r a di s h ) Tu r n i p ( l e a v e s ) , w a t e r c r e s s , k a l e , J a p a n e s e r ad i s h ( l e av es , i n c lu d in g radish), and brussels sprouts C a u l i f lo w e r a n d b r o c co l i C a b b ag e an d C h in e s e ca b b ag e
Wi t h t h e c al y x e s a n d th e s e e d s r e mo v e d Wi t h t h e to p s r e mo v e d Whole fruit Wi t h t h e p ed i c e l s r e mo v e d Wi t h t h e c al y x e s r e mo v e d Whole fruit Wi t h t h e c al y x e s r e mo v e d Wi t h t h e c al y x e s a n d th e s e e d s r e mo v e d Wi t h t h e r in d s r e mo v e d Wi t h t he p ed u n cl e s r emo v e d E d i b le p o r t i o n s Wi t h th e d ir t l i g h t l y r in s e d o ff w i t h water Wi t h t h e d ec a y e d l e av es r e mo v e d
Wi t h t h e l ea v e s r e mo v e d A s a mp l e c o n s i s t in g o f o n e p o r t io n f r o m e a c h o f f o u r h e ad s , w i t h eac h h e a d e q ua l ly c u t i nt o fo u r p o r ti o ns , w i t h o u t t h e d e c a y e d o u t e r l e av e s a n d th e co r e s Wi t h t h e r o o t s a n d t h e d e c a y e d l e a v e s r e mo v e d R o o t s w i th t h e d i r t l ig h t l y r i n s e d o ff w i t h w a t e r E d i b le p o r t i o n s Wi t h th e d ir t l i g h t l y r in s e d o ff w i t h water Wi t h t h e v in e s r e mo v e d
Kyona and komatsuna (Japanese mu s t a r d s p i n a c h ) Horseradish Qing-geng-cai and other c r u c i f e r o u s v e g et a bl e s S w e e t p o t ato , k on j ac , ta r o , p o t a t o , y a m a n d o t h e r p o ta t o es P u mp k i n ( i n c l u d i n g s q u a s h ) , c u c u mb e r ( i n c lu d in g g h e r k i n ) an d o r i e n t al p i ck l i n g me l o n ( v e g et a b le )
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O t h e r c u c u r b i t a c eo u s v e g et a b le s A r t i c h o k e , e n d iv e an d c h i co r y B u r d o ck a n d s a l s i f y
E d i b le p o r t i o n s Wi t h t h e d ec a y e d l e av es r e mo v e d A s a mp l e t h i n l y s l i ced t h en g r o u n d w i t h a me a t g r i n d e r, t h e l e a v e s h a v in g b e en r e mo v e d a n d th e d i r t h a v in g b e en l i g h t l y r in s e d o ff w it h water Wi t h t h e r o o t s a n d t h e d e c a y e d l e a v e s r e mo v e d Wi t h t h e d ec a y e d o u t e r l e a v e s a n d t h e co r e s r e mo v e d E d i b le p o r t i o n s E d i b le p o r t i o n s Wi t h t h e r o o t s a n d t h e d e c a y e d l e a v e s r e mo v e d Wi t h th e d ir t l i g h t l y r in s e d o ff w i t h water E d i b le p o r t i o n s Wi t h t h e c al y x e s r e mo v e d E d i b le p o r t i o n s St e ms
S h u n g i ku L e t t u ce ( i n c l u d i n g c o s l e t tu c e an d l e a f l e tt u c e) O t h e r c o mp o s i t e v e g eta b l e s S h i it a k e mu s h r o o m, b u t t o n mu s h r o o m a n d o t h e r mu s h r o o ms C e l e r y, p a rs l e y a n d m it s u b a Carrot and parsnip O t h e r u mb e l l i f e r o u s v eg e t ab l e s To ma t o , e g g p l an t an d p i mi e n t o (sweet pepper) O t h e r s o l a n c e o u s v e g eta b l e s Asparagus
O n i o n , g a r li c , w e l s h ( in c l ud i n g lee k ) Wi t h t h e o u t e r s k i n s an d t h e r o o t a n d mu l t i p ly i n g o n i o n h a i r r e mo v e d N i r a a n d o th e r l i l ia c eo u s v e g e t a b le s E d i b le p o r t i o n s G r e e n s o y b e a n s , k i d n ey b e a n s ( i m ma t u r e , w i t h p o d s ) a n d p e a s ( i m ma t u r e , w i t h p od s ) Okra Sugarcane Ginger Wi t h t h e p ed i c e l s r e mo v e d
Wi t h t h e c al y x e s r e mo v e d Wi t h t he hus k s r e mo v e d Wi t h t h e l ea v e s r e mo v e d , an d w i th t h e d i r t l ig h t l y r i n s e d o ff w i t h water Wi t h th e d ir t l i g h t l y r in s e d o ff w i t h water
Sugar beet
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Spinach
Wi t h r e d r o o t s l e f t o n , a n d w i th t h e r o o t h ai r an d th e d e c ay e d l e a v e s r e mo v e d
B a mb o o s ho o t s an d o th e r v e g e t ab l e s E d i b le p o r t i o n s S e s a me s e e d s , r a p e s e e d s , s u n f l o w e r s e e d s , s a ff l o w e r s e e d s , c o t t o n s e e d s a n d o t h e r oi l s e e d s A l mo n d , g in k g o n u t , ch e s t n u t , w a l n u t , p e ca n a n d o t h er n u t s C a c a o b e an s a n d co ff e e b e an s Te a Hop O t h e r s p i c es a n d o t h e r h e r b s Seeds only
Wi t h t h e h u s k s r e mo v e d B e a n s w i t h o u t th e p o d s Te a l ea v e s Dried flowers E d i b le p o r t i o n s
( 3 ) 2 , 4 , 5 - T a n a l yt ic al me t h o d 1 . E q u i p me n t G a s c h r o ma t o g r ap h wi t h a n e l e ctr o n c ap t u r e d e te c t o r (G C - E C D ) a n d a g a s c h r o ma t o g r a p h - ma s s s p e c t r o me t e r a r e u s ed . 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e to be used. R e a g en t s d e s i g n at e d as s p e c i a l g r a d e i n th i s s e ct i o n mu s t me e t t h e r e q u i r e me n t s f o r s p e c i a l g r a d e s p e ci f i e d i n t h e J ap a n I n d u s tr i a l St a n d a r d s fo r t h e r e a g e n t s . A c e t o n it r i le : T h r e e h u n d r e d ml o f a c e t o n i t r il e i s c o n c en t r a t e d u s in g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. A f t e r r e mo v i n g t h e a c e to n i t r il e , th e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e di s s o lv e d r e s i d u e i s in j e c te d i n to t h e G C - E C D f o r a n a ly s i s , t h e h ei g h t s o f p eak s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h a n n - h ex an e o n t h e g a s c h r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r th a n th e p e ak f o r g a mm a - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . A c e t o n e: T h r e e h u n d re d ml o f a c e t o n e i s co n c en t r a t ed u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. A f t e r r e m o v i n g t h e a c e t o n e , t h e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d u e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g .
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E t h e r : T h r ee h u n d r e d ml o f d i e t h y l e t h e r i s c o n c en t r a t ed u s i n g a r o t a r y v a c uu m e v a p o r a to r. A f t e r r e mo v i n g th e d i e th y l e t h e r, th e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d u e i s i n j e ct e d i n t o th e G C- E C D f o r a n a l y s i s , th e h e i g h t s o f p e ak s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h a n n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . S o d i u m c h l o r i d e : S o d iu m c h l o r i d e ( s p e c ia l g r a d e ) . I n c a s e s w h e re a s u b s t a n ce th a t i n t e r f e r e s w i t h t h e a n a l ys i s o f a n i n g re d i en t o f t h e a g r i c u lt u r al c he mi c a l p r o d u c t co n c e r n ed is c o n t a in ed , it s h o u ld b e r i n s e d o u t w i t h a s o lve n t s u ch a s n - h e x an e . S y n t h e t i c ma g n e s i u m s i l i c a t e (F l o r i s i l ) f o r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y : Florisil ( p a r t i c le size: 15 0 -2 5 0 m) p r o d u ce d for c o l u mn
c h r o ma t o g r a p h y i s h ea t e d a t 1 3 0 C f o r mo r e t h an 1 2 h o u r s b ef o r e b e i n g a ll o we d t o c o o l in a d e s i c c at o r. D i a t o ma c e o u s e a r t h : D i a t o ma c e o u s e a r t h f o r c h e mi c a l a n a l y s i s i s u s e d . E t h yl a c e tat e : T h r e e hu n d r e d ml o f e t h y l a ce t a t e i s c o n c e n t r a t ed u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. A f t e r r e mo v i n g t h e e th y l a c e t a t e, th e r e s i d u e i s d i s s o l v e d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e d i s s o lv ed r e s i d u e i s in j e c te d i n to th e G C - EC D f o r a n a ly s i s , t h e h ei g h t s o f p e ak s f o r c o mp o u n d s o th e r th a n n - h e x an e o n t h e g a s c h r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r th a n th e p e ak f o r g a mm a - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . R e a g en t f o r b u t y l e s t er i f i c a t i o n : Te n g r a ms o f b o r o n t r i f l u o r i d e e th e r c o mp l e x i s d i s s o l ve d in 2 5 ml o f n - b u t an o l. n - H e x a n e : T h r e e hu ndr e d ml o f n - h e x a n e i s c o n c en t r a t ed to 5 ml u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. W h e n 5 l o f th e c o n c en t r a t e d s a mp l e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . Wa t e r : D i s t i l l ed w a t er i s u s e d . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n ce t h a t i n t e r f e r e s w i t h a n al y s i s o f a n i n g r e d i e n t o f th e a g r i cu l tu r a l c h e mi c a l p r o d u ct con c e r n e d i s c o n ta i n ed , i t s h o u ld b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t s u c h a s n - h e x a n e. Sodium sulfate (anhydrous): Sodium sulfate (anhydrous) (special g r a d e ) . I n ca s e s w h e r e a s u b s t an c e t h a t i n t e r f e r e s w i t h an a l y s i s o f an i n g r e di e n t of the a g r i c u lt u r al c h e mi c a l p r o d u ct concerned is c o n ta i n ed , i t s h o u l d b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t su c h as n - h e x an e . M e t h an o l: T h r e e h u ndr e d ml o f m e t h an o l i s co n c en t r a t ed u s i n g a r o ta r y
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v a c uu m e va p o r a to r. A f t e r r e mo v i n g th e me t h a n o l , t h e r e s id u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d u e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l 2 , 4 , 5 - T: Thi s p r o d uc t s h o u ld c o n si s t o f 9 8 % o r mo r e 2 , 4 , 5 - T. M e l t in g p o in t : 1 5 6 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s i . C e r e a l g r a i n s , l eg u me s / p u l s e s an d s e ed s C e r e a l g r a in s , l e g u me s / p u l s e s a n d s e e d s a r e c r u s h e d so a s t o p a ss t h r o u gh a s t a n d a r d me s h s i e v e (4 2 0 m) b e f o r e b e in g w e i g h ed to p r e p a r e a 1 0 . 0 - g r a m s a mp l e . Tw e n t y ml o f w a t e r i s a d d e d to t h e o b t ai n ed s amp l e a n d l ef t t o s t an d f o r t w o h o u r s . T h e n , ac e to n e ( 1 0 0 ml ) a n d 4 mo l / l h y d r o c h lo r i c a ci d ( 5 ml ) a r e a d d ed . A f t e r h o mo g e n i z i n g f o r th r e e mi n u t e s , t h e mi x t u r e i s f i lt e r e d b y s u c t i o n i n t o a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r u s i n g f i l t e r p a p er c o v e r e d w it h a o n e - ce n t i me t e r- t h i c k la y e r o f d i a to ma c e o u s e a r th . T h e r e s i d u e o n t h e su r f a c e o f th e f i l te r p a p e r i s co ll e c t ed an d a c e t o n e ( 5 0 ml ) i s a d d e d b e f o r e h o mo g e n i z i n g f o r t h r e e mi n u t e s . T h e a b o v e p r o c e d u r e i s r e p e a ted a n d t h e f i l t r a t e i s a d d ed t o th e r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r a n d co nc e n t r a t ed to a p p r o x i ma t e l y 3 0 ml a t 4 0 C o r l o w e r. T h e c o nc en t r a t e d s olu t i o n i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml s e p a r a t in g f u n n e l a l r ea d y c o n t a i n i n g 1 00 ml o f 1 0 % s od i u m c h l o r i d e s o lu t io n. T h e e g g p l an t - s h a p ed fl a s k o f th e a b o v e r o t a ry v a c u u m e v a p o r at o r is w a s h e d w i th 1 0 0 ml o f e t h y l a c eta t e to o b t a in t h e w a s h in g s , w h i ch a r e a d d e d t o th e s e p ar a t i n g f u n n e l ab o v e . T h e mi x t u r e i s sh a k en v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h ak e r b e f o r e b e in g l e f t to s t a n d , a n d t h en th e e th y l a c et a t e l a y e r is t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i c a l f l a s k . F i f t y ml o f e t h yl a c et a t e i s a d d e d t o th e aq u eo u s l a y e r, a n d , a f t e r r e p e ati n g t h e ab o v e p r o c e d u r e , t h e et h y l a ce t a te lay e r i s a d d ed t o th e co n i c a l f l a s k . A n a d e q u a t e a mo u n t o f so d iu m s u l f a t e ( a n h yd r o u s) i s a l s o ad d e d t o t h e f l a s k , w h i ch i s le f t t o s t a n d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h ak e n f r o m t i me t o t i me . T h e c o n te n t o f t h e f l a sk i s t h e n f i l t e r ed in t o a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. T h e c o n i c a l f la s k is
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t h e n w a s h ed w i t h 2 0 ml o f et h y l ac e t a t e to o b t a i n t h e w as h i n g s , w i th w h i c h t h e r e s i d u e o n th e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p a p e r i s wa s h e d t w i c e. T h e w a s h i n g s o b t ai n ed f r o m t h e r e p e a te d w as h i n g a r e th e n a d d e d to t h e r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r a n d c o n c e n t r a t e d to a p p r o x i ma t e l y 1 ml a t 4 0 C o r l o w e r, a n d t h e n th e s o l v en t i s e v ap o ra t e d t o n ea r d r y n e s s i n a n i t r o g e n s t r e a m a t r o o m t e mp e r a t u r e . T h i r t y ml o f n - h e x an e i s a d d e d t o t h e d r i ed re s i d u e a n d t h e mi x t u r e i s t r a n s f e r r e d to a 1 0 0 - ml s e p a r a t i n g f u n n e l , to w h i ch 3 0 ml o f n - h e x an e - s a t u r a t ed a ce t o n i t r i l e is a d d e d . A ft e r s h a k i n g t h e mi x t u r e v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s in g a s h a k e r, th e f u n n el i s l e f t t o s t a n d a n d t h e a ce t o n i t r i l e la y e r i s t r a n s f e r r e d t o a 2 0 0 - ml s e p a r a t in g f u n n e l . A f t e r a d d i n g n - h e x a n e - s a tu r a t e d a c eto n i t r il e ( 3 0 ml ) t o th e n - h e x an e la y e r, t h e a b o v e p r o ce d u r e i s re p e a te d t wi c e a n d th e a c e t on i t r i le l a ye r i s a d d e d to th e s e p a r a t i n g f u n n e l a b o v e . F i f t y ml o f n - h ex a n e s a tu r a t e d w i t h a c eto n i t r il e i s a l s o ad d ed in t o th e s e p a r a t i ng f u n n e l , w h i c h i s l i g h tl y s h a k e n a n d l e f t to s t a n d . T h e a c e t o n i t r i le layer is then t r an s f e r r e d into a r o ta r y vacuum
e v a po r a t o r a n d co nc e n t r a t e d t o ap p r o x i ma t e l y 1 ml a t 4 0 C o r l o w e r, a n d th e n th e s o lv e n t i s e v a p o r a t e d t o n e a r d r y n e s s i n a n i t r o g e n s t r e a m a t r o o m t e mp e r a t u r e . i i . F r u i t , v eg e t ab l e s , ma t c h a a n d h o p s F r u i t a nd ve g e t ab l e s ar e w e i g h ed a c cu r a t e l y t o p r e p a r e a s a mp l e o f a b o u t o n e k i l o g r a m. A n a p p r o p ri a t e a mo u n t o f w a t e r i s me a s u r e d a n d ad d ed to t h e s a mp l e , i f r e q u i re d . A f t e r h o mo g e n i z ing , a s a mp l e e q u iv a l en t t o 2 0 . 0 g i s me a s u r e d o u t . M a t c ha i s w e i g h e d t o p r e p a r e a 5 . 0 0 - g r a m s a mp l e , t o w h i c h 2 0 ml o f w a t e r i s a d d e d an d l e f t t o s ta n d fo r t w o h o u r s . H o p s a r e f i r s t c r u s h e d i n to p ie c e s a n d w e i g h e d to p r e p a r e a 5 . 0 0 - g r a m s a mp l e , t o w h i c h 2 0 ml o f w a t e r is a d d ed a n d l e f t t o s ta nd for two hours. A c e t o n e ( 1 0 0 ml ) a n d 4 mo l / l h y d r o c h l o r i c ac i d ( 5 ml ) a r e a d d e d to t h e o b t a i n ed s a mp l e . T h e mi x t u r e , a f t e r h omo g e n i z i ng f o r th r e e mi n u t e s , i s f i l t e r e d b y s u c t i o n i n to a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r u si n g filter p ap e r c o v e r ed with a o n e - c en t ime t e r- t h i c k layer of
d i a to ma c e o u s e a r t h . Th e r e s i d u e o n th e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s c o l l ec t ed a n d a c e to n e ( 5 0 ml ) i s a d d e d b ef o r e h o mo g e n iz i n g f o r t h r e e mi n u te s . T h e a b o v e p r o c e d u r e i s r e p ea t e d , an d th e f i l t r a t e i s
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a d d ed
to
the
r o ta r y
vacuum
evaporator
and
c o n c e n t r a t ed
to
a p p r o x i ma t e l y 3 0 ml a t 4 0 C o r lo w e r. T h e co n cen t r a t e d s o lu t i on i s t ra n s f e r r e d to a 3 00 - ml s e p a r at i ng f u n n e l a l r ea d y c o n ta i ni n g 1 0 0 ml o f 1 0 % s o d i u m c h l o r i d e s o l u t i o n . T h e e gg p l an t - s h a p ed f l a s k o f t h e a b o v e r o t a ry v a c u u m e v a p o r at o r is w a s h e d w i th 1 0 0 ml o f e t h y l a c e ta t e t o o b t a in t h e w a s h in g s , w h i ch a r e c o mb i n e d i n th e s ep a r a t i n g f u n n e l ab o v e . T h e mi x t u r e i s s h a k en v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u si n g a s h a k e r b e f o r e b e i n g l e f t t o s t an d a n d th e e thyl a c e t a t e la y e r i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i c a l f la s k . F i f t y ml o f e t h y l a c e ta t e i s a d d ed t o t h e a q u e o u s la y e r a n d , a f t er r e p e a t in g th e a b o v e p r o c e d u r e , th e e th y l a ce t a t e l a y e r i s c o mb i n e d i n t h e c o n i c a l f la s k. A n a d e qu a t e a mo u n t o f s o diu m s u l f a t e ( a n h y d r o u s) i s a l s o a dd e d to th e f l a s k , w h i ch i s l e f t to s t a n d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h a k e n f ro m t i me t o t i me . T h e c o n te n t o f t h e f l a s k i s t h e n f il t e r ed i n t o a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. T h e c o n i c a l f l a s k is t h e n w a s h ed w i t h 2 0 ml o f e th y l ac e t a t e t o o b t a i n t h e w a s h i n g s , w ith w h i c h th e re s i d u e o n th e s u r f a c e o f t h e f i lt e r p a p e r i s w a s h e d t w i c e. T h e w a s h in g s o b t a in e d f r o m t h e re p e a te d w a s h i n g a r e th e n a d d e d to t h e r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r a n d c o n ce n t ra t e d to a p p r o x i ma t e l y 1 ml a t 4 0 C o r lo w e r, a n d t h en th e s o l v en t i s ev a p o r a t e d t o n ea r d r y n e s s i n a n i t r o g e n s t r e a m a t r o o m t e mp e r a t u r e . i i i . Te a s o th e r t h an ma t c h a A 9 . 0 0 - g r a m s a mp l e s o a k ed i n 5 4 0 ml o f w a t e r a t 1 0 0 C i s l e f t to s t a n d a t r o o m t e mp e r a t u r e f o r f i v e mi n u t es b e f o r e b e i n g f i l te r e d . F r o m t h e c o o l ed f i l t r at e , 3 6 0 ml i s t r a n s f e r r e d i n to a 5 0 0 - ml c o n i c al f l a s k , t o wh i c h 1 8 g o f s o d i u m c h l o r id e and 4 mo l / l h y d r o c h l o r ic a c i d a r e ad d e d t o a d j u s t th e p H t o 1 o r l o w e r. T h is s o l u t io n i s t r a n s f e r r e d t o a 1 ,0 0 0 - ml s e p a r a t i n g f u n n e l a l r e a d y co n t a in i n g 1 0 0 ml o f e t h y l a c e t a te b e f o r e s h a k i n g v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h ak e r. Th e s h a k en mi x t u r e i s l e f t to s ta n d an d t h e et h y l a ce t a te l a y e r i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n ic a l f l as k . O n e h u n d r e d ml o f e t h y l a c e t at e i s a d d ed t o t h e a q u e o u s l a y e r a n d , a f t e r r e p e a ti n g th e a b o v e p r o ce d u r e , th e e t h y l a c et at e l a y e r i s c o mb i n e d in t h e c o n i ca l f l a s k . A n a d e qu a t e amo u n t o f s o d i u m s u l f a t e ( an h y d r o u s ) i s als o a d d ed t o t he f l a s k , w h i c h i s le f t to s t an d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h a k e n f r o m t i me t o ti me . T h e c o n t en t o f t h e f l a s k i s t h en f il te r e d in t o a r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r. T h e co n i c a l f l a s k i s t h en w a s h e d w i th 2 0
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ml o f e t h y l a c e t a te t o o b t a in t h e w a s h i n g s , w it h w h i c h th e r e s i d u e o n t h e su r f a c e o f th e f il t e r p a p e r i s w a s h ed t w i ce . Th e w a s h ing s o b t ai n ed f r o m t h e r e p e a t e d w a s h i n g a r e th en a d d e d to t h e r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r a n d c o n c en t r at e d to ap p ro x i ma t e l y 1 ml a t 4 0 C o r l o w e r, a n d t h e n th e s o l v en t is e v a p o r at ed t o n e a r d r y n e s s i n a n i t r o g e n s t re a m a t r o o m t e mp e r a t u r e . i v. F o o d s o t h e r t h a n th o s e l i s t ed in i to i ii a b o v e E x t r a c t s a re o b ta i ne d b y t h e me t h o d s d e s c r ib e d in i o r i i . b. Hydrolysis T h e r e s i d u e o b t a in e d b y t h e ex t r a c t io n me t h o d d es c r i b e d i n a . E x t r a c t io n me t h o d s is dissolved in 20 ml of me t h a n o l and
t r a n s f e r r e d t o a 1 0 0 - ml e g g p l a n t - s h a p ed f l a s k , t o w h i ch 1 0 ml o f a 1 .5 mo l / l s o d iu m h y d r o x i d e s o l u ti o n i s ad d ed . A r e f l u x c o n d e n s e r i s a t t a ch e d to t h e f l a s k , w h i c h i s th e n h e a te d f o r 3 0 mi n u t e s in a w at e r b a t h a t 80 C a n d al l ow e d t o co o l . T h e s o l u t i o n i s t r an s f e r r e d t o a r o t a r y v a c uu m e v a p o r a t o r a n d mo s t o f t h e me t h a n o l is r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s th en f i l t e r ed b y s u c t i o n th r o u g h a g la s s f i l t e r ( p o r e s i z e G 3 ) . Th e f i lt r a t e is t r a n s f e r r e d to a 3 0 0 -ml s e p a r a t in g f u n n e l ( I ) . T h e r e s i d u e o n t h e g l a s s f i l t e r i s w a s h e d w i t h a s ma l l a mo u n t o f a c e t on e an d w a t e r an d th e w as h i n g s a r e a d d ed to t h e s e p a r a t i n g f u n n e l ab o v e , t o w h i ch 5 0 ml o f e t h e r a n d 1 0 0 ml o f 1 0 % s o d i u m c h l o r i d e s o lu ti o n a r e a ls o a d d ed . T h e mi x t u r e i s s h a k en v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h a k e r be f o r e b e i ng l e f t t o s ta nd , a n d th e n th e a q u e o u s l a y e r i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 -ml s e p a r a t i n g f u n n e l ( I I ) , t o w h i c h 4 mo l / l h y d ro c h l o r i c a c i d i s a d d e d t o a d j u s t t h e p H t o 1 o r l o w e r. F i f t y ml o f e t h y l a c e t at e i s a d d e d to t h e a d j u st e d s o l u t io n b ef o r e b e i n g v i go r o u s ly s h a k e n fo r f i v e mi n u t e s u s i ng a s h a k e r a n d l e f t t o s t a n d . T h e et h y l a c e t a te l ay e r i s t h e n t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i ca l f l a sk . F i f t y m l o f e t h y l a c e t a te i s a d d ed t o th e a q u eo u s l ay e r a n d , af t e r r e p e a t in g t h e a b o v e p r o c ed u r e , t h e e th y l a c e t a te l a y e r i s c o mb i n e d in t h e c o n i c al f l a s k d e s c r i b e d a b o v e . A n a d e qu a t e amo u n t o f s o d i u m s u l f a t e ( a n h y d ro u s ) i s a l s o a d d e d to t h e f l a s k , w h i ch i s l e f t to s t a n d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h ak en f r o m t i m e t o t i me . T h e c o n te n t o f t h e f l a s k i s t h e n f i l t e re d i n t o a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. T h e c o n i ca l f l a s k i s t h e n w a s h e d w i t h 2 0 ml o f e t h y l a c e t a te to o b t a in th e wa s h i n g s , w it h w h i ch th e r e s i d u e o n t h e s u r f ac e o f t h e f i l t er p a p e r i s w a s h e d . Th e w a s h i n g s a r e ad d ed t o th e r o t ar y
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v a c u u m e v ap o r a t o r an d c o n c e n t r ate d to a p p r o x i ma t e l y 1 ml a t 4 0 C o r l o w e r. c . B u t y l e s te r i f i c a t i o n T h e s o lu t i on o bt a i ne d b y t h e h y d ro l y s i s d e s cr i b e d in b . H y d r o l y s i s i s t r a n s f e r r e d t o a 2 0 - ml e g g p l a n t - s h a p e d f la s k , a n d th e n t h e s o l v e n t is e v ap o r at e d to n ea r d r yn e s s in a ni tr o g e n s t r ea m a t room
t e mp e r a t u r e . A f t e r t h e d e s ic c a t io n , o n e ml o f a b u t y l e s t e r i f i c a te d a g e nt i s a dd e d . A r e f l u x c o n d e n se r i s at t a ch e d to t h e eg g p la n t - s h ap ed f l a s k d e s c r ib e d a b o v e , w h i c h i s t h e n h e a t ed fo r 3 0 mi n u te s i n a w a te r b a t h at 9 0 C a n d a ll ow e d t o c o o l. T h e c o o l ed mi x t u r e i s t r a n s f e r r e d t o a 2 0 0 - ml s e p a r a t in g fu n n el a l r e ad y c o n t ai n in g 5 0 ml o f 1 0 % s o d iu m c h l o r id e s ol u t io n a n d 5 0 ml o f n - h e x a n e b ef o r e s h a k in g v ig o r o u s ly f o r f i v e mi n u t e s u s i ng a s h ak e r. T h e s h ak e n mi x t u r e i s l e f t to s t an d a n d t h e n - he x a n e l a ye r i s t r a n s f e rr e d t o a 2 0 0 - ml c o n i ca l f l a s k . F if t y ml o f n - h e x a n e i s a d d ed t o t h e a qu e o u s l a ye r a n d , a f t e r r e p e a t in g th e a b o v e p r o ce d u r e , t h e n - h e x an e l ay e r i s c o mb i n e d in t h e c o n ic a l f l a sk d e s c r i b ed ab o v e. A n ad e q u a t e a mo u n t o f s o d i u m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s a l s o ad d e d to t h e f la s k , w h ic h i s l e f t t o s ta n d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h a k e n f r o m t i me t o t i me . T h e c o n t e n t o f t h e f l a s k i s t h en f i l t e r e d in t o a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. T h e c o n i ca l f l as k i s t h e n w a s h e d w i th 1 0 ml o f n - h e x a n e to o b t ai n t h e w a s h i n g s , w i t h w h i c h t h e r e s i d u e o n th e s u r f a c e o f t h e f i lt e r p a p e r i s w a sh e d . Th e wa s h i n g s a r e a d d ed to th e r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r a n d co n c e n t r a t ed to a p p r o x i ma t e l y 2 ml a t 4 0 C o r lo w e r. d . C l ea n - u p F i v e g r a ms o f f l o r i si l f o r c o lu mn c h r o ma t o g r a p h y su s p e n d e d in n - h e x an e i s a d d e d t o a c h r o ma t o g r a p h tu b e ( i n n e r d i a me t e r : 15 mm a n d l en g th : 3 0 0 m m) , o v e r w h i c h a p p r o x i ma t e l y 5 g o f s o d i u m s u l f a t e ( a n h y d r o u s) i s f u r t h e r a d d e d . T h e n - h ex a n e i s th e n s p i l t o u t o f th e c o l u mn u n ti l on l y a sma l l a mo u n t r e ma i n s o n t h e p ac k i n g o f th e c o l u mn , i n to w h i c h t h e s o l u t i o n o b t ai n ed b y t h e b u t y l e s t e r i f i c a ti o n d e s c r i b ed in c . B u t yl e s t e r i f i c at i o n i s p o u r e d . T h en , 5 0 ml o f a mi x t u r e o f e t h e r an d n - h e x a n e ( 1 :1 9 ) i s al s o p o u r e d i n t o t h e c o lu mn a n d th e e ff lu e n t i s d i s ca r d e d . I n ad d i ti o n , 1 5 0 ml o f a m i x t u r e o f e th e r a n d n - h e x an e ( 3 : 17 ) is a l s o p o u re d i n t o th e c o l u mn a n d t h e e l u a te i s c o l l ec t ed in a r o ta r y vacuum e v ap o r a to r and c o n c e n t r a t ed to
a p p r o x i ma t e l y 1 ml a t 4 0 C o r l o w e r, a n d t h e n th e s o l v en t i s
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e v a p o r a t e d t o n e a r d r y n e s s i n a n it r o g e n s t r ea m a t r o o m t e mp e r a t u r e . T h e r e s id u e o b t a in e d i s d i s s o l v ed in n - h e x an e to ma k e e x ac t l y 1 0 ml o f s o l u ti o n , w h i c h i s u s e d a s t h e sa mp l e s o l u ti o n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e r e f e r e n c e ma t e r i a l u n d e r th e p r o c e du r e d e s c r i b ed i n c . But yl e s t e r i f i c a t io n in 4 . P r e p a r a t i o n o f t e s t s o lu t i o n s . Te s t i n g c o n d i t io n s C o l u mn : A s i l i c a te g l as s c a p il l a r y c o lu mn ( i n n e r d i a me t e r : 0 . 2 5 m m a n d l en g t h : 3 0 m) c o a t e d w i t h 5 % p h e n y l me t h y l s i l i c o n e f o r g a s c h r o ma t o g r a p h y t o a th i c k n e s s o f 0 . 2 5 m i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : T h e c o lu mn t e mp e r a t u r e i s h e l d a t 5 0 C f o r o n e mi n u t e , f o ll o w e d b y an i n c r e a s e o f 2 5 C ev er y mi n u t e u n t i l r e ac h in g 1 2 5 C , a f t e r w h i c h th e t e mp e r a t u r e i s i n cr e a s e d b y 1 0 C e v e r y mi n u t e u nt il r e a c h in g 3 0 0 C , w h er e i t i s h e l d f o r f i v e mi n u t e s . I n l e t t e mp e r a t u r e : 2 6 0 C D e t e c t o r : Sh o u ld be op e r a t e d a t 3 0 0 C G a s f l o w r a t e : N i t r o g en o r h e l i u m i s u s e d a s t h e c a r r i e r g a s . Th e f lo w r a t e s h o u l d b e ad j u s te d s o t h a t n - b u t yl (2 , 4 , 5 - t r i ch lo r o p h en ox y) a c e t a te f l o w s o u t i n ap p r o x i ma t e l y 1 5 mi n u t e s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e c o n di t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l it a t i v e t e s t s, u s i n g ei th e r t h e p e ak h e i g h t o r p e a k a r e a me t h o d . c . C o n f i r ma t i o n t e s t s G a s c h r o ma t o g r ap h y/ma s s s p e c t r o me t r y i s p e r f o r me d u n d e r t h e s ame c o n d i t io n s a s t h o s e d es c r i b e d i n a . Q u a l i t at i v e t e s t s . Te s t r e s u lt s o b t ai n ed i n t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l mu s t b e t h e s a me a s t h e r e s u l t s o b t ai n ed u nd e r t h e p r oc e d u r e d e s cr i b e d in c . B u t y l e s t e ri f i c a t io n in 4 . P r e p a r a t i o n o f t e s t s o l u t io n s . T h e q ua n ti ty ma y b e d e t e r mi n e d b y e i t h e r th e pe a k he i gh t o r p e a k a r ea me t h o d , if r e q u i r e d . ( 4 ) A n a l yt i c a l me t h o d f o r a z o c y c lo t i n a n d c y h e x at i n 1 . E q u i p me n t A g a s c h r o ma t o g r a p h w i t h a f l ame p h o t o me t r i c d e t e cto r ( i n t e r f e r e n c e filter for tin d e t er mi n a t i o n , wavelength: 6 1 0 n m) and a gas
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c h r o ma t o g r a p h - ma s s s p e c t r o me t e r a r e u s e d . 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. R e a g en t s d e s i g n at e d as s p e c i a l g r a d e i n th i s s e ct i o n mu s t me e t t h e r e q u i r e me n t s f o r s p e c i a l g r a d e s p e ci f i e d i n t h e J ap a n I n d u s tr i a l St a n d a r d s fo r t h e r e a g e n t s . A c e t o n it r i le : Th r e e h u n d r e d ml o f a c e t o n it r i l e i s c o n c en t r a t e d u sin g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. A f t e r r e mo v i n g t h e a c e to n i t r il e , th e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e di s s o lv e d r e s i d u e i s in j e c te d i n to t h e G C - E C D f o r a n a ly s i s , t h e h ei g h t s o f p eak s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h a n n - h ex an e o n t h e g a s c h r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r th a n th e p e ak f o r g a mm a - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . A c e t o n e: Th r e e h u n d r e d ml o f a c e t o n e i s c o n c en t r a t ed u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. A f t e r r e m o v i n g t h e a c e t o n e , t h e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d u e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . 3 mo l / l e t h y l ma g n e s i u m b r o mi d e - e t h e r e a l s o l u t io n : 3 mo l / l
e t h y l ma g n es i u m b r o mi d e - e t h e r e al s o l u ti o n . E t h e r : T h r ee h u nd r e d ml o f d i e t h y l e t h e r i s c o n c en t r a t ed u s i n g a ro t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. A f t e r r e mo v i n g t he d i eth yl e t h e r, th e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d u e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . S o d i u m c h l o r i d e : S o d iu m c h l o r i de ( s p e c i al g r a d e ) . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n ce t h a t in t e r f e r e s w i t h a n a l y s i s o f a n i n g r ed i e n t o f th e a g r i c u lt u r al c h e mi c a l p r o d uc t co n c e r n ed is c o n ta i n ed , i t s h ou ld be r i n s e d o u t w i t h a s o lve n t s u ch a s n - h e x an e . S y n t h e t i c ma g n e s i u m s i l i c at e (F l o r i s i l ) f o r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y: Florisil (p a r t i c le si z e : 150-250 m) p r o d u c ed for c o lu mn
c h r o ma t o g r a p h y i s h ea t e d at 1 3 0 C f o r mo r e t h an 1 2 h o u r s b ef o r e b e i n g a ll o we d t o c o o l in a d e s i c c at o r. D i a t o ma c e o u s e a r th : D i a t o ma c e o u s e a r th fo r c h e mi c a l a n al y s i s i s u s e d .
