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MICROBIOLOGA II

Fuentes Anniev. Granado Julio. Prieto Mario. Rodrguez Yhonathan. Snchez Yojana. Yance Aumary

Bacterias
Las bacterias son microorganismos unicelulares que presentan un tamao de unos pocos micrmetros (entre 0,5 y 5 m, por lo general) y diversas formas incluyendo esferas (cocos), barras (bacilos) y hlices (espirilos). Las bacterias son procariotas y, por lo tanto, a diferencia de las clulas eucariotas (de animales, plantas, hongos, etc.), no tienen el ncleo definido ni presentan, en general, orgnulos membranosos internos. Generalmente poseen una pared celular compuesta de peptidoglicano. Muchas bacterias disponen de flagelos o de otros sistemas de desplazamiento y son mviles. Del estudio de las bacterias se encarga la bacteriologa, una rama de la microbiologa.

UNEFM rea de ciencia de la salud Programa de Medicina Seccin 2

Las bacterias

Las bacterias son microorganismos unicelulares que se reproducen por fisin binaria. La mayora son de vida libre, a excepcin de algunas que son de vida intracelular obligada. Son los organismos ms abundantes del planeta. Son ubicuas, se encuentran en todos los hbitats terrestres y acuticos; crecen hasta en los ms extremos como en los manantiales de aguas calientes y cidas, en desechos radioactivos, en las profundidades tanto del mar como de la corteza terrestre. Algunas bacterias pueden incluso sobrevivir en las condiciones extremas del espacio exterior. El tamao de las bacterias oscila entre las 0.5 y 3 m, pudiendo llegar en algunos tipos a 10 m. Las bacterias de inters mdico tienen un tamao entre 0.4 y 2 m. Solo son visibles entonces, al microscopio ptico o microscopio electrnico.

Morfologa La forma de las bacterias al microscopio est determinada por la rigidez de su pared celular. Bsicamente, se diferencian segn su forma en cocos (esfricas u ovaladas), bacilos (cilndrica o de bastones; rectos o curvos) y espirilos (espiral). La forma de las bacterias es muy variada y, a menudo, una misma especie adopta distintos tipos morfolgicos, lo que se conoce como pleomorfismo. Las bacterias pueden mantenerse unidas unas con otras despus de la divisin celular, pero conservando siempre la independencia celular. Si el plano de divisin es nico, podemos encontrar diplococos o cocos en cadena (microorganismos del gnero Streptococcus). Si los planos de divisin son muchos, los cocos pueden agruparse en ttradas o en racimos (Staphylococcus). Los bacilos pueden ser muy cortos (cocobacilos) o muy largos. Sus extremos pueden ser redondeados o rectos; pueden estar aislados, en cadenas, en filamentos o formando letras chinas (Corynebacterium). Los bacilos curvos pueden tener forma de coma (Vibrio cholerae). La morfologa bacteriana debe ser observada con el microscopio ptico o el microscopio electrnico, dado el tamao pequeo de estos microorganismos. El ms usado en el laboratorio es el microscopio ptico de campo claro, pero existen otros como el microscopio ptico de campo oscuro en los que los organismos aparecen brillantes en fondo oscuro. Este microscopio permite la visualizacin de bacterias difciles de colorear como el Treponema pallidum, agente de la sfilis. Las bacterias pueden observarse sin tincin (examen en fresco) si se las coloca en glicerol o soluciones no acuosas que aumenten el ndice de refraccin o con tincin usando distintas coloraciones que mejoran su visualizacin ya que son clulas incoloras. Dichas tinciones se basan en la afinidad que presentan los colorantes por las estructuras bacterianas. Los colorantes

