La mayora de los tejidos, sobre todo los de los animales, son incoloros y por ello necesitamos teirlos para

observar sus caractersticas morfolgicas. Las tinciones generales estn basadas en el uso de colorantes, sustancias mediante las cuales se consigue colorear a los tejidos. Los colorantes son normalmente hidrosolubles y se caracterizan por unirse a ciertas molculas presentes en los tejidos gracias a afinidades qumicas. Se utilizan normalmente para teir a las clulas y componentes tisulares que van a ser observados con el microscopio ptico y por ello se realizan habitualmente sobre secciones de tejido, siendo las ms utilizadas las secciones obtenidas a partir de inclusiones en parafina u obtenidas en el criostato. Los colorantes son los elementos principales de las tinciones generales. Son molculas que poseen tres componentes importantes: un esqueleto incoloro, que normalmente es un anillo aromtico de benceno, al cual se le unen dos tipos de radicales: uno que aporta el color, denominado cromforo, y otro que posibilita la unin a elementos del tejido denominado auxocromo. Al conjunto de estos tres elementos unidos en una molcula se denomina cromgeno. Segn la naturaleza qumica del cromforo hay varios tipos de colorantes: nitrosos, ozoicos, derivados de la antroquinona, derivados de la acridina, derivados de iminas quinnicas, derivados de diferrilmetano y triferrilmetano, derviados del xanteno y derivados de las talocianinas. Segn la naturaleza qumica del radical auxocromo los colorantes se clasifican en: Bsicos: son sales en las que la base aporta el color, mientras que la parte cida es incolora. Tienen apetencia por sustancias cidas del tejido como el ADN o ciertos componentes de la matriz extracelular como los glucosaminoglucanos. As, ponen de manifiesto el ncleo y el ARN, sobre todo el ARNr presente en los ribosomas por ser muy abundante, as como ciertas matrices extracelulares ricas en componentes cidos. Ejemplos de colorantes bsicos son la tionina, safranina, azul de toluidina, el azul de metileno o la hematoxilina cidos: son sales con el anin coloreado y la base incolora. Tienen apetencia por sustancias bsicas, sobre todo estructuras proteicas localizadas en el citoplasma celular y tambin el colgeno de la matriz extracelular. Ejemplos de colorantes cidos son la fucsina cida, verde rpido, naranja G o la eosina. Neutros: poseen una porcin cida y otra bsica, ambas con capacidad para aportar color. Por tanto un mismo colorante puede teir tanto las partes bsicas como las cidas de los tejidos. Por ejemplo, el eosinato de azul de metileno. Indiferentes: realmente no se unen a elementos de los tejidos por afinidad qumica sino porque se disuelven en ellos. Por ejemplo, el colorante sudn se disuelve en los lpidos y por tanto teir a las gotas de lpidos, especialmente en los adipocitos. En algunas ocasiones necesitamos resaltar elementos tisulares de manera especfica y para ello usamos colorantes que tienen apetencia por dichas estructuras. Por ejemplo, la tincin denominada azn contiene azocarmn y anilina-naranja-cido actico que tie los ncleos de rojo y sobre todo destaca el conectivo intensamente teido de azul. Otra tincin combinada es el tricrmio de Mallory que tie el colgeno de verde, las clulas musculares de rojo. Cuando un colorante se une al tejido y refleja un color diferente al que tiene en solucin se dice que ha ocurrido un fenmeno de metacromasia. Esto se debe a que las propiedades de absorcin de la luz del colorante cambian al unirse a componentes celulares. Por ejemplo, el azul de toluidina se vulve prpura cuando se une a ciertos grnulos de los mastocitos. Cuando el colorante unido al tejido tiene

el mismo color que en solucin se denomina ortocromasia. Tincin general. Una de las tinciones ms comnmente usada en histologa es la hematoxilinaeosina sobre cortes de parafina. Como vemos se usa un colorante bsico y otro cido para teir de diferente color a las estructuras cidas y bsicas de la clula. Antes de proceder a la tincin, si partimos de cortes de parafina, tenemos que llevar a cabo unos tratamientos previos sobre las secciones como es el desaparafinado, puesto que estos cortes son hidrosolubles. Si partimos de cortes de criostato esto no se lleva a cabo.

Contraste de ultrafinos. El contraste no es estrictamente una tincin, puesto que no aporta color a la muestra, pero s es un proceso para poder observar los componentes ultraestructurales de la clula, por ese motivo lo incluimos en este apartado. Aunque las secciones para microscopa electrnica se pueden observar directamente con el microscopio electrnico se suelen tratar previamente con metales pesados en un proceso denominado contraste, obteniendo as una imagen ptima de la ultraestructura celular. Tngase en cuenta que en la microscopa electrnica lo importante no es aadir sustancias coloreadas sino molculas que puedan interferir con el camino de los electrones emitidos por el microscopio y que atraviesan la muestra. Los electrones que atraviesan la muestra inciden sobre una pantalla fosforescente que emitir destellos de luz cuando reciban el impacto de un electrn y permite observar las caractersticas del tejido. Los metales pesados unidos al tejido impedirn que pasen los electrones y por tanto se ver una zona negra en la pantalla fosforescente,

mientras que en aquellas zonas de la clula donde no estn estos metales provocaran reas luminosas en dicha pantalla. Por ello todas las imgenes originales de microscopa electrnica son en blanco y negro, aunque se puedan colorear posteriormente con un ordenador.

Tinciones histoqumicas:
Vamos a incluir dentro de las tcnicas histoqumicas a aquellas que supongan una reaccin qumica en la que intervienen molculas pertenecientes al propio tejido (trataremos la deteccin de glcidos mediante lectinas y la inmunohistoqumica en apartados diferentes a ste, aunque algunos autores las incluyen como tnicas histoqumicas). El objetivo de la histoqumica es poner de manifiesto una molcula o familia de molculas presentes en una seccin histolgica y estudiar su distribucin tisular "in situ". Estas molculas son difcilmente discernibles con colorantes generales. Durante el procesamiento del tejido previo a la reaccin histoqumica, como la fijacin o la inclusin, hay que evitar daar a la molcula que queremos detectar porque de otra manera resultara en falsos negativos, es decir, no tener tincin cuando en realidad la molcula de inters s est presente en el tejido, aunque deteriorada. En algunas ocasiones es necesario realizar pasos previos a la reaccin histoqumica para descubrir la molcula que queremos detectar, por ejemplo usando un fijador adecuado, ya que de otra manera no reaccionara con los reactivos qumicos. Vamos a dividir las tcnicas histoqumicas en dos grupos: reacciones qumicas e histoqumica enzimtica.

Las reacciones qumicas consisten en la modificacin qumica de molculas del tejido para posteriormente poder colorearlas. Existen tcnicas histoqumicas para detectar glcidos, protenas y nucletidos. La tcnica histoqumica ms empleada es la reaccin de PAS (Periodic Acid Schiff). Se utiliza para la deteccin de hidratos de carbono, libres o conjugados, en los tejidos cuando estn en cantidades relativamente grandes. La modificacin qumica del tejido consiste en la oxidacin mediante el cido peridico de los enlaces entre los carbonos prximos que contienen grupos hidroxilos. Esto provoca la formacin grupos aldehdos que sern reconocidos por el reactivo de Schiff, el cual se combinar con ellos para dar un color rojizo brillante. Entre los componentes del reactivo de Schiff est la pararosanilina (un componente de la fucsina bsica) tratada con cido sulfrico. Una gran ventaja de la tincin histoqumica PAS es su capacidad de discriminacin de tipos de glcidos con pequeas modificaciones de la tcnica.