Terapia genica de las enfermedades neurodegenerativas Las neuronas del SNC generalmente son celulas post-mittica altamente diferenciadas,

la cuya capacidad de proliferacin trmina completamente despues del nascimento. Ademas, un vasto numero de neuronas se mueren progressivamente durante el curso de la vida. Algunos estudios indican que cada persona tiene, al nascimento, mas o menos 19-22 mil miliones de neuronas neocorticales, de los cual si pierden, en condiciones fisiologica, mas de 80.000 por dia, por consiguiente una prdida global que, a la edad de 80 anos, reduce de mas del 10% el contenido neuronal neocortical. Por otro lado, en los adultos, fuera de pocas areas donde en apariencia existen celulas potencialmente en grado de proliferar y diferenciarse en nueva neuronas, la mayoria de las regiones del cerebro no tiene alguna capacidad de rigeneracion. Ademas de ese agotamiento neuronal fisiologico, una serie de enfermedades especificas pueden causar una aceleracin patologica de las prdida de neuronas, determinando entonces el surgir de enfermedades neurodegenerativas. Estas estan caracterizada por un perdida neuronal mas o menos extendida, que puede afectar diferentes tipos neuronales o cirtas areas del cerebro. El progresivo envejecimiento general de la poblacin est aumentando mucho la prevalencia de las enfermedades neurodegenerativas, que juntas con las enfermedades neurologicas de origen vascular, son consideradas entre de las primeras 4 causa de muerte o invalididad en los paises occidentales. Por ejemplo, se estima que entre 6 y 7 miliones de personas sean afectada por el Alzheimer. En la mayoria de las enfermedades neurodegenerativas se escapa todavia la causa raiz de la acelerada perdida neuronal, aunque en algunas enfermedades sea conocido el mecanismo patogenetico responsable del su desarollo. Independientemente de la causa, todavia, un objetivo teraputico comun a todas las neurodegeneraciones es lo del preservar el mas tiempo posible la vitalidad y las funzione de las neuronas que quedan. La descubiertas de que algunas citoquinas ejercen un papel trofico y de protecin sobre las neuronas. Ya entre el 1920 y el 1940 se observio que la sobravivencia de las neuronas es dependiente por la liberacin de factores solubile, producidos en cuantidad limitada, por parte de los tepido diana de sus proyecciones axonales. Estos factores son estado nombrados en origen con el nombre de factores neurotroficos. Esta palabra hoy incluye mucha citoquinas que afectan selectivamente las neuronas y factores que ejercen varias funciones en otros districtos. Los factores neurotroficos jugan un papel fundamental en el desarollo del SN; en los organismos adultos, algunos de estos ejercen una funcion atniapoptotica. Y entonces son importantes para el mantenimento de la sobrevivencia neuronal. Se vio qque en modelos animales la sus soministracin puede prevenir la muerte neuronal y mejorar significativamente la sintomatologia patologica. Debido a esas observaciones si probo a sub ministrar estos factores como proteinas ricombinantes solubile. Estos factores, sin embargo, no pasan la bariera hematoencefalica y deben ser subministrados por infusion en el lquido cefalorachideo; por eso la utilizacion de la terapia genica para la producion limitada solo a las regiones querrida, es de grande interes. Terapia genica del Parkinson. El Parkinson es una condicin patologica comun, que tiene una prevalencia de 1-3% despues de los 65 anos y es entonces la secunda patologia neurologica mas frequente. La enfermedad es generalmente debida a la siguiente perdida de neuronas dopaminergicas en la pars compacta de la sub stantia nigra, uno de los nucleos basales que juega un papel fundamental en el sistema extrapiramidal del control motor. Los nucleos basal incluyen una serie de formaciones subcorticales, extensamente interconectada entre ellas, las cuyas principales aferencias tienen su origen en la cortecia cerebral y en el talamo y a las cuya proyecciones son dirigidas a las cortecia cerebral a traves del talamo y algunos nucleos del tronco