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C y h e x a t in s t a n d a r d so l u t io n : A mi x t u r e o f a ce t i c ac i d an d e t h y l ac e ta t e ( 1 : 9 9 ) i s a d d e d t o 1 0 .0 mg o f c y h e x a t in to ma k e a 1 0 0 - ml s o l u ti o n . O f t h e 1 0 0 - ml s o l u t io n , 1 0 ml i s t a k e n o u t a n d n - h e x a n e i s a d d ed t o ma k e 1 0 0 ml o f mi x . S o d i u m d o d e c y l s u l f a t e : A r e a g e n t w i t h a p u r i t y o f 8 5 % o r h i g h er i s used. n - H e x a n e : T h r e e hu ndr e d ml o f n - h e x a n e i s c o n c en t r a t ed to 5 ml u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. W h e n 5 l o f th e c o n c en t r a t e d s a mp l e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . Wa t e r : D i s t i l l ed w a t er i s u s e d . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n ce t h a t i n t e r f e r e s w i t h a n al y s i s o f a n i n g r e d i e n t o f th e a g r i cu l tu r a l c h e mi c a l p r o d u ct con c e r n e d i s c o n ta i n ed , i t s h o u ld b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t s u c h a s n - h e x a n e. Sodium sulfate (anhydrous): Sodium sulfate (anhydrous) (special g r a d e ) . I n ca s e s w h e r e a s u b s t an c e t h a t i n t e r f e r e s w i t h an a l y s i s o f an i n g r e di e n t of the a g r i c u lt u r al c h e mi c a l p r o d u ct concerned is c o n ta i n ed , i t s h o u l d b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t su c h as n - h e x an e . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l C yh e x a t in : T h i s p r o duc t s h o u l d co n s i s t o f 9 9 % o r mo r e c y h e x a ti n . M e l t in g p o in t : 1 9 5 - 1 9 8 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s i . L e g u me s / p u l s e s a n d s e e d s L e g u me s / p u l s e s a n d s e e d s a r e c r u s h e d s o a s t o p a ss t h r o u g h a s t a n d a r d me s h s i e v e ( 4 2 0 m) b e f o r e b e in g w e i g h ed to p r e p a r e a 1 0 . 0 - g r a m s a mp l e . Tw e n t y ml o f w a t e r i s a d d ed t o t h e o b t ai n ed s a mp l e a n d l e f t t o s t a n d f o r t w o h o u r s . T h e n , 1 0 0 ml o f a mi x t u r e o f a c e to n e a n d a c et i c a c id ( 9 9 : 1 ) i s a d d ed . T h e mi x t u r e , a f t e r h o mo g e n i z i n g f o r t h r e e mi n u t e s , i s f i l t e r e d b y s u c t i o n i n to a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r u s i n g f i l te r p a p e r c o v e r e d w i t h a o n e - c e n t i me t e r- t h i c k l a y e r o f d i a to ma c e o u s e a r t h . T h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l t er p a p e r i s co l l e ct e d an d 5 0 ml o f a mi x t u r e of a c e to n e and a c e ti c acid (99:1) is ad d e d b e f o re
h o mo g e n i z in g f o r th r ee mi n u t e s . T h e ab o ve p r o c e du r e is r e p e a t ed , a n d th e f il t r a t e i s ad d e d t o t he r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r a nd
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c o n c en t r a t ed t o a p p r ox i ma t e l y 3 0 ml a t 4 0 C o r l o w e r. T h e c o n c en t r a t e d so lu t i o n i s t ra n s f e r r e d t o a 5 0 0 - ml s e p a r a t in g f u n n e l a l r ea d y c o n t a i ni n g 2 00 ml o f 1 0 % s od i u m c h l o r i d e s o lu t io n. T h e e g g p l an t - s h a p ed fl a s k o f th e a b o v e r o t a ry v a c u u m e v a p o r at o r is w a s h e d w i th 1 0 0 ml o f n - h e x an e t o o b t ai n th e w a s h in g s , w h i c h a r e a d d ed t o th e s e p a r a ti n g f u n n e l a b o v e . Th e mi x t u r e i s s h a k en v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h ak e r b e f o r e b e in g l e f t to s t a n d , a n d th e n t h e n - h e x an e l a ye r i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i ca l f l a sk . F i f t y m l o f n - h e x a n e i s a d d e d t o t h e a q u e o u s l a y e r a n d , a f t er r e p e a t in g th e a b o v e p r o c e d u r e , th e n - h ex a n e l a y e r i s a d d ed t o th e c o n ic a l f la s k . A n a d eq u a t e a mo u n t o f s o d iu m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s a l s o a dd e d t o th e f l a sk , w h i c h i s l e f t t o st an d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h a k e n f r o m t i me t o ti me . T h e co n t en t o f th e f l a s k i s t h e n f i l t e r ed i n t o a r o ta r y v a c u u m e v a p o r at o r. T h e c o n i c al f l a s k i s t h e n w a s h e d w i t h 2 0 ml o f n - h e x a n e to o b ta i n th e w as h i n g s , w i th w h i c h t h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s w a s h e d t w i c e . T h e w a s h i n g s o b t a in e d f r o m t h e r e p e a t e d w a s h in g a r e th e n a d d ed t o th e r o t a r y v a cu u m e v a p o r a t o r, a n d n - h e x an e is r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. Tw e n t y ml o f n - h e x a n e i s a d d e d t o t h e r e s id u e a n d t h e mi x t u r e i s t r a n s f e r r e d t o a 1 0 0- ml s e p a r a t i n g f un n el , t o w h i ch 4 0 ml o f n - h e x an e - s a t u r a t ed a ce t o n i t r i l e is a d d e d . A ft e r s h a k i n g t h e mi x t u r e v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s in g a s h a k e r, th e f u n n el i s l e f t t o s t a n d a n d t h e ac e t o n i t r i l e l a y e r i s t r a n s f e r r e d t o t h e r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. A f t e r a d d in g n - h e x a n e - s a t u r a t e d a c e to n i t r i le ( 4 0 ml ) t o t h e n - he x an e l a ye r, th e a b o v e p r o c e du r e i s r e p e a t ed t w i c e . T h e a c e t o n i t r i le l a y e r i s t h e n a d d e d to t h e r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r, a n d t h e ac e to ni t r i l e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e is d i s s o l v e d i n n - h ex a n e t o ma k e e x a c t l y 5 ml o f s o l u ti o n . i i . C e r e al g r a i n s , f r u i t a n d v e g et ab l e s C e r e a l g r a in s a r e c r u s h e d s o a s t o p a s s t h ro u gh a s t an d a r d me s h s i e v e ( 4 2 0 m) b e f o r e b e i n g w e i g h e d t o p r e p a r e a 1 0 . 0 -g r a m s a mp l e . Tw e n t y ml o f w a t e r i s a d d ed to th e o b t a in e d s a mp l e a n d t h en le f t to s t a n d f o r tw o h o u r s . F r u i t a n d v e g e t ab l e s ar e w e i g h e d a c c u r a t el y t o p r e p a r e a s a mp l e o f a b o ut o n e k i l og r a m. A p p r o p r i a te a mo u n t o f w a t e r i s me a s u r e d a n d a d d ed t o th e s a mp l e , i f r e q u i r e d . A f t e r h o mo g e n i z in g , a s a mp l e
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e q u iv a l en t t o 2 0 . 0 g i s me a s u r e d o u t . O n e h u n d re d ml o f a mi x t u r e o f a c e to n e an d ac e t i c ac i d ( 9 9 : 1 ) i s a d d ed t o t he 2 0 - g r a m s a mp l e b e f o r e b e in g fi n e l y c r u s h e d f o r t h r ee mi n u t e s , an d f i lt e r e d b y s u ct i o n in t o a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r u s i n g f i l t er p a p e r c o v e r e d w i th a o n e - c en t i me t e r- t h i c k la y e r o f d i a to ma c e o u s e a r t h . Th e r e s i d u e o n th e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s c o l l ec t ed an d 5 0 ml o f a mi x t u r e o f a c e to n e a n d a c e ti c a c i d ( 9 9 : 1 ) i s a d d ed b e f or e h o mo g e n i z i n g f o r t h r e e mi n u t e s. T h e ab o v e p r o ce d u re i s r e p e a te d a n d t h e f i l tr a t e i s ad d ed t o th e r o ta r y v a c u u m e v ap o r a to r a n d co n ce nt r a t e d to ap p r o x i ma t e l y 3 0 ml a t 4 0 C o r lo w e r. T h e c o nc en t r a t e d s olu t i o n i s t r a n s f e r r e d t o a 5 0 0 - ml s e p a r a t in g f u n n e l a l r ea d y c o n t a i n i n g 2 00 ml o f 1 0 % s od i u m c h l o r i d e s o lu t io n. T h e e g g p l an t - s h a p ed fl a s k o f th e a b o v e r o t a ry v a c u u m e v a p o r at o r is w a s h e d w i th 1 0 0 ml o f n - h e x an e t o o b t ai n th e w a s h in g s , w h i c h a r e a d d ed t o th e s e p a r a ti n g f u n n e l a b o v e . Th e mi x t u r e i s s h a k en v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h ak e r b e f o r e b e in g l e f t to s t a n d , a n d th e n t h e n - h e x an e l a ye r i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i ca l f l a sk . F i f t y m l o f n - h e x a n e i s a d d e d t o t h e a q u e o u s l a y e r a n d , a f t er r e p e a t in g th e a b o v e p r o c e d u r e , th e n - h ex a n e l a y e r i s a d d ed t o th e c o n ic a l f la s k . A n a d eq u a t e a mo u n t o f s o d iu m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s a l s o a dd e d t o th e f l a sk , w h i c h i s l e f t t o st an d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h a k e n f r o m t i me t o ti me . T h e co n t en t o f th e f l a s k i s t h e n f i l t e r ed i n t o a r o ta r y v a c u u m e v a p o r at o r. T h e c o n i c al f l a s k i s t h e n w a s h e d w i t h 2 0 ml o f n - h e x a n e to o b ta i n th e w as h i n g s , w i th w h i c h t h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s w a s h e d t w i c e . T h e w a s h i n g s o b t a in e d f r o m t h e r e p e a t e d w a s h in g a r e th e n a d d ed t o th e r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r, a n d th e n - h ex a n e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v ed i n n - h e x an e to ma k e e x a c tl y 1 0 ml o f s o l u t io n . i i i . Ma t ch a a n d h o p s M a t c ha i s w e i g h e d t o p r e p a r e a 5 . 0 0 - g r a m s a mp l e , t o w h i c h 2 0 ml o f w a t e r i s a d d e d an d l e f t t o s ta n d fo r t w o h o u r s . H o p s a r e f i r s t c r u s h e d i n to p ie c e s a n d w e i g h e d to p r e p a r e a 5 . 0 0 - g r a m s a mp l e , t o w h i c h 2 0 ml o f w a t e r is a d d ed a n d l e f t t o s ta nd for two hours. O n e h u n d re d ml o f a mi x t u r e o f a c e to n e an d ac e t i c ac i d ( 9 9 : 1 ) i s a d d ed t o th i s s a mp l e . T h e mi x t u r e , a f t e r h o mo g e n i z in g f o r t h r ee
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mi n u t e s , i s f i l t e r e d b y s u c t i o n i n to a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r u si n g filter p ap e r c o v e r ed with a o n e - c en t ime t e r- t h i c k layer of
d i a to ma c e o u s e a r t h . Th e r e s i d u e o n th e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s c o l l ec t ed an d 5 0 ml o f a mi x t u r e o f a c e to n e a n d a c e ti c a c i d ( 9 9 : 1 ) i s a d d ed b e f or e h o mo g e n i z i n g f o r t h r e e mi n u t e s. T h e ab o v e p r o ce d u re i s r e p e a t ed , a n d th e f i l tr a t e i s a d d ed t o th e r o ta r y v a c u u m e v a p o r a t o r a n d co n ce nt r a t e d to ap p r o x i ma t e l y 3 0 ml a t 4 0 C o r lo w e r. T h e c o nc en t r a t e d s olu t i o n i s t r a n s f e r r e d t o a 5 0 0 - ml s e p a r a t in g f u n n e l a l r ea d y c o n t a i n i n g 2 00 ml o f 1 0 % s od i u m c h l o r i d e s o lu t io n. T h e e g g p l an t - s h a p ed fl a s k o f th e a b o v e r o t a ry v a c u u m e v a p o r at o r is w a s h e d w i th 1 0 0 ml o f n - h e x an e t o o b t ai n th e w a s h in g s , w h i c h a r e a d d ed t o th e s e p a r a ti n g f u n n e l a b o v e . Th e mi x t u r e i s s h a k en v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h ak e r b e f o r e b e in g l e f t to s t a n d a n d th e n - h e x a n e l a y e r i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i c a l f l a s k . F i f ty ml o f n - h e x a n e i s ad d ed t o th e aq ue o u s l a ye r a n d , a f te r r e p e a ti n g t he a b o ve p r o ce d u r e , th e n - h e x an e la ye r i s a d de d t o t h e co n i ca l f l a sk . A n a d e q u a t e a mo u n t o f s o d i u m s u l fa t e ( a n h y d r o u s ) i s a l s o a d d e d t o t h e f la s k , wh i c h i s l e f t t o s t an d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h ak e n f r o m t i me t o t i me . T h e c o n t en t o f t h e f la s k i s t h en f i l t e r e d i n t o a r o t ar y v a c u u m e v a p o r a to r. Th e c o n i c a l f l a s k i s t h en w a s h e d w i t h 2 0 ml o f n - h e x an e to o b ta i n th e w a s h i n g s , w i t h w h i c h th e r e s i d u e o n th e s u r f a c e o f t h e f il t e r p a p e r i s w a s h e d t w i c e . T h e w a s h in g s o b t a in e d from the r e p e a t ed washing ar e a d d ed to th e r o ta r y vacuum
e v a po r a t o r a n d co nc e n t r a t e d t o ap p r o x i ma t e l y 5 ml a t 4 0 C o r l o w e r, t o w h i ch n -h e x an e i s ad d e d t o ma k e e xa c t l y 1 0 ml o f s o l u t io n . i v. Te a s o t h e r t h a n ma t c h a A 9 . 0 0 - g r a m s a mp l e s o a k ed i n 5 4 0 ml o f w a t e r a t 1 0 0 C i s l e f t to s t a n d a t r o o m t e mp e r a t u r e f o r f i v e mi n u t es b e f o r e b e i n g f i l te r e d . F r o m t h e c o o le d f i l tr a t e , 3 6 0 ml i s t r a n s f e r r e d i n t o a 5 0 0 - ml s e p a r a t i ng f u n n e l . To t h i s c oni c a l f l a s k , 3 0 g o f s o d i u m c h l o r i d e , 2 ml o f 2 % s o d i u m d o d ec yl s u lf a t e s o l u ti o n a n d 1 0 0 ml o f n - h e x a n e a r e a l so a d d e d . The mi x t u r e i s s h a k e n v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h a k e r a n d l e f t t o s t an d . T h e n - h e x a n e l a y er i s t h e n tr a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n ic a l f l as k . O n e h u n d r e d ml o f n - h e x a n e i s a d d ed to t h e aq u eo u s l a y e r a n d , af t e r r e p e a t in g t h e a b o v e p r o c e d u r e, t h e n - h e x a n e l a y e r i s a d d ed t o t h e c o n i c a l fl a s k . A n ad e q ua t e a mo u n t o f s od i u m s u l f a t e
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( a n h yd r o u s) i s a l s o ad d e d t o t h e f l a s k , w h i ch i s le f t t o s t a n d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h ak e n f r o m t i me t o t i me . T h e c o n te n t o f t h e f l a sk i s t h e n f i l t e r ed in t o a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. T h e c o n i c a l f la s k is t h e n w a s h ed w i t h 2 0 ml o f n - h e x a n e t o o b ta i n th e w as h i n g s , w i th w h i c h t h e r e s i d u e o n th e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p a p e r i s wa s h e d t w i c e. T h e w a s h i n g s o b t ai n ed f r o m t h e r e p e a te d w as h i n g a r e th e n a d d e d to t h e r o ta r y v a c u u m e v a p o r a to r, an d n - h e x an e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v ed i n n - h e x an e to ma k e e x a ct l y 6 ml o f s o l u t io n . v. F o o d s o th e r t h an t h o s e l i s t ed in i to i v a b o v e E x t r a c t s a re o b ta i ne d b y t h e me t h o d s d e s c r ib e d in i , i i , o r i i i . b . E t h y l at io n O n e ml ( 2 ml f o r c e r e a l g r a i n s , t e a s a nd h op s ) o f t h e s o lu t io n o b t ai n ed b y t h e me t h o d d e s c r ib e d i n a . E x t r a c t i o n me t h o d s i s t r a n s f e r r e d t o a 5 0 - ml t e s t tu b e w i th a g la s s s to p p e r, t o w h i c h 1 ml ( 2 ml f o r c e r e a l g r a i n s , t e a s a n d h o p s ) o f a 3 mo l / l eth y l ma g n e s i u m b r o mi d e - e t h e r e a l s o lu ti o n i s a dd ed . T h e mi x t u r e i s l e f t t o s t a n d f o r 2 0 mi n u t e s a t r o o m t e mp e r a t u r e . T h e n , 1 0 ml o f 0 . 5 ml / l s u l f u r i c ac i d i s g r a d u a l l y a d d e d , f o l l o w e d b y t h e ad d it i on o f 10 ml o f w a t e r t o b e mi x e d in . Ten ml o f n - h e x a n e i s a d d ed t o t he mi x t u r e be f o r e b e i n g v i g o r o u s l y s h a k e n f o r o n e mi n u t e . A f t e r b e i n g l e f t to s t an d , th e n - h ex a n e l a ye r i s t r a n s f e r r e d to a 5 0 m l c o n ic a l f la s k . F i v e ml o f n - h ex a n e i s ad d ed to th e aq u eo u s l a y e r a n d , a f t e r r e p e a t i n g th e ab o v e p r o c ed u r e t w i c e, t h e n - h ex a n e la y e r i s a d d ed to th e c on i ca l f l a s k . A n a d e q u a t e amo u n t o f s o d i u m s u l f a t e ( a n h yd r o u s) i s a l s o add e d to th e f l a s k , w h i ch i s l e f t t o s t a n d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h a k e n f ro m t i me t o t i me . T h e co n t en t o f t h e f l a s k i s t h e n f i l t e r e d i n to a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. Th e co n i c a l f l a s k i s t h e n w a s h e d w i t h 5 ml o f n - h e x a n e t o o b t ai n th e w a s h i n g s , w i t h w h i c h t h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f th e f i l t e r p ap er i s w a s h ed t w i c e . Th e w a s h i n g s f r o m t h e r e p e a t ed w a s h i n g a r e th e n ad d ed t o t h e r o t ar y v a c u u m e v a p o r a t o r an d c o n ce n t r a te d t o 2 ml a t 4 0 C o r l o w e r. c . C l e an - u p F i v e g r a ms o f f l o r i si l f o r c o lu mn c h r o ma t o g r a p h y su s p e n d e d in n - h e x an e i s a d d e d t o a c h r o ma t o g r a p h tu b e ( i n n e r d i a me t e r : 15 mm a n d l en g th : 3 0 0 m m) , o v e r w h i c h a p p r o x i ma t e l y 5 g o f s o d i u m s u l f a t e ( a n h y d r o u s) i s f u r t h e r a d d ed . T h e n - h e x an e i s t h e n s p il t o u t u n t il o n l y
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a s ma l l a mo u n t r e ma i n s o n t h e p a c k in g o f th e c o l u mn , i n t o w h i c h t h e s o l u t io n o b t a i n ed b y th e e th y l a t io n d e s c r i b e d i n b . E t h y l a t io n i s p o u r e d . Th e n , t h e e g g p l a n t - s h a p e d f l a s k o f th e ro t a r y v a cu u m e v a po r a t o r i s w a s h e d w i t h 1 5 ml o f n - h e x an e t o o b t a in t h e w a s h i n g s , w h i c h a r e t r a n s f e r r e d t o a c o lu mn . T h e e l u a t e i s co ll e c t ed i n th e r o t a r y v a cu u m e v a p o r a t o r. T h e n, 5 0 ml o f a mi x t u r e o f e th e r an d n - h e x an e (1 : 9 9 ) i s p o u r e d in an d t h e e l u a t e i s c o ll e c t ed i n t h e r o t ar y v a c u u m e v a p o r a to r, a n d t h e e t h er a n d n - h e xa n e a r e r e mo v e d a t 40 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e o b t ai n ed i s d i s s o l ve d i n n - h ex a n e to ma k e e x a c tl y 2 ml o f s o l u t i o n , w h i c h i s u s e d a s t h e s a mp l e s o l u t io n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e c yh e x a t in re f e r e n c e ma t e r i a l u n d e r t h e p r o c e d u r e d e sc r i b e d i n b . E t h yl a t io n i n 4 . P r e p a r a t io n o f t e s t s o lu t i o n s . Az o c y c l o ti n i s mo d i f i e d b y e t h y l a t i o n i n to th e sa me s u b s t a n c e a s c yh ex a t in . Te s t i n g c o n d i t io n s C o l u mn : A s i l i c a t e g l a s s c a p i l la r y c o l u mn ( i n n e r d i a me t e r : 0 . 3 2 m m- 0 . 5 3 m m a n d l e n g t h : 3 0 m) c o a t e d w i t h 5 % p h e n y l me t h y l s i l i c o n e f o r g a s c h r o ma t o g r ap h y to a th i c k n es s o f 1 . 5 m i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : T h e c o lu mn t e mp e r a t u r e i s h el d at 1 2 0 C f o r t w o mi n u t e s , f o l lo w e d b y an in cr e a s e o f 1 0 C e v e r y mi n u t e u n ti l r e a c h i n g 2 0 0 C , a f t e r w h i c h t h e t e mp e r a t u r e i s i n c r e as e d b y 2 0 C e v e r y mi n u t e u n t i l r e ac h i n g 3 0 0 C , w h e r e i t i s h e l d f o r f i v e mi n u t es . I n l e t t e mp e r a t u r e : 2 8 0 C D e t e c t o r : Sh o u ld be op e r a t e d a t 3 0 0 C Gas flow rate: Helium is used as the carrier gas. The flow rate should b e ad j u s t ed s o th a t c y h e x a t in f l o w s o u t i n ap p r o x ima t e l y 1 3 - 1 5 mi n u t e s . T h e f l o w r a t e s o f a i r a n d h y d r o g e n a r e a d j u s t ed t o o p t i ma l c o n d i t io n s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e s a me c o n d it i o n s d e s c ri b e d i n a . Q u a l i ta t ive t e s t s , u si n g e i th e r th e p e a k h e ig h t o r p e ak a re a me t h o d . c . C o n f i r ma t i o n t e s t s G a s c h r o ma t o g r ap h y/ma s s s p e c t r o me t r y i s p e r f o r me d u n d e r t h e s ame
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c o n d i t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l i t a t i v e t e s t s. Te s t r e s u l t s o b t a in e d mu s t b e t h e s a me a s t h e r e s u l t s o b t a in e d in t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l u n d e r t h e p r o c e d u r e d es c r i b e d i n b . E t h yl a t io n i n 4 . P r e p a r a t i o n o f t e s t s o l u ti o n s . Th e q u a n ti t y ma y b e d e t e rmi n e d b y ei t h e r t h e p e a k h e i gh t o r pe a k a r e a me t h o d , i f r eq u i r e d . ( 5 ) A mi t r o l e a n a l y t ic a l me t h o d 1 . E q u i p me n t A h i g h - p e r fo r ma n c e l iq u i d ch r o ma t o g r ap h wi t h a f l u o r es c e n c e d e tec t o r a n d li q u i d c h r o ma t o g r a p h ma s s s p e c t r o me t e r a r e u s e d . 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. A c e t o n e: Th r e e h u n d re d ml o f a c e t o n e i s co n c en t r a t ed u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. A f t e r r e m o v i n g t h e a c e t o n e , t h e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d u e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . E t h a no l : Th r e e hu n d re d ml o f e t h a n o l i s c o n c e n t r a t e d u s i n g a r o ta r y v a c uu m e va p o r a to r. A f t e r r e m o v i n g t h e e t h a n o l , t h e r e s id u e is d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d ue i s i n j e ct e d i n t o th e G C- E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e ak s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e ga s c h r o ma t o g r a m mu s t b e t he s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . D i a t o ma c e o u s e a r th : D i a t o ma c e o u s e a r th fo r c h e mi c a l a n al y s i s i s u s e d . A c e t i c ac id b u ff e r s o l u ti o n : 0 .0 5 mo l / l s o d i u m a c e ta t e s o l u t io n i s a d d ed t o 8 0 0 ml o f 0 . 0 5 mo l / l a c et i c a ci d s o lu t i o n t o ma k e a 1 ,0 0 0 - ml s o l u t io n . We a k a ci d c a t io n ex c h a n g e r e si n : We ak ac i d ca t io n e x c h an g e r e s i n p r o d u ce d f o r c o l u mn c h o r o ma t o g r a p h y i s f i r s t w a s h e d w i t h 1 mo l / l h y d r o c h l o r ic a c i d , s ec o n dl y w i t h a 2 . 8 % a q u eo u s am mo n i a , a n d t h i r d l y w i th 1 mo l / l h y d r o c h l o r i c a c i d a g ai n . T h e r e a f t e r t h e w a s h i n g s a r e f u r t h e r w a s h e d w i th w a t e r u n ti l t h e y b e co me n e u t r al . F l u o r e s c a mi n : A r e a g en t w i t h a p u r i t y o f 9 8 % o r h i g h er i s u s e d . Wa t e r : D i s t i l l ed w a t er i s u s e d . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n ce t h a t i n t e r f e r e s w i t h a n al y s i s o f a n i n g r e d i e n t o f th e a g r i cu l tu r a l c h e mi c a l
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p r o d u ct con c e r n e d i s c o n ta i n ed , i t s h o u ld b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t s u c h a s n - h e x a n e. P h o s p h a te b u ff e r s o l ut i o n : 1 0 % p h o s p h o r i c a c i d s o lu t io n i s a d d e d t o a 0 . 0 5 ml / l mo n o s od i u m p h o s p h a t e s o l u ti o n t o ad j u s t t h e p H t o 3 . 0 . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l A mi t r o l e : T h i s p r o d u c t s h o u l d co n s i s t o f 9 8 % o r mo r e a mi t r o l e . M e l t in g p o in t : 1 5 7 - 1 5 9 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s i . C e r e a l g r a i n s , l eg u me s / p u l s e s , se e d s , f r u i t , v e g et a b le s , ma t c h a a n d hops C e r e a l g r a in s , l e g u me s / p u l s e s a n d s e e d s a r e c r u s h e d so a s t o p a ss t h r o u gh a s t a n d a r d me s h s i e v e (4 2 0 m) b e f o r e b e in g w e i g h ed to p r e p a r e a 3 0 . 0 - g r a m s a mp l e . F r u i t a n d v e g e t ab l e s ar e w e i g h e d a c c u r a t el y t o p r e p a r e a s a mp l e o f a b o u t o n e k i l o g r a m. A n a p p r o p ri a t e a mo u n t o f w a t e r i s me a s u r e d a n d a d d e d to t h e s a mp l e , i f r e q ui r e d . A f t e r ho mo g e n i z ing , a s a mp l e e q u iv a l en t t o 3 0 . 0 g i s me a s u r e d o u t . M a t c h a i s w e i g h e d t o p r e p a r e a 3 0 . 0 - g r a m s a mp l e . H o p s a r e cr u s h e d in t o p i e ce s a n d w e i g h ed to p r e p a r e a 3 0 .0 - g r a m s a mp l e . E i g h t y ml o f e t h an o l i s a d de d t o t h e o bt a i ne d s a mp l e b e f o r e b ei ng c r u s h e d f in e l y f o r t h r ee mi n u t e s . T h e c r u s h ed s a mp l e i s f i l t e r e d b y s u c t i o n in to a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r u s i n g f i lt e r p a p e r c o v e r ed w i t h a o n e- c e n t i me t e r- t h i c k la y e r o f d i a t o ma c e o u s e a r t h a n d th e f i l t r a t e i s t ra n s f e r r e d to a 2 0 0 - ml g r a d u at e d cy l i n d e r. T h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p a p e r i s co l l e c t ed an d 4 0 ml o f 6 0 % e t h a n o l i s a d d ed b ef o r e h o mo g e n i z in g f o r t h r e e mi n u te s . A f t e r r e p e a t in g th e a b o v e p r o ce d u r e , th e f i l t r a t e i s add e d to t h e g r a d u at e d cy l i n d e r a n d t h e a mo u n t o f f i l t r a t e i s me a s u r e d . Te n ml o f t h e f i l t r a t e is t r a n s f er r e d t o a 2 0 0 - ml r o u n d b o t t o m f l a s k , t o w h i ch 1 ml o f h y d r o g e n p e r o x i d e s o l u t io n i s a d d ed . A r e f l u x c o n d e n s e r i s a t t a ch e d t o th e f l as k , w h i c h i s t h e n h ea t e d f o r 30 mi n u t e s i n a w a t e r b a th a t 7 5 C an d a ll o w e d t o c o o l . i i . Tea s e x ce p t ma t c h a A 1 0 . 0 0 - g ra m s a mp l e s o a k e d i n 6 0 0 ml o f w a t e r a t 1 0 0 C i s l e f t to s t a n d a t r o o m t e mp e r a t u r e f o r f i v e mi n u t es b e f o r e b e i n g f i l te r e d .
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F r o m t h e c o o l ed f i l t r at e , 1 2 ml i s t r a n s f e r r e d i n t o a 2 0 0 - ml r o u n d b o t to m f l a s k , t o w h i ch 1 ml o f h y d r o g e n p e ro x i d e s o l u ti o n i s a d d ed . A r e f l u x co n d e n s e r i s a t t a ch e d to t h e f l a s k , w h i c h i s th e n h e a te d f o r 3 0 mi n u t e s i n a w a t e r b a t h a t 7 5 C a n d a l lo w e d t o co o l. i i i . F o o d s ex c e p t t h o s e l i s t e d i n i a n d ii a b o v e E x t r a c t s a re o b ta i ne d b y t h e me t h o d s d e s c r ib e d in i . b . C l ea n - u p One ml of strong m) in acid a c a ti o n w a t er e x c h an g e s u s p e n s io n resin is (p a r t i c le poured s iz e : a
0.063-0.156
i n to
c h r o ma t o g r a p h t ub e ( i n n e r d i a me t e r : 1 0 mm a n d l e n g th : 3 0 0 mm ) . T h e w a t e r i s t h e n s p i l t o u t u n ti l o n l y a s ma l l a mo u n t r ema i n s o n th e p a c ki n g o f t h e co l u mn , in t o w h ic h 5 ml o f w a t e r i s p o u r e d a n d t h e e ff l u e n t i s d i s c a r d ed . T h e s o l u ti o n o b t a in e d b y t h e me t h o d d e s c r ib e d i n a . Ex t r ac t i o n me t h o d s i s th en p o u r e d in t o th e c o l u mn . T h e r o u n d b o t to m f l a s k de s c r i b e d a b o v e i s t h e n w a s h ed w i t h 1 0 ml o f w a t e r an d t h e w a s h ing s a r e a l so p o u r e d in t o th e co lu mn a n d th e e ff l u e n t i s d i s c a r d ed . S u b s e q u en tl y, 1 2 ml o f 2 . 8 % a q u eo u s a mmo n i a i s a d d ed t o t h e co l u mn . T h e el u a te i s c o l le c t ed i n a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r an d 3 0 ml o f n - p r o p a no l i s a d d ed b e f o r e r e mo v i n g th e w a t e r a n d n - p r o p a no l a t 45 C o r l o w e r. F i v e ml o f w a t e r i s a d d ed to t h e r e s i d u e to dissolve it. I n a ch r o ma t o g r ap h t u b e ( i n n e r d ia me t e r : 1 0 m m a n d l e n g t h : 3 0 0 mm) , 5 ml o f w e a k a ci d c a t io n e x c h an g e r e s i n ( p a r ti c l e si z e : 0 .3 3 - 0 . 5 0 m) i n a w a t e r s u s p e n s io n is p o u r e d . Th e w a t e r i s t h e n s p i l t o u t u n t i l o n ly a s ma l l a mo u n t r e ma i n s o n t h e p a c k in g o f th e co l u mn , i n to w h ic h 1 0 ml o f w a t e r i s p o u re d a n d t h e e ff l u e n t is d i s c a r d ed . T h e a b o v e s o l u t io n i s p o u r e d in an d t h e e ff lu e n t i s d i s ca r d e d . F i f t y ml o f w a t e r i s a l s o p o u r e d i n an d t he e ff l u e n t is d i s c a r d e d. S u b s e q u en t l y, 3 5 ml o f 2 . 8 % a qu eo u s a mmo n i a i s a d d e d t o t h e c o l u mn . T h e e l u at e i s c o l l ec t ed i n a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r a n d 1 0 0 ml n - p r o p a n o l i s a d d ed b e f or e r e mo v i n g t h e a q u e o u s a mmo n i a a n d n - p r o p a n o l a t 4 5 C o r l o w e r. c . D e r i v a t iz a t i o n Tw o ml o f a c et i c a c id b u ff e r s o l u ti o n i s a d d ed t o th e r e s id u e to d i s s o l v e it w e l l . To 1 ml o f t h i s s o lu t i o n , 1 0 0 l o f 0 . 2 5 % f l u o r e s c a mi n - a c e to n e s o l u t io n i s a d d e d , w h i c h i s t h e n s h a k en we l l b e f o r e b e in g a l l o w ed to s t a n d f o r o n e h o u r. T h e n , 0 . 5 ml o f 0 . 0 5 mo l / l
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s o d i u m b o r a t e s o lu t io n i s a l s o a dd e d to p r epa r e t h e t e s t s o l u ti o n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e reference ma t e r i a l under the p r o ced u r e d e s cr i b e d in c .
D e r i v a t i z ati o n i n 4 . P r e p a r a t i o n o f t e s t s o lu t i o n s . Te s t i n g c o n d i t io n s C o l u mn p a c k i ng : O c ta d e c y l s i l an e - b o n d e d si l i c a g e l ( p a r t i c l e s i ze: 5 m) i s u s e d . C o l u mn : A s t a i n le s s tu b e ( i nn e r d i a me t e r : 4 . 6 mm a n d l e n gt h : 1 50 m m) i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : 4 0 C D e t e c t o r : Sh o u ld b e op e r a t e d w i th a n ex c i tat i o n w a v e le n g th o f 3 8 0 n m a n d a f lu o r e s c e n t w a v e l e ng t h o f 4 8 4 n m. M o b il e p h as e : A mi x t u r e o f ac e t o n i t r i l e an d p h o s p h a t e b u ff e r s o lu ti o n ( 3 : 7 ) i s u s ed . T h e f l o w r a t e s h o u l d b e ad ju s t e d so th a t t h e a mi t r o l e f l o w s o u t in a p p r o x i ma t e l y 1 5 mi n u t e s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e s a me c o n d it i o n s d e s c ri b e d i n a . Q u a l i ta t ive t e s t s , u si n g e i th e r th e p e a k h e ig h t o r p e ak a re a me t h o d . c . C o n f i r ma t i o n t e s t s L i q u id c h ro ma t o g r a p hy / ma s s s p e c t r o me t r y i s p e r f o r me d u n d e r t h e s a me c o n d i t i o n s d e s cr i b e d i n a . Q u a li t a ti v e t e s t s . Te s t r e s u l t s o b t ai n ed i n t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l mu s t b e t h e s a me a s t h e r e s u l t s o b t ai n ed u n d e r t h e p r o c e du r e d es c r i b e d i n c . D e r i v a t i z a t io n in 4 . P r e p a r a t i o n o f t e s t s o l u t io n s . Th e q u a n t i t y ma y b e d e t e r mi n e d b y e i t h e r th e pe a k he i gh t o r p e a k a r ea me t h o d , if r e q u i r e d . ( 6 ) C a p t a f ol a n al yt i c a l me t h o d 1 . E q u i p me n t A g a s c h r oma t o g r a p h w i t h an e lec t r o n c a p tu r e d e t ec t o r ( G C - E C D ) a n d a g a s ch r o ma t o g r a p h - ma s s s p e c t r o me t e r a r e u s e d . 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used.
