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Mtodos de Inmunizacin y Tipos de Vacunas Facultad de Medicina veterinaria y Zootecnia UAT

Lorena Citlalli Ledn Morales 24 de abril de 2012

NDICE

ndice
1. Mtodos de Inmunizacin y Tipos de Vacunas 1.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.2. Tipos de Inmunizacin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.2.1. Inmunizacin pasiva . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.2.2. Inmunidad activa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.3. Tipos de Vacunas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.3.1. Vacunas con microorganismos atenuados . . . . . . . 1.3.2. Vacunas de microorganismos desactivados o muertos 1.3.3. Vacunas subunitarias . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.3.4. Vacunas conjugadas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.3.5. Vacunas de DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.3.6. Vacunas con vectores recombinantes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 2 3 5 7 9 11 13 14 15 18 20

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS

1.
1.1.

Mtodos de Inmunizacin y Tipos de Vacunas


Introduccin

Las raices de la inmunologa se encuentran en las primeras pruebas de vacunacin que realizaron Edward Jenner y Louis Pasteur. Desde entonces se han desarrollado vacunas para muchas enfermedades que antes eran un problema para la raza humana. Por ejemplo, se ha reducido la presencia de enfermedades como difteria, sarampin, paperas, poliomelitis y ttanos a medida que se ha extendido la vacunacin contra dichos padecimientos. Un caso de notable importancia es el de la viruela, ya que desde octubre de 1977 no se ha informado en ningn lugar del mundo acerca de un caso de viruela adquirida de manera natural y de la misma manera se espera la erradicacin de la poliomelitis. Sin embargo, an se requieren vacunas contra otras enfermedades tales como paludismo, tuberculosis, SIDA, etc. Adems, tambin debe de tenerse en cuenta la necesidad de mejorar la seguridad y ecacia de las vacunas disponibles en la actualidad y encontrar modos de disminuir su costo y hacerlas llegar ecientemente a las personas que las requieren, principalmente en pases en vas de desarrollo. En este tenor, la Organizacin mundial de la Salud (OMS) estima que millones de muertes infantiles en el mundo se deben a enfermedades que podran prevenirse con las vacunas existentes, si las tuvieran a su disposicin. Otro aspecto que debe de tenerse en cuenta es que: para que se desarrolle una vacuna que pueda aprobarse para la aplicacin humana, manufacturarse a un costo razonable y embarcarse ecientemente a las poblaciones en riesgo, debe de seguirse un camino costoso, largo y tedioso. Lo anterior se debe a la regulacin estricta de los procedimientos para la fabricacin de los materiales que pueden administrarse a los seres humanos, y lo mismo se aplica a los protocolos para el ensayo de estos materiales en estudios clnicos. Inclusive, las vacunas candidatas que superan el escrutinio inicial y se aprueban para realizar los estudios clnicos no cuentan con la garanta para llegar a la aplicacin generalizada, debido a que la experiencia ha demostrado que no todas las vacunas candidatas que tuvieron buenos resultados en los estudios de laboratorio y en los animales, previenen la enfermedad en los humanos. Algunas vacunas potenciales producen efectos adversos inaceptables, y algunas ms pueden incluso empeorar los trastornos que deberan prevenir. Las vacunas de virus vivos representan una amenaza especial para quienes experimentan inmunodeciencia primaria o adquirida, por lo que se requiere investigacin con pruebas estrictas debido a que las vacunas se administran a grandes cantidades de personas sanas. Por lo tanto, los efectos adversos, an cuando sean de baja frecuencia, deben ponderarse contra el benecio potencial de la proteccin conferida por la vacuna. El desarrollo de una vacuna se inicia con investigacin bsica. Adems, los progesos recientes en inmunologa y biologa molecular han permitido el desarrollo de nuevas vacunas ecaces y la institucin de medidas promisorias para encontrar nuevas vacunas candidatas. La identicacin de las diferencias en los eptopos reconocidos por las clulas T y B ha permitido empezar a disear vacunas candidatas para maximizar la activacin tanto de inmunorreacciones celulares como humorales. Conforme se revelaron las diferencias en las vas de procesamiento de los antgenos, los cientcos empezaron a disear vacunas 2

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS y utilizar materiales coadyuvantes con la nalizar de potencializar la presentacin de los antgenos con molculas de MHC (Complejo Principal de Histocompatibilidad) I o II. Adems, pueden emplearse tcnicas de ingeniera gentica para el desarrollo de vacunas que maximicen la reaccin inmunitaria contra eptopos seleccionados y simplicar su administracin. En este trabajo se describirn los mtodos de inmunizacin, as como las vacunas que se usan en la actualidad. Adems, se mencionar brevemente el aspecto de las medidas de vacunacin, mencionando diseos experimentales que podran tener como resultado la creacin futura de nuevas vacunas.

