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Facultad de Qumica y Biologa Departamento de Biologa CURSO DE BIOQUMICA II 1er Semestre 2012

Universidad de Santiago de Chile

Calorimetra. (Randall y cols. (1998) Protein Science, 7, 1195-1200). La protena Sec B, en E. coli es tetramrica, y es una chaperona que facilita la exportacin de polipptidos al espacio periplsmico y fuera de la membrana. Su funcin es unir y distribuir precursores de protenas exportadas a los aparatos de traslocacin antes de que se enrollen en sus estructuras nativas, mantenindolos en un estado competente para el paso a travs de la membrana. Los ligandos naturales de SecB son protenas precursoras conteniendo secuencias lder amino terminal. En este trabajo, los autores, usaron titulacin calorimtrica para mostrar que SecB se une a dos ligandos (maltosa y galactosa) en dos estados: un estado sin y otro estado con secuencia lder (maduro). Los resultados se muestran en la Tabla 1.

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Universidad de Santiago de Chile

La titulacin calorimtrica del precursor maltosa unido a SecB fue llevada a cabo por sucesivas inyecciones de SecB a la solucin de 3 M de complejo precursor-protena a 7 C. Si bien estas especies de maltosa unida a la protena se enrolla mas lentamente que la protena salvaje, fue necesario agregar solucin de cloruro de guanidinio 0,3 N para que el enrollamiento sea lo suficientemente lento para llevar a cabo la titulacin. Cada inyeccin de SecB result en un efecto exotrmico antes de que el precursor maltosa-protena llegara a concentracin saturante, hasta el punto en el cual se observ el calor de dilucin endotrmico de SecB (fig. 1 izquierda). El calor de reaccin, obtenido de la integracin de la desviacin de la lnea base para cada inyeccin y corregida por sustraccin del calor de dilucin integrado, fue normalizado a moles de ligando inyectado y graficados en la Fig.1 derecha. a) Qu puede Ud. concluir a partir de los valores de Kd para SecB y sus ligandos? b) Por cul de los dos ligandos presenta mayor afinidad SecB? c) Influye en la afinidad de unin el hecho de que la protena contenga la secuencia lder (forma madura)?

En la figura que se muestra a continuacin, se observa el espectro de emisin de la 17HSD y de su coenzima, NADPH cuando fueron excitadas a una longitud de onda de (A) 295 nm y (B) 340 nm. Qu conclusiones puede obtener de la observacin de estos espectros de emisin?

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4. La enzima deshidrogenasa alcohlica de hgado es un dmero que tiene dos residuos de Trp (Trp15 y Trp314) y fue ensayada en su emisin de fluorescencia por desactivacin con ioduro (I-) por Eftink y Selvidge (Biochemistry (1982) 21,117). La figura que se muestra a continuacin corresponde a la grfica de Stern-Volmer para el apagamiento por I-. Qu conclusiones puede Ud. obtener a partir de esta grfica?

350 nm

323 nm