encefalico. Ellos, entonces, son los principales componentes de los circuitos corticosubcorticales que interconectan la cortecia cerebral y el talamo. Los nucleos basales incluyen 4 formaciones nervosa: 1. El cuerpo estriado, csotituido por tres subdivisiones: el nucleo caudato, el putament y el cuerpo estriado ventral. 2. El globus palidus, est dividido en un segmento exterior y uno interior; lo interiore s funzionalmente parecido al pars reticolata de la sub stantia nigra, y las neuronas de ambas las estructuras utilizan como neurotrasmectitor el acido - aminobutirico (GABA) 3. La substantia nigra, que se encuentra en el mesencefalo, compuesta por una pars reticolata y una pars compacta; las neuronas de la pars compacta utilizan dopamina, rientra lo de la reticolata GABA. 4. El nucleo subtalamico es estrectamente enlazado anatomicamente con ambos los segmentos del palido y con la sub stancia nigra; la sus neuronas son Glutamatergicos y exitatorios. Entre los nucleos basal, es el cuerpo estriado lo que recibe las aferencias neuronales principales de la cortecia cerebral, del talamo, del mesencefalo y de los nucleos del renfe. Los dos nucleos de donde originan las vias eferentes de los nucleosbasales son el palido interior y la pars reticulada de la sub stancia nigra. Las neuronas que proyectan de esta extructura inhiben tonicamente los sus nucleos diana en el talamo y en el trnco encefalico. El cuerpo estriado(nucleos afferentes) y el palido interior y la pars reticolata de la sub subtancia nigra(nucleos eferentes) son interconectados por dos vias, que tienen una funcion de modulacin opuesta los senales inhibitorios en salida. La via directa esta compuesta por las neuronas GABAergici que directamente conectan el cuerpo estriado con los nucleos eferentes; la via indirecta conecte inicialmete el cuerpo estriado con el palio exterior; y al fin los nucleos subtalamicos con los dos nucleos efernetes. LA via directa y la indirecta tienen dos efecot opuesto: la via directa inhibe los dos nucleos eferentes, y en consecuencia activa el talamo y aumenta la actividad, de la proyecciones talamo corticales. Debido a eso la activacin de las via directas facilita el movimento, rientra que la activacin de la indirecta lo inhibe. Las neuronas dopaminergicas de la pars compacta de la sub stancia nigra pryectan hacia el cuerpo estriado y influencian de maniera diferente las vias dircta y indirecta. Las neuronas del cuerpo estriado que siguen la via directa tienen receptores para la dopamina del tipo D1, que facilitan la trasmicin sinaptica, rientra que las neuronas de la via indirecta tienen receptores del tipo 2D, que en vez la reducen. Noobstante estas opuestas aciones sinapticas,sin embargo, debido al hecho de que las vias directas y indirectas tienen funciones contrarias, el resultado final de las aferencias dopaminergicas es en ambos los casos lo mismo, o sea una riducion de la inhibicin de las neuronas talamo-corticales y una siguente facilitacin de los movimientos empezados por la cprtecia. En el morbo de Parkinson va a faltar la actividad dopaminergica en el cuerpo estriado y aumenta entonces las actividades de las neuronas eferentes(palido interior y pars reticulata). A su vez, aumenta la inhibicin de las neuronas talamo-corticales el cuya tarea es la de facilitar el comienzo del movimento. Las sintomas de la enfermedad empezan a manifiestarse cuando el niviel de las dopaminas en el cuero estriado se vuelven menos del 40% del normal. Esencialmente consisten en una caratteristica triada, que distingue la sindrome extrapiramidal, o sea: 1. Temblor en riposo, generalmente de los artes, que se reduce cuando el movimento se vuelve volontario. 2. Rigidez muscular, que determina un caracteristico pattern de movimientos y de postura y una exprecion amimica de la cara 3. Bradichinesia, que causa dificoldad a empezar y parar los movimientos, y en general ipocinesi. Muchos paziente pueden ser afectados tambien por deprecion y otras sintomas neuropsiquiatricas, probablemente debidas de otroas vias dopaminergicas del cerebro.