1.2.

Tipos de Inmunizacin

La inmunidad contra microorganismos infecciosos puede lograrse mediante la inmunizacin activa o pasiva (ver Fig. 01). En cada caso la inmunidad se adquiere por procesos naturales (generalmente por transferencia de la madre al feto o por infeccin previa con el patgeno) o por medios articiales (como la inyeccin de anticuerpos o vacunas) como se muestra en la Tabla 01. Adquirida por Anticuerpo materno natural Inmunoglobulina Inmunidad pasiva Anticuerpo monoclonal humanizado Antitoxina Infeccin natural (a) Microorganismos atenuados (b) Microorganismos desactivados (c) Macromolculas microbianas puricadas (d) Antgenos microbianos clonados Inmunidad activa Vacunas: expresados como protenas recombinantes, como DNA clonado solo o en vectores vricos (e) Complejos Multivalentes Toxiode Tabla 01. Adquisicin de inmunidad activa y pasiva Los procedimientos de inmunizacin pasiva producen una inmunizacin temporal mediante la transferecnia de anticuerpos de un animal resistente a uno susceptible. Esta transferencia pasiva de anticuerpos proporciona una proteccin inmediata, pero a medida que son catabolizados, esta inmunidad decae con el tiempo y el receptor vuelve a ser susceptible. La inmunizacin activa, por el contrario, implica la administracin del antgeno a un animal, de modo que este responda desarrollando una respuesta inmune, es decir, esta inmunizacin se logra al inocular agentes microbianos que inducen inmunidad, pero no causan enfermedad, o componentes antignicos de esos microorganismos. La reinmunizacin o la 3 Tipo

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS exposicin a la infeccin del mismo animal ocasionar una segunda respuesta inmune y una inmunidad mucho mayor. La desventaja de la inmunizacin activa es que la proteccin no se adquiere inmediatamente. Sin embargo, una vez establecida, la inmunidad dura ms tiempo y puede ser estimulada de nuevo.

Figura 01. Clasicacin de los diferentes tipos de inmunidad adquirida y de los mtodos empleados para inducir proteccin En la Fig. 02 se pueden observar los niveles de anticuerpos sricos (y, por lo tanto, el grado de proteccin) conferidos por mtodos activos y pasivos de inmunizacin.

Figura 02. Niveles de anticuerpos sricos (y, por lo tanto, el grado de proteccin) conferidos por mtodos activos y pasivos de inmunizacin 4

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS 1.2.1. Inmunizacin pasiva

Se reconoce a Emil von Behring e Hidesaburo Kitasato sus contribuciones a la inmunidad pasiva. Dichos investigadores fueron los primeros en demostrar que la inmunidad desencadenada en un animal poda transferirse a otro si se le inyectaba suero del primero. La nalidad de la inmunizacin pasiva es la proteccin transitoria o el alivio de un trastorno existente. La inmunizacin pasiva, en la que se transernen anticuerpos preformados a un receptor, se produce de manera natural con la transferencia de anticuerpos maternos a travs de la placenta al feto en desarrollo. ste adquiere pasivamente de los anticuerpos maternos proteccin contra: difteria, ttanos, estreptococos, rubola, sarampin, paperas y poliovirus. Los anticuerpos maternos que se encuentran en el calostro y la leche ofrecen tambin inmunidad pasiva al lactante. De la misma manera, se transere inmunizacin pasiva al inyectar al receptor anticuerpos preformados. En el pasado, antes de contar con vacunas y antibiticos, la inmunizacin pasiva ofreca una defensa de primera importancia contra diversas enfermedades infecciosas. A pesar de los riesgos de inyectar suero de los animales, en particulas de caballo, ste era el nico tratamiento ecaz para trastornos por los dems mortales. En la actualidad son varios los padecimientos que justican el empleo de la inmunizacin pasiva, incluidos los siguientes: Deciencia de la sntesis de anticuerpos como resultado de defectos congnitos o adquiridos de la clula B, de manera aislada o en conjunto con otras inmunodeciencias Exposicin comprobada o probable a una enfermedad capaz de ocasionar complicaciones (como un nio con leucemia expuesto a varicela o sarampin) o imposibilidad de suministrar la proteccin adecuada mediante inmunizacin activa Infeccin por microorganismos patgenos cuyos efectos pueden contrarrestarse con anticuerpo Se administra inmunizacin pasiva de manera sistemtica a los individuos expuestos a: botulismo, ttanos, difteria, hepatitis, sarampin y rabia, y puede ofrecer proteccin inmediata a viajeros y prestadores de servicios de salud que en fecha prxima estarn expuestos a un microorganismo infeccioso y que carecen de inmunidad activa contra ste. Se emplea tambin antisuero administrado de manera pasiva para ofrecer proteccin contra veneno de serpientes y de artrpodos. Como la inmunizacin pasiva no activa el sistema inmunitario, no genera una reaccin de memoria y, por lo tanto, la proteccin que se ofrece es transitoria. Para enfermedades infecciosas (como la insuciencia renal producida en los nios por el virus sincicial respitarorio o RSV), la inmunizacin pasiva es la mejor medida preventiva disponible en la actualidad. La inmunizacin pasiva requiere que los anticuerpos sean producidos en un animal donante mediante inmunizacin activa, y que esos anticuerpos se administren a los animales 5