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R e a g en t s d e s i g n at e d as s p e c i a l g r a d e i n th i s s e ct i o n mu s t me e t t h e r e q u i r e me n t s f o r s p e c i a l g r a d e s p e ci f i e d i n t h e J ap a n I n d u s tr i a l St a n d a r d s fo r t h e r e a g e n t s . A c e t o n it r i le : Th r e e h u n d r e d ml o f a c e t o n it r i l e i s c o n c en t r a t e d u sin g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. A f t e r r e mo v i n g t h e a c e to n i t r il e , th e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e di s s o lv e d r e s i d u e i s in j e c te d i n to t h e G C - E C D f o r a n a ly s i s , t h e h ei g h t s o f p eak s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h a n n - h ex an e o n t h e g a s c h r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r th a n th e p e ak f o r g a mm a - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . A c e t o n e: Th r e e h u n d r e d ml o f a c e t o n e i s c o n c en t r a t ed u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. A f t e r r e m o v i n g t h e a c e t o n e , t h e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d ue i s i n j e ct e d i n t o th e G C- E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e ak s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e ga s c h r o ma t o g r a m mu s t b e t he s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . S o d i u m c h l o r i d e : S o d iu m c h l o r i de ( s p e c i al g r a d e ) . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n ce t h a t in t e r f e r e s w i t h a n a l y s i s o f a n i n g r ed i e n t o f th e a g r i c u lt u r al c h e mi c a l p r o d uc t co n c e r n ed is c o n ta i n ed , i t s h ou ld be r i n s e d o u t w i t h a s o lve n t s u ch a s n - h e x an e . S y n t h e t i c ma g n e s i u m s i l i c at e (F l o r i s i l ) f o r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y: Florisil (p a r t i c le si z e : 150-250 m) p r o d u c ed for c o lu mn
c h r o ma t o g r a p h y i s h ea t e d at 1 3 0 C f o r mo r e t h an 1 2 h o u r s b ef o r e b e i n g a ll o we d t o c o o l in a d e s i c c at o r. D i a t o ma c e o u s e a r th : D i a t o ma c e o u s e a r th fo r c h e mi c a l a n al y s i s i s u s e d . E t h yl a c e t at e : T h r e e hu n d r e d ml o f e t h y l a ce t a t e i s co n c e n t r a t ed u s i n g a r o t a r y v ac u u m e v a p o r a t o r. A f t e r r e mo v i n g th e e t h y l a c e ta t e , th e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e di s s o lv e d r e s i d u e i s in j e c te d i n to t h e G C - E C D f o r a n a ly s i s , t h e h ei g h t s o f p eak s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h a n n - h ex an e o n t h e g a s c h r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r th a n th e p e ak f o r g a mm a - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . n - H e x a n e : T h r e e hu ndr e d ml o f n - h e x a n e i s c o n c en t r a t ed to 5 ml u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. W h e n 5 l o f th e c o n c en t r a t e d s a mp l e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . Wa t e r : D i s t i l l ed w a t er i s u s e d . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n ce t h a t i n t e r f e r e s w i t h a n al y s i s o f a n i n g r e d i e n t o f th e a g r i cu l tu r a l c h e mi c a l
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p r o d u ct con c e r n e d i s c o n ta i n ed , i t s h o u ld b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t s u c h a s n - h e x a n e. Sodium sulfate (anhydrous): Sodium sulfate (anhydrous) (special g r a d e ) . I n ca s e s w h e r e a s u b s t an c e t h a t i n t e r f e r e s w i t h an a l y s i s o f an i n g r e di e n t of the a g r i c u lt u r al c h e mi c a l p r o d u ct concerned is c o n ta i n ed , i t s h o u l d b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t su c h as n - h e x an e . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l C a p t a f ol : Th i s p r o du c t s h o u ld co n si s t o f 9 8 % o r mo r e c a p t a f o l . M e l t in g p o in t : 1 5 9 - 1 6 1 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s i . C e r e a l g r a i n s , l eg u me s / p u l s e s an d s e ed s C e r e a l g r a in s , l e g u me s / p u l s e s a n d s e e d s a r e c r u s h e d so a s t o p a ss t h r o u gh a s t a n d a r d me s h s i ev e (4 2 0 m) b e f o r e b e in g w e i g h ed to p r e p a r e a 1 0 . 0 - g r a m s a mp l e . Tw e n t y ml o f 3 % p h o s p h o r i c ac id s o l u t io n i s a d d ed t o th e o b t ai n ed s a mp l e , w h i c h i s th e n l e f t t o s t an d for two hours. A c e t o n e ( 10 0 ml ) i s th e n a d d e d . T h e mi x t u r e , a f t e r h o mo g e n i z in g f o r t h r e e mi n u t e s , i s f i l t e r e d b y s u c t i o n i n t o a r o ta r y v a c u u m e v a p o r a t o r u s i n g f i lt e r p a p e r c ove r e d w i t h a o n e - c en t ime t e r- t h i c k l a y e r o f d i at o ma c e o u s e a r t h . T h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l te r p a p e r i s co ll e c t ed a n d a c e t o n e ( 5 0 ml ) i s a d d e d b e f o r e h o mo g e n i z i n g f o r t h r e e mi n u t e s . Th e ab o v e p r o c e d u r e i s t h en r e p ea t e d a n d th e f i l t r a t e i s ad d e d to t h e r o t a r y v a c uu m e v a p o r a t o r a n d c o n c e n t r a t ed to a p p r o x i ma t e l y 3 0 ml a t 4 0 C o r lo w e r. T h e c o nc en t r a t e d s olu t i o n i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml s e p a r a t in g f u n n e l a l r ea d y c o nt a ini n g 1 0 0 ml o f 1 0 % s o d i u m c h l o r i d e s o lu t io n . T h e eg g p l an t - s h a p ed fl a s k o f t h e a b o ve r o t a ry v a c u u m e v a p o r at o r is w a s h e d w i t h 1 0 0 ml o f n - h e x an e t o o b t ai n th e w a s h in g s , w h i c h a re a d d ed t o th e s e p a r ati n g f u n n el a b o v e . Th e mi x t u r e i s s h a k en v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h ak e r b e f o r e b e in g l e f t to s t an d , a n d th e n t h e n - h e x a n e l a y e r i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i ca l f l a sk . F i f t y m l o f n - h e x a n e i s a d d ed t o t h e a q u e o u s l a y e r a n d , a f t e r r e p e a t in g th e a b o v e p r o c e d u r e , th e n - h ex a ne l a ye r i s a d d ed t o t he c o n ic a l f l a sk . A n a d eq u a t e a mo u n t o f so d iu m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s a l s o ad d ed t o th e f l a sk , w h i ch i s l e f t t o s t an d f o r 15 mi n u t e s a nd s h a k e n f r o m t i me t o ti me . T h e co n t en t o f th e f l a s k i s t h e n f i l te r e d
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i n t o a r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r. T h e c o n i c al f l a s k i s th e n w a s h e d w i t h 2 0 ml o f n - h ex a n e t o o b t a i n t h e w a s h i n g s , w i t h w h i c h t h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s w a s h e d t w i c e . T h e w a s h i n g s o b t a in e d f r o m t h e r e p e a t e d w a s h in g a r e th e n a d d ed t o th e r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r, a n d th e n - h ex a n e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h i r t y ml o f n - h e x an e i s a d de d t o t h e r e s id u e a n d t h e mi x t u r e i s t h en t r a n s f e r r e d t o a 1 0 0- ml s e p a r a t i n g f un n el , t o w h ich 3 0 ml o f n - h e x an e - s a t u r a t ed a ce t o n i t r i l e is a d d e d . A f t e r s h a k in g t h e mi x t u r e v i g o r ou s l y f o r f i v e mi n u t e s u s in g a s h a k e r, th e f u n n e l i s l e f t t o s t a n d a n d t h e ac e t o n i t r i l e l a y e r i s t r a n s f e r r e d t o t h e r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. A f t e r a d d in g n - h e x a n e - s a t u r a t e d a c et o n i t r i le ( 3 0 ml ) t o t h e n - h e x an e l a y e r, th e a bo v e p r o c e du r e i s r e p e a t ed t w i c e . T he a c e t o n i t r i le l a y e r i s t h e n a d d e d to t h e r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r, an d t h e a c e to n i t r i l e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e is d i s s o l v e d in 5 ml o f n - h e x a n e. i i . F r u i t , v eg e t ab l e s , ma t c h a a n d h o p s F r u i t a n d v e g e t ab l e s ar e w e i g h e d a c c u r a t el y t o p r e p a r e a s a mp l e o f a b o u t o n e k i l o g r a m, t o w h i ch 5 0 0 ml o f 1 0 % p h o s p h o r i c ac id s o l u t io n i s a d d ed b e f o r e h o mo g e n i z in g . T h en , a s a mp l e e q u iv a l en t t o 20 . 0 g i s me a s u r e d o u t . M a t c ha i s w e i g h e d t o p r e p a r e a 5 . 0 0 - g r a m s a mp l e , t o w h i c h 2 0 ml o f 3 % p h o sp ho r i c ac i d so l u ti o n i s a d d ed an d l e f t t o s ta n d f o r t wo hours. H o p s a r e f i r s t c r u s h e d i n to p ie c e s a n d w e i g h e d to p r e p a r e a 5 . 0 0 - g r a m s a mp l e , t o w h i c h 2 0 ml o f 3 % p h os p h o r i c a cid s o l u ti o n is a d d ed a nd le f t t o s t an d f o r t w o h o u r s . O n e h u n d r ed ml o f a c e t o n e i s th en a d d e d t o t h e mi x t u r e a n d f i n e l y c r u s h e d f o r t h r e e mi n u t e s . T h e c r u s h e d mi x t u r e i s f i l t e r e d b y s u c t i o n in to a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r u s i n g f i lt e r p a p e r c o v e r ed w i t h a o n e - c e n t i me t e r- t h i c k l a ye r o f d i ato ma c e o u s e a r t h . Th e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l te r p a p e r i s c o l l e ct e d a n d a c et o n e ( 5 0 ml ) i s a d d ed b e f o r e h o mo g e n i z i n g f o r th r e e mi n u t e s. T h e a b o v e p r o c e d u r e is r e p e a t ed a n d t h e f i l tr a t e i s ad d ed t o t he r o ta r y v a c u u m e v a p o r a t o r a n d co n cen t r a t e d to a p p r o x i ma t e l y 3 0 ml a t 4 0 C o r l o w e r. T h e c o nc en t r a t e d s olu t i o n i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml s e p a r a t in g
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f u n n e l a l r ea d y c o n t a i n i n g 1 00 ml o f 1 0 % s od i u m c h l o r i d e s o lu t io n. T h e e g g p l an t - s h a p ed fl a s k o f th e a b o v e r o t a ry v a c u u m e v a p o r at o r is w a s h e d w i th 1 0 0 ml o f n - h e x an e t o o b t ai n th e w a s h in g s , w h i c h a r e a d d ed t o th e s e p a r a ti n g f u n n e l a b o v e . Th e mi x t u r e i s s h a k en v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h ak e r b e f o r e b e in g l e f t to s t a n d , a n d th e n t h e n - h e x an e l a ye r i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i ca l f l a sk . F i f t y m l o f n - h e x a n e i s a d d e d t o t h e a q u e o u s l a y e r a n d , a f t er r e p e a t in g th e a b o v e p r o c e d u r e , th e n - h ex a n e l a y e r i s a d d ed t o th e c o n ic a l f la s k . A n a d eq u a t e a mo u n t o f s o d iu m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s a l s o a dd e d t o th e f l a sk , w h i c h i s l e f t t o st an d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h a k e n f r o m t i me t o ti me . T h e co n t en t o f th e f l a s k i s t h e n f i l t e r ed i n t o a r o ta r y v a c u u m e v a p o r at o r. T h e c o n i c al f l a s k i s t h e n w a s h e d w i t h 2 0 ml o f n - h e x a n e to o b ta i n th e w as h i n g s , w i th w h i c h t h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s w a s h e d t w i c e . T h e w a s h i n g s o b t a in e d f r o m t h e r e p e a t e d w a s h in g a r e th e n a d d ed t o th e r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r, a n d th e n - h ex a n e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v ed i n 5 ml o f n - h e x a n e. i i i . Te a s exc e p t ma t c h a A 9 . 0 0 - g r a m s a mp l e s o a k ed i n 5 4 0 ml o f w a t e r a t 1 0 0 C i s l e f t t o s t a n d a t r o o m t e mp e r a t u r e f o r fi v e mi n u t es b e f o r e b e i n g f i l t e r ed . F r o m t h e c o o l ed f i l t r at e , 3 6 0 ml i s t r a n s f e r r e d i n t o a 5 0 0 - ml c o n i c a l flask. T h i r t y ml o f p h o s p h o r i c a c id , 1 0 0 ml o f a c e t o n e a n d 2 ml o f s a t u r a t e d le a d a ce t a te s o l u t io n ar e a l s o a d d e d t o t h i s co n i ca l f l a sk . T h e mi x t u r e i s l e f t t o s t a n d f o r o n e h o u r a t r o o m t e mp e r a t u r e b e f o re being f i l t er e d by suction u s i ng filter paper covered with a
o n e - c e n t i me t e r- t h i c k la y e r o f d i a t o ma c e o u s e a r t h . T h e f i l t r a t e is t r a n s f e r r e d t o a 1 ,0 0 0 - ml s e p a r a t i n g f u n n e l . Th e c o n i c a l f l a s k i s t h e n w a s h ed w i t h 5 0 ml o f a c e t o n e t o o b ta i n t h e w a s h i n g s , w i th w h i c h t h e r e s i d u e o n th e s u r f a c e o f t h e f i l ter p a p e r i s w a s h e d . Th e w a s h i n g s ar e a d d e d to t h e s ep ar a t i n g f u n n e l , t o w h ic h 3 0 g o f s o d i u m c h l o r i d e a n d 1 0 0 ml o f n - h e x an e a r e a l s o a d d e d . T h e mi x t u r e i s s h a k en v i g o r ou s l y f o r f i v e mi n u t e s a n d l e f t to s t a n d . Th e n - h e x an e la y e r i s t h en t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i ca l f l a s k . On e h u nd r e d ml o f n - h e x an e i s a d d ed t o t h e aq u e o u s l a y e r, a n d a f te r r e p e a t in g th e a b o v e p r o c e d u r e , th e n - h ex a n e l a y e r i s a d d ed t o th e c o n ic a l f la s k . A n a d eq u a t e a mo u n t o f s o d iu m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s
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a l s o a dd e d t o th e f l a sk , w h i c h i s l e f t t o st an d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h a k e n f r o m t i me t o ti me . T h e co n t en t o f th e f l a s k i s t h e n f i l t e r ed i n t o a r o ta r y v a c u u m e v a p o r at o r. T h e c o n i c al f l a s k i s t h e n w a s h e d w i t h 2 0 ml o f n - h e x a n e to o b ta i n th e w as h i n g s , w i th w h i c h t h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s w a s h e d t w i c e . T h e w a s h i n g s o b t a in e d f r o m t h e r e p e a t e d w a s h in g a r e th e n a d d ed t o th e r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r, a n d n - h e x a n e i s r emo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o lv ed i n 5 ml o f n - h e x a n e . i v. F o o d s ex c e p t t h o s e l i st e d i n i t o i ii a b o v e E x t r a c t s a re o b ta i ne d b y t h e me t h o d s d e s c r ib e d in i o r i i . b . C l ea n - u p I n a ch r o ma t o g r ap h t u b e ( i n n e r d ia me t e r : 1 5 m m a n d l e n g t h : 3 0 0 mm) , 5 g o f f l o r is i l f o r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y s u s p e n d e d in n - h e x a n e i s a d d ed , o v e r w h i c h ap p ro x i ma t e l y 5 g o f s od i um s u l f a t e ( a n h yd r o u s ) i s f u r t h e r a d d e d . T h e n -h e x an e i s t h e n s p i lt o u t u n ti l o n l y a s ma l l a mo u n t r e ma i n s o n t h e p a c k i n g o f t h e c o lu mn , i n to w h ic h t h e s o lu t io n o b t ai n ed by t h e e x t ra c t i o n me t h o d d e s c r ib e d in a . E x t r a c t io n me t h o d s is p o u r e d . Th e n , 10 0 ml o f n - h e x an e i s a l s o p o u r e d i n an d t h e e ff l u en t i s d i s c a r d ed . S u b s e quen t l y, 1 5 0 ml o f a mi x t u r e o f e th y l a c e t a te an d n - h e x a n e ( 1 : 9 ) i s a d d e d an d t h e e l u a te i s co l l e ct e d i n a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r, a n d t h e e th y l ac e t a t e a n d n - h e x an e a r e r e mo v e d a t 4 0 C o r lo w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in n - h e x a n e t o ma k e e x a c tl y 5 ml o f s o l u ti o n, w hi c h i s u s e d a s t h e s a mp l e s o lu t i o n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed u n d er a n y o f t h e c o n d i t io n s mu s t b e t h e s a me a s t h e r e s u l t s o b t ai n e d i n t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l . Te s t i n g c o n d i t io n s 1 C o l u mn : A s i l i c a te g l as s c a p il l a r y c o lu mn ( i n n e r d i a me t e r : 0 . 2 5 m m and l e n g th : 10-30 m) coated with me t h y l silicone for g as
c h r o ma t o g r a p h y t o a th i c k n e s s o f 0 . 2 5 m i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : T h e c o lu mn t e mp e r a t u r e i s h e l d a t 5 0 C f o r o n e mi n u t e , f o ll o w e d b y an i n c r e a s e o f 2 5 C ev er y mi n u t e u n t i l r e ac h in g 1 7 5 C , a f t e r w h i c h th e t e mp e r a t u r e i s i n cr e a s e d b y 1 0 C e v e r y mi n u t e u nt il r e a c h in g 3 0 0 C , w h er e i t i s h e l d f o r f i v e mi n u t e s . I n l e t t e mp e r a t u r e : 2 3 0 C
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D e t e c t o r : Sh o u ld be op e r a t e d a t 3 0 0 C Gas flow rate: Helium is used as the carrier gas. The flow rate should b e a d j u s t ed t o th e o p t ima l c o n d i tio n . Te s t i n g c o n d i t io n s 2 C o l u mn : A s i l i c a te g l as s c a p il l a r y c o lu mn ( i n n e r d i a me t e r : 0 . 2 5 m m a n d le n g t h : 1 0 - 3 0 m) c o a t ed w i t h 5 % p h e n y l me t h y l s i l i c o n e f o r g as c h r o ma t o g r a p h y t o a th i c k n e s s o f 0 . 2 5 m i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : T h e c o lu mn t e mp e r a t u r e i s h e l d a t 5 0 C f o r o n e mi n u t e , f o ll o w e d b y an i n c r e a s e o f 2 5 C ev er y mi n u t e u n t i l r e ac h in g 1 2 5 C , a f t e r w h i c h th e t e mp e r a t u r e i s i n cr e a s e d b y 1 0 C e v e r y mi n u t e u n t il r e a c h in g 3 0 0 C , w h er e i t i s he l d f o r t h r e e mi n u t e s . I n l e t t e mp e r a t u r e : 2 3 0 C D e t e c t o r : Sh o u ld be op e r a t e d a t 3 0 0 C Gas flow rate: Helium is used as the carrier gas. The flow rate should b e a d j u s t ed t o th e o p t ima l c o n d i tio n . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e s a me c o n d it i o n s d e s c ri b e d i n a . Q u a l i ta t ive t e s t s , u si n g e i th e r th e p e a k h e ig h t o r p e ak a re a me t h o d . c . C o n f i r ma t i o n t e s t s G a s c h r o ma t o g r ap h y/ma s s s p e c t r o me t r y i s p e r f o r me d u n d e r t h e s ame c o n d i t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l i t a t i v e t e s t s. Te s t r e s u l t s o b t a in e d mu s t b e t h e s a me a s t h e r e s u l t s o b t ai n ed in t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l . T h e q u an t it y ma y b e d e t e r mi n e d b y e i t h e r t h e p ea k h e i g h t o r p ea k a r e a me t h o d , i f r e q u i r e d . ( 7 ) C a r b a d o x an a l y t i ca l me t h o d Q u i n o x a l in e - 2 - c a r b o x y l i c a c i d i s a n a l y z ed . 1 . E q u i p me n t A h i g h - p er f o r ma n c e l i q u id d e t e c to r ch r o ma t o g r a p h and a l i q u id with an u l t r av io l e t ma s s
s p e c t r o p h o to me t r i c
c h r o ma t o g r a p h
s p e c t r o me t e r a r e u s e d . 2 . R e ag e n t s / t e s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. R e a g en t s d e s i g n at e d as s p e c i a l g r a d e i n th i s s e ct i o n mu s t me e t t h e r e q u i r e me n t s f o r s p e c i a l g r a d e s p e ci f i e d i n t h e J ap a n I n d u s tr i a l
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St a n d a r d s fo r t h e r e a g e n t s . O c t a d e c yl si l a n e - bo nde d s i l i ca gel mi n i c o l u mn (500 mg ) : A
p o l y e t h y l en e c o l u mn w i t h a n i n n e r d i a me t e r o f 8 - 9 mm p a c k e d w it h 5 0 0 mg o f o c t a d e c y l s i l a n e - bo nde d s i l i c a ge l o r o n e w i t h t h e s am e s e p a r a t i o n c h a r a c t e r i st i c s i s u s ed . St r o n g b a s ic a n i o n ex c h a n g e r mi n i c o l u mn ( 3 6 0 mg ) : A p o l y e t h yl e n e c o l u mn w i t h a n i n n e r d i a me t e r o f 8 - 9 mm p a c k ed w i t h 3 60 mg o f t r i me t h yl a mi n o a c r yl a mi d e c o p o l y me r s i l a n e - b o n d e d s il i c a g e l o r o n e w i t h t h e s ame s e p a r a t i o n ch a r a c t er i s t i c s i s u se d . Wa t e r : Wa te r p r o d u ced f o r l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y i s u se d . Sodium sulfate (anhydrous): Sodium sulfate (anhydrous) (special g r a d e ) . I n ca s e s w h e r e a s u b s ta n c e t h at in t e r f e r e s w i t h an a l y s i s o f an ingredient of the a g r i c u lt u r al c h e mi c a l product concerned is c o n ta i n ed , i t s h o u l d b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t su c h as n - h e x an e . P h o s p h a te b u ff e r s o l u ti o n (pH 2.5): M o n o p o t a ss i u m dihydrogen
mo n o p h o s ph a t e ( 1 . 36 g ) i s d i s so l v ed i n wa t e r to ma k e a 8 0 0 -ml s o l u t io n , t o w h i c h p h o s p h o r i c a c id i s a dd e d t o a dj u s t t he p H t o 2 . 5. Wa t e r i s a d d e d to th e a d j u s te d s o l u t io n to ma k e a 1 , 0 0 0 - ml s o l u t i o n . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l Q u i n o x a l in e - 2 - c a r b o x y l i c a c i d : T h i s p r o d u c t s h o u l d co n s i s t o f 9 9 % o r mo r e q u i n o x a l in e - 2 - c ar b o x yl i c aci d . M e l t in g p o in t : 2 0 8 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s A f t e r h o mo g e n iz i n g , a s a mp l e o f 5 . 0 0 g i s me a s u r e d o u t. F o r mu s c l e , t h e f a t l a yer s h o u l d be r e mo v e d a s mu c h a s p o s s i b l e b e f o r e c h o p p in g . O n e h u n d r e d ml o f a mi x t u r e o f me t h a n o l an d 0 .3 % me t a ph o s p hor i c a c i d s ol u t io n ( 3 : 7 ) i s a d d ed t o t h e me a s u r e d - o u t s a mp l e . T h e mi x t u r e , a f t e r h o mo g e n iz i n g , is f i l t e r e d b y s u c t io n i n to a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r u s i n g f i l te r p a p e r co v e r e d w i th a t w o - mi l l i me t e r- t h i c k l a ye r o f d ia t o ma c e o u s e a r t h . T h e r e s i d u e o n t h e s u r f a ce o f th e f ilt e r p a p e r i s t h e n w a s h e d w i t h 10 ml o f a mi x t u r e o f me t h a n o l a n d 0 .3% me t a p h o s p h o r i c a c i d so l u ti o n ( 3 :7 ) t o c o ll e ct t h e w a s h in g s , w h ic h a r e t h e n f i l t e r ed b y s u c t ion an d a d d ed in t o t h e ro t a r y v a cu u m e v a p o r a to r. T h e mi x t u r e i s c o n c en t r a t e d t o 3 0 ml a t 4 5 C o r l o w e r, a n d 0 . 1 ml o f p h o s ph o r i c a c i d i s a d de d . b . C l ea n - u p
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i . O c t a d ec y l s i l a n e - b o n d e d s il i c a g e l c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y F i v e ml o f me t h a n o l i s a d d ed to an o c ta d ec yl s i l a n e - bo n de d s i l ic a gel mi n i c o l u mn ( 5 0 0 mg ) , f o l l o w e d b y 1 0 ml o f w a t e r. T h e e ff l u e n t is d i s c a r d ed . T h e s o lu t io n o b t a i n e d b y t h e e x t r a c t i o n me t h o d d e sc r i b ed in a . E x t r a c t i on me t h o d s is poured in t o this c o l u mn and
s u b s e q u e n tl y 2 0 ml o f p h o s p ha te b u ff e r s ol u t io n ( p H 2 . 5 ) i s a ls o a d d ed . T h e e ff l u e n t i s d i s c a r d e d. Te n ml o f me t h a n o l i s p o u r e d in to t h e co l u mn . T h e e l u ate i s c o l l e cte d in a r o ta r y v a c u u m e v ap o r a t o r, a n d t h e me t h an o l i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f w a t e r. i i . St r o n g b a s i c a n i o n e x c h an g e r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y F i v e ml o f w a t e r i s p o u r e d i nto a s t r on g b a s i c a n io n ex c ha ng e r mi n i c o l u mn ( 3 60 mg ) a n d t h e e ff l u e n t i s d i s c a r d e d . T h e so l u tio n o b t ai n ed in i . O c t a d ec y l s i la n e - b o n d ed silica gel c o l u mn
c h r o ma t o g r a p h y i s p o u r e d in t o t h i s c o lu mn . Tw o ml o f w a t e r, 1 0 ml o f e t h a n o l a n d t h e n 5 ml o f w a t e r a r e a l s o a d d e d in t h at o r d e r. T he e ff l u e n t i s d i s c a r d e d. F i v e ml o f 0 . 1 mo l / l h y d r o c h lo r i c a c id is p o u r e d i n to t h i s c o lu mn a n d th e el u a t e i s c o ll e c t ed i n a 5 0 - ml t e s t t u b e . Th r ee ml o f 3 mo l / l h y d r o c h lo r i c a ci d a n d 1 5 ml o f e t h y l a c e t a te a r e a l s o a d d e d b e f o r e s h a ki n g v ig o r o u s l y u s i n g a s h a k e r f o r f i v e mi n u t e s . A f t e r l e a v in g t o s t a n d , t h e e t h y l a ce t at e l a y e r i s t r a n s f e r r e d i n t o a 1 0 0 -ml c o n i c a l f l a s k . F i f t e e n ml o f e t h y l a c e t a te i s a d d ed to t h e a q u e o u s la ye r, a n d a f t e r r e p e at i ng th e ab ov e p r o c ed u r e , t h e e th y l a c e t a t e l a y e r i s a d d e d t o t h e co n ic a l f l a s k . A n a d e q u a te a mo u n t o f s o d i u m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s a ls o a d d e d to t h e f l a s k , w h i c h i s l ef t t o s t a n d f o r 1 5 mi n u t e s an d s h a k e n f r o m t i me t o t i me . T h e c o n t en t o f t h e f la s k i s t h en f i l t e r e d i n t o a r o t ar y v a c u u m e v a p o r a t o r, a n d th e eth y l a c e t at e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v e d in 1 . 0 ml o f a mi x t u r e o f a c e t o n i t r il e a n d p h o s p h a t e b u ff e r s o l u t i o n ( p H 2 .5 ) ( 1 : 4 ) , w h i c h i s u s ed a s t h e t es t s o l u t io n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e reference material. Te s t i n g c o n d i t io n s
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C o l u mn p a c k i ng : O c ta d e c y l s i l an e - b o n d e d si l i c a g e l ( p a r t i c l e s i ze: 5 m) i s u s e d . C o l u mn : A s t a i n l e s s tu b e ( i n n e r d ia me t e r : 4 . 0 - 6 . 0 mm a n d l e n gt h : 15 0 m m) i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : 4 0 C D e t e c t o r : S h o u ld b e o p e r a t e d at an a b s o r p ti on w a v e l e ngt h o f 2 45 nm . M o b il e p h as e : A mi x t u r e o f ac e t o n i t r i l e an d p h o s p h a t e b u ff e r s o lu ti o n ( p H 2 . 5 ) ( 1 : 4 ) i s u s ed . T h e f l o w r a t e s h o u l d b e a d ju s t e d s o t h a t q u i no x al i ne - 2 - c a r b o xyl i c mi n u t e s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e s a me c o n d it i o n s d e s c ri b e d i n a . Q u a l i ta t ive t e s t s , u si n g e i th e r th e p e a k h e ig h t o r p e ak a re a me t h o d . c . C o n f i r ma t i o n t e s t s G a s c h r o ma t o g r ap h y/ma s s s p e c t r o me t r y i s p e r f o r me d u n d e r t h e s ame c o n d i t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l it a t i ve t e s t s, b ut th e mo b i l e p has e s h o u ld b e a mi x t u r e o f a c e t o ni tr i l a n d w a t e r ( 1 : 4 ) . Te s t r e s u l ts o b t ai n ed mu s t b e th e s a me a s t h e r e s u l t s o b t a in e d i n t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l . T h e q u a n ti t y ma y b e d e t e r mi n e d b y e i t h e r th e p e a k h e i g h t o r p e a k a r e a me t h o d , i f r e q u i r e d . ( 8 ) C o u ma p h o s a na l yt ic a l me t h o d 1 . E q u i p me n t A g a s c h r o ma t o g r a p h w i t h a n a lk a l i f l a me i o n i za t i o n d e t e c to r, a f l a me p h o to me t r i c d e t ec t o r (i n t e r f e r e n ce f i l t e r f o r p h o s p h o r u s d e t e r mi n a t i o n , w a v e l e n g t h : 5 2 6 n m) , o r a h i g h l y - s e n s i ti v e n i t ro g e n p h o sp h o r u s d e t e ct o r, an d a g a s c h r o ma t o g r a p h - ma s s s p e c t r o me t e r a r e u s e d . 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. R e a g en t s d e s i g n at e d as s p e c i a l g r a d e i n th i s s e ct i o n mu s t me e t t h e r e q u i r e me n t s f o r s p e c i a l g r a d e s p e ci f i e d i n t h e J ap a n I n d u s tr i a l St a n d a r d s fo r t h e r e a g e n t s . A c e t o n it r i le : Th r e e h u n d r e d ml o f a c e t o n it r i l e i s c o n c en t r a t e d u sin g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. A f t e r r e mo v i n g t h e a c e to n i t r il e , th e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e di s s o lv e d a ci d flows out in a p p ro x i ma t e l y 10
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r e s i d u e i s in j e c te d i n to t h e G C - E C D f o r a n a ly s i s , t h e h ei g h t s o f p eak s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h a n n - h ex an e o n t h e g a s c h r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r th a n th e p e ak f o r g a mm a - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . A c e t o n e: Th r e e h u n d r e d ml o f a c e t o n e i s c o n c en t r a t ed u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. A f t e r r e m o v i n g t h e a c e t o n e , t h e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d u e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . S o d i u m c h l o r i d e : S o d iu m c h l o r i de ( s p e c i al g r a d e ) . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n ce t h a t in t e r f e r e s w i t h a n a l y s i s o f a n i n g r ed i e n t o f th e a g r i c u lt u r al c h e mi c a l p r o d uc t co n c e r n ed is c o n ta i n ed , i t s h ou ld be r i n s e d o u t w i t h a s o lve n t s u ch a s n - h e x an e . S i l i c a g e l f o r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y ( p ar t i c l e s i ze : 6 3 - 2 0 0 m) : Silica gel (particle size: 63- 2 0 0 m) p r o d u ce d for c o l umn
c h r o ma t o g r a p h y i s h ea t e d at 1 3 0 C f o r mo r e t h an 1 2 h o u r s b ef o r e b e i n g a ll o we d t o c o o l in a d e s i c c at o r. D i a t o ma c e o u s e a r th : D i a t o ma c e o u s e a r th fo r c h e mi c a l a n al y s i s i s u s e d . E t h yl a c e t at e : T h r e e hu n d r e d ml o f e t h y l a ce t a t e i s co n c e n t r a t ed u s i n g a r o t a r y v ac u u m e v a p o r a t o r. A f t e r r e mo v i n g th e e t h y l a c e ta t e , th e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e di s s o lv e d r e s i d u e i s in j e c te d i n to t h e G C - E C D f o r a n a ly s i s , t h e h ei g h t s o f p eak s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h a n n - h ex an e o n t h e g a s c h r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r th a n th e p e ak f o r g a mm a - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . n - H e x a n e : T h r e e hu ndr e d ml o f n - h e x a n e i s c o n c en t r a t ed to 5 ml u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. W h e n 5 l o f th e c o n c en t r a t e d s a mp l e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . Wa t e r : D i s t i l l ed w a t er i s u s e d . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n ce t h a t i n t e r f e r e s w i t h a n al y s i s o f a n i n g r e d i e n t o f th e a g r i cu l tu r a l c h e mi c a l p r o d u ct con c e r n e d i s c o n ta i n ed , i t s h o u ld b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t s u c h a s n - h e x a n e. Sodium sulfate (anhydrous): Sodium sulfate (anhydrous) (special g r a d e ) . I n ca s e s w h e r e a s u b s t an c e t h a t i n t e r f e r e s w i t h an a l y s i s o f an i n g r e di e n t of the a g r i c u lt u r al c h e mi c a l p r o d u ct concerned is c o n ta i n ed , i t s h o u l d b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t su c h as n - h e x an e .
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3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l C o u ma p h o s : T h i s p r o d u c t s h o u ld c o n si s t o f 9 8 % o r mo r e c o u ma p h o s . M e l t in g p o in t : 9 5 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s i . C e r e a l g r a i n s , l eg u me s / p u l s e s an d s e ed s C e r e a l g r a in s , l e g u me s / p u l s e s a n d s e e d s a r e c r u s h e d so a s t o p a ss t h r o u gh a s t a n d a r d me s h s i e v e (4 2 0 m) b e f o r e b e in g w e i g h ed to p r e p a r e a 1 0 . 0 - g r a m s a mp l e . Tw e n t y ml o f w a t e r i s a d d e d to t h e o b t ai n ed s amp l e a n d it i s l e f t to st a n d f o r t wo h o u r s . A c e t o n e ( 1 0 0 ml ) i s t h e n a d d e d . T h e mi x t u r e , a f t e r h o mo g e n i z in g f o r t h r e e mi n u t e s , i s f i l t e r e d b y s u c t i o n i n t o a r o ta r y v a c u u m e v a p o r a t o r u s i n g f i l t e r p a p e r c o v e r e d w i t h a o n e - c e n time t e r- t h i c k l a y e r o f d i at o ma c e o u s e a r t h . Th e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f il t er p a p e r i s c o ll e c t ed an d a c e t o n e ( 5 0 ml ) i s a d d ed b e f o r e h o mo g e n i z i n g f o r t h r e e mi n u t e s . T h e a b o v e p r o c e d u r e i s t h e n r e p ea t e d , an d th e f i l t r a t e i s ad d e d t o th e r o t a r y v a c uu m e v a p o r at o r a n d c o n c e n t r a t ed to a p p r o x i ma t e l y 3 0 ml a t 4 0 C o r lo w e r. T h e c o nc en t r a t e d s olu t i o n i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml s e p a r a t in g f u n n e l a l r ea d y c o n t a ini n g 1 00 ml o f s a t u r a ted s o di u m c h l o r i de . The e g g p l a n t - s h a p e d f l a s k o f t h e a bo v e r o t a r y v a c uu m e v a p o r at o r is w a s h e d w i th 1 0 0 ml o f a mi x t u r e o f e t h y l a ce t a t e a n d n - h e x a n e ( 1 :4 ) t o o b t a in th e w a s h i n g s , w h i c h ar e t h e n a d d e d to th e s e p a r a t in g f u n n e l ab o v e . Th e mi x t u r e i s s h a k e n v i g o ro u s l y f o r fi v e mi n u t es u s i n g a s h ak e r b e f o r e b e i ng l e f t to s t a nd , a nd t h en t he la ye r s o f e t h yl a c e t a te a n d n - h e x a n e a r e t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i c a l f l a s k . F i f t y ml o f a mi x t u r e o f eth y l a c e t at e a n d n - h e x a n e ( 1 :4 ) i s a d d ed to th e a q u eo u s l ay e r a n d a f t e r r e p e a t i ng t h e ab o ve p r o c e d u r e , t h e l a ye r s o f e t h y l ac e t at e an d n - he x a n e a r e a d d ed to th e co n ic a l f l a s k . A n a d e qu a t e amo u n t o f s o d i u m s u l f a t e ( a n h y d ro u s ) i s a l s o a d d ed t o th e f l a s k , w h i ch i s t h e n le f t t o s t a n d f o r 1 5 mi n u te s a n d s h a k e n f r o m t i me t o t i me . T h e c o n te n t o f t h e f l a s k i s t h en f i l t e r ed in t o a r o t a ry v a c u u m e v a p o r a to r. T h e c o n i c a l f l a s k i s t h en w a s h e d w i t h 2 0 ml o f n - h e x an e to o bt a i n th e w a s h i n g s , w i t h w h i c h th e r e si d u e o n th e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p a p e r i s w a s h e d t w i c e . T h e w a s h ing s o b t a in e d f r o m t h e r e p e a te d w a s h i n g a r e th e n a d d e d t o th e r o ta r y v a c u u m e v a p o r a t o r, a n d t h e eth y l a c e t a t e a n d n - h ex an e a r e r e mo v e d at 4 0 C
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o r l o w e r. T h i r t y ml o f n - h e x an e i s a d de d t o t h e r e s id u e a n d t h e mi x t u r e i s t h en t r a n s f e r r e d t o a 1 0 0- ml s e p a r a t i n g f un n el , t o w h i ch 3 0 ml o f n - h e x an e - s a t u r a t ed a ce t o n i t r i l e is a d d e d . A ft e r s h a k i n g t h e mi x t u r e v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s in g a s h a k e r, th e f u n n el i s l e f t t o s t a n d a n d t h e ac e t o n i t r i l e l a y e r i s t r a n s f e r r e d t o t h e r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. A f t e r a d d in g n - h e x a n e - s a t u r a t e d a c e to n i t r i le ( 3 0 ml ) t o t h e n - he x an e l a ye r, th e a b o v e p r o c e du r e i s r e p e a t ed t w i c e . T h e a c e t o n i t r i le l a y e r i s t h e n a d d e d to t h e r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r, a n d t h e ac e to ni t r i l e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e is d i s s o l v e d in 5 - ml o f a mi x t u r e o f a c e t o n e an d n - h ex a n e ( 1 : 1 ) . i i . F r u i t , v eg e t ab l e s , tea s a n d h o p s F r u i t a n d v e g e t ab l e s ar e w e i g h e d a c c u r a t el y t o p r e p a r e a s a mp l e o f a b o u t o n e k i l o g r a m. A n a p p r o p ri a t e a mo u n t o f w a t e r i s me a s u r e d a n d a d d e d to t h e s a mp l e , i f r e q ui r e d . A f t e r ho mo g e n i z ing , a s a mp l e e q u iv a l en t t o 2 0 . 0 g i s me a s u r e d o u t . T h e te a i s w e i g h e d to p r e p a r e a sa mp l e o f 5 .0 0 g , to w h i c h 2 0 ml o f w a t e r i s a d d e d an d l e f t t o s ta n d fo r t w o h o u r s . H o p s a r e f i r s t c r u s h e d i n to p ie c e s a n d w e i g h e d to p r e p a r e a 5 . 0 0 - g r a m s a mp l e , t o w h i c h 2 0 ml o f w a t e r is a d d ed a n d l e f t t o s ta nd for two hours. T h e n , 1 0 0 ml o f a c e to n e i s a d d e d b e f o r e f i n e l y c r u s h i n g f o r t h re e mi n u t e s . Th e c r u sh e d s a mp l e i s f i l t e r e d b y s u c t i o n in t o a r o t a ry vacuum e v a p o r at o r using filter p ap e r covered with a
o n e - c e n t i me t e r- t h i c k la y e r o f d i at o ma c e o u s e a r t h . Th e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l te r p a p e r i s c o l l ec t e d a n d a ce t o n e ( 5 0 ml ) i s a d d ed b e f or e h o mo g e n i z i n g f o r t h r e e mi n u t e s. T h e ab o v e p r o ce d u re i s r e p e a te d a n d t h e f i l tr a t e i s ad d ed t o th e r o ta r y v a c u u m e v ap o r a to r a n d co n ce n t r a t e d to ap p r o x i ma t e l y 3 0 ml a t 4 0 o r l o we r. T h e c o nc en t r a t e d s olu t i o n i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml s e p a r a t in g f u n n e l a l r ea d y c o n t a ini n g 1 00 ml o f s a t u r a t ed s o di u m c h l o r i de . The e g g pl a nt - s h a p e d f l a s k o f t h e a b o v e r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r is w a s h e d w i th 1 0 0 ml o f a mi x t u r e o f e t h y l a ce t a t e a n d n - h e x a n e ( 1 :4 ) t o o b t a in th e w a s h i n g s , w h i c h ar e t h e n a d d e d to th e s e p a r a t in g f u n n e l a b o v e . Th e mi x t u r e i s s ha k e n v ig o ro u s l y f o r fi v e mi n u t es u s i n g a sh a k e r b e f o r e b e in g l e f t t o s t a n d , a n d t h e l a ye r s o f e t h yl a c e t a te a n d n - h e x an e ar e t h e n t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i c a l f l a sk .
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Provisional Translation from Japanese Original F i f t y ml o f a mi x t u r e o f e t h y l a c e ta t e a n d n - he x a n e ( 1 :4 ) i s ad d ed t o t h e aq u eo us l a ye r, a n d a f t e r r e pe a t i n g th e a b o v e p ro c e d u r e , t h e l a y e r s o f e t h y l a c e t at e a n d n - h e x a n e a r e a d d e d to t h e co n i ca l f l a sk . A n a d e q u a t e a mo u n t o f s o d i u m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s a l s o a d d e d t o t h e f la s k , wh i c h i s l e f t t o s t an d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h ak e n f r o m t i me t o t i me . T h e c o n t en t o f t h e f la s k i s t h en f i l t e r e d i n t o a r o t ar y v a c u u m e v a p o r a to r. Th e c o n i c a l f l a s k i s t h en w a s h e d w i t h 2 0 ml o f n - h e x an e to o b ta i n th e w a s h i n g s , w i t h w h i c h th e r e s i d u e o n th e s u r f a c e o f t h e f il t e r p a p e r i s w a s h e d t w i c e . T h e w a s h in g s o b t a in e d f r o m t h e r e p e a te d w as h i n g a r e th e n a d d e d t o t h e r o ta r y v a c u u m e v a p o r a t o r, a n d t h e e th y l a c et a t e a n d n - h ex an e a r e r e mo v e d at 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v ed i n 5 ml o f a mi x t u r e o f a c e t o n e a n d n - h e x an e ( 1 : 1 ) . i i i . F o o d s ex c e p t t h o s e l i s t e d i n i a n d ii a b o v e E x t r a c t s a re o b ta i ne d b y t h e me t h o d s d e s c r ib e d in i o r i i . b . C l ea n - u p F i v e g r a ms o f s i l i c a g e l f o r c o lu mn c h r o ma t o g r ap h y ( p a r t i c l e s iz e : 6 3 - 2 00 m) s u s p e n ded i n a mi x t u r e o f a ce to n e a n d n -h e x an e ( 1 :1 ) i s a d d ed i n to a c h r o ma t o g r a p h t ub e ( i n n e r d i a me t e r : 1 5 mm a n d le n gt h : 3 0 0 mm) , o v e r w h i c h ab o u t 5 g o f s o d iu m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s a l so p o u r e d. T he n , t he mi x t u r e o f a c et o n e a n d n - h e x an e ( 1 :1 ) i s s p i l t o u t u n t il on l y a s ma l l a mo u n t r e ma i n s i n t h e ti p o f t h e c o l u mn . T h e s o l u t io n obt a i n ed b y th e me t h o d d e s c r i b ed in a . Ex t r ac t i o n me t h o d s i s p o u r e d in t o t h i s c o lu mn . T h e n , 1 0 0 ml o f a mi x t u r e o f a c e t o n e an d n - h e x an e (1 : 1 ) i s a l so ad d ed . Th e el u at e is c o ll e c t ed i n a r o t a ry v a c uu m e v a p o r a to r, an d th e ac et o n e a n d n - h e x a n e a re r e mo v e d a t 4 0 C o r l ow e r. T h e r e s i d u e i s d i ss o l v e d in ac e t o n e t o ma k e e x ac t l y 5 ml o f s o l u t i o n , w h i c h i s u s e d a s th e s a mp l e s o l u ti o n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed u n d er a n y o f t h e c o n d i t io n s mu s t b e t h e s a me a s t h e r e s u l t s o b t ai n e d i n t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l . Te s t i n g c o n d i t io n s 1 C o l u mn : A s i l i c a te g l as s c a p il l a r y c o lu mn ( i n n e r d i a me t e r : 0 . 5 3 m m and l e n g th : 10-30 m) coated with me t h y l silicone for g as
c h r o ma t o g r a p h y t o a th i c k n e s s o f 1 . 5 m i s u s e d .