catinicos por ejemplo, son atrados por los componentes de carga negativa como los cidos nucleicos y los polisacridos. Ejemplo de este tipo son: el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Las clulas poseen unas estructuras filamentosas que sirve para su movilizacin. Tiene una estructura nica, completamente diferente de los dems sistemas presentes en otros organismos, como los cilios. Presenta una similitud notable con los sistemas mecnicos artificiales, pues es una compleja estructura compuesta de varios elementos (piezas) y que rota como una hlice. Distintas especies de bacterias tienen diferente nmero y localizacin de los flagelos. Las bacterias monotricas presentan un solo flagelo (por ejemplo, Vibrio cholerae). Las bacterias lofotricas tienen mltiples flagelos situados en el mismo punto (o en dos puntos opuestos) que actan en concierto para conducir a las bacteria en una sola direccin. En muchos casos, las bases de los mltiples flagelos estn rodeadas de una regin especializada de la membrana plasmtica, denominada membrana polar. Las bacterias anfitricas tienen un solo flagelo en cada uno de los dos extremos opuestos (un solo flagelo opera a la vez, permitiendo a la bacteria revertir rpidamente el movimiento cambiando el flagelo que est activo). Las bacterias peritricas tienen flagelos que se proyectan en todas las direcciones (por ejemplo, Escherichia coli).

Fisiologa Nutricin Fuente de energa Existe un grupo de organismos capaces de utilizar las radiaciones solares (energa luminosa), como fuente de energa para su crecimiento. Reciben el nombre de bacterias fototrofas. Dichos organismos son capaces de utilizar dicha energa luminosa y transformarla en qumica (ATP), con la aparicin de un poder reductor En el caso de los microorganismos, si el RHz es un compuesto inorgnico (como el azufre), reciben el nombre de fotolitotrofos. Si es un compuesto orgnico. Recibe el nombre de fotoorganotrofos. Si la fuente de energa no es la luminosa, sino de carcter qumico por reacciones de oxido-reduccin, se habla de bacterias quimiotrofas. Igualmente, si el radical dador de electrones es un compuesto mineral, se denominan quimiolitotrofas y, si es un compuesto orgnico quimioorganotrofas. Prcticamente, casi todas las bacterias del hombre se pueden incluir en el grupo de quimioorganotrofas.

Fuente de carbono Desde el punto de vista del poder de sntesis, se pueden dividir las bacterias en: Auttrofas: Estn dotadas de un gran poder de sntesis, ya que son capaces de formar prtidos, glcidos, lpidos, etc., a partir de compuestos muy simples, como H20, sales minerales y, fundamentalmente, CO2, Pueden ser estrictas si no utilizan la materia orgnica y facultativas si, adems, son capaces de utilizarla. Hetertrofas: Son incapaces de sintetizar sus propios constituyentes a partir de compuestos inorgnicos y necesitan compuestos orgnicos de carbona para obtener energa suficiente.

Aceptor final de electrones Tambin pueden dividirse las bacterias segn el ultimo aceptor de electrones, en dos clases principales: aerobias, que emplean el oxigeno molecular como ultimo aceptor de electrones, y anaerobias. Que, en lugar de oxigeno. Utilizan alguna otra molcula. Las que pueden utilizar ambas formas se denominan facultativas (v. mas adelante).

Gentica Reproduccin asexual. La reproduccin asexual es el sistema ms primitivo de reproduccin, el primero en aparecer en el curso evolutivo y por lo tanto el ms extendido. Consideramos ste un sistema asexual pues, a partir de una sola clula original se originan dos individuos genticamente idnticos entre si, es decir clones. La ventaja del primer sistema, reproduccin asexual es su rapidez: si una bacteria est viviendo en un ambiente adecuado puede dividirse en unos veinte minutos y generar grandes poblaciones. El mtodo ms habitual es la biparticin o fisin binaria en la que, a partir de una clula original, resultan dos clulas hijas aproxi-madamente iguales en tamao y con la misma dotacin gentica: una copia de la molcula de ADN circular propia de la clula madre en cada una de ellas. Podemos considerar los siguientes pasos: 1. El proceso se inicia cuando la clula ha aumentado algo su tamao y duplica su ADN. 2. Las dos molculas resultantes permanecen unidas a la membrana por sitios cercanos. 3. La clula sintetiza los componentes fundamentales de la membrana: lpidos y protenas que se incorporan a la zona situada entre los dos puntos de unin de las