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS susceptibles para conferirles una proteccin inmediata. El suero que contiene estos anticuerpos (antisuero) se puede producir frente a una amplia variedad de patgenos, por ejemplo: en bovinos contra el carbunco bacteridiano (ntrax ), en perros frente al moquillo, en gatos contra la panleucopenia y en los seres humanos frente al sarampin. La inmunizacin pasiva es ms ecaz en la proteccin de los animales frente a microorganismos toxicognicos, utilizando antisueros producidos en caballos. Los antisueros generados de este modo se denominan inmunoglubulinas y se producen normalmente en caballos jvenes mediante una serie de inyecciones inmunizantes. Las toxinas de los clostridios son protenas que pueden ser desnaturalizadas, eliminando su toxicidad mediante un tratamiento con formaldehdo, denominndose entonces toxoides. Para preparar estas antitoxinas, los caballos donantes se inoculan primero con toxoides, pero una vez que se producen los anticuerpos, las siguientes inyecciones pueden contener toxinas puricadas. Las respuestas de los caballos son monitorizadas y cuando sus niveles de anticuerpos son sucientemente altos, se someten a sangrado, los cuales se realizan a intervalos hasta que los niveles de anticuerpos caen y entonces los animales son estimulados de nuevo con el antgeno. El plasma se separa de la sangre y la fraccin de globulinas que contiene los anticuerpos se concentra, se titula y se dispensa. Aunque la inmunizacin pasiva puede ser una medida teraputica ecaz, debe de emplearse con precaucin porque la inyeccin de un anticuerpo preformado entraa ciertos riesgos. Si el anticuerpo se produjo en otra especie (como el caballo) el receptor puede activar una intensa reaccin contra los determinantes isotpicos del anticuerpo extrao. Esta reaccin antiisotpica puede producir graves complicaciones, por ejemplo: Algunos individuos producen IgE especco para factores determinantes contenidos en el anticuerpo inyectado. Los complejos inmunitarios de esta IgE jada al anticuerpo administrado de manera pasiva pueden mediar la desgranulacin de los mastocitos del cuerpo y provocar analaxis sistmica. Otros individuos producen anticuerpos IgG o IgM especcos contra el anticuerpo extrao, que forman complejos inmunitarios activadores del complemento. El depsito de estos complejos en los tejidos puede tener como consecuencia reacciones de hipersensibilidad del tipo III, denominada enfermedad del suero. Incluso cuando se administra gammaglobulina humana de manera pasiva, el receptor puede generar una respuesta antialotpica contra la inmunoglobulina humana, aunque su intensidad suele ser mucho menor que la de una reaccin antiisotpica. Para reducir la antigenicidad, las inmunoglubulinas se tratan normalmente con pepsina para destruir la fraccin Fc, dejando intacta slo la porcin de la molcula necesaria para la neutralizacin de la toxina. Para estandarizar la potencia de las diferentes inmunoglobulinas, se debe de hacer una comparacin con un estndar biolgico internacional. Los anticuerpos monoclonales son otro fuente de inmunizacin pasiva para los animales. Sin embargo, al ser producidos principalmente por hibridomas ratn-ratn, son inmunoglobulinas de ratn y estimulan una respuesta inmune cuando se administran en animales de otras especies. Se ha empleado con xito un anticuerpo monoclonal para las clulas de