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C o l u mn t e mp e r a t u r e : T h e c o lu mn t e mp e r a t u r e i s h e l d a t 8 0 C f o r o n e mi n u t e , f o ll o w e d b y an in c r e a s e o f 8 C e v e ry mi n u t e u n t i l r e a c h i n g 2 5 0 C , w h er e i t i s h e l d f o r f i v e mi n u t e s . I n l e t t e mp e r a t u r e : 2 3 0 C D e t e c t o r : Sh o u ld be op e r a t e d a t 2 8 0 C Gas flow rate: Helium is used as the carrier gas. The flow rate should b e a d ju s t e d t o t h e o p t ima l c o n d i t io n . T h e f l o w s o f a i r a n d h y d r o g en s h o u ld a l s o b e ad j u s t ed t o t h e o p ti ma l c o n d iti o n s . Te s t i n g c o n d i t io n s 2 C o l u mn : A s i l i c a te g l as s c a p il l a r y c o lu mn ( i n n e r d i a me t e r : 0 . 3 2 m m a n d l en g th : 1 0 - 3 0 m) c o a t e d w i t h 5 0 % t r i f l u o r o p r o p y l me t h y l s i l i c o n e f o r g a s c h r o ma t o g r ap h y to a th i c k n es s o f 0 . 2 5 m i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : T h e c o lu mn t e mp e r a t u r e i s h e l d a t 7 0 C f o r o n e mi n u t e , f o ll o w e d b y an i n c r e a s e o f 2 5 C ev er y mi n u t e u n t i l r e ac h in g 1 2 5 C , a f t e r w h i c h th e t e mp e r a t u r e i s i n cr e a s e d b y 1 0 C e v e r y mi n u t e u nt il r e a c h in g 2 3 5 C , w h er e i t i s h e l d f o r 1 2 mi n u t e s . I n l e t t e mp e r a t u r e : 2 3 0 C D e t e c t o r : Sh o u ld be op e r a t e d a t 2 8 0 C Gas flow rate: Helium is used as the carrier gas. The flow rate should b e a d ju s t e d t o t h e o p t ima l c o n d i t io n . T h e f l o w s o f a i r a n d h y d r o g en s h o u ld a l s o b e ad j u s t ed t o t h e o p ti ma l c o n d iti o n s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e s a me c o n d it i o n s d e s c ri b e d i n a . Q u a l i ta t ive t e s t s , u si n g e i th e r th e p e a k h e ig h t o r p e ak a re a me t h o d . c . C o n f i r ma t i o n t e s t s G a s c h r o ma t o g r ap h y/ma s s s p e c t r o me t r y i s p e r f o r me d u n d e r t h e s ame c o n d i t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l i t a t i v e t e s t s. Te s t r e s u l t s o b t a in e d mu s t b e t h e s a me a s t h e r e s u l t s o b t ai n ed in t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l . T h e q u an t it y ma y b e d e t e r mi n e d b y e i t h e r t h e p ea k h e i g h t o r p ea k a r e a me t h o d , i f r e q u i r e d . ( 9 ) C h l o r amp h e n i c o l a n a l yt i ca l me t h o d 1 . E q u i p me n t L i q u id ch r oma t o g r a p h ma s s s p e c t r o me t e r i s u s e d . 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e
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used. R e a g en t s d e s i g n at e d as s p e c i a l g r a d e i n th i s s e ct i o n mu s t me e t t h e r e q u i r e me n t s f o r s p e c i a l g r a d e s p e ci f i e d i n t h e J ap a n I n d u s tr i a l St a n d a r d s fo r t h e r e a g e n t s . A c e t o n it r i le : A c e t o ni tr i l e p r o d u ce d f o r l i q u id c h r o ma t o g r a p h y i s u s e d . O c t a d e c y l si l a n e - b o n d e d s i li c a gel mi n i c o l u mn (500 mg ) : A
p o l y e t h y l en e c o l u mn w i t h a n i n n e r d i a me t e r o f 8 - 9 mm p a c k e d w it h 5 0 0 mg o f o c t a d e c y l s i l a n e - bo nde d s i l i c a ge l o r o n e w i t h t h e s am e s e p a r a t i o n c h a r a c t e r i st i c s i s u s ed . St r o n g b a s ic a n io n e x c h a ng e r mi n i c ol u mn ( 3 6 0 mg ) : A p o l ye t h yl e n e c o l u mn w i t h a n i n n e r d i a me t e r o f 8 - 9 m m p a c k ed w i t h 3 60 mg o f t r i me t h yl a mi n o a c r yl a mi d e c o p o l y me r s i l a n e - b o n d e d s il i c a g el o r o n e w i t h t h e s ame s e p a r a t i o n ch a r a c t er i s t i c s i s u se d . Wa t e r : Wa te r p r o d u ced f o r l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y i s u se d . Sodium sulfate (anhydrous): Sodium sulfate (anhydrous) (special g r a d e ) . I n ca s e s w h e r e a s u b s t an c e t h a t i n t e r f e r e s w i t h an a l y s i s o f an i n g r e di e n t of the a g r i c u lt u r al c h e mi c a l p r o d u ct concerned is
c o n ta i n ed , i t s h o u l d b e r i n s e d o u t w i t h et h y l a c e t at e . P h o s p h a te b u ff e r s o l u ti o n (pH 2.5): M o n o p o t a ss i u m dihydrogen
mo n o p h o s p h a t e ( 1 . 3 6 g ) i s d i s s o l v ed in w a t e r t o ma k e a 8 0 0 - ml s o l u t io n , t o w h i c h p h o s p h o r i c ac id i s a d de d t o a dj u s t the p H t o 2 .5. Wa t e r i s a d d e d to th e a d j u s te d s o l u t io n to ma k e a 1 , 0 0 0 - ml s o l u t i o n . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l C h l o r a mp h e n i co l : Thi s p r o d u c t s h o u ld co n s i s t o f 9 9 % o r mo r e c h l o r a mp h e n i c o l . D e c o mp o s i t i o n p o i n t: 2 0 8 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s A f t e r h o mo g e n iz i n g , a s a mp l e o f 5 . 0 0 g i s me a s u r e d o u t. F o r mu s c l e , t h e f a t l a yer s h o u l d be r e mo v e d a s mu c h a s p o s s i b l e b e f o r e c h o p p in g . O n e h u n d r e d ml o f a mi x t u r e o f me t h a n o l an d 0 .3 % me t a ph o s p hor i c a c i d s o lu t io n ( 3 : 7 ) i s a d d ed t o t he me a s u r e d o u t s a mp l e . A f t e r f i n e l y c r u s h i n g f o r t h r e e mi n u t e s , th e mi x t u r e i s f il t e r e d b y s u c t io n in to a rotary v a cu u m evaporator u s in g f il t e r paper covered w i th a
t w o - mi l l i m e t e r- t h i c k la y e r o f d i a to ma c e o u s ea r t h . T h e re s i d u e o n th e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s t h e n w a s h e d w i t h 1 0 ml o f a mi x t u r e o f me t h a n o l an d 0 .3 % me t a p h o s p h o r i c a c i d s o lu t i o n ( 3 : 7 ) t o c o ll e c t th e
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w a s h i n g s , w h i c h a r e th e n f i lt e r ed b y s u c ti o n i n t o t h e ro t a r y v a c u u m e v a po r a t o r. T h e mi x t u r e i s co n c en t r a t e d t o 3 0 ml a t 4 5 C o r l o w e r, t o w h i c h 0 .1 ml o f p h o s p h o r i c a c id i s a d d e d . b . C l ea n - u p i . O c t a d ec y l s i l a n e - b o n d e d s il i c a g e l c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y F i v e ml o f me t h a n o l i s a d d ed t o t h e o c ta d ec y l s i l a n e - b o n d ed s i l i ca g e l mi n i c o l u mn ( 5 0 0 mg ) , f o l l o w e d b y a n a d d it i o n a l 1 0 ml o f w a t e r. T h e e ff l u en t i s d i s c a rd e d . T h e s o l u ti o n o b ta i n ed b y t h e e x t r a c t io n me t h o d d e sc r i b e d i n a . E x t r a ct io n me t h o d s i s p o u r e d i n t o t h is c o l u mn , a n d s u b s eq u en t l y 2 0 ml o f p h o sp ha t e bu ff e r s o l u t io n ( pH 2 . 5 ) i s a l s o a d de d . T h e e ff l u en t is d i s c a r d ed . Te n ml o f me t h a n o l is p o u r e d i n to t h e c ol u mn . T h e el u at e i s c o ll e ct e d in a r o ta r y v a c u u m e v a po r a t o r, a n d th e me t h a n o l is r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v ed i n 5 ml o f w a t e r. i i . St r o n g b a s i c a n i o n e x c h an g e r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y F i v e ml o f w a t e r i s p o u r e d i nto a s t r on g b a s i c a n io n ex c ha ng e r mi n i c o l u mn ( 3 60 mg ) a n d t h e e ff l u e n t i s d i s c a r d e d . T h e so l u tio n o b t ai n ed in i . O c t a d ec y l s i la n e - b o n d ed silica gel c o l u mn
c h r o ma t o g r a p h y i s p o u r e d in t o t h e c o lu mn . Tw o ml o f w a t e r, 1 0 ml o f e t h a n o l a n d t h e n 5 ml o f w a t e r a r e a l s o a d d e d in t h at o r d e r. T he e ff l u e n t i s d i s c a r d e d. F i v e ml o f 0 . 1 mo l / l h y d r o c h lo r i c a c id is p o u r e d i n t o t h e co l u mn a n d t h e el u a t e i s c o ll e c t ed i n a 5 0 - ml t e s t t u b e . Th r ee ml o f 3 mo l / l h y d r o c h lo r i c a ci d a n d 1 5 ml o f e t h y l a c e t a te a r e a l s o a d d e d b e f o r e s h a ki n g v ig o r o u s l y u s i n g a s h a k e r f o r f i v e mi n u t e s . A f t e r l e a v in g t o s t a n d , t h e e t h y l a ce t at e l a y e r i s t r a n s f e r r e d i n t o a 1 0 0 -ml c o n i c a l f l a s k . F i f t e e n ml o f e t h y l a c e t a te i s a d d ed to t h e a q u e o u s la ye r, a n d a f t e r r e p e at i ng th e ab ov e p r o c ed u r e , t h e e th y l a c e t a t e l a y e r i s a d d e d t o t h e co n ic a l f l a s k . A n a d e q u a te a mo u n t o f s o d i u m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s a ls o a d d e d to t h e f l a s k , w h i c h i s l ef t t o s t a n d f o r 1 5 mi n u t e s an d s h a k e n f r o m t i me t o t i me . T h e c o n t en t o f t h e f la s k i s t h en f i l t e r e d i n t o a r o t ar y v a c u u m e v a p o r a t o r, a n d th e eth y l a c e t at e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v ed i n 1 . 0 ml o f a mi x t u r e o f a c e t o n i t r i le a n d w a ter ( 3 : 7 ) , w h i ch i s u s ed a s t h e te s t s o l u t io n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t
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r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e reference material. Te s t i n g c o n d i t io n s C o l u mn p a c k i n g : O c t a d e c y l s i l a n e -b o nd e d s il ic a g e l ( p a r ti c l e s i ze : 2 - 5 m) i s u s e d . C o l u mn : A s t a i n l e s s tu b e ( i n n e r d i a me t e r : 2 . 0 - 6 . 0 mm a n d l e n g t h : 1 0 0 - 25 0 mm) i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : 4 0 C M o b il e p h as e : A mi x t u r e o f a c e to n i t r i l e a n d 0 . 5 % a c e ti c a c i d ( 3 : 7 ) i s u s e d . T h e f l o w r a t e s h o u ld b e a d j u s te d so t h a t c h lo r a mp h e n i co l f l o w s o u t in a p p r o x i ma t e l y 1 5 mi n u t e s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e s a me c o n d it i o n s d e s c ri b e d i n a . Q u a l i ta t ive t e s t s , u si n g e i th e r th e p e a k h e ig h t o r p e ak a re a me t h o d . ( 1 0 ) C h l o r p r o ma z i n e an a l y t i c al me t h o d 1 . E q u i p me n t L i q u id ch r o ma t o g r a p h t a n de m ma s s s p e c t r o me t e r i s u s ed. 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. A c e t o n it r i le : A c e t o ni tr i l e p r o du ce d f o r l i qu id c h r o ma t o g r a p h y i s us e d . St r o n g a c id c at i o n ex c h an g e r mi n i c o l u mn ( 5 00 mg ) : A p o l ye t h yl e n e c o l u mn w i t h a n i n n e r d i a me t e r o f 8 - 9 m m p a c k ed w i t h 5 00 mg o f b e n z en e s ulf o n yl p r o p yl s i l a n e - b o n d e d s il i c a g e l o r o n e w i t h t h e s am e s e p a r a t i o n c h a r a c t e r i st i c s i s u s ed. Wa t e r : Wa te r p r o d u ced f o r l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y i s u se d . M e t h an o l: M e t h an o l p r o d u c ed f o r l i q ui d c h ro ma t o g r a p hy i s u s e d . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l C h l o r p r o ma z i n e h yd r o c h lo r i d e : T h i s p r o d u c t s h o u l d co n s i s t o f 9 8 % o r mo r e c h l o r p r o ma z i n e h y d r o c h l o r id e . M e l t in g p o in t : 1 9 4 - 1 9 6 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s A f t e r h o mo g e n iz i n g , a s a mp l e o f 5 . 0 0 g i s me a s u r e d o u t, t o w h i ch 2 5 ml o f e t h yl a c et a t e a nd 1 ml o f 4 mo l / l p o t as s i u m c a r b o n a te s o l u ti o n
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a r e a d d ed . T h e mi x t u r e i s f i n e l y c r u s h e d b e f o r e b e i n g ce n t r i f u g ed a t 3 , 0 00 r p m f o r f i v e mi n u t e s . T h e n , th e e t h y l ac e t a t e l a ye r i s t r a n s f e r r e d t o a r o t a ry v a c u u m e v a p o r a t o r. Tw e n t y - f i v e ml o f e t h y l a c e t a te i s a d d ed t o th e r e s i d u e a n d c r u s h ed a n d c en tr i f u g e d i n t h e s a me ma n n e r a s a b o v e. T h e et h y l a c e t at e l ay e r i s t h e n a d d ed to th e r o t a r y v a c uu m e v a p o r at o r, an d t h e e t h y l a c et at e i s r e mo v e d at 4 0 C o r l o w e r. T h ir t y ml e a c h o f a c eto n i t r il e a n d a c e to n itr i l e - s a t u r a te d n - h e x an e ar e a d d ed to t h e r e s i d ue b e f o r e sha k i ng vi go r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h ak e r. T h e s h a ken mi x t u r e i s l e f t t o s t an d , a nd t hen t h e a c e to n it r i l e la y e r is t r a n s f e r r e d t o a 1 0 0 - ml s e p a r a t in g f u n n el , t o w h i c h 3 0 ml o f a c e t o n i t r i l e - s a tu r a t e d n - h ex a n e i s ad d ed . T h e a b o v e p r o c e d u r e is r e p e a t e d a n d th e a ce t o n i t r i l e la y e r i s c o l l e c t ed i n th e r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r, a n d th e a c e to n it r i le i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s di s s o l v ed i n 1 0 ml o f a mi x t u r e o f me t h a n o l an d 1 . 2 % me t a p h o s p h o r i c ac i d s ol u ti on ( 2 : 3 ) , w hi c h i s f i l t e re d th r o u gh a c o t to n p l ug. b . C l ea n - u p T h r e e ml o f me t h a n o l f o l l o w e d b y 3 ml o f w a t e r a r e p o u r e d i n to a s t r o n g a c id c a t i o n e x ch a n ge r mi n i c o lu mn ( 5 0 0 mg ) a n d t h e e ff l u e nt i s d i s c a r d ed . T h e s o l u tio n o b ta i n ed b y t h e me t h o d d es c r i b e d i n a . E x t r a c t io n me t h o d s is p o u r e d i n t o t h i s c o lu mn . Wa t e r ( 5 ml ) i s a ls o a d d ed a n d t h e e ff l u en t i s d i s c ar d e d . F i f t e e n ml o f a mi x t u r e o f me t h a n o l and 0 .1 mo l / l dipotassium hydrogen orthophosphate
s o l u t io n ( 9 :1 ) a r e a d d ed t o th e co lu mn , a n d t h e e l u at e i s c o l l ec t ed i n a r o t a r y v a c uu m e v a p o r at o r, a n d th e w a t e r a n d me t h a n o l ar e r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i ss o l v e d i n 1. 0 ml o f me t h a no l , w hic h i s u s e d a s th e s a mp l e s o l u ti o n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e reference material. Te s t i n g c o n d i t io n s C o l u mn p a c k i n g : O c t a d e c y l s i l a n e -b o nd e d s il ic a g e l ( p a r ti c l e s i ze : 2 - 5 m) i s u s e d . C o l u mn : A s t a i n l e s s tu b e ( i n n e r d i a me t e r : 2 . 0 - 6 . 0 mm a n d l e n g t h : 1 0 0 - 25 0 mm) i s u s e d .
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C o l u mn t e mp e r a t u r e : 4 0 C M o b il e p h a s e : A mi x t u r e o f ac e t on i t r i l e, f o r mi c a c i d an d w at e r ( 5 0 0 : 1: 50 0) i s u s e d . T h e f l o w r a t e s h o ul d b e a dj us t e d s o t ha t c h l o r p r o ma z i n e f lo w s o u t in ap p ro x i ma t e l y 1 5 mi n u t e s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e s a me c o n d it i o n s d e s c ri b e d i n a . Q u a l i ta t ive t e s t s , u si n g e i th e r th e p e a k h e ig h t o r p e ak a re a me t h o d . ( 11 ) D i e t h yl s t i l b e s t r o l a n a l y t i ca l me t h o d 1 . E q u i p me n t L i q u id ch r o ma t o g r a p h t a n de m ma s s s p e c t r o me t e r i s u s ed. 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. R e a g en t s d e s i g n at e d as s p e c i a l g r a d e i n th i s s e ct i o n mu s t me e t t h e r e q u i r e me n t s f o r s p e c i a l g r a d e s p e ci f i e d i n t h e J ap a n I n d u s tr i a l St a n d a r d s fo r t h e r e a g e n t s . A c e t o n it r i le : A c e t o ni tr i l e p r o d u ce d f o r l i q u id c h r o ma t o g r a p h y i s u s e d . G l u c u r o n id a s e s o l u t io n : S h o u ld c o n ta i n 1 0 0 , 0 0 0 u n it s/ ml o f b e t a - D g l u cu r o n ida s e e x t r a cte d f r o m H e l i x p o m a t ia a n d r e f i n ed . D i c h l o r o me t h a n e : D i c h l o r o me t h a n e ( s p e c i a l g r a d e ) . We a k b a s i c a n i on e x cha n g e r e s i n mi n i c o l u mn ( 5 0 0 mg ) : A p o l y e t h y l e n e c o l u mn w i t h a n i n n e r d i a me t e r o f 8 - 9 m m p a c k ed w i t h 5 00 mg o f d i e th y l a mi n o p r o p y l w e a k b a s i c a n i o n e x ch a n g e r e s i n p r o d u c ed f o r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y or one with the s a me separation
c h a r a c t e r i st i c s i s u s ed . Wa t e r : Wa te r p r o d u ced f o r l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y i s u se d . Sodium sulfate (anhydrous): Sodium sulfate (anhydrous) (special g r a d e ) . I n ca s e s w h e r e a s u b s t an c e t h a t i n t e r f e r e s w i t h an a l y s i s o f an i n g r e di e n t c o n ta i n ed , of it the a g r i c u lt u r al be r in s e d c h e mi c a l out p r o d u ct a concerned s u ch is as
s h ou ld
with
so lv e n t
d i c h l o r o me t h a n e . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l D i e t h y l s t i lb e s t r o l : Th i s p r o du ct s h o u ld c o n s i s t o f 9 9 % o r mo r e d i e th y l s t i l b e s t r o l . D e c o mp o s i t i o n p o i n t: 2 0 8 C
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4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s A f t e r h o mo g e n iz i n g , a s a mp l e o f 5 . 0 0 g i s me a s u r e d o ut, t o w h i ch 11 ml o f 0 . 0 4 mo l / l s o d iu m a c e t a t e s o l u ti o n is a d d ed . Th e mi x t u r e i s f i n e l y c r u s h e d be f o r e a d d in g a ce ti c a c id t o ad j u s t th e p H t o 4 . 2 5 - 4 . 7 5 . O n e h un d r ed l o f g l ucu r o n i d a s e so l u ti o n i s ad d e d t o t h e s o l u t io n a n d l e f t t o s t a n d f o r 1 4 h o u r s a t 3 7 C. T h e n , 1 6 ml o f a c e t o n i t r i l e i s ad d e d . T h e mi x t u r e i s s h a k en v i g o r o u sl y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h ak e r b e f o r e b e in g c en t r i fu g e d a t 3, 0 0 0 r p m f o r f i v e mi n u t e s . T h e s u p e r n a ta n t l i qu i d i s co l l e ct e d i n a r o t a r y v ac u u m e v a p o r a t o r. S i x te e n ml o f a c e t o n i t r i l e i s ad d e d to t h e r e s i d u e a n d t h e a b o v e p r o c e d u r e i s r e p e a t ed t w i c e . T h e s u p e r n a t an t liq u i d i s a g a in c o ll e c te d i n t h e r o t a ry v a c u u m e v ap o r a t o r an d c o n c e n t r ate d to a p p r o x i ma t e l y 3 ml a t 5 0 C o r l o w e r. F i f t y ml o f d i ch l o r o me t h a n e an d 20 0 ml o f 5 % so d i u m c h l or i d e s o l u t io n ar e a d d e d t o t h e c o n c e nt r a t e d s a mp l e , w h i c h i s t h en vigorously shaken for five mi n u t e s using a s h a k e r. The
d i c h l o r o me t h a n e l a y e r i s th e n c o ll e c t ed an d d e h y d r a t ed w i t h s o d iu m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) a n d f i l t e r e d . F i f t y ml o f d i c h l o r o me t h a n e i s a d d ed to t h e a q u e o u s la ye r a n d the a b o v e p r o c e d u r e i s r e p e a t ed t w i ce . T h e d ic h lo r o me t h a n e l a y e r i s t h e n mi x e d . A n a d e q u a te a mo u n t o f s o d i u m s u l f a t e ( a nh yd r o u s ) i s ad d e d to th e mi x t u r e , w h ic h i s t h en le f t t o s t a n d f o r 1 5 mi n u te s a n d s h ak e n f r o m t i me t o t i me . T h e n , th e c o n te n t is filtered into a r o ta r y vacuum e v a p o r at o r, and th e
d i c h l o r o me t h a n e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. Th e r e s i du e i s d i s s o l v e d in 4 ml o f a mi x t u r e o f n - h e x an e an d b e n z en e ( 3 : 1 ) . b . C l ea n - u p Te n ml o f a mi x t u r e o f n - h ex a n e a n d b e n ze n e ( 3 : 1 ) is p o u r e d i n t o a w e a k b a s i c a n io n exc h a n g e r e si n mi n i c o lu mn ( 5 0 0 mg ) a n d th e e ff l u e n t i s d i s c a r d ed . T h e s o l u ti o n o b t a in e d b y t h e me t h o d d e s c r ib e d i n a . E x t ra c t i o n me t h o d s i s p o u r e d in t o th i s c o l u mn . Tw o ml o f a mi x t u r e of n - h e x an e a nd b en z e n e ( 3 :1 ) a nd the n 4 ml of
d i c h l o r o me t h a n e a r e a l s o ad d e d i n t h at o r d e r. Th e e ff lu e n t i s d i s c a r d ed . E i g h t ml o f a mi x t u r e o f d i c h l o ro me t h a n e an d me t h a n o l ( 9 : 1 ) i s p o u r e d in t o th e c o l u mn a n d t h e e l u a t e i s c o l lec t e d i n a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r, a n d t h e d i c h lo r o me t h a n e an d me t h a n o l a r e r e mo v e d a t 4 0 C o r lo w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 0 . 5 ml o f a mi x t u r e o f a c e t o n i t r i le a n d w a t e r ( 1 : 1 ) , w h i ch i s u s e d as t h e s a mp l e
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s o l u t io n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e reference material. Te s t i n g c o n d i t io n s C o l u mn p a c k i n g : O c t a d e c y l s i l a n e -b o nd e d s il ic a g e l ( p a r ti c l e s i ze : 2 - 5 m) i s u s e d . C o l u mn : A s t a i n l e s s tu b e ( i n n e r d i a me t e r : 2 . 0 - 6 . 0 mm a n d l e n g t h : 1 0 0 - 25 0 mm) i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : 4 0 C M o b il e p h as e : A mi x t u r e o f a c e to n i t r il e an d 0 .0 0 2 mo l / l a mmo n i u m a c e t a te ( 1 :1 ) i s u s ed . T h e f l o w r a t e sh o u l d b e ad ju s t e d s o th a t d i e th y l s t i l b e s t r o l f l o ws o u t in app r o x i ma t e l y s e v e n mi n u t e s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e s a me c o n d it i o n s d e s c ri b e d i n a . Q u a l i ta t ive t e s t s , u si n g e i th e r th e p e a k h e ig h t o r p e ak a re a me t h o d . ( 1 2 ) A n a l yt i c a l me t h o d f o r d i me t r i d a z o l e , me t r o n i d az o l e a n d r o n i d azo l e 1 . E q u i p me n t L i q u id ch r o ma t o g r a p h t a n de m ma s s s p e c t r o me t e r i s u s ed. 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. A c e t o n it r i le : A c e t o ni tr i l e p r o du ce d f o r l i qu id c h r o ma t o g r a p h y i s us e d . M e t h an o l: M e t h an o l p r o d u c ed f o r l i q ui d c h ro ma t o g r a p hy i s u s e d . Wa t e r : Wa te r p r o d u ced f o r l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y i s u se d . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l D i me t r i d a z o l e : d i me t r i d a zo l e . M e l t in g p o in t : 1 3 8 - 1 3 9 C M e t r o n id a zo l e : me t r o n i d a zo l e . M e l t in g p o in t : 1 5 8 - 1 6 0 C R o n id a z o l e: T h i s p r o d u c t s h o u ld c o n si s t o f 9 9 % o r mo r e r o n i da z ole . Th i s p r o du c t s h o ul d consist of 99% or mo r e This p r o d u ct s h o u ld consist of 99% or mo r e
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M e l t in g p o in t : 1 6 7 - 1 6 9 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s A f t e r h o mo g e n iz i n g , a s a mp l e o f 5 . 0 0 g i s me a s u r e d o u t, t o w hi c h 2 0 ml o f a c e t o n i t r i l e i s ad d e d . T h e mi x t u r e i s f i n e l y c r u s h e d a g a i n b e f o r e b e i ng c en t ri f u g e d a t 3,0 0 0 r p m f o r f i v e mi n u t e s . T h en , th e a c et o n i tr i l e l a y e r i s t r a n s f e r r e d t o a 1 0 0 - ml s e p a r a t i n g f u n n e l , t o w h i c h 2 0 ml o f n - h e x an e i s a l s o a dd e d a n d s h ak en v i g o r o u s ly. T h e s h ak e n mi x t u r e i s l e f t t o s t a n d , a n d th e n t h e a c e to n i t r i l e l a y e r i s t r a n s f e r r e d t o a r o ta r y v a c uu m e v a p o r a t o r, to w h i c h 5 ml o f n - p r o p an o l i s ad d ed t o r e mo v e th e a c e t o n i t r i le a n d n - p r o p a n o l at 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v e d i n 1 .0 ml o f me t h a n o l a n d f i lt e re d t h r o u g h a me mb r a n e f i l t e r w i t h a p o r e s i z e o f 0 . 2 m. T h i s f i l t e r ed s o l u ti o n i s u s e d a s t h e t e s t s o l u ti o n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e reference material. Te s t i n g c o n d i t io n s C o l u mn p a c k i n g : O c t a d e c y l s i l a n e -b o nd e d s il ic a g e l ( p a r ti c l e s i ze : 2 - 5 m) i s u s e d . C o l u mn : A s t a i n l e s s tu b e ( i n n e r d i a me t e r : 2 . 0 - 6 . 0 mm a n d l e n g t h : 1 0 0 - 25 0 mm) i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : 4 0 C M o b il e p h as e : A mi x t u r e o f ac e to n i t r il an d w a t e r ( 1 : 9 ) i s u s ed . Th e f l o w r a t e s h o u ld b e ad j u s t ed s o t h a t d i me t r i d a zo l e , me t r o n id a z o le a n d r o n i d azo l e f l o w o u t i n 4 - 1 0 mi n u te s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e s a me c o n d it i o n s d e s c ri b e d i n a . Q u a l i ta t ive t e s t s , u si n g e i th e r th e p e a k h e ig h t o r p e ak a re a me t h o d . ( 1 3 ) D a mi n o z i d e a n a l y t i c a l me t h o d 1 . E q u i p me n t A g a s c h ro ma t o g r a p h w i t h a n a l k a li f l a me i o n i za t io n d e t e ct o r o r h i g h l y - s e n s i t i v e n i t r o g e n p h o s p h o r u s d e t e c to r, a g a s c h r o ma t o g r a p h ma s s s p e c tr o me t e r, a n d s t e a m d i s t i ll a t io n a p p a r a tu s a r e u s e d . T h e s t e a m d i s t i l l a t io n ap p a r a t u s s h o u l d b e ma d e o f g l a s s an d r o u g h l y a s s h o w n i n t he f o l l o w in g f i g u r e :
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A : 1 , 00 0 - ml r o un d b o tt o m f l a s k (for steam generation) B : 1 ,0 00 - ml r o un d b o tt o m f l a s k ( f o r d i s t i l l at i o n ) C : D i s t i l la ti o n t r ap D : C o o l in g t u b e E : 1 0 0 - ml c o n ic a l f l a sk 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. R e a g en t s d e s i g n at e d as s p e c i a l g r a d e i n th i s s e ct i o n mu s t me e t t h e r e q u i r e me n t s f o r s p e c i a l g r a d e s p e ci f i e d i n t h e J ap a n I n d u s tr i a l St a n d a r d s fo r t h e r e a g e n t s . A c e t o n e: Th r e e h u n d r e d ml o f a c e t o n e i s c o n c en t r a t ed u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. A f t e r r e m o v i n g t h e a c e t o n e , t h e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d u e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . B a s i c a lu mi n a mi n i c o lu mn ( 1 , 7 1 0 mg ) : A p o l y e t h y l e n e co l u mn w i t h an i n n e r d i a me t e r o f 8 - 9 m m p a c k e d w i t h 1 , 7 1 0 mg o f b a s ic a l u mi n a o r o n e w i th t h e s a me s e p a r a t i o n c h ar a c t e r i s t i c s i s u s e d . S i l i c o n e f o r d e f o a mi n g : S i l i co n e p r o d u ce d fo r d e f o a mi n g i s u s e d . - N i t r o b e nz a l d eh yd e : - N i t r o b e n z a l d eh y d e (s p e c i a l g r ad e ) . 1 % - N i t r o b e n z al d eh y d e - me t h a n o l s o l u t i o n : - N i t r o b e n z a l d eh y d e (1 0 0 mg ) i s d i s s o l v e d i n 1 0 ml o f me t h a n o l . S h o u l d b e p r e p ar e d i mme d i a t e ly b e f o r e u s e . P h e n o lp h tha l e i n r e a g en t : P h en o lp h t h al e i n ( 1 g ) i s d i s s o l v e d i n 1 0 0 ml o f e t h an o l . n - H e x a n e : T h r e e hu ndr e d ml o f n - h e x a n e i s c o n c en t r a t ed to 5 ml u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. W h e n 5 l o f th e c o n c en t r a t e d s a mp l e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h a n n - h e x an e on t he ga s ch r o ma t o g r a p h mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . Wa t e r : D i s t i l l ed w a t er i s u s e d . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n ce t h a t i n t e r f e r e s w i t h a n al y s i s o f a n i n g r e d i e n t o f th e a g r i cu l tu r a l c h e mi c a l
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p r o d u ct con c e r n e d i s c o n ta i n ed , i t s h o u ld b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t s u c h a s n - h e x a n e. M e t h an o l: T h r e e h u ndr e d ml o f m e t h an o l i s co n c en t r a t ed u s i n g a r o ta r y v a c uu m e va p o r a to r. A f t e r r e mo v i n g th e me t h a n o l , t h e r e s id u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d u e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . P h o s p h a te b u ff e r s o l u ti o n ( pH 5): M o n op o t a s s iu m d i h yd r o g e n
mo n o p h o s p h a t e ( 1 3 .1 5 g ) a n d d i p o t a s s i u m h y d r o g e n o rt h o p h o s p h at e ( 0 . 5 9 g ) a re d i s s o lv e d i n w a t e r to ma k e a 1 0 0 - ml s o l u t io n . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l D i me t h y l h y d r a z i n e: Th i s p r o d uct s h o u ld co n s i s t o f 9 7 % o r mo r e 1 , 1 - d i me t h yl h yd r a z i ne . B o i l in g p o in t : 62 - 6 4 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s i . C e r e a l g r a i n s , l eg u me s / p u l s e s , se e d s , f r u i t , v e g et a b le s , ma t c h a a n d hops C e r e a l g r a in s , l e g u me s / p u l s e s a n d s e e d s a r e c r u s h e d so a s t o p a ss t h r o u gh a s t a n d a r d me s h s i e v e (4 2 0 m) b e f o r e b e in g w e i g h ed to p r e p a r e a 5 . 0 - g r a m s a mp l e . F r u i t a n d v e g e t ab l e s ar e w e i g h e d a c c u r a t el y t o p r e p a r e a s a mp l e o f a b o u t o n e k i l o g r a m. A n a p p r o p ri a t e a mo u n t o f w a t e r i s me a s u r e d a n d a d d e d to t h e s a mp l e , i f r e q ui r e d . A f t e r ho mo g e n i z ing , a s a mp l e e q u iv a l en t t o 1 0 . 0 g i s me a s u r e d o u t . M a t c h a i s w e i g h e d t o p r e p a r e a 5. 0 - g r a m s a mp l e . H o p s a r e cr u s h e d i n to p ie c e s a n d w e i g h e d t o p r e p a r e a 5 .0 - g r a m s a mp l e . E i g h t y ml o f w a t e r i s a d d ed t o th e o b t a in e d s a mp l e b e f o r e s h a k i n g v i g o r o u s l y f o r 3 0 mi n u t e s . T h e s h a k e n mi x t u r e i s f i l t e r e d b y s u c t i o n u s i n g a g l as s f i b e r f i l te r. T h e r e s id u e o n t h e f i l t e r i s co ll e c t ed an d 4 0 ml o f w a t e r i s a d d e d b e f o re s h a k in g f o r f i v e mi n u te s . A f t e r r e p e a t in g th e a b o v e p r o c e d u r e , t h e f i l t r at e i s t r a n sf e r r e d t o a 1 , 0 0 0 - ml r o u n d b o t t o m f l a s k ( f o r d i s t i l la t i o n ) . i i . Tea s e x ce p t ma t c h a A 6 . 0 - g r a m s a mp l e s o a k e d in 3 60 ml o f w a t e r a t 1 00 C i s l e f t t o
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s t a n d a t r o o m t e mp e r a t u r e f o r f i v e mi n u t es b e f o r e b e i n g f i l te r e d . F r o m t h e co o l ed f i l t r at e , 1 2 0 ml i s t r a n s f e r r e d i n to a 1 , 0 0 0 - ml r o u n d b o t to m f l a s k ( f o r d i s t i ll a t i o n ) . i i i . F o o d s ex c e p t t h o s e l i s t e d i n i a n d ii a b o v e E x t r a c t s a re o b ta i ne d b y t h e me t h o d s d e s c r ib e d in i . b . D i s t i l la t io n S i x t y g r a ms o f s o d i um h y d r o x i d e ( 6 5 g f o r v e g e ta b l e s a n d f r u i t ) i s a d d ed b it b y b i t t o th e r o u n d b o tto m f l a s k d e s c r i b e d ab o v e s o t h a t i t d i s s o l v e s as t h e w a t e r c o o l s . I mme d i a t e l y a f t e r a d d in g o n e t o tw o d r o p s o f d e f o a mi n g s i l i c o n e to t h e d i s s o l v e d s o l u t i o n , t h e f l a s k i s a t t a ch e d t o a d i st i l la ti o n a p p a r a t u s . S e p a r at e l y, a 1 0 0 - ml c o n i c al f l a s k c o n t ai n i n g 5 ml o f p h o s p h a t e b u ff e r s o l u t io n ( p H 5 ) a n d o n e d r o p o f p h en o l p h th a l ein r e a g e n t is a t t a c h ed to a s t e a m d i s t i l l e r a n d a 1 , 0 0 0 - ml r o u n d b o t t o m f l a s k ( f o r s t e a m g e n e r a t io n ) i s h e a t ed . T h e s o l u t io n i s s t e a m d i s t i l l ed u n t il t h e d i s ti l la t e co me s t o 4 5 ml t o c o n f i r m t h a t t h e d i s ti l l a te r e ma i n s c o lo r l es s . T h e h ea t s h o u l d b e a d j u s te d s o a s t o co mp l e t e th e d i st i l l at i o n i n a b o u t 1 5 mi n u te s . c . D e r i v a t iz a t i o n O n e ml o f 1 % - n i t r o b e n z al d eh y d e - me t h a n o l s o l u t io n is a d d e d to t h e a b o v e d i s ti ll a t e . Th e mi x t u r e i s s h a k e n an d lef t t o s t a n d f o r t w o h o u rs a t 3 0 C . Th e n , 5 0 ml o f n - h e x a n e i s a d d ed b e f o r e s h ak i n g a g a in f o r f i v e mi n u t e s . T h e s h a k e n mi x t u r e i s le f t to s t an d a n d th e n - h ex a n e l a y e r i s c o l l e c t ed to b e f i l te r e d i n a 2 0 0 - ml e g g p l an t - s h a p e d f l a s k u s i n g a l iq u i d p h a s e se p a r a t io n fi l t e r p ap e r. F i f t y ml o f n - h e x a ne i s a d d ed t o t h e a q u e o u s la ye r, a n d af t e r r e p e a tin g t h e ab ov e p r o c ed ur e , t h e n - h ex an e l a y e r i s c o mb i n e d i n t h e eg g p l an t - s h a p e d f l a s k . Th e r e s i d u e o n t h e f i l t e r i s w a s h e d w it h 1 0 ml o f n - h ex a n e to o b t ai n t h e w a s h i n g s , w h i c h a r e co mb i n e d i n t h e e g g p la n t - s h a p e d f la s k t o r e mo v e t h e n - h ex an e a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s t h e n d i s so l v ed i n 5 m l o f a mi x t u r e o f a c e to n e a n d n - h ex a n e ( 1 :1 9 ) . d . C l ea n - u p Te n ml o f a mi x t u r e o f a c e t o n e an d n - h ex a n e ( 1 : 1 9 ) i s p o u r e d in to a b a s i c a l u mi n a mi n i c o lu mn ( 1 , 7 1 0 mg ) a n d th e e ff l u e n t i s d i s c a r d e d . T h e s o lu t io n o b t ai n ed i n c . D e r i v a t i z ati o n i s p o u r e d in t o t h i s c o l u mn , f o l l o w e d b y th e i n j e c ti o n o f 1 0 ml o f a mi x t u r e o f a c e t o n e a n d n - h ex an e ( 1 : 19 ) . T h e el u ate i s c o l l ect e d i n a ro t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r, a n d t h e ac e t o n e a n d n - h e x a n e a r e r e mo v e d a t 4 0 C o r
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l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v e d i n a c et o n e t o ma k e e x a c t l y 5 ml o f s o l u t io n , wh i c h i s u s ed a s t h e t e st s o l u t i o n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e r e f e r e n c e ma t e r i a l u n d e r th e s a me p r o c e d u r e d e s cr i b e d i n c . D e r i v a t i z ati o n i n 4 . P r e p a r a t i o n o f t e s t s o lu t i o n s . Te s t i n g c o n d i t io n s C o l u mn : A s i l i c a te g l as s c a p il l a r y c o lu mn ( i n n e r d i a me t e r : 0 . 2 5 m m a n d le n g t h : 1 0 - 3 0 m) c o a t ed w i t h 5 % p h e n y l me t h y l s i l i c o n e f o r g as c h r o ma t o g r a p h y t o a th i c k n e s s o f 0 . 2 5 m i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : T h e c o lu mn t e mp e r a t u r e i s h e l d a t 6 0 C f o r t w o mi n u t e s , f o l l o w e d b y a n in c r ea s e o f 1 0 C e v e r y mi n u t e u n ti l r e a c h i n g 2 8 0 C , w h e r e i t i s h e l d fo r f i v e mi n u t e s . I n l e t t e mp e r a t u r e : 2 8 0 C D e t e c t o r : Sh o u ld be op e r a t e d a t 2 8 0 C . Gas flow rate: Helium is used as the carrier gas. The flow rate should b e a d ju s t ed s o t h a t d i me t h y l h y d r a z i n e d e r i v a t iv e s f l o w o u t in a p p r o xi ma t e l y 1 3 mi n u t e s . T h e fl o w s o f a i r a n d h y d r o g e n s h o u ld a l s o b e a d ju s t e d t o th e o p ti ma l c o n d it i o n s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e co n te n t o f d i me t h y l h yd r a z i ne i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e st r e s u l t s o b t ai n ed un d e r th e sa me c o n d iti o n s d e s c r ib e d i n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s , u s i n g e i t h e r t h e p e a k he i ght o r p e a k a re a me t h o d . T h e c o nt e nt o f d a mi n o z i d e i s al s o d e t e r mi n e d u s i n g t h e f o l l o w in g f or mu l a : D a mi n o z i d e c o n t e n t (p p m) = 2 . 6 7 x d i me t h y l h y d r a z i n e c o n t e n t (p p m ) c . C o n f i r ma t i o n t e s t s G a s c h r o ma t o g r ap h y/ma s s s p e c t r o me t r y i s p e r f o r me d u n d e r t h e s ame c o n d i t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l ita t i v e t e s t s . Te s t r e s u lt s o b t a i n e d i n t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l mu s t b e t h e s a me a s t h e r e s u l t s o b t a in e d u n d e r t h e p r o c ed u r e d e s c r ib e d in c . De r i v a t iz a t ion in 4 . Pr e p a r a t i on o f t e s t s o l u ti o n s . Th e q u a n ti t y ma y b e d e t e rmi n e d b y ei t h e r t h e p e a k h e i gh t o r pe a k a r e a me t h o d , i f r eq u i r e d . d . C a li b r a t io n cu r v e A s o l u t i o n o f d i me t h y l h y d r a z i n e ( 1 ml ) c o mb i n e d w i t h 5 ml o f p h o s p h a t e b u ff e r s o l u t i o n ( p H 5 ) a n d 4 0 ml o f w a t e r i s a s s a y e d w i t h
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t h e p r o c ed u r e d e s c r ib e d in c . De r i v a t iz a t ion in 4 . Pr e p a r a t i on o f test solutions. ( 1 4 ) N i t r o f u r a n s a n al y t i c a l me t h o d

3 - a mi n o - 2 - o x a z o l i d i n o n e , 1 - a mi n o h y d a n t o i n , 3 - a mi n o - 5 - mo r p h o l i n o m e t h y l - 2 - o x a z o l i d i n o n e a n d s e mi c a r b a z i d e a r e a n a l y s e d .
1 . E q u i p me n t L i q u id ch r o ma t o g r a p h t a n de m ma s s s p e c t r o me t e r i s u s ed. 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. R e a g en t s d e s i g n at e d as s p e c i a l g r a d e i n th i s s e ct i o n mu s t me e t t h e r e q u i r e me n t s f o r s p e c i a l g r a d e s p e ci f i e d i n t h e J ap a n I n d u s tr i a l St a n d a r d s fo r t h e r e a g e n t s . A c e t o n it r i le : A c e t o ni tr i l e p r o d u ce d f o r l i q u id c h r o ma t o g r a p h y i s u s e d . P o r o u s d i at o ma c e o u s e a r t h co l u mn ( t o h o ld 2 0 ml o f s o l u t io n ): A p o l y e t h y l en e co l u mn w i t h a n in n e r d i a me t e r o f 2 0 - 3 0 mm p a c k e d wi t h g r a n u la r porous d ia t o ma c e o u s earth p r o d u ce d for c o lu mn
c h r o ma t o g r a p h y t h at ca n h o l d 2 0 ml o f s o l u t i o n , o r o n e w i t h t h e s ame s e p a r a t i o n c h a r a c t e r i st i c s , i s u s ed . - N i t r o b e nz a l d eh yd e : o - N i t r o b e n z a l d eh y d e (s p e c i a l g r ad e ) . Wa t e r : Wa te r p r o d u ced f o r l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y i s u se d . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l 3 - a mi n o - 2 - o x a zo l id i no n e : T h i s p r o d u c t s h o u l d c o n s i s t o f 9 9 % o r mo r e 3 - a mi n o - 2 - o x a zo l id i n o n e . D e c o mp o s i t i o n p oi n t: 6 5 - 6 7 C 1 - a mi n o h yd a n to i n h yd r o c h lo r i d e: T h i s p r o d u c t s h o u l d c o n s i s t o f 9 0 % o r mo r e 1 - a mi n o h y d a n to i n h y d r o ch l o r i d e . D e c o mp o s i t i o n p o i n t: 2 0 1 - 20 5 C 3 - a mi n o - 5 - mo r p h o l i n o me t h yl - 2 - o x a z o l i d in o n e : Th i s p r o d u ct s h o u ld c o n s i s t o f 9 9 % o r mo r e 3 - a mi n o - 5 - mo r p h o l i n o m e t h y l - 2 - o x a z o l i d i n o n e . D e c o mp o s i t i o n p o i n t: 11 5 - 1 2 0 C S e mi c a r b a z i d e h yd r o ch l o r i d e : Th i s p r od u c t s h o u ld c o ns i s t o f 9 9% o r mo r e s e mi c a r b a z i d e h yd r o c h lo r i d e. D e c o mp o s i t i o n p o i n t: 1 7 5 - 17 7 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s a n d d e r i v at i z a ti o n
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A f t e r h o mo g e n iz i n g , a s a mp l e o f 5 . 0 0 g i s me a s u r e d o u t, t o w h i ch 1 0 ml o f 0 . 1 mo l / l h y d r o c h lo r i c a ci d i s a d d ed . T h e mi x t u r e i s f i n e l y c r u s h e d b ef o r e a d d i n g 0 . 4 ml o f 0 . 0 5 mo l / l - n i t ro b e n z a ld e h y d e - d i me t h y l s u l f o x id e so l u t io n . T h e mi x t u r e i s t h e n l e f t t o s t a n d f o r 1 6 h o u r s a t 3 7 C . T h e n , 5 ml o f 0 . 1 mo l / l d i p o t a s s iu m h y d r o g e n o r t h o p h o s p h a t e s o lu t io n i s ad d ed. A p p r o x i ma t e l y 0. 8 ml o f a 1 mo l / l s o d i u m h y d r o x i d e s o lu t i o n i s al s o a d d e d t o ad j u s t t h e p H t o 7 - 8 . Th i s s o l u t io n i s c e n t r i f u g e d a t 2 ,5 00 r p m f o r f i v e mi n u t e s a nd th e s u p e r n a ta n t i s c o ll e c t ed . b . C l ea n - u p T h e s u p e r n a t a n t o b t a in e d b y t h e p ro c e d u r e s t a t e d i n a . E x t r a c ti o n me t h o d s a n d d e r i v a ti za t i on i s in j e c te d i n to a p o r ou s d i at o ma c e o u s e a r t h co l u mn ( t o h o ld 2 0 ml o f s o l u ti o n ) . Th e co l u mn i s l e f t t o s ta n d f o r f i v e mi n u t e s b e f o r e a d d in g 1 0 0 ml o f e t h y l a c e t a te . T h e el u at e i s c o l l ec t ed in a r o t a r y v a cu u m e v a p o r at o r, a n d t h e eth y l a c et a t e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r lo w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v e d in 1 . 0 ml o f a mi x t u r e o f a c et o n i t r i le a n d w a ter ( 1 : 1 ) , w h i c h i s u se d a s th e t e st s o l u t io n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e reference material. Te s t i n g c o n d i t io n s C o l u mn p a c k i n g : O c t a d e c y l s i l a n e -b o nd e d s il ic a g e l ( p a r ti c l e s i ze : 2 - 5 m) i s u s e d . C o l u mn : A s t a i n l e s s tu b e ( i n n e r d i a me t e r : 2 . 0 - 6 . 0 mm a n d l e n g t h : 1 0 0 - 25 0 mm) i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : 4 0 C M o b il e p h as e : A c o n ce n t r a t io n g r a d i e n t o f a mi x t u r e o f a c e to n itr i l e a n d 0 . 1 % ac e t i c a c id so l u ti o n f r o m 1 : 4 t o 4 :1 s h o u l d b e c r e a t ed in 1 5 mi n u t e s. T h e f l o w r a t e s h o u ld b e a d j u st e d s o th a t 3 - a mi n o - 2 - o x a z o l i d in o n e f l o w s ou t i n a pp r ox i ma t e l y 1 2 mi n u t e s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e s a me c o n d it i o n s d e s c ri b e d i n a . Q u a l i ta t ive t e s t s , u si n g e i th e r th e p e a k h e ig h t o r p e ak a re a me t h o d .