molculas de ADN. Por lo tanto la clula se alarga, especialmente en esa zona central que separa los puntos de insercin del ADN. 4. Aparece entonces en la mitad de la clula una invaginacin de las envueltas externas que por estrangulacin progresa y divide al citoplasma en dos partes. Al mismo tiempo, nuevo material de la pared se deposita en la cara externa de la membrana. 5. En poco tiempo la clula habr formado dos clulas hijas que sern clones, individuos genticamente igua-les. Afortunadamente para las bacterias la elevada frecuencia de mutaciones permite que se genere una cierta diversidad, lo que resulta fundamental para conseguir su extraordinaria adaptabilidad a los cambios ambientales.

Reproduccin sexual. Las bacterias, en sentido estricto, no poseen mecanismos de reproduccin sexual. No se forman gametos, ni estos se fusionan en un zigoto. Sin embargo si que tienen mecanismos de intercambio de genes que conllevan la aparicin de bacterias hijas con caractersticas diferentes a las originales, lo que es una de las principales consecuencias de los procesos sexuales.

Existen en los procariotas tres mecanismos principales de intercambio de genes: Conjugacin: se realiza a travs de pequeos fragmentos de ADN circula denominados plsmidos. Estos plsmidos de fertilidad se denominan comnmente plsmidos F. Una bacteria con este plsmido (F+) actuar como bacteria donadora. Las bacterias que no tienen este plsmido (F") actan como receptoras. El proceso ms habitual de conjugacin es la transferencia del ADN del plsmido de una clula F+ a una F. Esto ocurre a travs de un pilus sexual de la clula donadora que sirve para engancharse a la receptora y tirar de ella para aproximarla. Luego se forma un puente citoplasmtico entre las dos clu-las. El ADN del plsmido F se replica y una copia se transfiere por el puente a la clula receptora. Despus las clulas, ahora las dos son donadoras, se separan. En algunas bacterias donadoras el plsmido F puede integrarse en el genoma bacteriano. En este estado el plsmido F contina provocando la conjugacin y, al hacerlo, puede arrastrar consigo una buena parte del cromosoma bacteriano y transferir genes de la bacteria donadora a la receptora. Transduccin: el material gentico de una bacteria es llevado hasta otra por medio de un virus que ataca bacterias (bacterifago). Puesto que los virus se integran habitualmente en el cromosoma bacteriano, cuando este se replica y pasa a otras bacterias puede llevar fragmentos del ADN de la primera, actuando como un vector de reproduccin parasexual. Transformacin. Este proceso se ha observado in vitro: algunas especies bacterianas son capaces de introducir ADN presente en su medio extracelular e incorporarlo a su genoma. Se duda

de la importancia de este fenmeno in vivo, pues el ADN aislado, fuera de un organismo es extraordinariamente raro en la naturaleza. Tiene importancia en los procesos de ingeniera gentica.

La Ingeniera Gentica Es una rama de la gentica que se concentra en el estudio del ADN, pero con el fin su manipulacin. En otras palabras, es la manipulacin gentica de organismos con un propsito predeterminado. En este punto se profundizar el conocimiento sobre los mtodos de manipulacin gnica. El fin con el cual se realizan dichas manipulaciones se tratar ms adelante, cuando se analicen los alcances de esta ciencia.

Enzimas de restriccin. Como ya se dijo, la IG consiste la manipulacin del ADN. En este proceso son muy importantes las llamadas enzimas de restriccin, producidas por varias bacterias. Estas enzimas tienen la capacidad de reconocer una secuencia determinada de nucletidos y extraerla del resto de la cadena. Esta secuencia, que se denomina Restriction Fragment Lenght Polymophism o RLPM, puede volver a colocarse con la ayuda de otra clase de enzimas, las ligasas (Sintetasas). Anlogamente, la enzima de restriccin se convierte en una "tijera de ADN", y la ligasa en el "pegamento". Por lo tanto, es posible quitar un gen de la cadena principal y en su lugar colocar otro.

