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Licenciatura en Ingeniera Biolgica

Microbiologa

Dra. Sylvie Le Borgne

Esterilizacin de material, preparacin e inoculacin de medios de cultivos y curva de crecimiento microbiano Introduccin Objetivos El alumno conocer de forma prctica como esterilizar el equipo, por vapor de agua con presin en la autoclave. El alumno obtendr los conocimientos y tcnicas adecuadas

para la

preparacin e inoculacin de medios de cultivos, de igual forma aprender a obtener la curva de crecimiento microbiano a travez de lo experimentado en laboratorio.

Materiales Mtodos

Resultados y Discusion La preparacin del medio de cultivo fue apta para el desarrollo y crecimiento de las bacterias que se cultivaron, gracias al medio en que estas fueron sembradas (Agar EDMO) y sobre todo a la preparacin y temperatura adecuada en las que estas estuvieron.

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Fig. 1 Uso del autoclave es primordial para la inoculacin y cultivo de las bacterias.

Fig. 2 colocando el medio de cultivo para el cultivo de las bacterias.

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Fig. 3 se logro apreciar que el cultivo fue un xito en el que tanto la Escherichia Coli, Citrobacter Freaundi y Klebsidia Pneunoniae.

Se logro apreciar como es que se formaron colonias en la caja Petri, al igual que se vio el desplazamiento de estas para la formacin de las colonias, el uso de la autoclave fue de manera la mas adecuada a la temperatura necesaria para que estas bacterias lograran desarrollarse en la temperatura que estas necesitan para un buen desarrollo.

La preparacin del medio de cultivo juega un papel muy importante para el cultivo de las bacterias, ya que estas suelen ser el medio en el que estas van a desarrollarse y lograr asi mostrar como es que estas suelen estar en familias, asi logrando aprovechar cada uno de sus beneficios y utilidades que estas pueden tener para nosotros, al igual que se llega a decir que los microrganismos al igual que otros seres vivos son capaces de adaptarse a los cambios ambientales y a medida de que se han adaptado a estos cambios, estas mismas se han distribuido en una gran cantidad de hbitats, en condiciones tanto fsicas como qumicas, tambin cabe
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destacar que este tipo de metodologa es de gran ayuda para lograr aislar de microrganismos y sobre todo para estos microrganismos el estar libres logran desplazarse en tanto que en los medios slidos se multiplican localmente en el punto de la inoculacin y forman colonias cuya apariencia frecuentemente es tpica de cada especie determinada.

Conclusiones

Referencias
Joanne M. Willey, Linda M., 2008, Microbiologa de Prescott, Harley y Klein, sptima edicin, capitulo 5, 6 y 7 Pg. 99-200, Mara lvarez y Cristina Snchez, Ed. Mc Graw Hill, Madrid Espaa. Michael T., John M., Jack Parker, Brock Biologa de los Microorganismos, 10a edicin, capitulo 5 y 6 Pg. 102-161, Ed. Pearson, Madrid

Respuestas al cuestionario
1) Define los siguientes trminos: desinfeccin, desinfectante, esterilizacin, esterilizante, saneamiento, bacteriosttico. Desinfeccin: Proceso que destruye casi todos los microorganismos patgenos sobre objetos inanimados. Desinfectante: Agente, normalmente qumico, que desinfecta: en general, se emplea con objetos inanimados. Esterilizacin: Proceso por el que todos los organismos vivos, esporas visibles, virus y viroides son destruidos o eliminados de un objeto o hbitat. Esterilizante: Son sustancias qumicas que se utilizan en una cmara hermtica (similar a una autoclave). Ariana Gonzlez Ros Eder Acevedo Rodrguez Uriel Vzquez Ortiz antisepsia, antisptico, quimioterapia, germicida, bactericida,