La terapia de sostitucion con L3,4-diidroxifenilalanina (L-DOPA), un precursor de la dopamina, esta empleada en los estadios avanzados de la enfermedad y es muy util porque mejora mucho la achinesia, la rigidez y el desbalance postural de los paziente; la soministracion juntas con farmacos anticolinergicos es utilizada para controlar tambien el temblor en riposo. La L-DOPA es generalmente administrada con un inhibidor de la dopa-carboxilasa, que previene la distrucion de la L-DOPA en el snagre y en los tejido perifericos, y aumenta entonces la cuantidad de farmaco capaz de cruzar la barrera hematoencefalica. Despues de 5-10 anos de terapia con la L-DOPA, los pacientes, generalmente, se vuelven meno tolerantes al farmaco y el suyos tratamiento se vuelve complicado. En los paziente con enfermedad avanzadas y sintomas que no se pueden controlar con terapa farmacologica, la cirurgia ofrece una extrema opcion terapeutica. Esta consite en la creacion de una pequena lesion a nivel del globo palido interior, debajo de guia estereotactica, por inhibir esta region. Con el desarollo de la DBS(deep brain stimulation) un electrodo esta implantado en la region que debe ser estimulada. El morbo de Parkinson mostra rasgos interesantes por la terapia genica. La enfermedad est caracterizada prevalentemente por un difecto de una region cerebral (la sub stantia nigra), alcanzable con las tecnicas estereoticas, que podria aiudar a la inoculacin dirigida de vectores que llevan genes con funciones terapeuticas. En estos ultimos anos tres esperimentaciones han alcanzado la fase clinica. Estas tres han obtenido vantaje por las propriedades de los vectores AAV los cuales, inoculados por via intracranial, son capaz de trasducir neuronas de maniera selective y con alta eficiencia y llenvar en estas genes que podran ser exprimidos por largo tiempo. Los tres metodos perseguidos preveden la inoculacion, debajo de guia estereobtica, in regiones cerebrales especificas de tres diferentes vectores AAV serotipo 2. 1. La primera esperimentacin de terapia genica ha visto la trasferencia del gen que codifica por la decarboxilasa del acido glutamico(GAD), en el nucleo subtalamico. El GAD es el enzima de limitacion en la via de sintesi del GABA. En el Parkinson, los dos principales nucleos eferentes inhibitoresde los ganglios basales, son continuamente estmulados largo la via indirecta por el nucleo subtalamico Hiperactivo y disinhibido, las cuales terminaciones axonales liberan el neurotrasmectitor exitator glutamato. La hiperproducin de GABA en consecuencia a latrasferencia del gen GAD en el nucleo subtalamico convierte si mismo da exitatorio a inibitorio, normalizzando entonces las eferencias total del circuito de los ganglios basales. In una primera esperimentacin, la inoculacin de un vector AAV-GAD en el nucleo subtalamico ha llevado a una mejoria significativa de la funcion motor, sin sintomas colaterales o rispuesta inmune. 2. Un secunda terapia genica por el Parkinson est porbando a prevenir o decelerando la degeneracin de las neuronas de la sub stancia nigra. Ha sido empleado un AAV para la trasferecia del gen de la neurturina (NTN) a las neuronas del putamen, que son la principal diana de las axonas dopaminergica. LaNTN es un factor de crescimiento que hace parte de la familia de las GDNF, con la cual comparte los receptores y los mecanismos de accin. Una esperimentacion de fase 1 basada en la inoculacin de un vector AAV2 que lleva el gen de la NTN hacia el putamen se ha mostrado segura y ha dado resultados de eficacia positivos. 3. Una otra esperimentacion ha visto el utilizo de AAV2 por la trasferencia del gen que codifica la enzima decarboxilasa de los L-aminoacidos aromaticos(AADC) en el cuerpo estriado con el fin de aumentar la conversin de la L-DOPA proporzionada farmacologicamente como dopamina. La enzima AADC convierte la L-DOPA en dopamina sea en las neuronas del cuerpo estriado que en las neuronas dopaminergiacas restantes en la sub stantia nigra. Durante el curso natural de la enfermedad, los niveles de AADC bajan, por eso entonces son necesarias dosis siempre majores de L-DOPA para que se queden terapeuticos los niveles de dopamina. Sin embargo, la L-DOPA proporcionada farmacologicamente a los paziente a dosis elevadas lleva a la aparici de efectos colaterales graves. LA trasferencia del gen AADC en el cuerpo estriado es capaz de aumentar la

sensibilidad a la L-DOPA y de aumentar entonces la ventana terapeutica en la ca ese farmaco puede ser empleado.