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS linfoma en el tratamiento de perros con ese tumor. Adems, actualmente se han desarrollado mtodos para producir anticuerpos monoclonales a partir de clulas de animales domsticos (xenohibridomas), por lo que es probable que estos tambin tengan su utilidad en el control de enfermedades infecciosas. 1.2.2. Inmunidad activa

La nalidad de la inmunizacin activa es conferir inmunidad protectora y memoria inmunitaria. Cuando la inmunizacin activa tiene buenos resultados, la exposicin subsecuente al agente patgeno desencadena una reaccin inmunitaria intensicada que lo elimina con ecacia o peviene la enfermedad mediada por sus productos. Se puede lograr inmunizacin activa con la infeccin natural con un microorganismo, o adquirirse de manera articial mediante la administracin de una vacuna. En la inmunizacin activa, el sistema inmunitario participa de manera activa: la proliferacin de clulasT y B reactivas con antgeno da lugar a la formacin de clulas de memoria. La inmunizacin activa con diversos tipos de vacunas ha desempeado un papel de primera importancia para reducir las defunciones por enfermedades infecciosas, en especial entre nios. La introduccin y empleo generalizado de diversas vacunas para la inmunizacin durante la infancia ha reducido la incidencia de las enfermedades infantiles. Sin embargo, la ocurrencia de reacciones adversas a una vacuna puede llevar a reducir su empleo, lo que representa el peligro de que reaparezca esa afeccin (como el caso de la vacuna bacteriana atenuada de la tos ferina). Los nios requieren de manera caracterstica refuerzos mltiples (inoculaciones repetidas) a intervalos apropiados para lograr una inmunidad ecaz. Lo anterior puede deberse a que en los primeros meses de vida se tiene persistencia de anticuerpos maternos circulantes en el lactante. Por ejemplo, los anticuerpos maternos adquiridos de manera pasiva se jan a eptopos contenidos en la vacuna DPT y bloquean la activacin adecuada del sistema inmunitario, por lo que esta vacuna debe de administrarse varias veces despus que el anticuerpo materno desaparece de la circulacin del lactante, con objeto de lograr la inmunidad adecuada. La vacunacin no es por completo ecaz. Con las vacunas un pequeo porcentaje de los receptores reacciona mal y no quedan protegidos de manera apropiada, lo cual no es un problema grave si la mayor parte de la poblacin queda inmune al agente infeccioso en cuestin. En este caso, la posibilidad de que un individuo susceptible haga contacto con un sujeto infectado es tan baja que es probable que el primero no contraiga la infeccin. Este fenmeno se conoce como inmunidad colectiva. Una vacuna ideal para la inmunizacin activa debe de inducir una inmunidad fuerte y prolongada. Esta inmunidad debera conferirse tanto al animal inmunizado como al feto (en el caso de la gestacin) y la vacuna debera de estar libre de efectos secundarios adversos. La vacuna ideal debera ser barata, estable y adaptable a la vacunacin en masa, y debera estimular una respuesta inmunitaria distinguible de la resultante de la infeccin natural, la inmunizacin y la erradicacin simultneas. Adems, la vacuna ideal debe tener ciertas propiedades fundamentales como: 7