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( 1 5 ) P r o p h a m a n a l y t i c a l me t h o d 1 . E q u i p me n t G a s c h r o ma t o g r a p h ma s s s p e c t r o me t e r i s u s e d . 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. R e a g en t s d e s i g n at e d as s p e c i a l g r a d e i n th i s s e ct i o n mu s t me e t t h e r e q u i r e me n t s f o r s p e c i a l g r a d e s p e ci f i e d i n t h e J ap a n I n d u s tr i a l St a n d a r d s fo r t h e r e a g e n t s . A c e t o n it r i le : Th r e e h u n d r e d ml o f a c e t o n it r i l e i s c o n c en t r a t e d u sin g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. A f t e r r e mo v i n g t h e a c e to n i t r il e , th e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e di s s o lv e d r e s i d u e i s in j e c te d i n to t h e G C - E C D f o r a n a ly s i s , t h e h ei g h t s o f p eak s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h a n n - h ex an e o n t h e g a s c h r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r th a n th e p e ak f o r g a mm a - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . A c e t o n e: Th r e e h u n d r e d ml o f a c e t o n e i s c o n c en t r a t ed u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. A f t e r r e m o v i n g t h e a c e t o n e , t h e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d u e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . S o d i u m c h l o r i d e : S o d iu m c h l o r i de ( s p e c i al g r a d e ) . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n ce t h a t in t e r f e r e s w i t h a n a l y s i s o f a n i n g r ed i e n t o f th e a g r i c u lt u r al c h e mi c a l p r o d uc t co n c e r n ed is c o n ta i n ed , i t s h ou ld be r i n s e d o u t w i t h a s o lve n t s u ch a s n - h e x an e . O c t a d e c y l si l a n e - b o n d e d s i li c a gel mi n i c o lu mn ( 1 , 0 00 mg ) : A
p o l y e t h y l en e co l u mn w i t h a n in n e r d i a me t e r o f 1 2 - 1 3 mm p a c k e d wi t h 1 , 0 00 mg o f o c t ad e c yls i l a n e - b o n d e d s i li c a g e l o r o n e w i t h th e s ame s e p a r a t i o n c h a r a c t e r i st i c s i s u s ed . G r a p h i t e ca r b o n an d a mi n o p r o pyl s i l a n e - b on d e d si l i c a g e l l a mi n a t ed mi n i c o l u mn ( 5 0 0 mg / 5 0 0 mg ) : A p o l ye t h yl e n e co lu mn w i t h an in n e r d i a me t e r o f 1 2 - 1 3 mm p a c k ed w i t h 5 0 0 mg e a c h o f g r ap h i te c a r b o n a n d a mi n o p r o p yl s i l a ne - b o n d e d si l i c a g e l , o r o n e w it h t h e s ame s e p a r a t i o n c h a r a c t e r i st i c s , i s u s ed . D i a t o ma c e o u s e a r th : D i a t o ma c e o u s e a r th fo r c h e mi c a l a n al y s i s i s u s e d . To l u e n e : Th r e e h u n d re d ml o f t o l u en e i s c o n c en t r a t ed i n a r o ta r y
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v a c u u m e v a p o r a to r. A f t e r r e m o v i n g th e t o lu e n e, t h e r e s id u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Wh e n 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d u e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . n - H e x a n e : T h r e e hu ndr e d ml o f n - h e x a n e i s c o n c en t r a t ed to 5 ml u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. W h e n 5 l o f th e c o n c en t r a t e d s a mp l e i s i n j e ct e d i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , th e h ei g h t s o f p e a k s f o r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e on t h e g a s ch r o ma t o g r a m mu s t b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n t h e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . Wa t e r : D i s t i l l ed w a t er i s u s e d . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n ce t h a t i n t e r f e r e s w i t h a n al y s i s o f a n i n g r e d i e n t o f th e a g r i cu l tu r a l c h e mi c a l p r o d u ct con c e r n e d i s c o n ta i n ed , i t s h o u ld b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t s u c h a s n - h e x a n e. Sodium sulfate (anhydrous): Sodium sulfate (anhydrous) (special g r a d e ) . I n ca s e s w h e r e a s u b s t an c e t h a t i n t e r f e r e s w i t h an a l y s i s o f an i n g r e di e n t of the a g r i c u lt u r al c h e mi c a l p r o d u ct concerned is c o n ta i n ed , i t s h o u l d b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t su c h as n - h e x an e . 0 . 5 mo l / l p h o s p h a t e b u ff e r s o l u t io n ( p H 7 .0) : 1 3 6 .8 5 g o f s e c o nda r y s o d i u m p h o s p h a t e ( d o de c a h yd r a t e ) a n d 1 7. 9 2 g o f s od i um p h o s p h a te mo n o b a s i c ( d i h y d r a t e ) a r e me a s u r e d o u t t o b e d i s s o l v ed i n w a t e r t o ma k e a 1 , 0 0 0 - ml s o l u ti o n . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l P r o p h a m: T h i s p r o d u c t s h o u ld co ns i s t o f 9 9 % o r mo r e p r o p h a m. M e l t in g p o in t : 8 7 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s i . C e r e a l g r a i n s , l eg u me s / p u l s e s an d s e ed s C e r e a l g r a in s , l e g u me s / p u l s e s a n d s e e d s a r e c r u s h e d so a s t o p a ss t h r o u gh a s t a n d a r d me s h s i e v e (4 2 0 m) b e f o r e b e in g w e i g h ed to p r e p a r e a 1 0 . 0 - g r a m s a mp l e . Tw e n t y ml o f w a t e r i s a d d e d to t h e o b t ai n ed s amp l e a n d it i s t h en l e f t t o s t an d f o r 1 5 mi n u t es . A c e t o n it r i le ( 5 0 ml ) i s t h e n a d d e d . A f t e r h o mo g e n i z in g f o r th r e e mi n u t e s , t h e mi x t u r e is f i l t e r e d b y s u c t i o n u s i n g f i lt e r p a p e r co v e r ed w i t h a o n e - c e n t i me t e r- t h i c k l a ye r o f d i ato ma c e o u s e a r t h . Th e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l te r p a p e r i s c o l l ec t e d a n d 2 0 ml o f a c e t o n i t r i le i s a d d ed . T h e mi x t u r e i s c r u s h e d f i n ely f o r t h r e e
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mi n u t e s . Th e ab o v e p r o c e d u r e i s r e p e at ed a n d t h e f i l t r a t e is c o mb i n e d . A c e t o n it r i le i s t h en ad d e d to ma k e a 1 0 0 - ml s o l u t io n . Tw e n t y ml o f t h e ab o v e so l u ti o n i s t r an s f e r r e d t o a 1 00 - ml s e p a r a t i n g f u n n e l , to w h i c h 1 0 g o f s o d iu m c h l o r i d e an d 2 0 ml o f 0 .5 mo l / l p h o sp h a te b u ff er s o l u ti o n (p H 7 . 0 ) a r e a d d e d . T h e mi x t u r e is s h a k e n vi go r o u s l y f o r 1 0 mi n u t e s u s i n g a sh a k e r a n d le f t t o s t an d . T h e a q u e o u s l a y e r i s t h e n d i s car d e d a n d th e a c e to n itr i l e l a y e r i s c o l l ec t ed . Te n ml o f a c e t on i t r i l e i s p o u r e d in a n o ct a d ec y l s i l a n e - b o n d ed s il i ca g e l mi n i c o lu mn ( 1 , 0 0 0 mg ) a n d t h e e ff l u e n t is d i s c a r d e d . T h e ab o v e a c e t o n i t r i le l a y e r i s p o u r e d i n to t h i s co l u mn . A f t e r t h e el u at e i s c o l l ec t ed in a 5 0 - ml c o n i c a l f l a s k , 2 ml o f a c et o n it r i l e i s a l s o p o u r ed i n t o t h e c o l u mn . T h e e l u a te i s co mb i n e d in t h e co n ic al f l a s k . A n a d e qu a t e amo u n t o f s o d i u m s u l f a t e ( a n h y d ro u s ) i s a l s o a d d e d to th e f l a s k , w h i ch i s l e f t t o s t a n d f o r 15 mi n u t e s an d s h ak e n fr o m t i me t o t i me . T h e co n t en t o f th e f l a s k i s t h e n f i lt e r ed i n to a r o ta r y v a c u u m e v a p o r a t o r. T h e c o n i c al f l a s k i s wa s h e d w i t h 1 0 ml o f a ce t o n i t r i l e to o b t ai n t h e w a s h i n g s , w i t h w h i c h t h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p ap er i s w a s h ed t w i c e. Th e w a s h in g s o b t a in ed f r o m t h e r e p e a t ed wa s h i n g a r e t h e n ad d ed t o th e r o ta r y v a c u u m e v ap o r a to r, a n d t h e a ce t o n i t r i l e is r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e is d i s s o l v e d in 2 ml o f a mi x t u r e o f t o l u e n e a n d a c e t o n i t r il ( 1 : 3 ) . i i . F r u i t , v eg e t ab l e s , tea s a n d h o p s F r u i t a n d v e g e t ab l e s ar e w e i g h e d a c c u r a t el y t o p r e p a r e a s a mp l e o f a b o u t o n e k i l o g r a m. A n a p p r o p ri a t e a mo u n t o f w a t e r i s me a s u r e d a n d a d d e d to t h e s a mp l e , i f r e q ui r e d . A f t e r ho mo g e n i z ing , a s a mp l e e q u iv a l en t t o 2 0 . 0 g i s me a s u r e d o u t . Te a s a n d h o p s a r e f i r st c r u s h ed in t o p i ec e s a n d w e ig h ed t o p r e p a r e a 5 . 0 0 - g r a m s a mp l e , t o w h i c h 2 0 ml o f w a t e r is a d d ed a n d l e f t t o s ta nd f o r 1 5 mi n u t e s . T h e n , 5 0 ml o f a c e to n it r i l e i s a d d e d b e f o r e f in e l y c r u s h in g f o r t h r ee mi n u t e s . Th e c r u sh e d s a mp l e i s f il t e r e d b y s u c t i o n u s i n g f i l t e r p a p e r c o v e r e d w it h a o n e - ce n t i me t e r- t h i c k la y e r o f d i a to ma c e o u s e a r th . T h e r e s i d u e o n t h e su r f a c e o f th e f i l te r p a p e r i s co ll e c t ed an d a c e t o n i t r i le ( 2 0 ml ) i s a d d ed b e f o re h o mo g e n i z i n g f o r t h re e mi n u t e s . T h e a b o v e p r o c e d u r e is r e p e a t e d a n d th e f i l tr a t e i s c o mb i n ed , a n d t h e n a c e to n i t r i l e i s a d d e d t o ma k e a 1 0 0 - ml s o l u ti o n .
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Tw e n t y ml o f t h i s s o l u t io n i s t ra n s f e r r e d t o a 1 0 0 - ml s e p a r a t i n g f u n n e l , to w h i c h 1 0 g o f s o d i u m c h l o r i d e an d 2 0 ml o f 0 . 5 mo l / l p h o s p h a t e b u ff e r s o l u ti o n ( p H 7 .0 ) a r e a d d ed . T h e mi x t u r e i s s h a k en v i g o r o u s l y f o r 1 0 mi n u t e s u s i n g a s h a k e r a n d l e f t to s t a n d . Th e a q u eo u s lay e r i s t h e n d i s c a r d e d . T h e a c e to n i t r i l e l a y er i s c o ll e c te d i n a 5 0 - ml c o n i ca l f la s k . A n a de q u at e a mo u n t o f s o di u m s u l f a t e ( a n h yd r o u s) i s a l s o a d d e d t o t h e fl a s k , w h i c h i s t h e n l e f t t o s t a n d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h ak e n f r o m t i me t o t i me . T h e c o n t en t o f t h e f l a s k i s t h e n f i l t e r ed in t o a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. T h e c o n i c a l f la s k is w a s h e d w i th 1 0 ml o f a c e t o n i t ri l e to o b t ai n t h e w a s h i n g s , w i th w h i c h t h e r e s i d u e o n th e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p a p e r i s wa s h e d t w i c e. T h e w a s h i n g s o b t ai n ed f r o m t h e r e p e a te d w as h i n g a r e th e n a d d e d to t h e r ot a r y v a c uu m e v a p o r a to r, an d t h e a c et o n it r i l e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l ow e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v ed in 2 ml o f a mi x t u r e o f t o l u e n e a n d a c e t o n i t r il ( 1 : 3 ) . i i i . F o o d s ex c e p t t h o s e l i s t e d i n i a n d ii a b o v e E x t r a c t s a re o b ta i ne d b y t h e me t h o d s d e s c r ib e d in i o r i i . b . C l ea n - u p Te n ml o f a mi x t u r e o f t o l u en e and a c e to n it r il e ( 1 : 3 ) i s p o u r e d i n to a g r a p h it e c ar b o n an d ami n o p r o p yl s i l a n e - bo n de d s i l ic a ge l l a mi n a t ed mi n i c o l u mn ( 5 0 0 mg / 50 0 mg ) a n d th e eff l u e n t i s d i s c a r d ed . T h e s o l u t io n ob t a in e d by the e x t ra c t i o n me t h o d d e s c r ib e d in a.
E x t r a c t io n me t h o d s is p o u r ed int o th i s co l umn a n d s u bs e q u e nt l y 20 ml o f a mi x t u r e o f t o l u e n e an d a c e t o n i t r i le ( 1 : 3 ) i s a ls o a d d e d . T h e e l u a te i s t ra n s f e r r e d in t o a r o t a r y v a cu u m e v a p o r a to r, an d t h e to l u e n e a n d a ce t o n i t r i l e a r e r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v e d in a mi x t u r e o f a c e t o n e a n d n - h ex an e ( 1 : 1 ) t o ma k e e x a c tl y 2 ml ( 1 ml f o r c e r e a l g r a i n s , l eg u me s / p u l s e s , s e e d s , t ea s a n d h o p s ) o f s o l u t io n , wh i c h i s u s ed a s t h e t e st s o l u t i o n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e reference material. Te s t i n g c o n d i t io n s C o l u mn : A s i l i c a te g l as s c a p il l a r y c o lu mn ( i n n e r d i a me t e r : 0 . 2 5 m m a n d l en g t h : 3 0 m) c o a t e d w i t h 5 % p h e n y l me t h y l s i l i c o n e f o r g a s
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c h r o ma t o g r a p h y t o a th i c k n e s s o f 0 . 2 5 m i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : T h e c o lu mn t e mp e r a t u r e i s h e l d a t 5 0 C f o r o n e mi n u t e , f o ll o w e d b y an i n c r e a s e o f 2 5 C ev er y mi n u t e u n t i l r e ac h in g 1 2 5 C , a f t e r w h i c h th e t e mp e r a t u r e i s i n cr e a s e d b y 1 0 C e v e r y mi n u t e u nt il r e a c h in g 3 0 0 C , w h er e i t i s h e l d f o r 6 . 5 mi n u t e s . I n l e t t e mp e r a t u r e : 2 5 0 C D e t e c t o r : Sh o u ld be op e r a t e d a t 2 8 0 C Gas flow rate: Helium is used as the carrier gas. The flow rate should b e a d j u s t ed t o o p t i ma l c o n d i t io n s . I n j e c t io n me t h o d : S p lit l e s s i n je c ti o n me t h o d M e a s u r e d ma s s n u mb e r ( m/ z ) : 9 3 , 1 3 7 an d 1 7 9 b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e s a me c o n d it i o n s d e s c ri b e d i n a . Q u a l i ta t ive t e s t s , u si n g e i th e r th e p e a k h e ig h t o r p e ak a re a me t h o d . T h e f o l lo w i n g r e v i si o n s h a l l b e ma d e t o I t e m 6 i n S e c t io n A G e n e r a l C o m p o s i ti on a l Sta n d ar d s f o r F o o d , P a r t I F o o d : I n c a s e s w h e r e s u b st a n c e s ( i n cl u d in g s u b st a n c e s p r o d u c e d b y ch e mi c a l t r a n s f o r ma t i o n : t h i s a p p li e s h er e i n a f t e r in t h i s p a ra g r a p h ) u se d as i n g r e d i e n t s o f a g r i cu l tu r a l c h e mi c a l s a n d o t h e r c h e mi c a l s u b s t an c e s l i s t ed i n t h e f i r s t c o l u mn o f t h e t a b le i n ( 1 ) b e l o w a r e c o n t a in ed i n a f o o d l i s t ed i n th e s e co n d co l u mn o f t h e s ame t a b l e , th e a mo u n t o f t h e su b st a n c e s s h a l l n o t ex c e e d t h e a mo u n t s t ip u l at e d i n t h e th i r d co l u mn o f t h e s a me t a b l e. T h e a g r i c u lt u r al c h e mi c a l s a n d o t h e r c h e mi c a l s u b s t a n ce s s t a t ed a b o ve r e f e r, h e r e a n d a l s o l a te r i n t h i s p a r ag r a p h , to s u b s t a n c e s u s e d f o r purposes d e s i g n a t ed by the A g r i c u l tu r e , Forestry and Fisheries
M i n i s te r i a l O r d i n a n c e a c c o r d in g t o t h e p r o v i s io n o f P a r a g r a p h 3 o f Article 2 of the Law C o n ce r n i n g Safety Assurance and Quality
I mp r o v e me n t o f A g r i cu l t u r a l C h emi c a l s a n d F e e d s ( L aw N o . 3 5 , 1 9 5 3 ) , w h i c h i s s ti p u la t e d u n d e r P a r a g r a p h 1 o f A r t i c l e 1 - 2 o f t h e A g r i c u lt u r a l C h e mi c a l s R e g u la t io n L a w ( L a w N o . 8 2 , 1 9 4 8 ) , w i th su c h a i ms a s a d d i n g t o , mi x i n g w i t h , o r in f i l t r a t in g i n t o f e e d s ( t h e f e e d s s t i p u la t ed u n d e r P a r a g r a p h 2 o f L a w N o . 8 2 ) , o r me d i c a l p r o d u ct s t o b e u s e d f o r a n i ma l s , w h i c h a r e s t i p u la t ed b y P a r a g r a p h 1 o f A r t i c l e 2 o f th e P h a r ma c e u t i cal A ff a i r s L a w. I n a s s o c i a t io n w i th t h i s r e g u l a t io n , f o o d s l i s t ed i n t h e f o o d s c o lu mn i n t h e t a b l e i n (2 ) b e l o w sh a l l b e t e s te d u s i ng t he p a r t l i s t e d i n t h e s a mp l e s c o l u mn i n t h e t ab l e as a s a mp l e . I n a d d i t io n , i n t h e
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s u b s t a n ce s u s e d a s i n g r e di e n t s o f a g r i c ul t u r a l ch emi c a l s a n d o t h er c h e mi c a l s u b s t a n c e s li s t e d i n t h e f i r s t c o l u mn o f t h e ta b l e i n ( 1 ) b e l o w, w h i c h a r e st i p u l a t ed to b e N o t d et e c t ed in th e t h i r d c o lu mn o f t h e s a me t a b l e in the f o o d s l i st e d i n t h e s e c o n d co lu mn o f t h e s a me t a b le , n o i n g r e d i e n t o f a g r i c u l tu r a l c h e mi c a l s o r o t h e r c h e mi c a l s u b s t a n c e s s h a l l be d e t e ct e d wh e n th e s e fo o d s a r e tes t e d u s in g th e t e s t me t h o d s s t ip u la t e d in ( 3 ) t o ( 1 0 ) b e l o w, s h al l b e c h a n g e d t o R e g ar d l e s s o f t h e p r o v i s io n s i n 5 , i n g r e d i e n t s o f a g r i cu l tu r a l c h e mi c a l s a n d o t h e r c h e mi c a l s u b s t an c e s l i s t ed i n th e f i r s t c o lu mn o f t h e t ab l e in ( 1 ) mu s t n o t b e c on ta i n ed in f oo d s at l e v e l s ex c ee d i n g t h e li mi t s s t i p u l a t e d i n th e t h i r d co lu mn o f t h e s a me t a b l e a c co r d i n g t o t he f o o d ca t e g o r i e s s h o w n i n th e s e co n d co l u mn o f t h e s a me t a b l e . I n a s s o c i ati o n w i th th is r e g u l a ti o n , f o o d s l i st e d in th e f o o d s c o l u mn i n th e t ab l e i n ( 2 ) b e l o w sh a l l b e te s te d u s in g t h e p a r t li s t ed i n t h e s a mp l e s c o l u mn i n th e ta b l e a s a s a mp l e . In a d d i ti o n , i n th e su b s ta n c es used as in g r e d ie n t s of a g r i cu l t u r a l c h e mi c a l s and other ch e mi c a l
s u b s t a n ce s l i s t e d i n the f i r s t c o l u mn o f t h e ta b l e in ( 1 ) b e l o w, w h ic h a r e s t i p u la t ed to b e N o t d e t e ct e d in t h e t h i r d c o l u mn o f t h e s a me t a b l e in t h e f o o d s l is t e d i n t h e s e c o n d co lu mn o f t he s a me t a b l e , n o in g r e die n t o f a g r i c u lt u r al ch e mi c a l s o r o t h e r c h e mi c a l s u b s t a n ce s s h a ll b e d e t e ct e d w h e n t h e s e f o o d s a r e t e s t e d u s in g t h e t e s t me t h o d s s t i p u la t e d i n ( 3 ) t o ( 1 0 ) b e l o w. T h e f o l lo w in g r e v i si o ns s h a l l al s o b e ma d e t o t h e ta b le in I t e m 6 ( 1 ) : T h e d e s c r ip t i o n o f B H C ( a s t o t al o f a l p h a - B H C , b e t a -B H C , g a mma - B H C a n d s i g ma - B H C , w h i c h ap p l i e s h e r e in a f t e r ) s h a l l b e c h an g e d to ( a s t o ta l o f a l p h a - B H C , b e t a - B H C , g a m ma - B H C a n d si g ma - B H C ) . U n d e r t h e h e a d i n g o f D C I P, K y o n a : 1 .0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 1 .0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 1 .0 ppm, G a r l i c : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 1 . 0 p p m N i r a : 1 . 0 p p m a n d S p i n a c h : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 1. 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 1 .0 p p m. The d e s c ri p t io n of DDT (including DDD and DDE, which ap p lie s
h e r e i n a f t e r) s h a l l b e c h a n g e d t o D D T ( i n c l u d i n g D D D a n d D D E ) .
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Under the heading of EPTC, K y o n a : 0 .0 4 p p m s h a l l b e c h a n g e d to K y o n a : 0 .0 4 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .1 ppm, G a r l i c : 0 . 0 4 pp m s h a l l be c h a n g e d to G a r l i c : 0 . 0 4 p p m N i r a : 0 . 04 p p m a n d S p i n a c h : 0 . 1 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 0. 1 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .1 p p m. T h e de s c r ip t i on o f M C PA ( i n c l u d in g p h en o t h i o l, w h i c h ap p l i e s h e r e in a f t er ) s h a l l b e c h a n g ed t o M C PA ( i n c l u d i ng ph e no t h io l ) . Under the heading of 2,4,5-T K y o n a : N o t d e te c t ed s h a l l b e c h a n g ed t o K y o n a : N o t d e te c t ed Q i n g - g e n g - c a i : N o t d e t e c t ed , G a r l i c : N o t d e te c t ed s h a l l b e c h a n g ed t o G a r l i c : N o t d e te c t ed N i r a : N o t d e t e ct e d , S p i n a c h : N o t d e t ec t ed s h a ll b e c h a n g e d t o S p i n a c h : N o t d e t ec t ed B a mb o o s h o o t: N o t d e t e c t ed an d W h e a t f l o u r s h a l l b e c h an g ed to W h e a t f l o u r ( e x c e p t w h o l e g r a in ) Under the heading of acephate, K y o n a : 5 .0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 5 .0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 5 .0 ppm, G a r l i c : 2 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 2 . 0 p p m N i r a : 0 . 5 p p m a n d O t h e r c u c u r b i t an e o u s v e g et a b l e s: 0 . 5 p p m s h a l l b e c h a n g ed t o O t h e r c u c u r b i t an e o u s v e g et a b l e s: 0 . 5 p p m B a mb o o s h o o t s: 3 .0 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f a mi t r o l e p ar t , K y o n a : N o t d e te c t ed s h a l l b e c h a n g ed t o K y o n a : N o t d e te c t ed
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Q i n g - g e n g - c a i : N o t d e t e c t ed , G a r l i c : N o t d e te c t ed s h a l l b e c h a n g ed t o G a r l i c : N o t d e te c t ed N i r a : N o t d e t e ct e d , S p i n a c h : N o t d e t ec t ed s h a ll b e c h a n g e d t o S p i n a c h : N o t d e t ec t ed B a mb o o s h o o t s: N o t d e t e ct e d an d W h e a t f l o u r s h a l l b e c h an g ed to W h e a t f lo u r ( e x c ep t w h o l e g r ain ) T h e f o l lo w in g t ab l e sha l l be a dd ed a f t e r t h e s e c t i o n o f a l d i ca r b p ar t : ALDRIN and DIELDRIN (as total) R i c e ( b r o wn r i c e ) Wheat C o r n ( ma i z e ) B u c k w h ea t Peas Broad beans Potatoes J a p a n e s e r ad i s h , r o o t s (including radish) J a p a n e s e r ad i s h , r o o t s (including radish) C h i n e s e c ab b a g e C a b b ag e Brussels sprouts Komatsuna (Japanese mu s t a r d s p i n a c h ) Kyona C a u l i f lo w e r B r o c c o li L e t t u ce ( i n c l u d i n g c o s l e t t u c e an d l e a f l e tt u ce ) Asparagus Celery Mitsuba To ma t o P i mi e n t o ( s w e e t p e p p er ) N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed 0.02 ppm 0.02 ppm 0.02 ppm 0.02 ppm 0.02 ppm N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed 0.02 ppm N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed 0.02 ppm 0.02 ppm 0.02 ppm
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Egg plant C u c u mb e r ( i n c lu d in g gherkin) Wa t e r me l o n Spinach P e a s , i mma t u r e ( w i t h p o d s ) K i d n e y b e an s , i m ma t u r e (with pods) Unshu orange, pulp C i t r u s n at su d a id ai , p u l p C i t r u s n at su d a id ai , p ee l s Apple Japanese pear Pear L o q u at Peach Cherry St r a w b e r r y Grape J a p a n e s e p e r s i m mo n Te a ( l i mi t e d t o u n f e r me n t ed tea)
0.02 ppm N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed N o t d e t ec t ed
T h e f o ll o w in g r ev i s i o n s s h a l l a l so b e ma d e to t h e t ab l e in I t e m 6 ( 1 ) , S e c t i o n A G e n e r a l C o m p o s i t io n a l Sta n d a r d s f o r F o o d , P a r t I F o o d: Under the heading of isofenphos, B r u s s e l s s p r o u t s : 0 . 10 p p m s h a l l b e c h an g e d t o B r u s s e l s s p r o u t s : 0 . 1 0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .1 0 pp m. U n d e r t h e h e a di n g o f i p r o d io n e, K y o n a : 5 .0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 5 .0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 5 .0 ppm, G a r l i c : 0 . 1 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 0 . 1 p p m N i r a : 5 . 0 p p m a n d S p i n a c h : 5 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to
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S p i n a c h : 5. 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 2 0 pp m. U n d e r t h e h e a di n g o f e t h io f e n c a rb , B r u s s e l s s p r o u t s : 2 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d t o B r u s s e l s s p r o u t s : 2 . 0 p p m Q i n g - g e n g - c a i : 2 .0 p p m a n d S p i n a c h : 0. 5 0 pp m s h a l l b e ch an g e d t o S p i n a c h : 0. 5 0 pp m B a mb o o s h o o t s: 7 .0 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f e t r i mf o s , K y o n a : 0 .2 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 0 .2 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .0 1 pp m, G a r l i c : 0 . 2 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 0 . 2 p p m N i r a : 0 . 2 p p m a n d S p i n a c h : 0 . 2 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 0. 2 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .2 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f c a p t a f ol , K y o n a : N o t d e te c t ed s h a l l b e c h a n g ed t o K y o n a : N o t d e te c t ed Q i n g - g e n g - c a i : N o t d e t e c t ed , G a r l i c : N o t d e te c t ed s h a l l b e c h a n g ed t o G a r l i c : N o t d e te c t ed N i r a : N o t d e t e ct e d , S p i n a c h : N o t d e t ec t ed s h a ll b e c h a n g e d t o S p i n a c h : N o t d e t ec t ed B a mb o o s h o o t s: N o t d e t e ct e d an d W h e a t f l o u r s h a l l b e c h an g ed to W h e a t f l o u r ( e x c e p t w h o l e g r a in ) U n d e r t h e h e a d i n g o f c a n th a x an th i n , C h i c k e n , e g g s ( li mi t e d t o y o l k ): 2 5 p p m s h a l l b e c h a n g ed t o C h i c k e n , eggs: 25 ppm (in yolk) U n d e r t h e h e a di n g o f c h i no me t h io n a t , O t h e r c u c u r b i t a ce o u s v e g et a b l e s: 0 . 5 p p m s h a l l b e c h a n g ed t o O t h e r c u c u r b i t a ce o u s v e g et a b l e s: 0 . 5 p p m
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B a mb o o s h o o t s: 0 .5 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f g l yp h o s at e , K y o n a : 0 .2 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 0 .2 p p m Q i n g - g e n g - c a i : 0 .2 p p m a n d S p i n a c h : 0 . 2 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 0. 2 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .2 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f g l u f o s in a t e, K a l e : 0 . 5 0 p p m s h a l l b e ch a n g ed t o K a l e : 0 . 5 0 p p m Q i n g - g e n g - c a i : 0 .5 p p m a n d G a r l i c : 0 . 5 0 pp m s h a l l be c h a n g e d to G a r l i c : 0 . 5 0 p p m N i r a : 0 . 5 0 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f c l o th i a ni d in , K y o n a : 5 p p m s h a l l b e c ha n g e d t o K y o n a : 5 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 5 p p m, G a r l i c : 0 . 0 2 pp m s h a l l be c h a n g e d to G a r l i c : 0 . 0 2 p p m Nira: 2 ppm, S p i n a c h : 0. 0 2 pp m s h a l l b e ch an g e d t o S p i n a c h : 0. 0 2 pp m B a mb o o s h o o t s: 2 p p m a n d S p e a r mi n t : 0 . 3 p p m P e p p e r mi n t : 0 .3 p p m s h a l l b e d el e t e d . A l s o u n d e r t h e h e a d i n g o f c l o th i an i d i n , O t h e r v e g e t a b le s ( e xc e p t s p e a rmi n t a n d p e p p e r mi n t ) s h a l l b e ch a n g e d to O t h e r v e g e t a b le s a n d H o p : 0 . 0 2 p p m s h a l l b e c h a n g e d t o H o p : 0 . 0 2 p p m S p e a r mi n t : 0 . 3 p p m P e p p e r mi n t : 0 .3 p p m. Under the heading of chlorpyrifos, K y o n a : 1 p p m s h a l l b e c ha n g e d t o K y o n a : 1 p p m
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Q i n g - g e n g- c a i : 1 p p m, G a r l i c : 0 . 0 1 pp m s h a l l be c h a n g e d to G a r l i c : 0 . 0 1 p p m N i r a : 0 . 01 p p m a n d S p i n a c h : 0. 0 1 pp m s h a l l b e ch an g e d t o S p i n a c h : 0. 0 1 pp m B a mb o o s h o o t s: 0 .5 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f c h l o r f l u az u r o n , K y o n a : 2 .0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 2 .0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 2 .0 ppm, G a r l i c : 2 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 2 . 0 p p m N i r a : 2 . 0 p p m a n d S p i n a c h : 2 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 2. 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 2 .0 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f c h l o r o t h a lo n i l , B r u s s e l s s p r o u t s : 5 pp m s h a l l b e c h an g ed to Brussels sprouts: 5 ppm Q i n g - g e n g- c a i : 2 p p m, G a r l i c : 1 0 p p m s h a l l b e ch a n g ed t o G a r l i c : 1 0 p p m N i r a : 2 ppm a n d O t h e r c u c u r b i t a ce o u s v e g et a b l e s: 5 p p m s h a l l b e c h a n g e d to O t h e r c u c u r b i t a ce o u s v e g et a b l e s: 5 p p m B a mb o o s h o o t s: 2 p p m. Under the heading of cyanazine, G a r l i c : 0 . 0 5 pp m s h a l l be c h a n g e d to G a r l i c : 0 . 0 5 p p m N i r a : 0 . 0 2 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f d i e th o f e n car b p a r t , K y o n a : 5 .0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 5 .0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 5 .0 ppm, G a r l i c : 5 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 5 . 0 p p m
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Provisional Translation from Japanese Original N i r a : 5 . 0 p p m a n d S p i n a c h : 5 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 5. 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 5 .0 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f c yc l o x yd i m, K y o n a : 2 p p m s h a l l b e c ha n g e d t o K y o n a : 2 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 2 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f d i c hl o f l u an i d e , S p i n a c h : 1 5 p p m s h a l l b e c h an g e d t o S p i n a c h : 1 5 p p m B a mb o o s h o o t s: 5 .0 p p m. Under the heading of dichlorvos, D i c h l o r v os s h a l l b e c h a ng e d t o D i c h l o r v os a n d na l ed ( a s t o t a l ) , K y o n a : 0 .1 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 0 .1 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .1 ppm, G a r l i c : 0 . 1 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 0 . 1 p p m N i r a : 0 . 1 p p m a n d S p i n a c h : 0 . 1 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 0. 1 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .1 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f c y h a l o th r i n, K y o n a : 0 .5 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 0 .5 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .5 ppm, G a r l i c : 0 . 5 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 0 . 5 p p m N i r a : 0 . 5 p p m a n d S p i n a c h : 0 . 5 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 0. 5 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .5 p p m. Under the heading of cyfluthrin, K y o n a : 2 .0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 2 .0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 2 .0 ppm,
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G a r l i c : 2 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 2 . 0 p p m N i r a : 2 . 0 p p m a n d O t h e r c u c u r b i t a ce o u s v e g et a b l e s: 2 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g ed t o O t h e r c u c u r b i t a ce o u s v e g et a b l e s: 2 . 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 2 .0 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f c y p r o c o n a zo l e , S u g a r b e e t: 0 . 1 p p m s h a l l b e c h a n g ed t o S u g a r b e e t: 0 . 1 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .0 2 pp m. U n d e r t h e h e a di n g o f c yh e x a t in , K y o n a : N o t d e te c t ed s h a l l b e c h a n g ed t o K y o n a : N o t d e te c t ed Q i n g - g e n g - c a i : N o t d e t e c t ed , G a r l i c : N o t d e te c t ed s h a l l b e c h a n g ed t o G a r l i c : N o t d e te c t ed N i r a : N o t d e t e ct e d , S p i n a c h : N o t d e t ec t ed s h a ll b e c h a n g e d t o S p i n a c h : N o t d e t ec t ed B a mb o o s h o o t s: N o t d e t e ct e d an d W h e a t f l o u r s h a l l b e c h an g ed to W h e a t f lo u r ( e x c ep t w h o l e g r ain ) U n d e r t h e h e a d i n g o f c y p e r me t h r i n , K o m a t s u n a : 5 .0 p p m s h a l l b e ch a n g e d to K o m a t s u n a : 5 .0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 5 .0 ppm, We l s h ( i n c l u d i n g l e ek ) : 5 . 0 p p m s h a l l b e ch a n ge d to We l s h ( i n c l u di n g l e ek ) : 5 . 0 p p m N i r a : 6 . 0 p p m a n d S p i n a c h : 2 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 2. 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 5 .0 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f s p i n o s ad , K y o n a : 5 p p m s h a l l b e c ha n g e d t o K y o n a : 5 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 2 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f s e t h o x y d i m, K y o n a : 1 0 p p m s h a l l b e ch a n g ed t o
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Provisional Translation from Japanese Original K y o n a : 1 0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 10 p pm, G a r l i c : 1 0 p p m s h a l l b e ch a n g ed t o G a r l i c : 1 0 p p m N i r a : 1 0 pp m a n d S p i n a c h : 1 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o S p i n a c h : 1 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 1 0 pp m. U n d e r t h e h e a d i n g o f d a mi n o z i d e, K y o n a : N o t d et e c te d s h a l l b e ch a n g e d to K y o n a N o t d e t e c t e d Q i n g - g e n g - c a i : N o t d e t e c t ed , G a r l i c : N o t d e te c t ed s h a l l b e c h a n g ed t o G a r l i c : N o t d e te c t ed N i r a : N o t d e t e ct e d , S p i n a c h : N o t d e t ec t ed s h a ll b e c h a n g e d t o S p i n a c h : N o t d e t ec t ed B a mb o o s h o o t s: N o t d e t e ct e d an d W h e a t f l o u r s h a l l b e c h an g ed to W h e a t f lo u r ( e x c ep t w h o l e g r ain ) Under the heading of thiobencarb, K y o n a : 0 .2 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 0 .2 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .2 ppm, G a r l i c : 0 . 2 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 0 . 2 p p m N i r a : 0 . 2 p p m a n d S p i n a c h : 0 . 2 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 0. 2 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .2 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f t h i o me t o n , K y o n a : 0 .1 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to K y o n a : 0 .1 0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .1 0 pp m, G a r l i c : 0 . 1 0 pp m s h a l l be c h a n g e d to G a r l i c : 0 . 1 0 p p m N i r a : 0 . 10 p p m a n d S p i n a c h : 0. 1 0 pp m s h a l l b e ch an g e d t o
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S p i n a c h : 0. 1 0 pp m B a mb o o s h o o t s: 0 .1 0 p p m. T h e h ea d in g o f d ie l d r in ( i n c lu d ing a l d r in ) s ha l l be d el e te d . U n d e r t h e h e a di n g o f t e f l u b en z u ro n , B r u s s e l s s p r o u t s : 0 . 5 p p m s h a l l b e c h a n g e d t o B r u s s e l s s p r o u t s : 0 . 5 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 1 p p m. T h e f o l lo w in g t ab l e sha l l be a dd ed a f t e r t h e s e c t i o n o f te f l u b en z u ro n : D E LTA M E T H R I N a n d TRALOMETHRIN (as total) R i c e ( b r o wn r i c e ) Wheat Barley Ry e C o r n ( ma i z e ) B u c k w h ea t O t h e r c e r e al g r a i n s Soybeans, dry B e a n s , d r y* Peas Broad beans Peanuts, dry O t h e r l e g u me s / p u l s e s Potato Ta r o S w e e t p o t ato Ya m Konjac O t h e r p o t ato s Sugar beet J a p a n e s e r ad i s h , r o o t s (including radish) J a p a n e s e r ad i s h , le a v es (including radish) Tu r n i p , r o o t s Tu r n i p , l e av e s 1.0 ppm 1.0 ppm 1.0 ppm 1.0 ppm 1.0 ppm 1.0 ppm 1.0 ppm 0.1 ppm 0.1 ppm 0.1 ppm 0.1 ppm 0.1 ppm 0.1 ppm 0.05 ppm 0.05 ppm 0.05 ppm 0.05 ppm 0.05 ppm 0.05 ppm 0.1 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm
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Horseradish Wa t e r c r e s s C h i n e s e c ab b a g e C a b b ag e Brussels sprouts Kale Komatsuna (Japanese mu s t a r d s p i n a c h ) Kyona Qing-geng-cai C a u l i f lo w e r B r o c c o li O t h e r c r u c if e r o u s v e g et a b le s B u r d o ck Salsify Artichoke Chicory Endive S h un g i ku L e t t u ce ( i n c l u d i n g c o s l e t t u c e an d l e a f l e tt u ce ) O t h e r c o mp o s i t e v e g eta b l e s Onion We l s h ( i n c lu d i n g le e k ) Garlic Nira Asparagus M u l ti p l y i n g o n i o n O t h e r l i l ia ce o u s v e g e tab l e s Carrot Parsnip Parsley Celery Mitsuba
0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm
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O t h e r u n b el l i f e r o u s v e g et a b le s To ma t o P i mi e n t ( s w e e t p e p p er ) Egg plants Other solanceous v e g et a b le s C u c u mb e r ( i n c lu d in g gherkin) P u mp k i n ( i n c l ud i ng squash) O r i e n t a l p ic k l in g me l o n ( v e g e t ab l e ) Wa t e r me l o n Melons M a k u wa u r i me l o n O t h e r c u c u r b i t a c eo u s v e g et a b le s Spinach B a mb o o s h o o t s Okra Ginger P e a s , i mma t u r e ( w i t h p o d s ) K i d n e y b e an s , i m ma t u r e (with pods) Green soybeans B u t to n mu s h r o o m S h i it a k e mu s h r o o m O t h e r mu s h r o o ms O t h e r v e g eta b l e s Unshu orange, pulp C i t r u s n at su d a id ai ( w h o l e ) L e mo n O r a n g e ( i nc l u di n g n ave l orange) Grapefruit L i me
0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 1.0 ppm 1.0 ppm 1.0 ppm 1.0 ppm 1.0 ppm
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Other citrus fruits Apple Japanese pear Pear Quince L o q u at Peach Nectarine Apricot J a p a n e s e p lu m ( i n c l u d in g prune) M u me p l u m Cherry St r a w b e r r y Raspberry Blackberry Blueberry Cranberry Huckleberry Other berries Grape J a p a n e s e p e r s i m mo n Banana Kiwifruit Papaya Av o c a d o Pineapple Guava Mango Passion fruit Date Other fruits Sunflower seeds S e s a me s e e d s S a ff l o w e r s e e d s
1.0 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm
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Cotton seeds Rapeseeds O t h e r o i l se e d s G i n k g o n u ts Chestnuts Pecan A l mo n d Wa l n u t Other nuts Te a C o ff e e b e an s C a c a o b e an s Hop
0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 0.5 ppm 10 ppm 2.0 ppm 0.05 ppm 5.0 ppm
T h e f o ll o w in g r ev i s i o n s s h a l l a l so b e ma d e to t h e t ab l e in I t e m 6 ( 1 ) , S e c t i o n A G e n e r a l C o m p o s i t io n a l Sta n d a r d s f o r F o o d , P a r t I F o o d: T h e h ea d ing s o f d e lt ame t h r i n a nd t r a l o me t h r i n s h a l l b e d e l et e d . U n d e r t h e h e a d i n g o f t r i c h l a mi d e , K y o n a : 0 .2 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 0 .2 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .2 ppm, G a r l i c : 0 . 2 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 0 . 2 p p m N i r a : 0 . 2 p p m a n d S p i n a c h : 0 . 2 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 0. 2 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .2 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f t r i c h l o r p h on , K y o n a : 0 .5 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to K y o n a : 0 .5 0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .1 0 pp m, G a r l i c : 0 . 5 0 pp m s h a l l be c h a n g e d to G a r l i c : 0 . 5 0 p p m N i r a : 0 . 50 p p m a n d S p i n a c h : 0. 5 0 pp m s h a l l b e ch an g e d t o S p i n a c h : 0. 5 0 pp m
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B a mb o o s h o o t s: 0 .5 0 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f t r i f l u mi z o l e , K y o n a : 1 .0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 1 .0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 1 .0 ppm, G a r l i c : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 1 . 0 p p m N i r a : 5 . 0 p p m a n d S p i n a c h : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 1. 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 1 .0 p p m. Under the heading of trifluralin, K y o n a : 0 .0 5 p p m s h a l l b e c h a n g e d to K y o n a : 0 .0 5 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .0 5 pp m, G a r l i c : 0 . 0 5 pp m s h a l l be c h a n g e d to G a r l i c : 0 . 0 5 p p m N i r a : 0 . 05 p p m a n d S p i n a c h : 0. 0 5 pp m s h a l l b e ch an g e d t o S p i n a c h : 0. 0 5 pp m B a mb o o s h o o t s: 2 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f t o l c lo p h o s - me t h y l , K y o n a : 2 .0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 2 .0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 2 .0 ppm, G a r l i c : 2 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 2 . 0 p p m N i r a : 2 . 0 p p m a n d S p i n a c h : 2 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 2. 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 2 .0 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f p a r a t h io n -me t h y l , K y o n a : 1 .0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 1 .0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .2 ppm, G a r l i c : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 1 . 0 p p m
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Provisional Translation from Japanese Original N i r a : 1 . 0 p p m a n d S p i n a c h : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 1. 0 p p m B a mb o o s h o o t s : 1 .0 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f b i o r e s me t h r i n , K y o n a : 0 .1 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 0 .1 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .1 ppm, G a r l i c : 0 . 1 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 0 . 1 p p m N i r a : 0 . 1 p p m a n d S p i n a c h : 0 . 1 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 0. 1 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .1 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f b i f e n th r i n , M e l o n s : 0. 2 p p m s h a l l be c h a n g e d to M e l o n s : 0 . 2 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .1 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f p y me t r o z i n e , B r u s s e l s s p r o u t s : 0 . 02 p p m s h a l l b e c h an g e d t o B r u s s e l s s p r o u t s : 0 . 0 2 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .0 2 pp m. U n d e r t h e h e a di n g o f p yr a c l o f o s , B r u s s e l s s p r o u t s : 0 . 1 p p m s h a l l b e c h a n g e d t o B r u s s e l s s p r o u t s : 0 . 1 p p m N i r a : 0 . 5 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f p yr i d a b e n , G a r l i c : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 1 . 0 p p m N i r a : 2 . 0 p p m a n d O t h e r c u c u r b i t a ce o u s v e g et a b l e s: 2 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g ed t o O t h e r c u c u r b i t a ce o u s v e g et a b l e s: 2 . 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 3 .0 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f p i r i mi c a r b , B r u s s e l s s p r o u t s : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d t o B r u s s e l s s p r o u t s : 1 . 0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .5 0 pp m.