Vectores. En el proceso de manipulacin tambin son importantes los vectores: partes de ADN que se pueden autorreplicar con independencia del ADN de la clula husped donde crecen. Estos vectores permiten obtener mltiples copias de un trozo especfico de ADN, lo que proporciona una gran cantidad de material fiable con el que trabajar. El proceso de transformacin de una porcin de ADN en un vector se denomina clonacin. Pero el concepto de clonacin que "circula" y est en boca de todos es ms amplio: se trata de "fabricar", por medios naturales o artificiales, individuos genticamente idnticos. ADN polimerasa. (Las ADN polimerasas intervienen en la replicacin del ADN para dar a cada clula hija una copia del ADN original en el proceso de la mitosis)

Otro mtodo para la produccin de rplicas de ADN descubierto recientemente es el de la utilizacin de la enzima polimerasa. ste mtodo, que consiste en una verdadera reaccin en cadena, es ms rpido, fcil de realizar y econmico que la tcnica de vectores.

Accin de los agentes fisico-quimicos sobre los microrganismos Incluso cuando se hallan presentes todas las sustancias nutritivas requeridas, el crecimiento y desarrollo de los microrganismos dependen de determinadas condiciones: concentracin de iones hidrogeno, Temperatura, presin osmtica, presencia de oxigeno, Presencia de CO2, influencia de humedad a desecacin, influencia de la luz y otras radiaciones, etc. Concentracin de iones hidrogeno Un pH adecuado es un factor esencial en el metabolismo y crecimiento de las bacterias. La mayora de las comensales y patgenas crecen mejor en un medio neutro a ligeramente alcalino (7,2-7,6). Algunas bacterias, sin embargo, se desarrollan en presencia de un elevado grado de acidez y se denominan acidfilas (p. ej., Lactobacillus). Otras. Por el contrario, son muy sensibles a los cidos, pero tolerantes a los lcalis (p. ej., Vibriu cholerae). Concentraciones fuertes de carcter acido a alcalino, por ejemplo. 5 % de acido clorhdrico a hidrxido sdico, respectivamente, son letales para la mayora de los microorganismos. Par ella es necesaria la adicin de determinados compuestos a los medias de cultivo con cierto efecto tampn; as, los fosfatos inorgnicos se emplean en dicha accin para pH superiores a 7,2 Y el carbonato clcico a bicarbonato sdico en los casas de mayor produccin de cidos.

Temperatura Interviene en dos aspectos, en el crecimiento de los microorganismos y en su viabilidad. Para cada especie hay una temperatura definida, que puede variar entre los lmites mximos y mnimos, y existen diversos puntos intermedios, entre los cuales se encuentra la temperatura optima. En la mayora de las bacterias parasitas del hombre, la temperatura ptima corresponde a la de su hbitat natural, es decir, 37C. En general, las bacterias del suelo y del agua tienen una temperatura 6ptima, que oscila entre 20 y 45C; se denominan mesfilas. Algunas de ellas tienen un amplio grado de desviacin (p. ej., Pseudomonas aeruginosa puede crecer entre 5 y 43C), mientras que otras presentan un rango mas carta (Neisseria gonorrhoeae, entre 30 y 39C). Bacterias psicrfilas son aquellos organismos preponderantes marinas cuya temperatura ptima esta par debajo de los 20C Y termfilas, aquellos cuyo crecimiento puede variar de 55 a

80C Y tienen un mnimo entre 20 y 40C (termfilas facultativas) a par encima de los 40C (termfilas estrictas).