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS 1. El antgeno debe de ser liberado ecientemente, de manera que las CPA puedan procesarlo y secretar las citoquinas apropiadas 2. Se deben estimular tanto los linfocitos T ccomo los B, de manera que se genere un gran nmero de clulas de memoria 3. Se debe estimular os linfocitos T colaboradores y efectores frente a varios eptopos de la vacuna, de manera que se minimicen las variaciones individuales en el polimorsmo de las MHC clase II y en las propiedades del eptopo 4. El antgeno debe ser capaz de estimular a las clulas de memoria, de tal forma que la proteccin dure tanto como sea posible Las vacunas vivas modicadas infectan a las clulas del hospedador, que sufren la replicacin vrica, procesando los antgenos endgenos. Por otra parte, las ventajas de las vacunas que contienen bacterias inactivadas (como la 45/20 de Brucella) son su seguridad en lo que respecta a la virulencia residual, y son de fcil almacenamiento, ya que los microorganismos estan muertos. Los inconvenientes de las vacunas inactivadas son paralelos a las ventajas de las vacunas vivas. De esta manera, el uso de adyuvantes para mejorar la antigenicidad puede causar una in amacin grave o una toxicidad sistmica, mientras que las dosis altas o mltiples de un antgeno aumentan el riesgo de ocasionar reacciones de hipersensibilidad y tambin incrementan los costos. En general las vacunas que contienen microorganismos vivos tienden a inducir una inmunidad ms fuerte y de tipo Th1, respecto a las vacunas formadas por microorganismos inactivados. Uan razn para este hecho es que las vacunas de virus vivos pueden invadir las clulas del hospedador e inducir la produccin del interfern, de manera que coneren una proteccin rpida en los animales susceptibles. Las vacunas inactivadas estimulan mas bien una respuesta de tipo Th2. Para muchos microorganismos, especialmente en el caso de virus, la respuesta Th1 sera ms apropiada. La antigenicidad de los microorganismos inactivados para su empleo como vacuna debe permanecer lo ms similar posible a los organismos vivos, por lo que los mtodos de inactivacin poco renados que ocasionan cambios signicativos en la estructura antignica como resultado de la desnaturalizacin protica, normalmente no son satisfactorios. En el caso de los microorganismos vivos virulentos, no se les puede emplear normalmente en las vacunas, siendo necesario reducir su virulencia, de modo que an sigan vivos pero no puedan producir la enfermedad. El proceso de reduccin de la virulencia se denomina atenuacin. El nivel de atenuacin es crtico para el xito de una vacuna, ya que una atenuacin escasa mantiene una virulencia residual en el organismo y la capacidad de producir la enfermedad, mientras que un exceso en la atenuacin generar una vacuna inecaz. En general, la manipulacin gentica es un mpetodo ecaz para transformar una bacteria en avirulenta. Por otra parte, el mtodo ms empleado para la atenuacin vrica ha sido el del crecimiento prolongado en cultivo tisular. En estos casos, la atenuacin del virus se lleva a cabo mediante el cultivo del microorganismo en clulas en las cuales no est adaptado.

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1.3.

Tipos de Vacunas

La mayora de las infecciones son enfrentadas por mecanismos inmunitarios inespeccos o innatos, en los que participan complemento, interferones, clulas NK, fagocitos activados, compuestos antimicrobianos y otros componentes. La inmunorreaccin adaptativa proporciona un tipo de resistencia ms exible a los patgenos. La vacunacin educa al sistema inmunitario adaptativo, preparndolo para enfrentar de manera ecaz y rpida a patgenos que no son eliminados fcilmente por la inmunidad innata. Deben tenerse presentes algunos factores para llegar a una vacuna ecaz como: 1. El desarrollo de una inmunoreaccin cuanticable no necesariamente signica que se consigue un estado de inmunidad protectora. A menudo es crtica la rama del sistema inmunitario que se activa, y por este motivo quienes crean la vacuna deben reconocer las diferencias importantes entre la activacin de las ramas humoral y mediada por clulas. 2. El desarrollo de memoria inmunitaria. Por ejemplo, una vacuna que induce una reaccin primaria protectora puede no inducir la formacin de clulas de memoria, lo que deja al hospedador desprotegido despus de desaparecer la reaccin primaria a la vacuna. La funcin de las clulas de memoria en la inmunidad depende, en parte, del perodo de incubacin del agente patgeno. En el caso de los agentes patgenos que tienen un perodo de incubacin prolongado, no es necesario conservar al anticuerpo neutralizado perceptible en el momento de la infeccin. El virus de la poliomielitis, por ejemplo, requiere ms de tres das para infectar el sistema nervioso central. El perodo de incubacin concede tiempo a las clulas B de memoria para reaccionar y producir anticuerpo srico en concentraciones elevadas. Por lo tanto, la vacuna de la polio se disea para inducir altas concentraciones de memoria inmunitaria. Despus de la inmunizacin con la vacuna Salk, las concentraciones sricas de anticuerpo alcanzan su mximo dentro de las dos primeras semanas, pero la reaccin de memoria no deja de aumentar y llega a sus niveles mximos a los seis meses, con persistencia durante aos (ver Fig. 03). Si un individuo inmunizado se expone ms tarde al virus de la poliomielitis, estas clulas de memoria reaccionan y se diferencian en clulas plasmticas que producen grandes cantidades de anticuerpo srico que deenden al individuo contra los efectos del virus.