Saneamiento: Reduccin de la poblacin microbiana de un objeto inanimado hasta niveles seguros segn los estndar de salud pblica. Antisepsia: Prevencin de una infeccin o sepsis. Antisptico: Sustancia qumica que se aplica a un tejido para evitar una infeccin al destruir o inhibir los microorganismos patgenos. Quimioterapia: Es un tratamiento sistemtico del cncer con frmacos citotxicos. Germicida: Compuesto que destruye agentes patgenos y muchos no patgenos, pero no necesariamente las endosporas bacterianas. Bactericida: Agente que destruye bacterias. Bacteriosttico: Que inhibe el crecimiento y la multiplicacin de bacterias. 2) Explica brevemente los factores (tamao y composicin de la poblacin, concentracin o intensidad del agente, duracin del tratamiento, temperatura y condiciones ambientales locales) que pueden alterar la eficacia de un agente antimicrobiano. Tamao de poblacin: La destruccin de una poblacin grande requiere ms tiempo que la de una poblacin ms pequea, ya que en cada intervalo de tiempo se destruye una proporcin de la poblacin microbiana. Composicin de la poblacin: La eficacia de un agente vara conforme a la composicin, ya que los organismos presentan una grande susceptibilidad. Concentracin o capacidad de un agente microbiano: Cuanto ms se encuentre el agente qumico, o ms intenso es el agente fsico, ms rpida ser la destruccin de estos. Por lo que la eficacia de un agente no es proporcional a la concentracin o intensidad. Duracin del tratamiento: Cuanto ms tiempo este expuesta una poblacin a un agente microbicida, ms organismo sern destruidos. Temperatura: El aumento de temperatura puede aumentar la actividad de un compuesto qumico. Condiciones ambientales locales: Las condiciones ambientales tienen factores que ofrece o colabora a la destruccin de cierto agente.

3)

Explica brevemente los mtodos de control microbiano: agentes fsicos. Agentes qumicos y mtodos mecnicos.

Agentes fsicos: Los agentes fsicos empleados con ms frecuencia para el control para el control microbiano son el calor, las bajas temperatura, la filtracin y radiacin.

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a) Calor: Mtodo ms generalizado para el control de crecimiento microbiano. Se pude aplicar la desnaturalizacin que es la aplicacin de altas temperaturas y el tiempo que se lleva para reducir 10 veces la densidad de la poblacin a una cierta temperatura es llamado tiempo de reduccin decimal. Tambin se usa el trmino de tiempo de muerte trmica, que es tiempo mnimo que se necesita para destruir todos los microorganismos. Se usan mtodos como la pasteurizacin o la autoclave. b) Bajas temperaturas: La congelacin a temperaturas de -20C, o inferiores detiene le crecimiento microbiano, a las bajas temperatura y a la ausencia de agua lquida. c) Filtracin: Se usa para esterilizar lquidos sensibles o gases. Se usan tres tipos de filtro: filtro de profundidad, el cual es utilizado para eliminar de un proceso final de esterilizacin partculas de gran tamao que influira. Otro filtro utilizado es el filtro de membrana, el cual retiene muchas de las partculas en la superficie del filtro. Y el tercer filtro de uso comn es el filtro de nucleacin, el cual utiliza la radiacin nuclear. d) Radiacin: Se utiliza radiacin electromagntica, lo cual permite controlar potencialmente el crecimiento microbiano. Se utilizan rayos X, radiacin gamma, microondas y radiacin ultravioleta. Agentes qumico: Este tipo de agentes se utiliza para la desinfeccin y la antisepsia, se usa tambin para impedir el crecimiento microbiano en los alimentos. Entre los grupos de desinfectantes que se usan, se encuentran los compuesto fenlicos, alcoholes, halgenos, metales pesados, compuestos de amoniaco cuaternario, aldehdos, gases esterilizantes y agentes quimioteraputicos. Agentes mecnico: 4) Explica porqu el calor es el agente esterilizante ms eficaz. Utilizando el concepto de tiempo de muerte trmica, nos indica el tiempo mnimo necesario para destruir todos los microorganismos a una temperatura especifica y a en condiciones factibles. Con lo anterior concluimos que es ms rpido el tipo de esterilizacin que se realiza con este mecanismo. 5) Explica en qu consiste el mtodo de pasteurizacin.

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Es un proceso que reduce la poblacin microbiana en leche y otros alimentos sensibles al calor, por lo tanto hay una aplicacin de calor. Este mtodo tambin impide el crecimiento de organismos alterantes de los lquidos perecederos. 6) Define endospora bacteriana. Cmo se eliminan las endosporas bacterianas de un material contaminado? Las endosporas bacterianas son las estructuras ms resistentes al calor que se conocen: son capaces de sobrevivir a temperaturas que rpidamente matan a clulas vegetales de la misma especia. Para eliminas ciertas endosporas de un material, se mete al autoclave, y este habitualmente alcanza una temperatura de 121C y tarda de 4 a 5 minutos para que haya una reduccin decima de endosporas. 7) Describe la cintica de muerte microbiana. La muerte de una poblacin se reduce a noveles iguales a intervalos constantes, esto quiere decir que la velocidad de destruccin disminuye debido a la supervivencia ms resistente de los microorganismos expuestos. En la grfica exponencial se muestra a los supervivientes al tiempo de exposicin, a 121C. Y nos indica que el tiempo de destruccin decimas (D) es igual a 1 minuto.

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