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U n d e r t h e h e a di n g o f p i r i mi f o s - me t h y l , K y o n a : 1 .0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 1 .0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 1 .0 ppm, G a r l i c : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 1 . 0 p p m N i r a : 1 . 0 p p m a n d S p i n a c h : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 1. 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 1 .0 p p m. Under the heading of pyrethrin, K y o n a : 1 .0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 1 .0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 1 .0 ppm, G a r l i c : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 1 . 0 p p m N i r a : 1 . 0 p p m a n d S p i n a c h : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 1. 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 1 .0 p p m. Under the heading of fipronil, C a b b a g e: 0 . 0 5 p p m s h a l l b e c h a n g ed t o C a b b a g e: 0 . 0 5 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .0 5 pp m. U n d e r t h e h e a d i n g o f f e n a r i mo l , K y o n a : 0 .5 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 0 .5 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .5 ppm, G a r l i c : 0 . 5 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 0 . 5 p p m N i r a : 0 . 5 p p m a n d S p i n a c h : 0 . 5 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 0. 5 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .5 p p m. Under the heading of fenitrothion, We l s h ( i n c l u d i n g l e ek ) : 0 . 2 p p m s h a l l b e ch a n ge d to We l s h ( i n c l u di n g l e ek ) : 0 . 2 p p m
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Provisional Translation from Japanese Original N i r a : 0 . 2 p p m, S p i n a c h : 0 . 2 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 0. 2 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .2 p p m a n d W h e a t f l o u r s h a l l b e c h an g ed to W h e a t f l o u r ( e x c e p t w h o l e g r a in ) . Under the heading of fenobucarb, K y o n a : 0 .3 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 0 .3 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .3 ppm, G a r l i c : 0 . 3 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 0 . 3 p p m N i r a : 0 . 3 p p m a n d S p i n a c h : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 1. 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .3 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f f e n a mi d o n e, G a r l i c : 0 . 2 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 0 . 2 p p m N i r a : 1 . 5 p p m a n d O t h e r c u c u r b i t a ce o u s v e g et a b l e s: 0 . 1 5 p p m s h a l l b e ch a n g e d to O t h e r c u c u r b i t a ce o u s v e g et a b l e s: 0 . 1 5 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .0 2 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f f e n v a l e r a te, K y o n a : 0 .5 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to K y o n a : 0 .5 0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 1 .0 ppm, G a r l i c : 0 . 5 0 pp m s h a l l be c h a n g e d to G a r l i c : 0 . 5 0 p p m N i r a : 0 . 50 p p m a n d S p i n a c h : 0. 5 0 pp m s h a l l b e ch an g e d t o S p i n a c h : 0. 5 0 pp m B a mb o o s h o o t s: 0 .5 0 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f f e n p y r o x i ma t e , S p i n a c h : 0 . 5 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 0. 5 p p m B a mb o o s h o o t s: 5 p p m.
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U n d e r t h e h e a d i n g o f f l u a z i n u m, B r u s s e l s s p r o u t s : 0 . 1 p p m s h a l l b e c h a n g e d t o B r u s s e l s s p r o u t s : 0 . 1 p p m Q i n g - g e n g - c a i : 0 .1 p p m a n d We l s h ( i n c l u d i n g l e ek ) : 0 . 1 p p m s h a l l b e ch a n ge d to We l s h ( i n c l u di n g l e ek ) : 0 . 1 p p m N i r a : 0 . 1 p p m. Under the heading of fluazifop, K y o n a : 0 .1 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 0 .1 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 1 p p m, G a r l i c : 0 . 5 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 0 . 5 p p m N i r a : 0 . 1 p p m a n d O t h e r c u c u r b i t a ce o u s v e g et a b l e s: 0 . 1 p p m s h a l l b e c h a n g ed t o O t h e r c u c u r b i t a ce o u s v e g et a b l e s: 0 . 1 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .5 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f f l u c y t h r i n at e , K a l e : 0 . 5 0 p p m s h a l l b e ch a n g ed t o K a l e : 0 . 5 0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .5 ppm, O n i o n : 0 .1 p p m s h a l l b e c h an g e d t o O n i o n : 0 .1 p p m N i r a : 0 . 5 p p m a n d S p i n a c h : 0. 5 0 pp m s h a l l b e ch an g e d t o S p i n a c h : 0. 5 0 pp m B a mb o o s h o o t s: 0 .5 0 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f f l u s u l f a mi d e , B r u s s e l s s p r o u t s : 0 . 1 p p m s h a l l b e c h a n g e d t o B r u s s e l s s p r o u t s : 0 . 1 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .1 ppm. U n d e r t h e h e a d i n g o f p r o t h io f o s , B r u s s e l s s p r o u t s : 0 . 2 p p m s h a l l b e c h a n g e d t o B r u s s e l s s p r o u t s : 0 . 2 p p m Q i n g - g e n g - c a i : 0 .2 p p m a n d G a r l i c : 0 . 1 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 0 . 1 p p m
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Provisional Translation from Japanese Original N i r a : 0 . 1 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f p r o p a mo c a r b , B r u s s e l s s p r o u t s : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d t o B r u s s e l s s p r o u t s : 1 . 0 p p m Q i n g - g e n g - c a i : 0 .5 p p m a n d S p i n a c h : 1 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o S p i n a c h : 1 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .2 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f p r o p i co n azo l e , K a l e : 0 . 0 5 p p m s h a l l b e ch a n g ed t o K a l e : 0 . 0 5 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .0 5 pp m. U n d e r t h e h e a di n g o f h e x at h i az ox , M e l o n s : 0. 5 p p m s h a l l be c h a n g e d to M e l o n s : 0 . 5 p p m B a mb o o s h o o t s: 2 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f p e r me t h r i n , K y o n a : 3 .0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 3 .0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 3 .0 ppm, G a r l i c : 3 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 3 . 0 p p m N i r a : 3 . 0 p p m a n d S p i n a c h : 2 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 2. 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 3 .0 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f b e n ta z on e , K y o n a : 0 .0 5 p p m s h a l l b e c h a n g e d to K y o n a : 0 .0 5 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .0 5 pp m, G a r l i c : 0 . 0 5 pp m s h a l l be c h a n g e d to G a r l i c : 0 . 0 5 p p m N i r a : 2 ppm a n d S p i n a c h : 0. 0 5 pp m s h a l l b e ch an g e d t o S p i n a c h : 0. 0 5 pp m B a mb o o s h o o t s: 0 .1 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f p e n d i me t h al i n ,
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Provisional Translation from Japanese Original K y o n a : 0 .0 5 p p m s h a l l b e c h a n g e d to K y o n a : 0 .0 5 p p m Q i n g - g e n g - c a i : 0 .0 5 p p m a n d G a r l i c : 0 . 2 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 0 . 2 p p m N i r a : 0 . 0 5 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f b o s c a li d , K y o n a : 1 8 p p m s h a l l b e ch a n g ed t o K y o n a : 1 8 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 18 p pm, G a r l i c : 3 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 3 . 0 p p m N i r a : 3 . 0 p p m, O t h e r c u c u r b i t a ce o u s v e g et a b l e s: 1 . 6 p p m s h a l l b e c h a n g ed t o O t h e r c u c u r b i t a ce o u s v e g et a b l e s: 1 . 6 p p m B a mb o o s h o o t s: 1 .6 p p m a n d S p e a r mi n t : 3 0 p p m P e p p e r mi n t : 3 0 p p m s h a l l b e d ele t e d . A l s o i n th e h e a di n g o f b o s c a li d , O t h e r v e g e t a b le s ( e xc e p t s p e a rmi n t a n d p e p p e r mi n t ) s h a l l b e ch a n g e d to O t h e r v e g e t a b le s a n d H o p : 3 5 p p m s h a l l b e c h an g ed to H o p : 3 5 pp m S p e a r mi n t : 3 0 p p m P e p p e r mi n t : 3 0 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f f o s e t yl , K a l e : 6 0 pp m s h a l l be c h an g ed to K a l e : 6 0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 10 0 pp m, G a r l i c : 5 0 p p m s h a l l b e ch a n g ed t o G a r l i c : 5 0 p p m N i r a : 1 0 0 p p m a n d S p i n a c h : 1 0 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 10 0 pp m B a mb o o s h o o t s: 1 0 0 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f ma l a t h i o n , K y o n a : 2 .0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o
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Provisional Translation from Japanese Original K y o n a : 2 .0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 2 .0 ppm, G a r l i c : 8 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 8 . 0 p p m N i r a : 2 . 0 p p m, S p i n a c h : 2 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 2. 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 2 .0 p p m a n d W h e a t f l o u r s h a l l b e c h an g ed to W h e a t f l o u r ( e x c e p t w h o l e g r a in ) U n d e r t h e h e a di n g o f ma l e i c h yd r a z i d e , K y o n a : 0 .2 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 0 .2 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .2 ppm, G a r l i c : 5 0 p p m s h a l l b e ch a n g ed t o G a r l i c : 5 0 p p m N i r a : 1 0 pp m a n d S p i n a c h : 2 5 p p m s h a l l b e c h an g e d t o S p i n a c h : 2 5 p p m B a mb o o s h o o t s: 3 0 pp m. U n d e r t h e h e a di n g o f my c l o b u t an i l , C h i n e s e ca b b ag e : 1 . 0 p p m s h a l l b e ch a n g ed t o C h i n e s e ca b b ag e : 1 . 0 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 1 .0 ppm, G a r l i c : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 1 . 0 p p m N i r a : 1 . 0 p p m a n d S p i n a c h : 1 . 0 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 1. 0 p p m B a mb o o s h o o t s: 1 .0 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f me t h i o c a r b, K y o n a : 0 .0 5 p p m s h a l l b e c h a n g e d to K y o n a : 0 .0 5 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .0 5 pp m, G a r l i c : 0 . 0 5 pp m s h a l l be c h a n g e d to G a r l i c : 0 . 0 5 p p m N i r a : 0 . 05 p p m a n d
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S p i n a c h : 0. 0 5 pp m s h a l l b e ch an g e d t o S p i n a c h : 0. 0 5 pp m B a mb o o s h o o t s: 0 .0 5 p p m. U n d e r t h e h e a di n g o f me t o l a c h l o r, K a l e : 0 . 0 2 p p m s h a l l b e ch a n g ed t o K a l e : 0 . 0 2 p p m Q i n g - g e n g - c a i : 0 .1 p p m a n d S p i n a c h : 0 . 3 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 0. 3 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .0 5 p p m. U n d e r t h e h e a d i n g o f l e n a ci l , K y o n a : 0 .3 p p m s h a l l b e c h an g e d t o K y o n a : 0 .3 p p m Q i n g - g e n g- c a i : 0 .3 ppm, G a r l i c : 0 . 3 p p m s h a l l b e c h an g e d t o G a r l i c : 0 . 3 p p m N i r a : 0 . 3 p p m a n d S p i n a c h : 0 . 3 p p m s h a l l b e c h a n g e d to S p i n a c h : 0. 3 p p m B a mb o o s h o o t s: 0 .3 p p m. I n R e ma r k 1 in t he ta b l e , , w h e a t f l o u r s h a l l b e d e le t e d . I n R e ma r k 2 in th e ta b l e , a n d p e a n u t s s h a l l b e c h a n g e d to , p e a n u t s a n d spices. I n R e ma r k 4 i n t h e ta b l e , , q i ng - g e n g - c ai s h a ll be ad d e d un d e r k y o n a a n d a n d b r o c co l i sh a l l be c h an g ed to , b r o c c o l i a n d h e r b s . I n R e ma r k 5 in th e t a b l e , a n d l et t u c e s h a l l b e c h a n g ed to , l e tt u c e a n d herbs. I n R e ma r k 6 i n t h e t a b l e , , n i r a s h a ll b e a d d e d u n d e r g a r l ic a n d a n d mu l t i p l y i n g o n io n sh al l b e c h an g e d t o , mu l t i p l y in g o n i o n a n d h er b s . I n R e ma r k 7 i n t h e t a b l e , an d m i t s u b a s h a l l b e c h a n g e d to , m i t s u b a , spices and herbs. I n R e ma r k 11 in t h e t a b l e, , b a mb o o s h o o ts s h a l l b e a d d ed u n d er s p i n a c h a n d a n d mu s h r o o ms s h a l l b e c ha n g ed t o , mu s h r o o ms , s p i c e s and h e r b s . I n R e ma r k 1 2 i n th e t ab l e , a n d li me s h a l l be ch a n ge d to , l i me a n d spices. I n R e ma r k 1 4 i n th e t a b l e, a n d d a t e s h a l l b e c h an g ed t o , d a t e an d s p i c e s . I n R e ma r k 1 5 in t h e t a b l e, a n d r a p e s e e d s s h a l l be ch a n ge d to , r a p e s e e d s
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a n d s p i c e s . R e ma r k 1 8 i n t h e t ab l e s h al l b e c h a n g e d t o R e ma r k s 2 0 an d 1 7 t o 1 9 . T h e f o l lo w in g t w o i t ems s h a l l b e a d d ed a f t er R e ma r k 1 6 : 1 7 . O t h e r s p i c e s r ef e r t o al l o t h e r sp i c es , e x c ep t h o r s e r a d i s h , w a s a b i ( J a p a n e s e h o r s e r a d i s h ) r h i z o me s , g a r l i c, p ep p e r s ch i l i , p a p r ik a , g i n g e r, l e mo n p e e ls , o r a n g e p e e l s ( i n c l udi n g n av e l or a n g e ) , y u zu ( C h i n e s e c i t r o n ) p e e l s a n d se s a me s e e d s . 1 8 . O t h e r h e r b s r e f e r t o a l l o t h e r h e r b s , e x c e p t w a t e rc r e s s , n i r a , p a r s l e y s t e ms a n d l e a v e s , ce l er y s t e ms a n d l e av e s . T h e f o ll o wi n g r e v i s ion s s h a ll b e ma d e t o th e ta b le in I t e m 6 ( 2 ) , S e c t io n A G e n e r a l C o m p o s i t io n a l Sta n d a r d s f o r F o o d , P a r t I F o o d: I n t h e O t h e r c r u c i f e r o u s v e g e tab l e s , O t h e r c r u c i f e r o u s v e g e tab l e s s h a l l b e c h a ng e d t o Q i n g - g e n g- c a i a nd o th e r c r u c i f er o u s v e g e t ab l e s . I n t h e O t h e r l i li a c eo u s v e g et ab l e s , O t h e r l i l ia c e o u s v eg e t ab l e s s h al l b e c h a n g e d t o N i r a a n d o t h e r li l i ace o u s v e g e tab l e s . I n t h e O t h e r v eg e tab l e s , O t h e r v e g e t ab le s s h al l b e c h a n g e d t o B a mb o o s h o o t s an d o t h e r v e g eta b l e s . T h e f o l lo w in g s h al l b e a d d ed a f t e r t h e p a r t o f h o p: O t h e r s p i c es a n d o t h e r h e r b s E d i b le p o r t i o n s
I t e m 6 ( 3 ) i n S e c t i o n A G e n e r a l C o mp o s i ti o n a l Sta n d a r d s f o r F o o d, P a r t I F o o d s h a l l b e c h a n g e d a s f o l l o w s: ( 3 ) 2 , 4 , 5 - T a n a l yt i ca l me t h o d S h o u l d b e p e r f o r me d a c c o r d in g to 5 ( 3 ) . I t e m 6 ( 4 ) i n S e c t i o n A G e n e r a l C o mp o s i ti o n a l Sta n d a r d s f o r F o o d, P a r t I F o o d s h a l l b e c h a n g e d a s f o l l o w s: ( 4 ) A mi t r o l a n a l yt i ca l me t h o d S h o u l d b e p e r f o r me d a c c o r d in g to 5 ( 5 ) . I t e m 6 ( 5 ) i n S e c t i o n A G e n e r a l C o mp o s i ti o n a l Sta n d a r d s f o r F o o d, P a r t I F o o d s h a l l b e c h a n g e d a s f o l l o w s: ( 5 ) A n a l yt i c a l me t h o d f o r a l d r i n , e n d r i n a n d d i e ld r i n 1 . E q u i p me n t A g a s c h r oma t o g r a p h w i t h an e lec t r o n c a p tu r e d e t ec t o r ( G C - E C D ) a n d a g a s ch r o ma t o g r a p h - ma s s s p e c t r o me t e r a r e u s e d . 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e
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used. R e a g en t s d e s i g n at e d as s p e c i a l g r a d e i n th i s s e ct i o n mu s t me e t t h e r e q u i r e me n t s f o r s p e c i a l g r a d e s p e ci f i e d i n t h e J ap a n I n d u s tr i a l St a n d a r d s fo r t h e r e a g e n t s . A c e t o n it r i le : T h r e e h u n d r e d ml o f a c e t o n i t r il e i s c o n c en t r a t e d u s in g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. A f t e r r e mo v i n g t h e a c e to n i t r il e , th e r e s i d u e i s d i s s o l v e d in 5 ml o f n - h e x a n e. Th e n , 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d u e i s in j e c te d in to t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , w h e n t h e h ei g h t s o f p e a k s f o r co mp o u n d s o t h e r th a n n - h e x an e o n t h e g a s ch r o ma t o g r a m s h o u ld b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n th e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 10 - 1 1 g . A c e t o n e: T h r e e h u n d re d ml o f a c e t o n e i s co n c en t r a t ed u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. A f t e r r e m o v i n g t h e a c e t o n e , t h e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Th e n , 5 l of t h e d i s s o lv e d r e s i du e i s i n j e ct e d i n to t h e G C - E C D f o r a n al y si s , w h e n t h e h ei g h ts o f p e ak s fo r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x a n e o n th e g a s c h r o ma t o g r a m s h o u l d b e t h e s a me a s o r l o w e r th a n th e p e ak f o r g a mm a - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . E t h e r : T h r ee h u n d r e d ml o f d i e t h y l e t h e r i s c o n c en t r a t ed u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. A f t e r r e mo v i n g t he d i eth yl e t h e r, th e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Th e n , 5 l of t h e d i s s o lv e d r e s i du e i s i n j e ct e d i n to t h e G C - E C D f o r a n al y si s , w h e n t h e h ei g h ts o f p e ak s fo r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x a n e o n th e g a s c h r o ma t o g r a m s h o u l d b e t h e s a me a s o r l o w e r th a n th e p e ak f o r g a mm a - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . S o d i u m c h l o r i d e : S o d iu m c h l o r i d e ( s p e c ia l g r a d e ) . I n c a s e s w h e re a s u b s t a n ce w h i c h in t er f e r e s w i t h a n a l y s i s o f a n in g re d i en t o f th e a g r i c u lt u r al c h e mi c a l p r o d uc t co n c e r n ed is c o n ta i n ed , i t s h ou ld be r i n s e d o u t w i t h a s o lve n t s u ch a s n - h e x an e . S y n t h e t i c ma g n e s i u m s i l i c a t e (F l o r i s i l ) f o r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y : Florisil (p a r t i c le si z e : 150-250 m) p r o d u c ed for c o lu mn
c h r o ma t o g r a p h y i s h ea t e d at 1 3 0 C f o r mo r e t h an 1 2 h o u r s b ef o r e b e i n g a ll o we d t o c o o l in a d e s i c c at o r. D i a t o ma c e o u s e a r th : D i a t o ma c e o u s e a r th fo r c h e mi c a l a n a l y s i s i s u s e d . n - H e x a n e : T h r e e h u n d r e d ml o f n - h e x a n e i s c o n c en t r a t ed t o 5 ml u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. Th en , 5 l o f t h e d i s s o l v e d r e s i d u e i s i n j e ct e d i n to t h e G C - E C D f o r a n al y si s , w h e n t h e h ei g h ts o f p e ak s fo r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x a n e o n th e g a s c h r o ma t o g r a m s h o u l d b e t h e s a me a s o r l o w e r th a n th e p e ak f o r g a mm a - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g .
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Wa t e r : D i s t i l l ed w a t er i s u s e d . I n c a s e s w h e r e a su b s t a n c e wh i ch i n t e r f e r e s w i t h a n al y s i s o f a n i n g r e d i e n t o f th e a g r i cu l tu r a l c h e mi c a l p r o d u ct con c e r n e d i s c o n ta i n ed , i t s h o u ld b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t s u c h a s n - h e x a n e. Sodium sulfate (anhydrous): Sodium sulfate (anhydrous) (special g r a d e ) . I n c a s e s w h e r e a s u b s t an c e w h i c h in t e r f e r e s w i t h an a l y s i s o f a n i n g r e d ie n t o f th e a g r i c u lt u ra l c h e mi c a l p r o d u c t c o n c e r n e d i s c o n ta i n ed , i t s h o u l d b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t su c h as n - h e x an e . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l A l d r i n : T h is p r o d u ct sh o u ld co n s is t o f 9 7 % or mo r e a l d r i n . M e l t in g p o in t : 1 0 2 - 1 0 4 C E n d r i n : T h is p r o d u ct sh o u ld co n s is t o f 9 8 % or mo r e e n d r i n . D e c o mp o s i t i o n p o i n t: 2 0 0 C D i e l d r i n : Th i s p r o du c t s h o u ld co n si s t o f 9 8 % o r mo r e d i e l d r i n . M e l t in g p o in t : 1 7 7 - 1 7 9 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s i . C e r e a l g r a i n s , l eg u me s / p u l s e s an d s e ed s C e r e a l g r a in s , l e g u me s / p u l s e s a n d s e e d s a r e c r u s h e d so a s t o p a ss t h r o u gh a s t a n d a r d me s h s i e v e (4 2 0 m) b e f o r e b e in g w e i g h ed to p r e p a r e a 1 0 . 0 - g r a m s a mp l e . Tw e n t y ml o f w a t e r i s a d d e d a n d l e f t to s t a n d f o r tw o h o u r s . A c e t o n e ( 1 0 0 ml ) i s a d d e d an d f in e l y c r u s h ed f o r t h r e e mi n u te s . T h e c r u s h e d mi x t u r e i s f i lt e r e d b y s u c t i o n in t o a rotary v a cu u m evaporator u s in g f i lt e r paper covered with a
o n e - c e n t i me t e r- t h i c k la y e r o f d i at o ma c e o u s e a r t h . Th e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l te r p a p e r i s c o l l ec t e d a n d a ce t o n e ( 5 0 ml ) i s a d d ed b e f or e h o mo g e n i z i n g f o r t h r e e mi n u t e s. T h e ab o v e p r o ce d u re i s r e p e a te d a n d t h e f i l tr a t e i s ad d ed t o th e r o ta r y v a c u u m e v ap o r a to r a n d co n ce nt r a t e d to ap p r o x i ma t e l y 3 0 ml a t 4 0 C o r lo w e r. T h e c o nc en t r a t e d s olu t i o n i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml s e p a r a t in g f u n n e l a l r ea d y c o n t a i ni n g 1 00 ml o f 1 0 % s od i u m c h l o r i d e s o lu t io n. T h e e g g p l an t - s h a p ed fl a s k o f th e a b o v e r o t a ry v a c u u m e v a p o r at o r is w a s h e d w i th 1 0 0 ml o f n - h e x an e t o o b t ai n th e w a s h in g s , w h i c h a r e a d d ed t o th e s e p a r a ti n g f u n n e l a b o v e . Th e mi x t u r e i s s h a k en v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h ak e r b e f o r e b e in g l e f t to s t a n d , a n d th e n t h e n - h e x an e l a ye r i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i ca l f l a sk . F i f t y m l o f n - h e x a n e i s a d d e d t o t h e a q u e o u s l a y e r a n d , a f t er
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Provisional Translation from Japanese Original r e p e a t in g th e a b o v e p r o c e d u r e , th e n - h ex a n e l a y e r i s a d d ed t o th e c o n ic a l f la s k . A n a d eq u a t e a mo u n t o f s o d iu m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s a l s o a dd e d t o th e f l a sk , w h i c h i s l e f t t o st an d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h a k e n f r o m t i me t o ti me . T h e co n t en t o f th e f l a s k i s t h e n f i l t e r ed i n t o a r o ta r y v a c u u m e v a p o r at o r. T h e c o n i c al f l a s k i s t h e n w a s h e d w i t h 2 0 ml o f n - h e x a n e to o b ta i n th e w as h i n g s , w i th w h i c h t h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s w a s h e d t w i c e . T h e w a s h i n g s o b t a in e d f r o m t h e r e p e a t e d w a s h in g a r e th e n a d d ed t o th e r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r, a n d th e n - h ex a n e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. Tw e n t y ml o f n - h ex a n e i s a d d e d t o t h e r e s i d u e , w h i c h i s t r a n s f e r r e d t o a 1 00 - ml s e p a r a ti n g f u n n e l , w h e r e 4 0 ml o f n - h e x a n e - s a tu r a t ed a c e t o n i t r i le i s a d d e d . A f t e r s h a k i n g t h e mi x t u r e v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s hak e r, t h e fu n n el i s le f t t o s t an d a n d t h e a c e t o n i t r i le l a y e r i s tr a n s f e r r e d t o t h e r o t ar y v a c u u m e v ap o r a to r. A f t e r a d d i ng n - h e x an e -s a t u r a t e d ac e t o n i t r i l e ( 4 0 ml ) t o t h e n - h e x a n e l a y e r, t h e a b o v e p r o ce d u r e i s r e p e a t ed t w ic e a n d th e a c e to n it r i le l a y e r i s a l s o a d d ed t o t h e r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r a n d th e a c e t o n i t r i le i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v ed i n n - h e x an e to ma k e e x a ct l y 5 ml o f s o l u t io n . i i . F r u i t , v eg e t ab l e s , ma t c h a F r u i t a n d v e g e t ab l e s ar e w e i g h e d a c c u r a t el y t o p r e p a r e a s a mp l e o f a b o ut on e k i l og r a m. A n a p p r o p ri a t e a mo u n t o f me a s u r e d w a t e r i s a d d ed t o th e s a mp l e , i f r e q u i r e d . A f t e r h o mo g e n i z in g , a s a mp l e e q u iv a l en t t o 2 0 . 0 g i s me a s u r e d o u t . M a t c ha i s w e i g h e d t o p r e p a r e a 5 . 0 0 - g r a m s a mp l e , t o w h i c h 2 0 ml o f w a t e r i s a d d e d an d le f t t o s t a n d f o r t w o h o u r s . T h en , 1 0 0 ml o f a c e t o n e i s ad d e d a n d th e mi x t u r e is f i n e l y c r u s h e d f o r th r e e mi n u t e s . T h e c r u s h ed mi x t u r e i s f i l t e r e d b y s u c t i o n i n to a r o ta r y v a c u u m e v a p o r a t o r u s i n g f il t e r p a p e r c o v e r e d w i t h a o n e - ce n t ime t e r- t h i c k l a ye r o f d ia t o ma c e o u s e a r t h . T h e r e s i d u e r emo v e d f r o m t h e s u r f a c e o f t h e f i l t er p a p e r i s co l l e ct e d a n d 5 0 ml o f a c e t o n e i s a d d ed b e f o r e h o mo g e n i z in g f o r t h r ee mi n u t e s . T h e a bo v e p r o c e du r e is r e p e a t e d a n d th e f il t r a t e i s ad d e d t o t h e r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r an d c o n c en t r a t ed t o a p p r ox i ma t e l y 3 0 ml a t 4 0 C o r l o w e r. T h e c o nc en t r a t e d s olu t i o n i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml s e p a r a t in g f u n n e l a l r ea d y c o n t a i ni n g 1 00 ml o f 1 0 % s od i u m c h l o r i d e s o lu t io n.
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T h e e g g p l an t - s h a p ed fl a s k o f th e a b o v e r o t a ry v a c u u m e v a p o r at o r is w a s h e d w i th 1 0 0 ml o f n - h e x an e t o o b t ai n th e w a s h in g s , w h i c h a r e a d d ed t o th e s e p a r a ti n g f u n n e l a b o v e . Th e mi x t u r e i s s h a k en v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h ak e r b e f o r e b e in g l e f t to s t a n d , a n d th e n t h e n - h e x an e l a ye r i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i ca l f l a sk . F i f t y m l o f n - h e x a n e i s a d d e d t o t h e a q u e o u s l a y e r a n d , a f t er r e p e a t in g th e a b o v e p r o c e d u r e , th e n - h ex a n e l a y e r i s a d d ed t o th e c o n ic a l f la s k . A n a d eq u a t e a mo u n t o f s o d iu m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s a l s o a dd e d t o th e f l a sk , w h i c h i s l e f t t o st an d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h a k e n f r o m t i me t o ti me . T h e co n t en t o f th e f l a s k i s t h e n f i l t e r ed i n t o a r o ta r y v a c u u m e v a p o r at o r. T h e c o n i c al f l a s k i s t h e n w a s h e d w i t h 2 0 ml o f n - h e x a n e to o b ta i n th e w as h i n g s , w i th w h i c h t h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s w a s h e d t w i c e . T h e w a s h i n g s o b t a in e d f r o m t h e r e p e a t e d w a s h in g a r e th e n a d d ed t o th e r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r, a n d th e n - h ex a n e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v ed i n n - h e x an e to ma k e e x a c tl y 1 0 ml o f s o l u t io n . i i i . Te a s ( l imi t e d t o u n f e r me n t e d te a ) o t h e r t h a n ma t c h a A 9 . 0 0 - g r a m s a mp l e s o a k ed i n 5 4 0 ml o f w a t e r a t 1 0 0 C i s l e f t to s t a n d a t r o o m t e mp e r a t u r e f o r f i v e mi n u t es b e f o r e b e i n g f i l te r e d . F r o m t h e c o o l ed f i l t r at e , 3 6 0 ml i s t r a n s f e r r e d i n to a 5 0 0 - ml c o n i c al f l a s k , t o w h i c h 1 0 0 ml o f a ce t one a nd 2 ml o f s a t u r a t ed l e ad ac e ta t e s o l u t io n a r e a d de d . Th i s s o lu t io n i s l e f t t o s t a n d f o r o n e h o u r at r o o m t e mp e r a t u r e b e f o r e b e i n g f ilt e r e d b y s u c t i o n u s i n g f i l t e r p a p er c o v e r e d w it h a o n e - ce n t i me t e r- t h i c k la y e r o f d i a to ma c e o u s e a r th . T h e f i l t r a te i s t r a n s f e r r e d t o a 1 , 0 0 0 - ml s e p a r a t i n g f u n n e l . Th e c o n ic a l f l as k i s t h en w a s h e d w i th 5 0 ml o f a c et o n e t o o b t a in t h e w a s h i n g s , w i t h w h i c h t h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e fi l t e r p ap e r i s w a s h e d . T h e w a s h i n g s a r e a d d ed to t h e s e p a ra t i n g f u n n el a b o v e . T h i r t y g r ams o f s o d iu m c h l o r i d e a n d 1 0 0 ml o f n - h ex a n e a r e a ls o a d d ed t o t h e s e p a r a t i n g f u n n e l. Th e mi x t u r e i s s h a k e n v i g o r o u sl y f o r f i v e mi n u t es a n d l e f t to s t a n d . T h e n - h e x an e l a y e r i s t h en t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i c a l f la s k . O n e hu n d r e d ml o f n - h e x an e i s a d d ed t o t h e aq u eo u s l a y e r a n d , a f t e r r e p e a t in g th e a b o ve p r oc e d u r e , t h e n - h e x an e l aye r i s a d ded in th e c o n i c a l f l a s k . A n a d e q u at e a mo u n t o f a s o d i u m s u l f a t e ( a n h yd r o u s ) i s a ls o a d d e d to t h e f l a sk , w h i c h i s lef t t o s t a n d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h a k e n f r o m t i me t o t i me . T h e c o n te n t o f
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t h e f l a s k is t h e n f i lte r e d i n to a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. Th e c o n ic a l f l as k i s t h en w a s h e d w i th 2 0 ml o f n - h e x an e to o b t a i n t h e w a s h i n g s , w i t h w h i c h t h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e fi l t e r p ap e r i s w a s h e d t w ic e . T h e w a sh i n g s o b ta in e d f r o m t h e r e p e a t ed w a s h i n g a re t h e n ad d ed t o t h e r o ta r y v a c u u m e v a p o r a t o r, a n d t h e n - h e x a n e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l ow e r. T h e r e s i d u e i s d i ss o l v e d i n n - h e x a n e to ma k e e x a c tl y 5 ml o f s o l u ti o n. b . C l ea n - u p Te n g r a ms o f f l o r i s i l f o r c o l u mn c h r o ma t o g r ap h y s u s p e n d e d i n n - h e x an e i s a dd e d i nt o a c h r o ma t o g r a p h tu b e ( i n n e r d i ame t e r : 1 5 m m a n d l en g th : 3 0 0 m m) , o v e r w h i c h a p p r o x i ma t e l y 5 g o f s o d i u m s u l f a t e ( a n h y d r o u s) i s f u r t h e r a d d ed . T h e n - h e x an e i s t h e n s p il t o u t u n t il o n l y a s ma l l a mo u n t r e ma i n s o n th e p a c k in g o f th e co l u mn , i n t o w h i ch 2 ml o f t h e s o l ut i o n o b t ai ne d b y t h e me t h o d d e sc r i b e d in a . E x t r a c t io n me t h o d s is p ou r e d . Su b s e q u e n tly, 2 0 0 ml o f a mi x t u r e o f et h e r an d n - h e x an e ( 3 : 1 7 ) i s al s o p o u r ed i n t o th e c o l u mn . T h e e l u at e i s t r a n s f e r r e d t o a r o t a r y v a c uu m e v ap o r a t o r, an d t h e e t he r an d n - h e x an e a r e r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o lv e d in n - h e x an e t o ma k e e x a c tl y 2 ml o f s o l u ti o n, w hi c h i s u s e d a s t h e s a mp l e s o lu t i o n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed u n d er a n y o f t h e c o n d i t io n s mu s t b e t h e s a me a s t h e r e s u l t s o b t ai n e d i n t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l . Te s t i n g c o n d i t io n s 1 C o l u mn : A s i l i c a te g l as s c a p il l a r y c o lu mn ( i n n e r d i a me t e r : 0 . 2 5 m m and l e n g th : 10-30 m) coated with me t h y l silicone for g as
c h r o ma t o g r a p h y t o a th i c k n e s s o f 0 . 2 5 m i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : T h e c o lu mn t e mp e r a t u r e i s h e l d a t 5 0 C f o r o n e mi n u t e , f o ll o w e d b y an i n c r e a s e o f 2 5 C ev er y mi n u t e u n t i l r e ac h in g 1 7 5 C , a f t e r w h i c h th e t e mp e r a t u r e i s i n cr e a s e d b y 1 0 C e v e r y mi n u t e u nt il r e a c h in g 3 0 0 C , w h er e i t i s h e l d f o r f i v e mi n u t e s . I n l e t t e mp e r a t u r e : 2 3 0 C D e t e c t o r : Sh o u ld be op e r a t e d a t 3 0 0 C Gas flow rate: Helium is used as the carrier gas. The flow rate should b e a dj u s t ed s o t h at a ld r i n f l o w s o u t i n a p p r o x i ma t e l y 1 0 mi n u t e s . Te s t i n g c o n d i t io n s 2
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C o l u mn : A s i l i c a te g l as s c a p il l a r y c o lu mn ( i n n e r d i a me t e r : 0 . 2 5 m m a n d l e n g t h : 1 0 - 3 0 m) c o a t ed w i th 1 4 % c y an o p r o p y l p h e n y l - me t h y l s i l i c o n e f o r g a s c h r o ma t o g r ap h y to a th i c k n es s o f 0 . 2 5 m i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : T h e co l u mn t e mp e r a t u r e i s h e ld at 8 0 C f o r tw o mi n u t e s , f o l l o w e d by a n i n c r ea s e o f 3 0 C e v e r y mi n u t e u n ti l r e a c h i n g 1 9 0 C , a f te r w h i c h th e t e mp e r a t u r e i s i n c r eas e d b y 3 . 6 C e v e r y mi n u t e u n ti l re a c h in g 2 5 0 C , w h e re i t i s h el d f o r ei g h t mi n u t e s . I n l e t t e mp e r a t u r e : 2 3 0 C D e t e c t o r : Sh o u ld be op e r a t e d a t 3 0 0 C Gas flow rate: Helium is used as the carrier gas. The flow rate should b e a dj u s t ed s o t h at a ldr i n f l o w s o u t i n a p p r o x i ma t e l y 1 0 mi n u t e s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e c o n di t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l it a t i v e t e s t s, u s i n g ei th e r t h e p e ak h e i g h t o r p e a k a r e a me t h o d . c . C o n f i r ma t i o n t e s t s G a s c h r o ma t o g r ap h y /ma s s s p e c t r o me t r y i s p e r f o r me d u n d e r t h e c o n d i t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l i t a t i v e t e s t s. Te s t r e s u l t s o b t a in e d mu s t b e t h e s a me a s t h e r e s u l t s o b t ai n ed in t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l . T h e q u an t it y ma y b e d e t e r mi n e d b y e i t h e r t h e p ea k h e i g h t o r p ea k a r e a me t h o d , i f r e q u i r e d . I t e m 6 ( 6 ) i n S e c t i o n A G e n e r a l C o mp o s i ti o n a l Sta n d a r d s f o r F o o d, P a r t I F o o d s h a l l b e c h a n g e d a s f o l l o w s: ( 6 ) C a p t a f ol a n al yt i c a l me t h o d S h o u l d b e p e r f o r me d a c c o r d in g to 5 ( 6 ) . I t e m 6 ( 7 ) i n S e c t i o n A G e n e r a l C o mp o s i ti o n a l Sta n d a r d s f o r F o o d, P a r t I F o o d s h a l l b e c h a n g e d a s f o l l o w s: ( 7 ) Q u i n o x a l i n e - 2 - c a rb o x y l i c a c id a n al yt i c al me t h o d S h o u l d b e p e r f o r me d a c c o r d in g to 5 ( 7 ) . I t e m 6 ( 8 ) i n S e c t i o n A G e n e r a l C o mp o s i ti o n a l Sta n d a r d s f o r F o o d, P a r t I F o o d s h a l l b e c h a n g e d a s f o l l o w s: ( 8 ) C y h e x at i n an a l y t i ca l me t h o d S h o u l d b e p e r f o r me d a c c o r d in g to 5 ( 4 ) . I t e m 6 ( 9 ) i n S e c t i o n A G e n e r a l C o mp o s i ti o n a l Sta n d a r d s f o r F o o d, P a r t I F o o d s h a l l b e c h a n g e d a s f o l l o w s: ( 9 ) D a mi n o z i d e an a l y ti c a l me t h o d
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S h o u l d b e p e r f o r me d a c c o r d in g to 5 ( 1 3 ) . I t e m 6 ( 1 0 ) i n S e c t i on A G e n e r a l Co m p o s it i o n a l Sta nd a r d s f o r F o o d, P a r t I F o o d s h a l l b e c h a n g e d a s f o l l o w s: ( 1 0 ) A n a l y t i c a l me t h o d f o r t r i a z o p h o s a n d p a r a t h io n 1 . E q u i p me n t A g a s c h r o ma t o g r a p h w i t h a n a lk a l i f l a me i o n i za t i o n d e t e c to r, a f l a me p h o to me t r i c d e t ec t o r (i n t e r f e r e n ce f i l t e r f o r p h o s p h o r u s d e t e r mi n a t i o n , w a v e l e n g t h : 5 2 6 n m) , o r a h i g h l y - s e n s i ti v e n i t ro g e n p h o sp h o r u s d e t e ct o r, an d a g a s c h r o ma t o g r a p h - ma s s s p e c t r o me t e r a r e u s e d . 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. R e a g en t s d e s i g n at e d as s p e c i a l g r a d e i n th i s s e ct i o n mu s t me e t t h e r e q u i r e me n t s f o r s p e c i a l g r a d e s p e ci f i e d i n t h e J ap a n I n d u s tr i a l St a n d a r d s fo r t h e r e a g e n t s . A c e t o n it r i le : Th r e e h u n d r e d ml o f a c e t o n it r i l e i s c o n c en t r a t e d u sin g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. A f t e r r e mo v i n g t h e a c e to n i t r il e , th e r e s i d u e i s d i s s o l v e d in 5 ml o f n - h e x a n e. Th e n , 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d u e i s in j e c te d in to t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , w h e n t h e h ei g h t s o f p e a k s f o r co mp o u n d s o t h e r th a n n - h e x an e o n t h e g a s ch r o ma t o g r a m s h o u ld b e t h e s a me a s o r l o w e r t h a n th e p e a k f o r g a mma - B H C a t 2 x 10 - 1 1 g . A c e t o n e: Th r e e h u n d r e d ml o f a c e t o n e i s c o n c en t r a t ed u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r. A f t e r r e m o v i n g t h e a c e t o n e , t h e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 5 ml o f n - h e x a n e. Th e n , 5 l of t h e d i s s o lv e d r e s i du e i s i n j e ct e d i n to t h e G C - E C D f o r a n al y si s , w h e n t h e h ei g h ts o f p e ak s fo r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x a n e o n th e g a s c h r o ma t o g r a m s h o u l d b e t h e s a me a s o r l o w e r th a n th e p e ak f o r g a mm a - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . S o d i u m c h l o r i d e : S o d iu m c h l o r i de ( s p e c i al g r a d e ) . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n ce w h i c h in t er f e r e s w i t h a n a l y s i s o f a n in g re d i en t o f th e a g r i c u lt u r al c h e mi c a l p r o d uc t co n c e r n ed is c o n ta i n ed , i t s h ou ld be r i n s e d o u t w i t h a s o lve n t s u ch a s n - h e x an e . S i l i c a g el f o r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y ( p ar t i c l e s i z e: 6 3 - 2 0 0 m ) : Silica g el (particle size: 6 3- 2 0 0 m) p r o d u c ed for c o l umn
c h r o ma t o g r a p h y i s h ea t e d at 1 3 0 C f o r mo r e t h a n 1 2 h o u r s b ef o r e b e i n g a ll o we d t o c o o l in a d e s i c c at o r.
