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SEPARACION DE TANINOS DESDE COMPUESTOS FENOLICOS NO TANINOS

El tanino se adsorbe en Sephadex LH 20 en alcohol mientras fenlicos pequeas eluir a partir del material. Los taninos se puede entonces se eluy con acetona acuosa. Hemos utilizado este mtodo, junto con los ensayos de azul de Prusia, para estimar los compuestos fenlicos taninos frente a no-taninos en los extractos vegetales crudos. Reactivos: 95% de etanol 70% acetona (70:30 acetona: agua) Sephadex LH-20 de Pharmacia 17-00-0-01, 25-100 micras Columna 1,5 cm x 8 cm aproximadamente. Colector de fracciones UV continua monitorizacin til para el monitoreo continuo de que el efluente, pero no es esencial.

Mtodo Extracto de la planta se aplic a la columna despus de retirar todo acetona a partir de la muestra, y reducir el volumen tanto como sea posible. Aadir etanol para mantener la muestra en solucin. Centrifugar antes de aplicar a la columna para eliminar cualquier material insoluble (se puede volver a disolver esta fraccin insoluble y ensayo con azul de Prusia; encontramos esto representa la fraccin de menos de 10% de los fenoles totales). Sobre el equivalente de 90 umol. La elucin de etanol se puede combinar, se evapor rotativamente para reducir el volumen, y se ensayaron con el ensayo de azul de Prusia para determinar no tanino fenlicos. Tambin se puede secar hasta peso constante y tanino no fenlicos determin gravimtricamente. La elucin de la columna con 70% de acetona, taninos son generalmente visibles como una banda marrn de pigmentos. Este eluato no se puede controlar en el UV debido a la absorbancia UV fuerte de acetona. La prueba de mancha azul de Prusia se puede utilizar para establecer cuando todo el tanino se ha eluido. Combinar las fracciones de tanino y el uso del azul de Prusia para determinar taninos. El tanino tambin puede determinarse gravimtricamente despus del secado hasta peso constante. Encontramos que la recuperacin total es habitualmente superior a 75%. La

mayora del material no recuperado taninos que es irreversible serbal a la columna.

SEPHADEX LH-20 Sephadex LH 20 sorbe taninos en alcohol, y los libera en acetona acuosa. La cromatografa en Sephadex es muy til para la separacin de tanino de tanino no fenlicos, o para fraccionar taninos hidrolizables. Taninos condensados (Sorghum o quebracho) se pueden preparar utilizando Sephadex LH-20. Tamao de separacin basado en no se consigue en cualquier Sephadex de taninos, ya que Sorb fenoles en el embalaje. Strumeyer y Mallin inform por primera vez en la purificacin de los taninos con Sephadex. Sephadex LH-20 puede obtenerse de Pharmacia 17-00-0-01, 25-100 micras o Sigma. Las separaciones se puede realizar en columnas o discontinua en un embudo de vidrio sinterizado grande (de vidrio sinterizado medio o grueso). Si se utilizan las columnas, deben tener conectores y tubos de plstico que son resistentes al alcohol y acetona. Equilibrar el Sephadex de acuerdo a las instrucciones del fabricante en etanol (80% en trminos absolutos, dependiendo de la purificacin que son las siguientes: no usar alcohol desnaturalizado). Si va a utilizar una columna, lavar con varios volmenes de lecho de etanol despus del empaque de la columna. Fenoles se aplican a la columna de Sephadex en etanol, y, finalmente, taninos se eluy con acetona. Si una columna se utiliza, debe reequilibrar la columna en etanol antes de usarlo nuevamente. Debido a que las perlas de Sephadex se hinchan a diferentes volmenes en los disolventes de alcohol y acuosa, es necesario utilizar mezclas de acetona / agua y etanol para llevar lentamente la columna de nuevo a etanol. Cambio directo a partir de acetona acuosa al etanol podra provocar grietas para formar en el lecho de Sephadex y hacer volver a empaquetar la columna esencial. El Sephadex se puede almacenar indefinidamente en el refrigerador (no congelador) ya sea en acetona acuosa o alcohol.

Modificado Azul de Prusia Ensayo de fenoles totales

El precio y el mtodo de Butler, en su versin modificada por HD Graham para dar una mayor estabilidad del color. Los volmenes estn tambin reducidos en este mtodo. Ahora estamos utilizando este mtodo.

Reactivos

0,02 M FeCl3 en 0,10 M de HCl 1 -. Diluir HCl concentrado a 0,10 M trayendo 8,3 ml de cido concentrado a 1 litro con agua destilada. 2 -. Hacer el cloruro frrico, disolviendo 3,24 g de cloruro frrico anhidro en 1 litro de agua destilada. Esto har que una solucin de color amarillo plido.

0,016 M K3Fe (CN) 6. Disolver 5,26 g de potasio de ferricianuro en 1 litro de agua de destilada. Esto har que una solucin de color amarillo.

Estabilizador (estable durante 1 semana en el refrigerador). Necesitas 5 ml / muestra. 30 ml de agua destilada, 10 ml de 85% H3 PO4, 10 ml de goma de 1% Arbica.

1 -. 85% H3PO4 es el cido tpico, fosfrico disponibles comercialmente. . 2 - goma de 1% Arbica se prepara mediante la suspensin de 1 g de goma Arbica (o goma de acacia; Sigma T-9752 o equivalente) en aproximadamente 80 ml de agua destilada y hervir la suspensin durante 25 min. 3 -. Vaco filtrar la mezcla con # 1 de papel y llevar el volumen del filtrado hasta 100 ml con agua destilada. Refrigere la solucin. Metodo

1.-Distribuir 0,10 muestra de ml (o un ms pequeo volumen apropiado de muestra hecha hasta 0,10 ml con el solvente de la muestra) en un tubo de ensayo 2.-Agrega que 3 ml destilaron (deionized) el agua y el vrtice la mezcla. El agua de calidad mala, sobre todo contener hierro, dar altos espacios en blanco y resultados inaceptables. 3.-a cada muestra, agregue que 1 ml K3Fe (CN) 6 sigui inmediately de 1 ml FeCl3 e inmediatamente el vrtice la mezcla. El intervalo entre el manejo de cada muestra debera ser aproximadamente 1 minuto, aunque el engranaje de distribucin exacto no sea tan crtico como con el mtodo de Mayordomo y el Precio. 4.-Quince minuto despus de la adicin de los reactivo a una muestra, aada 5 estabilizador ml a la muestra adn el vrtice. Cada muestra debera tener un tiempo de reaccin de 15 minuto antes de que el estabilizador sea aadido.

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