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Figura 03. La inmunizacin con una sola dosis de vacuna Salk contra la poliomielitis induce un incremento rpido de las concentraciones sricas de anticuerpo, que llegan a su mximo en plazo de dos semanas y disminuyen despus. La induccin de memoria inmunitaria sigue un curso ms lento y alcanza los niveles mximos seis meses despus de la vacuna. La persistencia de la reaccin de memoria durante aos despus de la vacunacin primaria es la causa de la inmunidad contra la poliomielitis A continuacin se describirn diversos criterios para el diseo de vacunas, empleadas en la actualidad o en fase de experimentacin, y se revisa su capacidad de inducir inmunidad humoral y mediada por clulas y producir clulas de memoria. Las vacunas comunes que se usan en la actualidad (ver Tabla 02) constan de microorganismos vivos pero atenuados, clulas bacterianas o partculas vricas desactivadas (muertas), o fragmentos de protena o carbohidrato (subunidades) del microorganismo blanco. Se encuentran en estudio cuidadoso varios tipos nuevos de posibles vacunas que presentan ventajas de proteccin, produccin o embarque. En la lista que se presenta a continuacin se incluyen las caractersticas principales y algunas ventajas y desventajas de los distintos tipos de vacunas, con indicacin del modo en que se usan actualmente o en que pueden aplicarse mejor a las enfermedades del ser humano.

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1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS

Tipo de vacuna

Enfermedades
S a ra m p i n P a p e ra s

Ventajas
Inte n sa in m u n o re a c c i n , a m e nu d o in m u n id a d

Desventajas
R e q u ie re a lm a c e n a m ie nto en re frig e ra c i n y p o d ra m u ta r a

P o lio m e litis d e p o r v id a c o n p o c a s

Viva atenuada

R o tav iru s d sis R u b o la Tu b e rc u lo sis u n a fo rm a v iru le nta Va ric e la F ie b re a m a rilla C le ra E sta b le , m s se g u ra G rip e q u e la s va c u n a s v iva s; m s d b il q u e c o n va c u n a s v iva s; n o re q u ie re P e ste a lm a c e n a m ie nto e n P o lio m e litis (S a lk ) re frig e ra c i n R a b ia E l siste m a in m u n ita rio re fu e rz o s re q u e rirse su e le n In m u n o rre a c c i n

Desactivada o muerta

H e p a titis A

Toxoide

D ifte ria T ta n o s

q u e d a c e b a d o p a ra re c o n o c e r tox in a s b a c te ria n a s

Subunidad (exotoxina desactivada)

H e p a titis B A ntg e n o s e sp e c c o s To s fe rin a re d u c e n la p o sib ilid a d N e u m o n a d e re a c c io n e s a d ve rsa s e stre p to c c ic a H a e m o p h ilu s C e b a e l siste m a in m u n ita rio d e l la c ta nte p a ra q u e re c o n o z c a d e te rm in a d a s b a c te ria s Inte n sa in m u n o rre a c c i n p ro d u c ir D ifc il d e

Conjugada

in u e n z a e tip o B N e u m o n a e stre p to c c ic a

DNA

E n e n sayo s c ln ic o s

hu m o ra l y c e lu la r; A n n o d isp o n ib le m a nu fa c tu ra re la tiva m e nte e c o n m ic a Im ita la in fe c c i n

Vector recombinante

E n e n sayo s c ln ic o s

n a tu ra l, d e lo q u e A n n o d isp o n ib le re su lta u n a inte n sa in m u n o rre a c c i n

Tabla 02. Clasicacin de las vacunas comunes para uso en seres humanos 1.3.1. Vacunas con microorganismos atenuados

En algunos casos se puede atenuar a los microorganismos de modo que pierdan su capacidad de causar afeccin considerable (patogenicidad), pero retengan su capacidad de 11