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D i a t o ma c e o u s e a r th : D i a t o ma c e o u s e a r th fo r c h e mi c a l a n al y s i s i s u s e d . E t h yl a c e t at e : Th r e e hu n d r e d ml o f e t h y l a c e t a t e i s c o n c e n t r a t ed u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. A f t e r r e mo v i n g t h e e t h y l a c e t a te , th e r e s i d u e i s d i s s o l v e d in 5 ml o f n - h e x a n e. Th e n , 5 l o f t h e d i s s o lv e d r e s i d u e i s in j e c te d i n to th e G C - EC D f o r a n a ly s i s , w h e n t h e h e ig h t s o f p e a k s f o r co mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x an e o n th e g a s ch r o ma t o g r a m s h o u ld b e t h e s a me a s o r l o w e r t h an th e p e a k f o r ga mma - B H C a t 2 x 10 - 1 1 g . n - H e x a n e : T h r e e h u n d r e d ml o f n - h e x a n e i s c o n c en t r a t ed t o 5 ml u sing a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. T hen , 5 l o f t h e d i s s o lve d r e s id u e i s i n j e ct e d i n to t h e G C - E C D f o r a n al y si s , w h e n t h e h e ig h ts o f p e ak s f o r c o mp o u n d s o t h e r th a n n - h e x an e o n th e g a s c h r o ma t o g r a m s h o u l d b e t h e s a me a s o r l o w e r th a n th e p e ak f o r g a mm a - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . Wa t e r : D i s t i l l ed w a t er i s u s e d . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n c e wh i c h i n t e r f e r e s w i t h a n a l y si s o f a n i n g r e d i e n t o f t h e a g r i cu l tu r a l c h e mi c al p r o d u ct con c e r n e d i s c o n ta i n ed , i t s h o u ld b e r i n s e d o u t w i t h a s o lv en t s u c h a s n - h e x a n e. S o d i u m s u l f a t e ( a n hyd r o u s ) : S o d i u m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) ( s p e c i al g r a d e ) . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n c e w h i c h in t e r f e r e s w i t h a n a l y s i s o f a n i n g r e d ie n t o f t h e a g r i c u lt u ra l c h e mi c a l p r o d u c t c o n c e r n e d i s c o n ta i n ed , i t s h o u l d b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t su c h as n - h e x an e . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l Tr i a z o p h o s: T h i s p r o d u c t s h o u ld c o n s i s t o f 9 8 % o r mo r e t r i a z o p h o s . M e l t in g p o in t : 0 -5 C P a r a t h i o n : T h i s p r o d u c t s h o u l d co n s i s t o f 97 % o r mo r e p a r a t hi o n . B o i l in g p o in t : 3 7 5 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s i . C e r e a l g r a i n s a n d l eg u me s / p u l s e s C e r e a l g r a in s a n d l eg u me s / p u l s e s a re c r u s h e d s o a s t o p as s t h r o u g h a s t a n d a r d me s h s i e v e (4 2 0 m) b e f o r e b e in g w e i g h ed to p r e p a r e a 1 0 . 0 - g r a m s a mp l e . Tw e n t y ml o f w a t e r i s a d d e d an d l e ft t o s t a n d f o r t w o h o u r s . A c e t o n e ( 1 0 0 ml ) i s a d d e d an d f in e l y c r u s h ed f o r t h r e e mi n u t e s . Th e c r u s h ed mi x t u r e i s f i l t e r e d b y s u c t i o n in t o a r o t a ry vacuum e v a p o r at o r using filter p ap e r covered with a
o n e - c e n t i me t e r- t h i c k la y e r o f d i at o ma c e o u s e a r t h . Th e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l te r p a p e r i s c o l l ec t e d a n d a ce t o n e ( 5 0 ml ) i s
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a d d ed b e f or e h o mo g e n i z i n g f o r t h r e e mi n u t e s. T h e ab o v e p r o ce d u re i s r e p e a t ed , a n d th e f i l tr a t e i s a d d ed t o th e r o ta r y v a c u u m e v a p o r a t o r a n d co n ce n t r a t e d to ap p r o x i ma t e l y 3 0 ml a t 4 0 o r l o we r. T h e c o nc en t r a t e d s olu t i o n i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml s e p a r a t in g f u n n e l a l r ea d y c o n t a in i n g 1 0 0 ml o f s a t u r a t e d s o d iu m c h l o r i de s o l u t io n . Th e e g g p l ant - s h a p e d f la s k o f t h e a b o v e r o ta r y v a c u u m e v a p o r a t o r i s w a s h e d w i t h 1 0 0 ml o f a mi x t u r e o f e th y l a c e ta t e a n d n - h e x an e (1 : 4 ) to o bt a i n t h e w a s h i n g s , w h i c h a r e ad d e d t o the s e p a r a t i ng f u n n e l ab o v e . T h e mi x t u r e i s s h a k e n v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h ak e r b e f o r e b e i n g l e f t t o s t a n d , an d t h en t h e l a y e r s o f e t h y l a c e t ate a n d n -h ex a n e a r e t ra n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n ic a l f l as k . F i f t y ml o f a mi x t u r e o f e th y l a c e ta t e an d n - h e x an e ( 1 : 4 ) i s a d d e d t o th e a q u eo u s l ay e r, a n d a f t e r r e p e a t in g t h e ab o v e p r o c e d u r e , t h e l a y e r s o f e t h y l a ce t a t e a n d n - h e x a n e a r e a d d e d t o th e c o n ic a l f la s k . A n a d eq u a t e a mo u n t o f s o d iu m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s a l s o a dd e d t o th e f l a sk , w h i c h i s l e f t t o st an d f o r 1 5 mi n u t e s a n d s h a k e n f r o m t i me t o ti me . T h e co n t en t o f th e f l a s k i s t h e n f i l t e r ed i n t o a r o ta r y v a c u u m e v a p o r at o r. T h e c o n i c al f l a s k i s t h e n w a s h e d w i t h 2 0 ml o f n - h e x a n e to o b ta i n th e w as h i n g s , w i th w h i c h t h e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s w a s h e d t w i c e . T h e w a s h i n g s o b t a in e d f r o m t h e r e p e a t e d w a s h in g a r e th e n a d d ed t o th e r o t a r y v a c u u m e v a p o ra t o r, a n d th e e th y l a ce t a t e a n d n - h e x a n e a re r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h i r t y ml o f n - h e x an e i s a d d ed t o t h e r es i d u e , w h ic h i s t h en transferred to a 1 0 0 - ml separating funnel, where 30 ml of n - h e x an e - s a t u r a t ed a ce t o n i t r i l e is a d d e d . A ft e r s h a k i n g t h e mi x t u r e v i g o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s in g a s h a k e r, th e f u n n el i s l e f t t o s t a n d a n d t h e ac e t o n i t r i l e l a y e r i s t r a n s f e r r e d t o t h e r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. A f t e r a d d in g n - h e x a n e - s a t u r a t e d a c e to n i t r i le ( 3 0 ml ) t o t h e n - he x an e l a ye r, th e a b o v e p r o c e du r e i s r e p e a t ed t w i c e . T h e a c e t o n i t r i le l a y e r i s t h e n a d d e d to t h e r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r, a n d t h e ac e to ni t r i l e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e is d i s s o l v e d in 5 ml o f a mi x t u r e o f a c e t o n e an d n - h ex a n e ( 1 : 1 ) . i i . F r u i t an d v eg e t ab l es F r u i t a n d v e g e t ab l e s ar e w e i g h e d a c c u r a t el y t o p r e p a r e a s a mp l e o f a b o ut on e k i l og r a m. A n a p p r o p ri a t e a mo u n t o f me a s u r e d w a t e r i s a d d ed to t h e s a mp l e , i f r e q u i r ed . A f t e r c h o p p i n g in t o p ie c e s o f e q u a l
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s i z e , a s a mp l e eq u iv a le n t to 20 . 0 g i s t ak e n . T h e n 1 0 0 ml o f a c e t o n e i s a d d e d b e f o r e f i n e l y c r u s h i n g f o r t h r e e mi n u t e s . Th e c r u sh e d s a mp l e i s f i l t e r e d b y s u c t i o n in t o a r o t a ry vacuum e v a p o r at o r using filter p ap e r covered with a
o n e - c e n t i me t e r- t h i c k la y e r o f d i at o ma c e o u s e a r t h . Th e r e s i d u e o n t h e s u r f a c e o f t h e f i l te r p a p e r i s c o l l ec t e d a n d a ce t o n e ( 5 0 ml ) i s a d d ed b e f or e h o mo g e n i z i n g f o r t h r e e mi n u t e s. T h e ab o v e p r o ce d u re i s r e p e a te d a n d t h e f i l tr a t e i s ad d ed t o th e r o ta r y v a c u u m e v ap o r a to r a n d co n ce nt r a t e d to ap p r o x i ma t e l y 3 0 ml a t 4 0 C o r lo w e r. T h e c o nc en t r a t e d s olu t i o n i s t r a n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml s e p a r a t in g f u n n e l a l r ea d y c o n t a ini n g 1 00 ml o f s a t u r a t ed s o di u m c h l o r i de . The e g g pl a nt - s h a p e d f l a s k o f t h e a b o v e r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r is w a s h e d w i th 1 0 0 ml o f a mi x t u r e o f e t h y l a ce t a t e a n d n - h e x a n e ( 1 :4 ) t o o b t ai n th e w a s h in g s , w h i c h a r e a d d e d t o t h e s e p a r at i n g f u n n e l a b o v e . T h e mi x t u r e i s s h a k en v ig o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g a s h a k e r b e f o r e b e in g l e ft t o s t an d , an d t h en th e l a y e r s o f e th y l a c e ta t e a n d n - h ex an e a r e t r a n sf e r r e d t o a 3 0 0 - ml c o n i c a l f l a s k . F i f t y ml o f a mi x t u r e o f e t h y l a ce t a te a n d n - h e x a n e ( 1 : 4 ) i s a d d e d t o th e aq u eo u s l a y e r, a n d a f t e r r e p e at i n g t h e a b o v e p r o c ed u r e , t h e l ay e r s o f e t h y l a c e t a te a n d n - h e x an e a r e a d d ed to t h e c o n i ca l f l a s k . An a d eq u at e a mo u n t o f s o d i u m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s a ls o a d d e d to t h e f l a s k , w h i c h i s l ef t t o s t a n d f o r 1 5 mi n u t e s an d s h a k e n f r o m t i me t o t i me . T h e c o n t en t o f t h e f la s k i s t h en f i l t e r e d i n t o a r o t ar y v a c u u m e v a p o r a t o r. T h e c o n i c al f l a s k i s t h e n w a s h e d w i t h 2 0 ml o f n - h e x an e t o o b t a in t h e w a s h i n g s , w i t h w h i ch t h e r e s id u e o n t h e su r f a c e o f th e f i l t e r p ap er i s w a s h ed t w i c e. Th e w a s h in g s o b t a in ed f r o m t h e r e p e a t ed wa s h i n g a r e t h e n ad d ed t o th e r o ta r y v a c u u m e v ap o r a to r, a n d t h e e t h y l a c e t a te an d n - h e x an e a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v e d in 5 ml o f a mi x t u r e o f a c e t o n e an d n - h ex a n e ( 1 : 1 ) . b . C l ea n - u p F i v e g r a ms o f s i l i c a g e l f o r c o lu mn c h r o ma t o g r ap h y ( p a r t i c l e s iz e : 6 3 - 2 00 m) s u s p e n ded i n a mi x t u r e o f a ce to n e a n d n -h e x an e ( 1 :1 ) i s a d d ed i n to a c h r o ma t o g r a p h t ub e ( i n n e r d i a me t e r : 1 5 mm a n d le n gt h : 3 0 0 mm) , o v e r w h i c h ab o u t 5 g o f s o d iu m s u l f a t e ( a n h y d r o u s ) i s a l so p o u r e d in . T h e n , t he mi x t u r e o f a c e t o n e a n d n - h ex a n e ( 1 : 1 ) i s s p i l t o u t u n ti l on l y a s ma l l a mo u n t r ema i n s o n th e p a c k in g o f t h e c o lu mn . T h e s o lu t io n o b t ai n ed b y t h e me t h o d d es c r i b e d in a . E x t r ac t i o n
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me t h o d s is p o u r e d in t o t h i s col u mn . T h e n 1 0 0 ml o f a mi x t u r e o f a c e t o n e and n - h ex a n e ( 1 : 1 ) i s a l so a d d e d . Th e e lu a t e i s c o l le c t ed in a r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r, an d t h e a c et o n e an d n - h e x an e a r e r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v ed in a c e t o n e t o ma k e e x a c tl y 5 ml o f s o l u t i o n , w h i ch i s u s ed a s t h e s a mp l e s o l u ti o n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed u n d er a n y o f t h e c o n d i t io n s mu s t b e t h e s a me a s t h e r e s u l t s o b t ai n e d i n t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l . Te s t i n g c o n d i t io n s 1 C o l u mn : A s i l i c a te g l as s c a p il l a r y c o lu mn ( i n n e r d i a me t e r : 0 . 5 3 m m and l e n g th : 10-30 m) coated with me t h y l silicone for g as
c h r o ma t o g r a p h y t o a th i c k n e s s o f 1 . 5 m i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : T h e c o lu mn t e mp e r a t u r e i s h e l d a t 8 0 C f o r o n e mi n u t e , f o ll o w e d b y an in c r e a s e o f 8 C e v e ry mi n u t e u n t i l r e a c h i n g 2 5 0 C , w h er e i t i s h e l d f o r f i v e mi n u t e s . I n l e t t e mp e r a t u r e : 2 3 0 C D e t e c t o r : Sh o u ld be op e r a t e d a t 2 8 0 C G a s f l o w r a t e : H e li u m i s u s e d a s th e c a r r i e r g a s . T h e f l o w r a t e s h o u l d b e a dj u s t ed t o t he o pt ima l c o n d i t io n . T h e f l o w s o f a i r a n d h y d r o g en s h o u ld a l s o b e ad j u s t ed t o t h e o p ti ma l c o n d iti o n s . Te s t i n g c o n d i t io n s 2 C o l u mn : A s i l i c a te g l as s c a p il l a r y c o lu mn ( i n n e r d i a me t e r : 0 . 3 2 m m a n d l e n g t h : 1 0 - 3 0 m) c o a t ed w i t h 5 0 % t r i f l u o r o p r o p y l me t h y l s i l i c o n e f o r g a s c h r o ma t o g r ap h y to a th i c k n es s o f 0 . 2 5 m i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : T h e c o lu mn t e mp e r a t u r e i s h e l d a t 7 0 C f o r o n e mi n u t e , f o ll o w e d b y an i n c r e a s e o f 2 5 C ev er y mi n u t e u n t i l r e ac h in g 1 2 5 C , a f t e r w h i c h th e t e mp e r a t u r e i s i n cr e a s e d b y 1 0 C e v e r y mi n u t e u nt il r e a c h in g 2 3 5 C , w h er e i t i s h e l d f o r 1 2 mi n u t e s . I n l e t t e mp e r a t u r e : 2 3 0 C D e t e c t o r : Sh o u ld be op e r a t e d a t 2 8 0 C Gas flow rate: Helium is used as the carrier gas. The flow rate should b e a d ju s t e d t o t h e o p t ima l c o n d i t io n . T h e f l o w s o f a i r a n d h y d r o g en s h o u ld a l s o b e ad j u s t ed t o t h e o p ti ma l c o n d iti o n s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e
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c o n di t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l it a t i v e t e s t s, u s i n g ei th e r t h e p e ak h e i g h t o r p e a k a r e a me t h o d . c . C o n f i r ma t i o n t e s t s G a s c h r o ma t o g r ap h y /ma s s s p e c t r o me t r y i s p e r f o r me d u n d e r t h e c o n d i t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l i t a t i v e t e s t s. Te s t r e s u l t s o b t a in e d mu s t b e t h e s a me a s t h e r e s u l t s o b t ai n ed in t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l . T h e q u an t it y ma y b e d e t e r mi n e d b y e i t h e r t h e p ea k h e i g h t o r p ea k a r e a me t h o d , i f r e q u i r e d . T h e f o l l o wi n g f o u r i te ms s h a l l b e a d d e d af t e r I t e m 6 i n S e c t i o n A G e n e r a l C o m p o s i ti on a l Sta n d ar d s f o r F o o d , P a r t I F o o d : 7 . I n a d dit i o n t o the s u b s t a n ce s s t i p u la te d u n d e r 6 , i n g r e d ie n t s o f a g r i c u lt u r al c h e mi c a l s a n d o th e r c h e mi c a l s u b s t a n c e s li s t e d i n th e f i r s t c o l u mn o f t h e ta b le i n ( 1 ) mu s t n o t b e c o n ta i n ed in f o o d s a t l e v el s e x c e ed i n g t h e li mi t s s t i p u la t ed i n t h e t h i r d c o lu mn o f t h e s a me t a b l e a c c o r d in g to t h e f o o d c a t e g o r i e s s h o w n in the s e c o n d c o l u mn o f t h e s a me t a b l e. C o n ce r n i n g th i s , f o o d s l i s t ed i n t he f o o d s c ol u mn i n t he t a bl e i n ( 2 ) s h a l l b e t e s t ed u si n g t h e p a rt l i s t ed in t h e s a mp l e s c o lu mn i n t h e t a b l e a s a s a mp l e . I n a d d it i o n , in t h e s u b s ta n c e s u s ed a s i n g r e d ie n t s o f a g r i c u lt u r al c h e mi c a l s a n d o th e r c h e mi c a l s u b s t a n c e s li s t e d i n th e f i r s t c o l u mn o f t h e t ab l e in ( 1 ) , w h i c h a r e s t i p u l at e d t o b e N o t d e t e ct ed in t h e th i r d co l u mn o f t h e s a me t a b l e in th e f o o d s l i s ted i n t h e se c o n d c o l u mn o f t h e s a me t a b l e , n o i n g r ed i e nt o f a g ri c u l tu r a l che mi c a l s o r o t h e r c h e mi c a l s u b s t a n c e s sh a l l b e d ete c t e d w h e n t h e s e f o o d s a r e t e s te d u s i n g t h e te s t me t h o d s s ti p u l a t e d i n ( 3 ) t o ( 8 ) . ( 1 ) T h e ma x i mu m r e s i d u e l i mi t s o f s u b s t a n c e s u s e d a s i n g r e d ien t s o f a g r i c u lt u r al c h e mi c a l s i n f o o d s ( P ro v i s i o n a l M R L s L i s t ) ( 2 ) S a mp l e s Food Barley and buckwheat W h e a t an d r y e R i c e ( b r o wn r i c e ) C o r n ( ma i z e ) S a mp l e ma t e r i a l T h r e s h e d se e d s H u s k e d s e ed s H u s k e d s e ed s S e e d s w i t h t h e h u s k , th e s i lk a n d t h e co r e s r e mo v e d T h r e s h e d se e d s
O t h e r c e r e al g r a i n s
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P e a s , b e a n s ( d r y) * , b r o a d b ea n s an d soybeans (dry) Peanuts, dry O t h e r l e g u me s / p u l s e s A p r i c o t , mu me p l u m, c h e r r y, J a p a n e s e p lu m ( i n c l u d in g p r u n e ) a n d n e c ta r i n e Peach
S e e d s w i t h o u t th e p o d s Wi t h t he s he l l s r e mo v e d S e e d s w i t h o u t th e p o d s Wi t h t h e p ed u n cl e s a n d t h e s e e d s r e mo v e d Wi t h t h e s k i n s a n d t h e s e e d s r e mo v e d Whole fruit
O r a n g e ( i n c l u d i n g n av e l o r a n g e ) , g r a p e f r u i t , c i t r u s na t su d a id a i ( w h o l e ) , l ime a n d l e mo n C i t r u s n a t su d a id a i ( p u l p ) a n d u n sh u o r a n g e ( p u lp ) C i t r u s n a t su d a id a i , p ee l s Other citrus fruits P e a r, J a p a n e s e p e a r, q u i n ce a n d a p p le L o q u at Av o c a do a nd ma n g o Kiwifruit Guava Date Pineapple P a s s i o n f r u i t a n d p ap ay a B a n a na St r a w b e r r y, c r a n b e r r y, h u c k l e b e r r y, b l a ck b e r r y a n d b l u eb e rr y Raspberry Other berries J a p a n e s e p e r s i m mo n Wa t e r me l o n , m a k u w a u r i me l o n an d
Wi t h t h e p ee l s r e mo v e d
Wi t h t h e c al y x e s r e mo v e d Whole fruit Wi t h t h e b l o s s o m s c a r s , t h e c o r e s a n d th e p e d u n c le s r e mo v e d Wi t h t he p ed u n cl e s , the s k i n s an d t h e s e ed s r e mo v e d Wi t h t h e s ee d s r e mo v e d Wi t h t h e s k i n s r e mo v e d Wi t h t h e c al y x e s r e mo v e d Wi t h t h e c al y x e s a n d th e s e e d s r e mo v e d Wi t h t h e to p s r e mo v e d Whole fruit Wi t h t h e p ed i c e l s r e mo v e d Wi t h t h e c al y x e s r e mo v e d Whole fruit Wi t h t h e c al y x e s r e mo v e d Wi t h t he c al yx e s a n d th e s e e d s r e mo v e d Wi t h t h e r in d s r e mo v e d
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me l o n s Grape Other fruits Tu r n i p ( r o o t s ) a n d J a p a n e s e r a d i s h ( r o o t s , i n clu d i ng r a di s h ) Tu r n i p ( l e a v e s ) , w a t e r c r e s s , k a l e , J a p a n e s e r ad i s h ( l e av es , i n c lu d in g radish) and brussels sprouts C a u l i f lo w e r a n d b r o c co l i C a b b ag e an d C h in e s e ca b b ag e Wi t h t he p ed u n cl e s r emo v e d E d i b le p o r t i o n s Wi t h th e d ir t l i g h t l y r in s e d o ff w i t h water Wi t h t h e d ec a y e d l e av es r e mo v e d
Wi t h t h e l ea v e s r e mo v e d A s a mp l e c o n s i s t in g o f o n e p o r t io n f r o m e a c h o f f o u r h e ad s , w i t h eac h h e a d e q ua l ly c u t i nt o fo u r p o r ti o ns , w i t h o u t t h e d e c a y e d o u t e r l e av e s a n d th e co r e s Wi t h t h e r o o t s a n d t h e d e c a y e d l e a v e s r e mo v e d R o o t s w i th t h e d i r t l ig h t l y r i n s e d o ff w i t h w a t e r E d i b le p o r t i o n s
Kyona and komatsuna (Japanese mu s t a r d s p i n a c h ) Horseradish
Qing-geng-cai and other c r u c i f e r o u s v e g et a bl e s S w e e t p o t ato , k on j ac , ta r o , p o t a t o , y a m a n d o t h e r p o ta t o es P u mp k i n ( i n c l u d i n g s q u a s h ) , c u c u mb e r ( i n c lu d in g g h e r k i n ) an d o r i e n t al p i ck l i n g me l o n ( v e g et a b le ) O t h e r c u c u r b i t a c eo u s v e g et a b le s A r t i c h o k e , e n d iv e an d c h i co r y B u r d o ck a nd s a l s i f y
Wi t h th e d ir t l i g h t l y r in s e d o ff w i t h water Wi t h t h e v in e s r e mo v e d
E d i b le p o r t i o n s Wi t h t h e d ec a y e d l e av es r e mo v e d A s a mp l e t h i n l y s l i ced t h en g r o u n d w i t h a me a t g r i n d e r, t h e l e a v e s h a v in g b e en r e mo v e d a n d th e d i r t h a v in g b e en l i g h t l y r in s e d o ff w it h water Wi t h t h e r o o t s a n d t h e d e c a y e d l e a v e s r e mo v e d Wi t h t h e d ec a y e d o u t e r l e a v e s a n d t h e co r e s r e mo v e d
S h u n g i ku
L e t t u ce ( i n c l u d i n g c o s l e t tu c e an d l e a f l e tt u c e)
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O t h e r c o mp o s i t e v e g eta b l e s S h i it a k e mu s h r o o m, b u t t o n mu s h r o o m a n d o t h e r mu s h r o o ms C e l e r y, p a rs l e y a n d m it s u b a Carrot and parsnip O t h e r u mb e l l i f e r o u s v eg e t ab l e s To ma t o , e g g p l an t an d p i mi e n t o (sweet pepper) O t h e r s o l a n c e o u s v e g eta b l e s Asparagus O n i o n , g a r li c , w e l s h ( in c l ud i n g l e e k ) an d mu l t i p l y i n g o n io n N i r a a n d o th e r l i l ia c eo u s v e g et a b le s G r e e n s o y b e a n s , k i d n ey b e a n s ( w i t h p o d s , i mma t u r e ) a n d p e a s ( w i t h p o d s , i mma t u r e ) Okra Sugarcane Ginger
E d i b le p o r t i o n s E d i b le p o r t i o n s
Wi t h t h e r o o t s a n d t h e d e c a y e d l e a v e s r e mo v e d Wi t h t h e d ir t l i g h t l y r i n s e d o ff E d i b le p o r t i o n s Wi t h t h e c al y x e s r e mo v e d E d i b le p o r t i o n s St e ms Wi t h t h e o u t e r s k i n s an d t h e r o o t h a i r r e mo v e d E d i b le p o r t i o n s Wi t h t h e p ed i c e l s r e mo v e d
Wi t h t h e c al y x e s r e mo v e d Wi t h t he hus k s r e mo v e d Wi t h t h e l ea v e s r e mo v e d , an d w i th t h e d i r t l ig h t l y r i n s e d o ff w i t h water Wi t h th e d ir t l i g h t l y r in s e d o ff w i t h water Wi t h r e d r o o t s l e f t o n , a n d w i th t h e r o o t h ai r an d th e d e c ay e d l e a v e s r e mo v e d E d i b le p o r t i o n s
Sugar beet
Spinach
B a mb o o s h o o t s an d o th e r v e g et a b le s S e s a me s e e d s , r a p e s e e d s , s u n f l o w e r s e e d s , s a ff l o w e r s e e d s , c o t t o n s e e d a n d o t h e r oi l s e e d s A l mo n d , g in k g o n u t , ch e s t n u t , w a l n u t , p e ca n a n d o t h er n u t s C a c a o b e an s a n d co ff e e b e an s
Seeds only
Wi t h t h e h u s k s r e mo v e d
B e a n s w i t h o u t th e p o d s
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Te a Hop O t h e r s p i c es a n d o t h e r h e r b s
Te a l ea v e s Dried flowers E d i b le p o r t i o n s
( 3 ) A n a l yt i c a l me t h o d f o r a l d r i n , e n d r i n a n d d i e ld r i n S h o u l d b e p e r f o r me d a c c o r d in g to 6 ( 5 ) . ( 4 ) C l e n b u te r o l a n a l y t ic a l me t h o d 1 . E q u i p me n t L i q u id ch r o ma t o g r a p h t a n de m ma s s s p e c t r o me t e r i s u s ed. 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. A c e t o n it r i le : A c e t o ni tr i l e p r o du ce d f o r l i qu id c h r o ma t o g r a p h y i s us e d . St r o n g a c id c a t io n ex c h an g e r mi n i c o l u mn ( 5 0 0 mg ) : A p o l y e t h y l e n e c o l u mn w i t h a n i n n e r d i a me t e r o f 8 - 9 mm p a c k ed w i t h 5 00 mg o f b e n z en e s u lf o n i l p r o p y l s i l a n e - bon d e d s il i c a g e l o r o n e w i t h t h e s ame s e p a r a t i o n c h a r a c t e r i st i c s i s u s ed . Wa t e r : Wa te r p r o d u ced f o r l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y i s u se d . M e t h an o l: M e t h an o l p r o d u c ed f o r l i q ui d c h ro ma t o g r a p hy i s u s e d . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l C l e n b u t e r o l h y d r o ch lo r i d e : T h i s p r o du c t sh o u ld c on s i s t o f 9 8% o r mo r e c l e n bu t e r o l h yd r o c h lo r i d e . M e l t in g p o in t : 1 7 4 - 1 7 6 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s A f t e r h o mo g e n iz i n g , a s a mp l e o f 5 . 0 0 g i s me a s u r e d o u t, t o w h i ch 2 5 ml o f e t h yl a c et a t e a nd 1 ml o f 4 mo l / l p o t as s i u m c a r b o n a te s o l u ti o n a r e a d d ed . T h e mi x t u r e i s f i n e l y c r u s h e d b e f o r e b e i n g ce n t r i f u g ed a t 3 , 0 00 r p m f o r f i v e mi n u t e s . T h e n , th e e t h y l ac e t a t e l a ye r i s t r a n s f e r r e d t o a r o t a ry v a c u u m e v a p o r a t o r. Tw e n t y - f i v e ml o f e t h y l a c e t a te i s ad d e d t o t h e r e s i d u e a n d t h e n c r u sh e d a n d c en t r i f u g ed as d e s c r i b ed ab o v e. T h e e t h y l a c et at e l a y e r i s t h e n a d d e d t o th e r o t ar y v a c u u m e v a p o r a t o r, and t h e et h y l a c e t a te i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h i r t y ml e a c h o f a ce to n i t r il e a n d a c e t o n i t r i le - s a t u r a t e d n - h e x an e ar e a d d ed t o t he r e s i d u e be f o r e s h a k in g v ig o r o u s l y f o r f i v e mi n u t e s u s i n g
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a s h a k e r. Th e s h ak e n mi x t u r e i s le f t t o s t a n d a n d th e ace t o n i t r i l e la y e r i s t r a n s f e r r e d t o a 1 0 0 - ml s e p a r a t i ng fu n n el , w he r e 3 0 ml o f a c e t o n i t r i le- s a t u r a t e d n - h e x an e is a d d e d . Th e ab o v e p r o c e d u r e i s r e p e a t ed and t h e a ce t o n i t r i l e l a y er i s c o ll e c te d in th e ro t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r, a n d th e ac e t o n i t r i l e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l ve d in 1 0 ml o f a mi x t u r e o f me t h a n o l a n d 1 . 2 % me t a p h o s p h o r i c a c i d so l u ti o n ( 2 :3 ) , w h i c h is f i l t e r e d t h r o u g h a c o tt o n plug. b . C l ea n - u p T h r e e ml o f me t h a n o l f o l l o w e d a l so b y 3 ml o f w a t e r a r e p o u r e d in t o a s t r o n g a c id c a t i o n e x ch a n ge r mi n i c o lu mn ( 5 0 0 mg ) a n d t h e e ff l u e nt i s d i s c a r d ed . T h e s o l u tio n o b ta i n ed b y t h e me t h o d d es c r i b e d i n a . E x t r a c t io n me t h o d s is p o u r ed in t o th e c o lu mn . Wa t e r ( 5 ml ) i s a l s o a d d ed a n d t h e e ff l u en t i s d i s c ar d e d . F i f t e e n ml o f a mi x t u r e o f me t h a n o l and 0 .1 mo l / l dipotassium hydrogen orthophosphate
s o l u t io n ( 9 :1 ) i s a d d e d t o th e co l u mn , a n d t h e e l u at e i s co l l e ct e d i n a r o t a r y v a c u u m e v a p o r at o r, a n d t h e w a t e r a n d me t h a n o l ar e r e mo v e d a t 4 0 C o r low e r. T h e re s i d u e i s d i s s o l v ed in 1 .0 ml o f me t h a n o l , a n d t h i s i s u se d a s t h e s a mp l e s o l u t io n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e reference material. Te s t i n g c o n d i t io n s C o l u mn p a c k i n g : O c t a d e c y l s i l a n e -b o nd e d s il ic a g e l ( p a r ti c l e s i ze : 2 - 5 m) i s u s e d . C o l u mn : A s t a i n l e s s tu b e ( i n n e r d i a me t e r : 2 . 0 - 6 . 0 mm a n d l e n g t h : 1 0 0 - 25 0 mm) i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : 4 0 C M o b il e p h a s e : A mi x t u r e o f ac e t o n i t r i l e, f o r mi c a c i d an d w at e r ( 5 0 0 : 1: 50 0) i s u s e d . T h e f l o w r a t e s h o u l d b e a d j u s t e d s o t h a t c l e n b u t e r o l f l o w s o u t in a p p r o x i ma t e l y 1 0 mi n u t e s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e c o n di t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l it a t i v e t e s t s, u s i n g ei th e r t h e p e ak h e i g h t o r p e a k a r e a me t h o d .