Presin osmtica Como resultado de la presencia de la membrana citoplsmica, las bacterias, igual que otras clulas, estn sujetas a los fenmenos osmticos. En general suelen ser bastante tolerantes. Muchas crecen en soluciones can un contenido en sales del 0,1 al 1 %, pero otras, denominadas halofilas (u osmofilas), pueden crecer a ms altas concentraciones, incluso cerca de la saturacin. La rpida exposicin de bacterias a altas concentraciones salinas (2 a 25 % de cloruro sdico) puede causar plasmlisis, y nicamente algunas bacterias marinas dependen para su existencia de determinadas concentraciones salinas y se lisan cuando se las traslada del agua de mar a agua destilada. Las bacterias halofilas, en su mayora, no son patgenas. Pero existen bacterias defectivas en cuanto a su pared celular (formas L), que requieren concentraciones hipertnicas de sales para sobrevivir. En estos casos, para poder aislarlas en los productos patolgicos (sangre), es necesario cultivarlas en medias hipertnicos (Bacteroides).

Presencia de oxigeno Todas las bacterias aerobias obligadas necesitan oxigeno como aceptar de electrones. En los medios de cultivo lquidos de grosor considerable, las bacterias aerobias solo crecen en la superficie y cada vez las condiciones se hacen mas anaerobias, a medida que se desciende de dicha superficie. Para que los microrganismos aerobios tambin puedan crecer en las capas profundas de un cultivo liquido, este tiene que airearse, lo cual puede hacerse con una mezcla de oxigeno, nitrgeno y anhdrido carbnico. Se puede obtener una gran superficie de contacta entre las fases liquida y gaseosa, para aumentar la aireacin, par varios mtodos: cultivo en superficies planas, moviendo el liquido par media de agitadores; por rotacin de los frascos segn su eje longitudinal; pasando aire a presin por la columna liquida, y por percolacin a agitacin mecnica. La exclusin de oxigeno atmosfrico, por el contrario, es una condicin necesaria para las bacterias anaerobias estrictas. Para ella, se puede recurrir a soluciones en las que se ha hecho el vaco, frascos cerrados sin burbujas de aire, bombas de vaco, medias que absorban el oxigeno (pirogalol) a medios reductores (tioglicolato, cistena). En cualquiera de los casos, para el desarrollo de las bacterias, debe siempre tenerse en cuenta la necesidad a no de la existencia del oxigeno.

Presencia de CO2

Todas las bacterias requieren la presencia de pequeas cantidades de dixido de carbono para su crecimiento, que normalmente proviene de la atmosfera a de reacciones de oxidacin y fermentacin de la propia clula. Otras bacterias (p. ej., Brucella abortus), por el contrario, requieren mayores concentraciones de este compuesto (5 a 10 %), que deben ser suministradas creando un ambiente definido en el medio de cultivo (microaerofilia).

Influencia de la humedad y desecacin Las bacterias estn constituidas por una elevada proporcin (80 %) de agua y precisan, adems, un ambiente hmedo para su desarrollo. El aire excesivamente seco es lesivo para muchos microorganismos, y as Neisseria, Treponema y algunos tipos de virus mueren rpidamente, mientras que otros, como Staphylococcus aureus a algunos poxvirus, pueden sobrevivir durante semanas a meses. Los esporos de determinadas bacterias, como, par ejemplo, Bacillus anthracis, pueden sobrevivir, de 5 a 6 aos en el suelo. Adems, ciertas bacterias no esporuladas pueden sobrevivir en ambientes secos, si dicha desecacin se lleva a cabo de una forma rpida y completa, y preferentemente si se hace el vaco y se almacenan en ampollas de vidrio cerrado. Esta es la base de la liofilizacin, mtodo capaz de conservar los cultivos bacterianos en el laboratorio.

Influencia de la luz y otras radiaciones La oscuridad proporciona condiciones favorables de crecimiento. Por el contrario, los rayos ultravioleta suministrados directamente por la luz del solo por una lmpara de mercurio destruyen los microorganismos; lo mismo ocurre con las radiaciones ionizantes.