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS reproducirse de manera transitoria dentro de un hospedador inoculado. La primera vacuna usada por Jenner era de este tipo; la inoculacin con el virus de la viruela bovina (vaccinia) en seres humanos confera inmunidad contra la viruela humana sin causar sta. Muchas veces la atenuacin se logra si se cultivan la bacteria o el virus patgenos durante perodos prolongados bajo condiciones anormales de cultivo. Este procedimiento selecciona cepas mutantes que estn mejor dotadas para multiplicarse en estas condiciones anormales de cultivo y son, en consecuencia, menos capaces de reproducirse en el hospedador natural. Por ejemplo, se desarroll una cepa atenuada de Mycobacterium bovis llamada bacilo de Calmette-Gurin (BCG) al cultivar este microorganismo en un medio que contena concentraciones crecientes de bilis. Despus de 13 aos, esta cepa se haba adaptado para proliferar en un medio con potentes concentraciones de bilis y se haba atenuado lo suciente para convertirse en un componente adecuado de la vacuna para la tuberculosis. La vacuna Sabin contra la poliomielitis y la vacuna contra el sarampin consisten en cepas vricas atenuadas. El sustrato para elaborar la vacuna Sabin se atenu al cultivarlo en clulas epiteliales renales de mono. La vacuna contra el sarampin contiene una cepa de virus de la rubola que se cultiv en clulas de embrin de pato y ms tarde en lneas celulares humanas. Las vacunas atenuadas tienen ventajas y desventajas. Por su capacidad de multiplicarse de manera transitoria, los microorganismos de estas vacunas ofrecen exposicin prolongada de los eptopos individuales de los microorganismos atenuados al sistema inmunitario, lo que tiene como consecuencia aumento de la inmunogenicidad y produccin de clulas de memoria. Como consecuencia, estas vacunas suelen requerir slo una inmunizacin, lo que ha eliminado la necesidad de refuerzos repetidos. La capacidad de los microorganismos de muchas vacunas atenuadas de multiplicarse dentro de las clulas hospedadoras hace a estas vacunas especialmente adecuadas para inducir una reaccin mediada por clulas. Una desventaja importante de las vacunas atenuadas es la posibilidad de que los microorganismos retornen a su forma virulenta. La tasa de reversin de los virus de la vacuna Sabin contra la poliomielitis con produccin de enfermedad paraltica ulterior se acerca a un caso por cada 2.4 millones de individuos vacunados. Esta reversin implica que unos cuantos sujetos inmunizados liberan formas patgenas del virus que pueden encontrar su camino hacia el agua del abastecimiento municipal, sobre todo en regiones sin estndares rigurosos de saneamiento o donde deben reciclarse las aguas residuales. Las vacunas atenuadas pueden relacionarse tambin con complicaciones semejantes a las observadas durante la enfermedad natural. Un porcentaje pequeo de receptores de la vacuna del sarampin, por ejemplo, desarrolla encefalitis u otras complicaciones posvacunales. Sin embargo, el riesgo de complicaciones relacionadas con la vacuna es mucho ms bajo que en la infeccin. Las tcnicas de ingeniera gentica ofrecen una manera de atenuar el virus de manera irreversible al remover de manera selectiva de la vacuna genes que son necesarios para su virulencia o para la proliferacin. Esto se ha efectuado con la vacuna del virus del herpes para cerdos, en la que se removi el gen de la timidincinasa. Como el virus requiere esta enzima para multiplicarse en ciertos tipos de clulas (p. ej., neuronas), la remocin del gen hizo al virus incapaz de producir la enfermedad. En fecha reciente se cre una vacuna viva atenuada contra la gripe, y se autoriz su comercializacin con el nombre 12

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS FluMist. El proceso de atenuacin implic el cultivo del virus a temperaturas menores que la normal, hasta que se obtuvo una cepa adaptada al fro. Esta cepa de virus de la gripe se desarrolla bien a temperaturas menores de 37 C pero es incapaz de proliferar a la temperatura del cuerpo humano, que es de 37 C. Este virus atenuado vivo se administra intranasalmente y causa una infeccin de las vas respiratorias superiores, suciente para inducir una intensa inmunorreaccin. El virus no puede propagarse ms all de las vas respiratorias superiores debido a su incapacidad de reproducirse a las temperaturas elevadas del interior del cuerpo, y por tanto su distribucin es limitada. En virtud de su facilidad de administracin y de que induce buena inmunidad de las mucosas, es probable que las vacunas antigripales adaptadas al fro y de uso nasal pronto dominen este campo. 1.3.2. Vacunas de microorganismos desactivados o muertos