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( 5 ) D e x a me t h a s o n e a n al y t i c a l me t h o d 1 . E q u i p me n t L i q u id ch r o ma t o g r a p h t a n de m ma s s s p e c t r o me t e r i s u s ed. 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. A c e t o n it r i le : A c e t o ni tr i l e p r o du ce d f o r l i qu id c h r o ma t o g r a p h y i s us e d . O c t a d e c y l si l a n e - b o n d e d s i li c a gel mi n i c ol u mn (360 mg ) : A
p o l y e t h y l en e c o l u mn w i t h a n i n n e r d i a me t e r o f 8 - 9 mm p a c k e d w it h 3 6 0 mg o f o c t a d e c y l s i l a n e - bo nde d s i l i c a ge l o r o n e w i t h t h e s am e s e p a r a t i o n c h a r a c t e r i st i c s i s u s ed . S y n t h e t i c ma g n e s i u m s i l i c at e (F l o r i s i l ) f o r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y: Florisil (p a r t i c le si z e : 150-250 m) p r o d u c ed for c o lu mn
c h r o ma t o g r a p h y i s h ea t e d at 1 3 0 C f o r mo r e t h an 1 2 h o u r s b ef o r e b e i n g a ll o we d t o c o o l in a d e s i c c at o r. Wa t e r : Wa te r p r o d u ced f o r l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y i s u se d . M e t h an o l: M e t h an o l p r o d u c ed f o r l i q ui d c h ro ma t o g r a p hy i s u s e d . P h o s p h a te b u ff e r s o l u t i o n (p H 5 .0 ) : F i r s t s o l u t io n : A n a mo u n t o f 2 7 .2 g o f mo n o p o t a s s i u m d i h y d r o g e n mo n o p h o s p h a t e i s me a s u r e d , w h i ch i s d i s s o lv e d i n w a te r t o ma k e a 1 , 0 0 0 - ml s o l u ti o n . S e c o n d s o lu t i o n : A n a mo u n t o f 3 . 4 8 g o f d i p o ta s s i u m h y d r o g e n o r t h o ph o s ph a t e i s me a s u r e d , w h ich i s d i s s o lv e d i n w a te r t o ma k e a 1 0 0 - ml s o l u t i o n . T h e f i r s t so l u ti o n i s co mb i n e d w it h th e s e c o n d so l u ti o n t o a d j u s t th e p H t o 5 .0 . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l D e x a me t h a s o n e : d e x a me t h a s o n e . M e l t in g p o in t : 2 6 2 - 2 6 4 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s A f t e r h o mo g e n iz i n g , a s a mp l e o f 5 . 0 0 g i s me a s u r e d o u t, t o w h i ch 3 0 ml o f 9 5 % a c e t o n i t r il e s o l u t i o n i s a d d ed . T h e mi x t u r e i s f i n el y c r u s h e d a ga i n b e f o r e b e i n g c e n t r i f u g e d at 2 ,5 0 0 r p m f o r f i v e mi n u t e s a n d t h e a c et o n it r i l e l ay e r i s c o l l e c t e d . T h i r ty ml o f 9 5 % a c e t o n i t ri l e This p r o du c t s h o u ld con s i s t of 99% or mo r e
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s o l u t io n i s a d d ed t o th e r e s i d u e , a n d th e n i t i s f i n e l y c r u s h e d an d c e n t r i f u g e d a s d e s c r ib ed a b o v e b e f o r e c o l l e ct in g t h e a c eto n i t r il e la y e r. b . C l ea n - u p i . F l o r i s i l fo r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y E i g h t g r a ms o f f l o r i s i l f o r c o lu mn c h r o ma t o g r a p h y s u s p e n d e d in a c e t o n i t r i le i s p o u r ed in t o a c h r o ma t o g r a p h t u b e ( in n e r d i a me t e r : 1 5 m m a n d l e n g t h : 3 0 0 mm) . T h e a c e t o n it r i l e i s t h e n s pi l t ou t u nt i l on ly a s ma l l a m o u n t r e ma i n s o n t h e p a c k in g o f th e c o lu mn , i n t o w h i ch 1 0 0 ml o f a c e t on i t r i le i s p o u r e d a n d th e e ffl u e n t i s d i s c a r d e d . Th e s o l u t io n o b t a in e d b y t h e me t h o d de s c r i be d in a . E x t r a c ti on me t h o d s an d , su b s e qu e n tl y, 30 ml o f a c e to n i t r il e a r e a l s o po u r ed i n t o t h e c o l u mn . T h e e l u a te i s t ra n s f e r r e d t o a 3 0 0 - ml s e p a r a t in g f u n n e l . F i f ty ml o f n - h e x a n e i s t he n a dd e d to t h e f u nn e l b e f o r e b e ing v i g o r ou s l y s h a k e n u s in g a s h a k e r f o r t h r e e mi n u t e s a n d le f t t o s t a n d . T h e a c et o n i t r i l e l a y e r i s t h e n c o l le c t ed i n a r o ta r y v a c u u m e v a p o r a t o r, a n d th e a ce t o ni t r i l e is r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s di s s o l v ed i n 4 ml o f p h o s p h a t e b u ff e r s o l u t i o n ( p H 5 . 0 ) , t o w h i c h 6 ml o f w a t e r i s a d d ed . i i . O c t a d e cy l s i l a n e - b o n d e d s i l i ca g e l co l u mn c h r o ma t o g r a p h y Te n ml o f me t h a n o l , 1 0 ml o f w a t e r a nd 2 ml o f p h o sp h a te bu ff e r s o l u t io n ( p H 5 . 0 ) a r e a d d ed to the o ct a d ec yl s i l a n e - bo n de d s i li c a g el mi n i c o l u mn ( 3 6 0 mg ) i n t h a t o rd e r. T h e e ff l u e n t i s d is c a r d e d . Th e s o l u t io n o b t a in e d i n i . F l o r i si l f o r co l u mn c h r o ma t o g r a p h y i s p o u r e d in to th i s c o lumn . S u b s e q u e nt l y, 5 ml o f p h o sp h a te b u ff er s o l u t io n ( pH 5 . 0 ) a n d 1 0 ml o f 2 5 % me t h a n o l s ol u tio n a r e a l so p o u r e d in to t h e c o lu mn i n t h at o rd e r. T h e e ff l u e n t i s d is c a r d e d . Ten ml o f 6 0 % a c e t on i t r ile s o l u ti o n i s p o u r ed i n t o t h e co l u mn . T h e e l u a te is c o l l ec t ed in a r o t a ry vacuum e v ap o r a to r, and th e
a c e t o n i t r i le a n d w a te r a r e r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l ve i n 0 . 5 ml o f 1 0 % a ce t o n i t r i l e s o lu t io n , an d th is i s u s e d as t h e te s t s o lu t i o n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e reference material. Te s t i n g c o n d i t io n s
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C o l u mn p a c k i n g : O c t a d e c y l s i l a n e -b o nd e d s il ic a g e l ( p a r ti c l e s i ze : 2 - 5 m) i s u s e d . C o l u mn : A s t a i n l e s s tu b e ( i n n e r d i a me t e r : 2 . 0 - 6 . 0 mm a n d l e n g t h : 1 0 0 - 25 0 mm) i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : 4 0 C M o b il e p h a s e : A mi x t u r e o f ac e t o n i t r i l e, f o r mi c a c i d an d w at e r ( 1 , 2 0 0: 1 :8 00 ) i s u s ed . T h e f lo w r a t e s h o u ld b e a d j u st e d so th a t d e x a me t h a s o n e f l o w s ou t i n a pp r ox i ma t e l y 7 - 1 0 mi n u t e s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e c o n di t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l it a t i v e t e s t s, u s i n g ei th e r t h e p e ak h e i g h t o r p e a k a r e a me t h o d . ( 6 ) A n a l yt i c a l me t h o d f o r t r i a z o p h o s a n d p a r a t h io n S h o u l d b e p e r f o r me d a c c o r d in g to 6 ( 1 0 ) . ( 7 ) A n a l y t i c a l me t h o d f o r a l p h a - t re n b o l o n e an d b e t a - t r en b o lo n e 1 . E q u i p me n t A h i g h - p er f o r ma n c e l i q u id d e t e c to r ch r o ma t o g r a p h and a l i q u id with an u l t r av io l e t ma s s
s p e c t r o p h o to me t r i c
c h r o ma t o g r a p h
s p e c t r o me t e r a r e u s e d . 2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. R e a g en t s d e s i g n at e d as s p e c i a l g r a d e i n th i s s e ct i o n mu s t me e t t h e r e q u i r e me n t s f o r s p e c i a l g r a d e s p e ci f i e d i n t h e J ap a n I n d u s tr i a l St a n d a r d s fo r t h e r e a g e n t s . We a k b a s i c a n i on e x cha n g e r e s i n mi n i c o l u mn ( 5 0 0 mg ) : A p o l y e t h y l e n e c o l u mn w i t h a n i n n e r d i a me t e r o f 8 - 9 m m p a c k ed w i t h 5 00 mg o f d i e th y l a mi n o p r o p y l w e a k b a s i c a n i o n e x ch a n g e r e s i n p r o d u c ed f o r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y or one with the s a me separation
c h a r a c t e r i st i c s i s u s ed . H yd r o x yp r o p yl d e xt r a n f o r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y : D e x t r a n ( p a r t i c le s i z e : 2 5 - 1 0 0 m) c h e mi c a l l y b o n d e d w i t h a h yd r o x ypr o p yl g r o up p r o d u ce d fo r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y i s u s ed . D i c h l o r o me t h a n e : D i c h l o r o me t h a n e ( s p e c i a l g r a d e ) . 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l
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A l p h a - t r e nb o l on e : Th i s p r o d u ct s h o u ld c o n s i s t o f 9 4 % o r mo r e alpha-trenbolone. M e l t in g p o in t : 11 0 C B e t a - t r e n bo l o ne : beta-trenbolone. M e l t in g p o in t : 1 8 6 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s A f t e r h o mo g e n iz i n g , a s a mp l e o f 5 . 0 0 g i s me a s u r e d o u t. F o r mu s c l e , t h e f a t l a ye r s h o ul d b e r e mo v e d a s mu c h a s p o s s i b le b e f o r e b e i n g c h o pp e d. Tw e n t y ml o f a mi x t u r e o f a c e t o n i t ri l e a n d me t h a n o l ( 4 : 1 ) i s a d d e d . T h e mi x t u r e i s f i n e l y c r u s h e d b e f o r e b e in g ce n t r i f u g ed a t 2 ,6 0 0 r p m f o r f i v e mi n u te s . T h e s u p e r n at an t li q ui d is c o l le c t ed i n a 10 0 - m l s e p a r a t i n g f u n n e l. Tw e n t y ml o f a mi x t u r e o f a ce t o ni t r i l e a n d me t h a n o l ( 4 : 1 ) i s a d d e d t o th e p r e c i p i ta t e , a n d th e mi x t u r e i s t h e n c e n t r i f u ge d under the above c o n d i t io n s . The mi x e d layer of Th is p r o d u ct s h o u ld co n s i s t of 99% or mo r e
a c e t o n i t r i le a n d me t h a n o l i s c o mb i n ed i n t h e s e p a r a t in g f u n n e l , to w h i c h 2 0 ml w a t e r- s a t u r a t ed n -h e x an e i s al s o a d d e d b e f o r e s h ak i n g v i g o r ou s l y f o r f i v e mi n u t e s . T h e s h a k e n mi x t u r e i s t h en l e f t t o s t an d a n d th e mi x e d l a y e r o f a c e t o n it r il e a n d me t h a n o l i s t r a n s f e r r e d t o a r o t a r y v a cu u m e v a p o r a t o r. F o r t y ml e a c h o f 5 % so d i u m s u l f a t e s o l u t io n an d d i ch l o ro me t h a n e are also a d d ed be f o r e s h a ki ng
v i g o r ou s l y f o r f i v e mi n u t e s . T h e s h a k e n mi x t u r e i s t h en l e f t t o s t an d a n d th e la y e r o f d i c h lo r o me t h a n e i s t r a n s f e r r e d t o a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. F i f t e e n ml o f d i ch l o r o me t h a n e i s a d d e d t o t h e aq u eo u s l a ye r, a nd a f t e r r e p e at i n g th e a b o v e p r o c ed u r e , th e d ic h l o r o me t h a n e layer is co mb i n e d in th e r o ta r y vacuum e v a p o r at o r, an d th e
d i c h l o r o me t h a n e i s r e mo v e d a t 4 0 C o r l o w e r. Th e r e s i du e i s d i s s o l v e d in 1 ml o f a mi x t u r e o f n - h e x an e an d b e n z en e ( 3 : 1 ) . b . C l ea n - u p i . We a k b a si c a n i o n e x c h a n g e r e s in c o lu mn c h r o ma t o g r a p h y A w e a k b a s i c a n io n e xc h a ng e r e s in mi n i c o l umn ( 5 0 0 m g ) i s i n j e c ted w i t h 6 ml o f a mi x t u r e o f n - he x a n e an d b en z e ne (3 : 1 ) a n d th e e ff l u e n t i s d i s c a r d ed . T h e s o l u ti o n o b t ai n ed b y t h e me t h o d d e s c r i b ed i n a . E x t ra c t i o n me t h o d s i s p o u r e d i n t o th i s c o lu mn . Tw o ml o f a mi x t u r e o f n - h e x an e an d b e n z e n e ( 3 : 1 ) i s als o a d d e d to t h e co l u mn
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and
t he
e ff l u e n t
is
discarded.
Three
ml
of
mi x t u r e
of
d i c h l o r o me t h a n e an d me t h a n o l (9 : 1 ) i s p o u r e d i n t o t h e c o l u mn a n d t h e e l u a t e i s co l le c te d in a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a to r, a n d t h e solvent is evaporated to near dryness under nitrogen at 40C or l o w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o lv e d i n 0 . 5 ml o f a mi x t u r e o f be n z ene a n d me t h a n o l ( 1 7: 3 ) . i i . H yd r o x yp r o p yl d ex tr a n f o r c o lu mn c h r o ma t o g r ap h y A p o l ye t h yl e n e c ol u mn w i t h an in n e r d i a me t e r o f 6 mm i s p a c k ed w i t h h yd r o x yp r o p yl d e x t r a n f o r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y s u s p e n d ed i n a mi x t u r e o f b e n zen e a n d me t h a n o l ( 1 7 :3 ) b e f o r e b e i n g l e f t to s t a n d f o r 1 2 h ou r s s o a s t o o b t ai n a 1 2 0 - mm l o n g l a y e r o f h y d r o x y p r o p y l d e x t r an f o r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y. T h e mi x t u r e o f b e n z en e and me t h a n o l ( 1 7 : 3 ) i s t h e n s p i l t o u t u n t il o n l y a s ma l l a mo u n t r e ma i n s o n t h e p a c k i n g o f t h e co l u mn . T h e s o l u t io n o b t a in e d i n i . We a k b a s i c a n ion e x c h a n g e r e s i n c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y i s p o u r e d i n to t h i s co lu mn . Te n ml o f a m i x t u r e o f b e n z en e an d me t h a n o l (1 7 : 3 ) i s a l so a d d e d t o t h e co l u mn a n d 2 . 0 ml o f t h e f i r s t e ff l u e n t i s d i s c a r d ed . T h e n e x t elu a t e i s c o lle c t e d in a ro t a r y v a cu u m e v a p o r a t o r, a n d th e so l v en t i s ev a p o r at e d t o n ea r d r y n e s s u n d er n i t r o g e n at 4 0 C o r lo w e r. T h e r e s i d u e i s d i s s o l v e d in 0 . 5 ml o f a mi x t u r e o f a c e t o n i t r i le a n d w a t e r ( 1 : 1 ) , a n d th i s i s u s e d a s t h e t e s t s o l u t io n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e reference material. Te s t i n g c o n d i t io n s C o l u mn p a c k i ng : O c ta d e c y l s i l an e - b o n d e d si l i c a g e l ( p a r t i c l e s i ze: 5 m) i s u s e d . C o l u mn : A s t a i n l e s s tu b e ( i n n e r d ia me t e r : 4 . 0 - 6 . 0 mm a n d l e n gt h : 15 0 m m) i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : 4 0 C D e t e c t o r : S h o u ld b e o p e r a t e d at an a b s o r p ti on w a v e l e ngt h o f 3 40 nm . M o b il e p h as e : A mi x t u r e o f a c e t o n i t r i l e a n d w a t e r ( 5 : 6 ) i s u s e d . Th e f l o w r a t e s h o u ld be ad j u s t ed s o t h a t a l p h a - t r e n b o l o n e f l o w s o u t in a p p r o xi ma t e l y 1 0 mi n u t e s .
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b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e c o n di t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l it a t i v e t e s t s, u s i n g ei th e r t h e p e ak h e i g h t o r p e a k a r e a me t h o d . c . C o n f i r ma t i o n t e s t s L i q u id c h ro ma t o g r a p h y/ ma s s s p e c t r o me t r y i s p e r f o r me d u n de r t he c o n d i t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l i t a t i v e t e s t s. Te s t r e s u l t s o b t a in e d mu s t b e t h e s a me a s t h e r e s u l t s o b t ai n ed in t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l . T h e q u an t it y ma y b e d e t e r mi n e d b y e i t h e r t h e p ea k h e i g h t o r p ea k a r e a me t h o d , i f r e q u i r e d . ( 8 ) E t h y l e n e d i b r o mi d e a n a l yt ic a l me t h o d 1 . E q u i p me n t A g a s c h r o ma t o g r a p h w i t h a n e lec t r o n c ap t u r e d e t e c to r ( G C - E C D ) , a g a s c h r o ma t o g r ap h - ma s s s p e c t ro me t e r a n d D e a n Sta r k d i s t il la t i o n a p p a r a tu s ar e u s e d . T h e D e a n St a r k d i s t il l a t io n ap p a r a t u s i s r o u g h l y a s s h o w n i n th e following figure:
A : D i s t i l l a ti o n f l a sk B : C o o l in g t u b e C : D i s t i l la ti o n t r ap
2 . R e ag e n t s / Te s t s o lu t io n s I n a d d i t io n t o t h e r e ag e n t s an d t es t s o l u t i o n s l i s t ed b e lo w, t h o s e li st e d i n S e c t i o n C R e a g e nts / Te s t S o l u t i o n s , E t c ., P a r t I I F o o d a d d it i v e s a r e used. S y n t h e t i c ma g n e s i u m s i l i c at e (F l o r i s i l ) f o r c o l u mn c h r o ma t o g r a p h y: Florisil (p a r t i c le si z e : 150-250 m) p r o d u c ed for c o lu mn
c h r o ma t o g r a p h y i s h ea t e d at 1 3 0 C f o r mo r e t h an 1 2 h o u r s b ef o r e b e i n g a ll o we d t o c o o l in a d e s i c c at o r. S i l i c o n e f o r d e f o a mi n g : S i l i co n e p r o d u ce d fo r d e f o a mi n g i s u s e d . n - H e x a n e : T h r e e hu ndr e d ml o f n - h e x a n e i s c o n c en t r a t ed to 5 ml u s i n g a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r. Th en , 5 l o f t h e d i s s o l v e d r e s i d u e i s i n j e ct e d i n to t h e G C - E C D f o r a n al y si s , w h e n t h e h ei g h ts o f p e ak s fo r c o mp o u n d s o t h e r t h an n - h e x a n e o n th e g a s c h r o ma t o g r a m s h o u l d b e
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Provisional Translation from Japanese Original t h e s a me a s o r l o w e r th a n th e p e ak f o r g a mm a - B H C a t 2 x 1 0 - 1 1 g . Wa t e r : D i s t i l l ed w a t er i s u s e d . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n c e wh i ch i n t e r f e r e s w i t h a n al y s i s o f a n i n g r e d i e n t o f th e a g r i cu l tu r a l c h e mi c a l p r o d u ct con c e r n e d i s c o n ta i n ed , i t s h o u ld b e r i n s e d o u t w i t h a so lv e n t s u c h a s n - h e x a n e. 3 . R e f e r e n c e ma t e r i a l E t h y l e n e d i b r o mi d e : T h i s p r o d u c t s h o u ld c o n s i s t o f 9 9 % o r mo r e e t h yl e n e d ib r o mi d e . B o i l in g p o in t : 13 1 .5 C 4 . P r e p a r a ti o n o f t e s t s o l u t io n s a . E x t r a ct io n me t h o d s A b o u t o n e k g o f a s a mp l e i s ch o pp e d i n to s ma l l p i e ce s of e q u al s i ze. O f t h e c h o pp e d s a mp l e , 1 0 0 g i s me a s u r e d o u t t o b e t r an s f e r r e d i n to a 1 , 0 0 0 - ml d i s t i l l at i o n f l a s k . Tw o h un d r e d ml o f w a t e r a n d 1 0 ml o f n - h e x an e ar e a l s o ad d e d to th e f l a s k . A f e w d r o p s o f d e f o a mi n g s i l i c o n e a n d b o i li n g s to n e s a r e th e n ad d ed b e f o r e t h e f la s k i s a t ta ch e d t o th e D e an St a r k d i s t il l a t io n a p p a r a t u s to b e h e at e d a n d r e f l u x ed f o r o n e ho u r. A f t e r c o o l in g , mo s t o f t h e w a t e r i n t h e d i s til l a t io n t r ap i s r e mo v e d . T h e n - h ex a n e l a y e r i s t h e n f i lt e r ed i n to a 1 0 - ml me a s u r i n g f l a s k t h r o u g h l iq u id p h a s e s e p a r at i o n f il t e r p a p e r. T h e i n s i d e o f th e t r a p i s w a s h e d w i th a s ma l l a mo u n t o f n - h ex a n e t o o b t a in t h e w a s h i n g s , w h i c h a r e f i l t e r e d t h r o u g h th e f i l te r p a p e r a s s t a t e d ab o v e . T h e f i l t r a t e i s c o mb i n e d w i t h t h e n - h e x a n e la y e r t o ma k e e x a ct l y a 1 0 - ml s o l u ti o n . b . C l ea n - u p T h e s o lu t io n o b t ai n ed b y t h e me t h o d d es c r i b e d in a . E x t r ac t i o n me t h o d s is t r a n s f e r r e d t o a 1 0 -ml t e s t t u b e w i t h a g la s s s t o p p e r, t o w h i c h a pp r o x i ma t e l y 1 g o f f l o r i s i l f o r c o lu mn c h r o ma t o g r ap h y i s a d d ed . T h e mi x t u r e i s v i g o r o u s l y s h a k e n b e fo r e b e in g le f t t o s ta n d a t r o o m t e mp e r a t u r e f o r a b o u t 1 5 mi n u t e s . T h e n , ab o u t f i v e ml o f s u p e r n a ta n t l i q u i d i s c o l l ec t ed in a n o t h e r t e s t t u b e w i t h a g l as s s t o p p e r, a nd t h i s i s u se d a s th e t es t s o l u ti o n . 5 . D e t e r mi n a t io n a . Q u a l i ta t iv e t e s t s Q u a l i t a ti v e t e s t s a r e p e r f o r me d u n d e r t h e f o l l o w i n g c o n d i ti o n s . Te s t r e s u l t s o b ta i n ed mu s t b e t h e s ame a s t h e r e s u l t s o b t a i n ed i n th e reference material.
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Te s t i n g c o n d i t io n s C o l u mn : A s i l i c a te g l as s c a p il l a r y c o lu mn ( i n n e r d i a me t e r : 0 . 3 2 m m a n d le n g t h : 3 0 m) c o a t ed w i th 6 % c y an o p r o p y l p h e n y l - me t h y l s i l i c o n e f o r g a s c h r o ma t o g r ap h y to a th i c k n es s o f 1 . 8 m i s u s e d . C o l u mn t e mp e r a t u r e : T h e c o lu mn t e mp e r a t u r e i s h e l d a t 5 0 C f o r t w o mi n u t e , f o ll o w e d b y an in c r e a s e o f 5 C e v e ry mi n u t e u n t i l r e a c h i n g 11 0 C , a f te r w h i c h th e t e mp e r a t u r e i s in cr e a s e d b y 3 0 C ev e ry mi n u t e u nt il r e a c h in g 2 6 0 C , w h er e i t i s h e l d f o r f i v e mi n u t e s . I n l e t t e mp e r a t u r e : 2 5 0 C D e t e c t o r : Sh o u ld be op e r a t e d a t 3 0 0 C Gas flow rate: Helium is used as the carrier gas. The flow rate should b e a dj u s t ed s o t h at e th y l e n e d i b ro mi d e f l o w s o u t in ap p r o x i ma t e l y e i g h t mi n u te s . b . Q u a n ti t at i v e t e s t s T h e q u a n ti ty i s d e t e r mi n e d f r o m t h e t e s t r e su l t s o b t a in e d u n d e r th e c o n di t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l it a t i v e t e s t s, u s i n g ei th e r t h e p e ak h e i g h t o r p e a k a r e a me t h o d . c . C o n f i r ma t i o n t e s t s G a s c h r o ma t o g r ap h y /ma s s s p e c t r o me t r y i s p e r f o r me d u n d e r t h e c o n d i t io n s d e s c r i b ed in a . Q u a l i t a t i v e t e s t s. Te s t r e s u l t s o b t a in e d mu s t b e t h e s a me a s t h e r e s u l t s o b t ai n ed in t h e r e f e r e n c e ma t e r i a l . T h e q u an t it y ma y b e d e t e r mi n e d b y e i t h e r t h e p ea k h e i g h t o r p ea k a r e a me t h o d , i f r e q u i r e d . 8 . I n c a s e s w h e r e a s u b s t a n c e u s e d a s a n i n g r e d i e n t o f a n a g r i c u l tu r a l c h e mi c a l ( e x c lu d in g s u b s t a n ce s d et e r mi n e d b y t h e M i n i s te r o f H e a l th , L a b o u r an d We l f a r e a s h a v in g n o p o t e n ti a l t o c au s e d a ma g e t o h u ma n h e a l th u n d e r P a r a g r a p h 3 o f A r t i c l e 11 o f t h e L aw ) , f o r w h i c h no c o mp o s i t i o n a l st a n d a r d s a r e s ti p u l a t ed i n 5 to 7 , i s t h e s a me a s th e s u b s t a n ce n a t u r a ll y co n t ai n ed in t h e f o o d , t h e a mo u n t o f th e s u b s t a n ce c o n ta i n ed in t h e f o o d s h a l l n o t ex c e e d th e amo u n t n o r ma l l y c o n t a i n ed i n t h e f o o d . Th i s , h o w e v e r, d o e s n ot a p p l y t o f o o d s c o nta i n in g s u b st a n c es t h a t ma y c a u s e d a ma g e t o h u ma n h e a l t h a t th e a mo u n t n o rma l l y c o n t a i n e d . 9 . I n c a s e s w h e r e s u b st a n c e s u s e d a s i n g r e d ie n t s o f ag r ic u l tu r a l ch e mi c a l s a n d o th e r ch e mi c a l s u b s t a n ce s th a t a r e l i s ted in t h e f i r s t c o l u mn o f t h e f o l l o w i n g ta b l e a r e c o n t a in e d in a f o o d , t h e a mo u n t o f t h e s u b s t an c e s s h a l l n o t ex c e e d t h e a mo u n t s t ip u l at e d i n t h e th i r d co l u mn o f t h e s a me
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t a b l e a c co r d i n g t o t he f o o d ca t e g o r i e s s h o w n i n th e s e co n d co l u mn o f t h e s a me t a b l e . T h e ma x i mu m r e s i d u e l i mi t s o f s u b s t a n c e s u s e d a s i n g r e d ie n t s o f a g r i c u lt u r al c h e mi c a l s i n f o o d s ( e x c l u d i n g f o o d s l i st e d i n th e s e c o n d c o l u mn o f t h e t ab l e i n 6 ( 1 ) a n d th e s e c o n d co l u mn o f t h e t a b l e in 7 ( 1 ) ) : C o l u mn 1 AZINPHOS-METHYL A C E P H AT E C o l u mn 2 O t h e r s p i c es , d r i e d C o l u mn 3 0.5 ppm
O t h e r s p i c es , d r i e d ( e x c e p t t h e 0 . 2 p p m f r u i t o f S a n s h o ( J a p a n es e pepper)) C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 0 . 0 5 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e e d s a l a d o i l t h a t me e t t h e J a p a n e s e A g r i c u l t u r a l St a n d a r d s ( J A S ) f o r E d i b l e Ve g e t ab l e F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r e d i b l e o i l s th a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c t e r t h an J A S ) 0.01 ppm P e a n u t o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d peanut oil and peanut salad oil t h a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t ab l e F a t s a n d O il s , a n d o t h e r ed i b le o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) 0.01 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS)
AMITRAZ
ALDICARB
IPRODIONE
O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s )
0.05 ppm 0.1 ppm
IMIDACLOPRID
W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) W h e a t b r an
0.03 ppm 0.3 ppm
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ETHION
O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s )
5 ppm 3 ppm 0.3 ppm 5 ppm 10 ppm
ETHEPHON
Raisin Fig, dried
E N D O S U L FA N
C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 0 . 5 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e e d s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s ) 5 ppm 1 ppm 0.5 ppm 170 ppm 1 ppm 0.2 ppm 1 ppm 2 ppm
C A R B A RY L
R i c e b r an M i l l ed r i c e W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) Wheat germ W h e a t b r an
C o r n o i l ( ex c e p t ed i b le c o r n o il 0 . 1 p p m t h a t me e t s t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t ab l e F a t s a n d O il s , a n d o t h e r ed i b le o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) 0.2 ppm S o y b e a n o il ( e x c ep t ed i b le s o y b e a n o i l t h a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g e t ab l e F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r e d i b l e o i l s th a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c t e r t h an J A S ) To ma t o j u ic e 3 ppm
109/126
To ma t o p a st e E d i b le o li v e o i l ( li mi t e d t o v i rg in o il ) Sunflower oil (except edible s u n f l o w e r o i l th a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g et ab l e F a t s a n d O i l s , an d o t h e r ed i b l e o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c te r t h a n J A S ) Q U I N TO Z E N E O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s ) G LY P H O S AT E
10 ppm 25 ppm 0.05 ppm
0.02 ppm 0.1 ppm 2 ppm
0.05 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 0 . 0 5 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e e d s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S )
G L U F O S I N AT E
Sunflower oil (except edible s u n f l o w e r o i l th a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g et ab l e F a t s a n d O i l s , an d o t h e r ed i b l e o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c te r t h a n J A S )
0.05 ppm
0.05 ppm R a p e s e ed o i l ( e x c ep t re f i n e d r a p e s e e d o il a n d r ap e se e d s al a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S )
110/126
KRESOXIM-METHYL
Raisin E d i b le o li v e o i l ( li mi t e d t o v i rg in o li ve o i l )
2 ppm 0.7 ppm
CLETHODIM
S o y b e a n o il ( l i mi t e d to e d ib l e 0 . 5 p p m s o y b e a n o i l t h a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g e t ab l e F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r e d i b l e o i l s th a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c t e r t h an J A S ) 1 ppm S o y b e a n o il ( e x c ep t ed i b le s o y b e a n o i l t h a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g e t ab l e F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r e d i b l e o i l s th a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c t e r t h an J A S ) Sunflower oil (except edible s u n f l o w e r o i l th a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g et ab l e F a t s a n d O i l s , an d o t h e r ed i b l e o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c te r t h a n J A S ) 0.1 ppm
0.5 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 0 . 5 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) 0.5 ppm R a p e s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d r a pe s e e d oi l an d r a p e s e e d s al a d o i l t h at me e t t h e J A S f o r E d i b l e Ve g et ab l e F a t s a n d O i l s , an d o t h e r ed i b l e o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c te r t h a n J A S )
111/126
0.5 ppm R a p e s e ed o i l ( e x c ep t re f i n e d r a p e s e e d o il a n d r ap e se e d s al a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) CHLORDANE M i l l ed r i c e 0.02 ppm
S o y b e a n o il ( l i mi t e d to e d ib l e 0 . 0 2 p p m s o y b e a n o i l t h a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g e t ab l e F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r e d i b l e o i l s th a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c t e r t h an J A S ) 0.05 ppm S o y b e a n o il ( e x c ep t ed i b le s o y b e a n o i l t h a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g e t ab l e F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r e d i b l e o i l s th a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c t e r t h an J A S ) C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 0 . 0 5 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e e d s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) L i n s e e d o i l ( e x c e pt r e f i n e d l i n s e ed o il ) CHLORPYRIFOS W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) 0.05 ppm
0.1 ppm
C o r n o i l ( limi t e d t o e d i b l e c o r n 0 . 2 p p m o i l th a t me e t s t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) S o y b e a n o il ( l i mi t e d to e d ib l e 0 . 0 5 p p m s o y b e a n o i l t h a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g e t ab l e F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r e d i b l e o i l s th a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c t e r t h an J A S )
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0.05 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 0 . 0 5 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e e d s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s ) C H L O R P Y R I F O S - M E T H Y L W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) W h e a t b r an O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s ) C H L O R M E Q U AT W h e a t f l o u r ( l i mi t e d t o w h o l e grain) W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) W h e a t b r an Ry e f l o u r ( l i mi t e d t o w h o l e grain) 1 ppm 5 ppm 1 ppm 2 ppm 20 ppm 0.3 ppm
1 ppm
5 ppm
5 ppm
2 ppm
10 ppm 4 ppm
Ry e f l o u r ( e x c e p t w h o l e g r a in ) 3 p p m Ry e b r a n 10 ppm
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0.1 ppm R a p e s e ed o i l ( e x c ep t re f i n e d r a p e s e e d o il a n d r ap e se e d s al a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) F E N B U TAT I N O X I D E P l u m, d r i e d Raisin D I C H L O RV O S a n d N A L E D (as total) W h e a t f l o u r ( l i mi t e d t o w h o l e grain) W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) W h e a t b r an Wheat germ O t h e r s p i c es , d r i e d D I Q U AT M i l l ed r i c e W h e a t f l o u r ( l i mi t e d t o w h o l e grain) W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) W h e a t b r an Ve g e t ab l e oi l ( e x c ep t re f i n e d v e g et a b le o i l ) DICOFOL P l u m, d r i e d 1 0 pp m 20 ppm 2 ppm 1 ppm 10 ppm 10 ppm 0.1 ppm 0.2 ppm 2 ppm 0.5 ppm 5 ppm 0.05 ppm
3 ppm
0.5 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 0 . 5 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e e d s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S )
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O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s ) D I S U L F O TO N CYHALOTHRIN O t h e r s p i c es , d r i e d
0.1 ppm
0.05 ppm
0.1 ppm
0.05 ppm
0.02 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 0 . 0 2 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e e d s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S )
DIPHENYLAMINE CYPRODINIL
Apple juice W h e a t b r an P l u m, d r i e d Raisin
0.5 ppm 2 ppm 5 ppm 5 ppm 0.1 ppm 0.2 ppm 0.5 ppm
CYPERMETHRIN
O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s ) Ve g e t ab l e o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d v e g e t a b le o il )
DIMETHIPIN
0.1 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS)
115/126
C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 0 . 1 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e e d s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) D I M E T H O AT E E d i b le o li v e o i l ( ex c ep t v i rg i n oil) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s ) BROMIDE W h e a t f l o u r ( l i mi t e d t o w h o l e grain) P e a c h , d r i ed P l u m, d r i e d Raisin Date, dried Fig, dried Fruits (dried fruits except p e a c h , p lu m, g r a p e , d a t e a n d fig) O t h e r h e r b s, d r i e d SPINOSAD W h e a t b r an Raisin 0.05 ppm 0.5 ppm 5 ppm 0.1 ppm 50 ppm
50 ppm 20 ppm 100 ppm 100 ppm 250 ppm 30 ppm
400 ppm 2 ppm 1 ppm
0.01 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 0 . 0 1 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e e d s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r
116/126
E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) DIAZINON P l u m, d r i e d O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s ) THIODICARB and METHOMYL W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) Wheat germ W h e a t b r an 2 ppm 0.1 ppm
5 ppm
0.5 ppm 0.03 ppm
2 ppm 3 ppm
C o r n o i l ( limi t e d t o e d i b l e c o r n 0 . 0 2 p p m o i l th a t me e t s t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) S o y b e a n o il ( l i mi t e d to e d ib l e 0 . 2 p p m s o y b e a n o i l t h a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g e t ab l e F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r e d i b l e o i l s th a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c t e r t h an J A S ) 0.2 ppm S o y b e a n o il ( e x c ep t ed i b le s o y b e a n o i l t h a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g e t ab l e F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r e d i b l e o i l s th a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c t e r t h an J A S ) 0.04 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS)
117/126
TEBUCONAZOLE TEBUFENOZIDE
Raisin Raisin
3 ppm 2 ppm 2 ppm
D E LTA M E T H R I N a n d W h e a t f l o u r ( l i mi t e d t o w h o l e TRALOMETHRIN (as total) grain) W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) W h e a t b r an TERBUFOS
0.3 ppm
5 ppm
0.05 ppm R a p e s e ed o i l ( e x c ep t re f i n e d r a p e s e e d o il a n d r ap e se e d s al a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) 0.05 ppm S u n f l o w e r o i l ( l i mi t e d t o e d i b l e s u n f l o w e r o i l th a t me e t s t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) Sunflower oil (except edible s u n f l o w e r o i l th a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g et ab l e F a t s a n d O i l s , an d o t h e r ed i b l e o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c te r t h a n J A S ) 0.05 ppm
PA R A Q U AT
0.05 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) PA R AT H I O N O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s ) 0.2 ppm
0.1 ppm
0.2 ppm
118/126
PA R AT H I O N - M E T H Y L
Raisin O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s )
1 ppm 5 ppm 5 ppm 3 ppm 1 ppm 1 ppm 3 ppm 5 ppm 0.5 ppm
BIORESMETHRIN
W h e a t f l o u r ( l i mi t e d t o w h o l e grain) W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) Wheat germ W h e a t b r an
BIFENTHRIN
W h e a t f l o u r ( l i mi t e d t o w h o l e grain) W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) W h e a t b r an
0.2 ppm
2 ppm 30 ppm 10 ppm 90 ppm 80 ppm
P I P E R O N Y L B U TO X I D E
W h e a t f l o u r ( l i mi t e d t o w h o l e grain) W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) Wheat germ W h e a t b r an
C o r n o i l ( ex c e p t ed i b le c o r n o il 8 0 p p m t h a t me e t s t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t ab l e F a t s a n d O il s , a n d o t h e r ed i b le o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) To ma t o j u ic e J u i c e o f ci tr u s f r u i t s F r u i t s , d r i ed PYRIPROXYFEN 0.3 ppm 0.05 ppm 0.2 ppm
0.01 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le
119/126
o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 0 . 0 1 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e e d s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) PIRIMICARB O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) W h e a t b r an O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) PYRETHRINS VINCLOZOLIN FA M O X A D O N E F r u i t s , d r i ed O t h e r s p i c es , d r i e d W h e a t b r an Raisin FENAMIPHOS 5 ppm
PIRIMIPHOS-METHYL
15 ppm 0.5 ppm 3 ppm 0.2 ppm 0.05 ppm 0.2 ppm 5 ppm
0.05 ppm Peanut oil (except refined peanut oil and peanut salad oil t h a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t ab l e F a t s a n d O il s , a n d o t h e r ed i b le o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 0 . 0 5 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e e d s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S )
FENITROTHION
W h e a t f l o u r ( l i mi t e d t o w h o l e grain) W h e a t b r an O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits)
5 ppm 20 ppm 1 ppm
120/126
O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s ) FENTHION E d i b le o li v e o i l ( li mi t e d t o v i rg in o il ) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) W h e a t f l o u r ( l i mi t e d t o w h o l e grain) W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) W h e a t b r an
7 ppm 0.1 ppm
1 ppm
P H E N T H O AT E F E N VA L E R AT E
7 ppm 2 ppm 0.2 ppm 5 ppm
0.1 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 0 . 1 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e e d s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) F E N P R O PAT H R I N C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 3 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e e d s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) N i r a , d r i ed B a s i l , d r ied FLUSILAZOLE F L U TO L A N I L Raisin R i c e b r an M i l l ed r i c e 50 ppm 50 ppm 1 ppm 10 ppm 1 ppm
FLUDIOXONIL
121/126
PROCHLORAZ
W h e a t b r an
7 ppm
1 ppm S u n f l o w e r o i l ( l i mi t e d t o e d i b l e s u n f l o w e r o i l th a t me e t s t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) PROCYMIDONE 0.5 ppm S u n f l o w e r o i l ( l i mi t e d t o e d i b l e s u n f l o w e r o i l th a t me e t s t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) Corn flour 0.2 ppm
P R O PA R G I T E
C o r n o i l ( limi t e d t o e d i b l e c o r n 0 . 5 p p m o i l th a t me e t s t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) C o r n o i l ( ex c e p t ed i b le c o r n o il 0 . 7 p p m t h a t me e t s t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t ab l e F a t s a n d O il s , a n d o t h e r ed i b le o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) 0.3 ppm P e a n u t o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d peanut oil and peanut salad oil t h a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t ab l e F a t s a n d O il s , a n d o t h e r ed i b le o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) 0.3 ppm Peanut oil (except refined peanut oil and peanut salad oil t h a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t ab l e F a t s a n d O il s , a n d o t h e r ed i b le o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) O r a n g e j u ice A p p l e ju i c e 0.3 ppm 0.2 ppm
122/126
G r a p e j u i ce Raisin
1 ppm 12 ppm
0.2 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) PROFENOFOS 0.05 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) S o y b e a n o il ( l i mi t e d to e d ib l e 0 . 0 2 p p m s o y b e a n o i l t h a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g e t ab l e F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r e d i b l e o i l s th a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c t e r t h an J A S ) 0.5 ppm S o y b e a n o il ( e x c ep t ed i b le s o y b e a n o i l t h a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g e t ab l e F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r e d i b l e o i l s th a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c t e r t h an J A S ) PERMETHRIN W h e a t f l o u r ( l i mi t e d t o w h o l e grain) W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) Wheat germ W h e a t b r an 2 ppm 0.5 ppm 2 ppm 5 ppm
H E P TA C H L O R
0.1 ppm S o y b e a n o il ( e x c ep t ed i b le s o y b e a n o i l t h a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g e t ab l e F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r e d i b l e o i l s th a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c t e r t h an J A S )
123/126
1 ppm S u n f l o w e r o i l ( l i mi t e d t o e d i b l e s u n f l o w e r o i l th a t me e t s t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) Sunflower oil (except edible s u n f l o w e r o i l th a t me e t s t h e J A S f o r E d i b l e Ve g et ab l e F a t s a n d O i l s , an d o t h e r ed i b l e o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s e q u i v al e n t t o o r s t r i c te r t h a n J A S ) 1 ppm
0.1 ppm C o t to n s e ed o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d co t to n s e e d o il a n d c o t to n s e ed s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Veg e t a b le F a t s a n d O il s , a n d o th er e d i b le o i l s th a t me e t s t an d a rd s e q u iv a l en t t o o r s t r i c te r t h a n JAS) O t h e r s p i c es , d r i e d PENCONAZOLE PHOSALONE Raisin O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s ) P H O R AT E 0.05 ppm 0 . 5 pp m 2 ppm 2 ppm 3 ppm
0.05 ppm P e a n u t o i l ( l i mi t e d t o r e f i n e d peanut oil and peanut salad oil t h a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t ab l e F a t s a n d O il s , a n d o t h e r ed i b le o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) 0.05 ppm Peanut oil (except refined peanut oil and peanut salad oil t h a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t ab l e F a t s a n d O il s , a n d o t h e r ed i b le o i l s t h a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) 0.1 ppm
124/126
O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s ) M A L AT H I O N To ma t o j u ic e O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o fruits) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o r o o t s o r r h iz o me s ) METHAMIDOPHOS
0.5 ppm 0.1 ppm
0.01 ppm 1 ppm 2 ppm 0.5 ppm
O t h e r s p i c es , d r i e d ( e x c e p t t h e 0 . 1 p p m f r u i t o f S a n s h o ( J a p a n es e pepper)) O t h e r s p i c es , d r i e d ( l imi t e d t o seeds) E d i b le o li v e o i l ( li mi t e d t o v i rg in o il ) 5 ppm 2 ppm
M E TA L A X Y L a n d MEFENOXAM M E T H I D AT H I O N
C o t to n s e ed o i l ( e xc e pt r e f i n e d 2 p p m c o t to n s e ed o i l an d co t to n s e e d s a l a d o i l th a t me e t t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) METHOXYFENOZIDE P l u m, d r i e d Raisin METHOPRENE W h e a t f l o u r ( l i mi t e d t o w h o l e grain) W h e a t f l o u r ( e x c e p t wh o l e grain) W h e a t b r an 2 ppm 3 ppm 5 ppm 2 ppm 10 ppm
C o r n o i l ( limi t e d t o e d i b l e c o r n 0 . 2 p p m o i l th a t me e t s t h e J A S f o r E d i b le Ve g e t a b le F a t s a n d O i l s , a n d o t h e r ed i b le o il s th a t me e t s t a n d a r d s eq u i v a l en t to o r s t r i c t e r t h an J A S ) HYDROGEN PHOSPHIDE Ve g e t a b l e s , d r i e d F r u i t s , d r i ed 0.01 ppm 0.01 ppm
125/126
1 0 . I n a ddi t i on t o the p r o v i s io n s o f 6 o r 9 , w h e n f o o d p r o d u c t s a r e ma n u f a c t u r e d o r p r o ces s e d u s in g f o o d s f o r wh i c h c o mp o s i t i o n a l st an d a r d s a r e s p e ci f i e d in 6 t h r o u g h 9 , th e f oo d s us e d mu s t c o mp l y w i t h t he standards given in 6 through 9.
126/126

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Wi t h t h e c al y x e s r e mo v e d Wi t h t he hus k s r e mo v e d Wi t h t h e l ea v e s r e mo v e d , an d w i th t h e d i r t l ig h t l y r i n s e d o ff w i t h water Wi t h th e d ir t l i g h t l y r in s e d o ff w i t h water

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mi n u t e s , i s f i l t e r e d b y s u c t i o n i n to a r o t a r y v a c u u m e v a p o r a t o r u si n g filter p ap e r c o v e r ed with a o n e - c en t ime t e r- t h i c k layer of

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St a n d a r d s fo r t h e r e a g e n t s . O c t a d e c yl si l a n e - bo nde d s i l i ca gel mi n i c o l u mn (500 mg ) : A

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c o n ta i n ed , i t s h o u l d b e r i n s e d o u t w i t h et h y l a c e t at e . P h o s p h a te b u ff e r s o l u ti o n (pH 2.5): M o n o p o t a ss i u m dihydrogen

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t h e p r o c ed u r e d e s c r ib e d in c . De r i v a t iz a t ion in 4 . Pr e p a r a t i on o f test solutions. ( 1 4 ) N i t r o f u r a n s a n al y t i c a l me t h o d

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M i n i s te r i a l O r d i n a n c e a c c o r d in g t o t h e p r o v i s io n o f P a r a g r a p h 3 o f Article 2 of the Law C o n ce r n i n g Safety Assurance and Quality

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