Otro mtodo comn para crear vacunas es la desactivacin del agente patgeno mediante calor o sustancias qumicas, de tal modo que no sea capaz de multiplicarse en el hospedador. Un aspecto de vital importancia es el conservar la estructura de los eptopos sobre los antgenos de supercie durante la desactivacin. Por lo general, la desactivacin por calor es insatisfactoria porque produce desnaturalizacin extensa de las protenas; por este motivo es probable que se alteren de manera considerable los eptopos que dependen de los rdenes superiores de estructura protenica. Por otra parte, la tcnica de desactivacin qumica con formaldehdo o diversos agentes alquilantes ha tenido buenos resultados. La vacuna Salk de la poliomielitis se elabora mediante desactivacin del virus de la poliomielitis con formaldehdo. Las vacunas vivas atenuadas suelen requerir slo una dosis para inducir inmunidad prolongada. Por otra parte, las vacunas de microorganismos muertos requieren a menudo refuerzos repetidos para conservar el estado de inmunidad del hospedador. Las vacunas de microorganismos muertos inducen una reaccin de anticuerpo de predominio humoral y tienen menos ecacia que las de microorganismos atenuados para inducir inmunidad mediada por clulas y desencadenar una reaccin secretoria de IgA. Aunque contienen agentes patgenos muertos, las vacunas de microorganismos enteros desactivados representan an ciertos riesgos. Una complicacin grave con las primeras vacunas Salk surgi cuando el formaldehdo no mat a todos los virus en dos lotes de vacunas, lo que produjo poliomielitis paraltica en un porcentaje elevado de los receptores. Tambin existe riesgo en la manufactura de las vacunas desactivadas. Es necesario manipular grandes cantidades del agente infeccioso antes de su desactivacin, y quienes se exponen al proceso estn en riesgo de infectarse. Ha habido informes de infeccin de individuos que participan en la manufactura de la vacuna Salk. En general, la seguridad de las vacunas desactivadas es mayor que la correspondiente a las vacunas vivas atenuadas, que retienen la capacidad de multiplicarse y tal vez revertir a una forma activa. Existen vacunas desactivadas de uso comn contra enfermedades vricas y bacterianas. La vacuna contra la gripe clsica es de este tipo, al igual que las vacunas contra hepatitis A y clera. Adems de su relativa seguridad, otras ventajas de las vacunas desactivadas son estabilidad y facilidad de almacenamiento y transporte. El requisito de que la mayora de 13

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS las vacunas desactivadas se administre mediante inyeccin es una desventaja para su uso en campaas de vacunacin masiva. 1.3.3. Vacunas subunitarias

Muchos de los riesgos que acompaan a las vacunas de microorganismos enteros atenuados o muertos pueden evitarse si se emplean vacunas constituidas por macromolculas puricadas especcas que se derivan de agentes patgenos. Se utilizan en la actualidad tres formas generales de estas vacunas: 1. Exotoxinas o toxoides desactivados 2. Polisacridos capsulares 3. Antgenos protenicos recombinantes Algunos patgenos bacterianos, incluidos los que causan difteria y ttanos, producen exotoxinas que explican muchos de los sntomas de su infeccin. Las vacunas para difteria y ttanos se producen puricando la exotoxina bacteriana y luego desactivndola con formaldehdo para formar un toxoide. La vacunacin con el toxoide induce anticuerpos antitoxina, que son capaces de jarse a la toxina y neutralizar sus efectos. Aunque se han ensayado como vacunas determinadas glucoprotenas de subunidades vricas, por ejemplo una protena de envoltura de VIH-1, y el xito ha sido limitado, persiste la esperanza de que estas glucoprotenas puedan proteger contra algunas enfermedades. Un ensayo clnico reciente de glucoprotena D del virus del herpes simple tipo 2 previno el herpes genital en algunas personas que se sometieron a vacunacin. Se han clonado con buenos resultados diversos genes que codican antgenos de supercie de agentes patgenos vricos, bacterianos y protozoarios en sistemas de expresin de bacterias, levaduras, insectos o mamfero, y se han empleado los antgenos expresados para el desarrollo de vacunas. La primera de estas vacunas de antgeno recombinante aprobada para su uso en seres humanos fue la vacuna de la hepatitis B, que se desarroll mediante clonacin del gen para el antgeno mayor de supercie del virus de la hepatitis B (HBsAg) y su expresin en levaduras. Las clulas de levaduras recombinantes se cultivan en grandes sistemas fermentadores y se acumula HBsAg en ellas. A continuacin estas clulas se cosechan y desintegran mediante gran presin, para que liberen el HBsAg recombinante, que luego se purica por las tcnicas bioqumicas ordinarias. Se ha demostrado que esta vacuna recombinante de la hepatitis B induce la produccin de anticuerpos protectores, y es muy promisoria para los 250 millones de portadores de la hepatitis B crnica que hay en el mundo. Muchas de las vacunas propuestas para enfermedades importantes como el paludismo constan de una o ms protenas del patgeno. Estas protenas se biosintetizan en grandes cantidades usando lneas celulares apropiadas y luego se purican mediante procedimientos que no introducen contaminantes en el producto. Un problema universal tiene que ver con el desarrollo de inmunoreacciones contra estas protenas. Determinados coadyuvantes, como el alumbre, estn aprobados para su uso en seres humanos, pero los ms ecaces, 14

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS como los coadyuvantes completo e incompleto de Freund, generan efectos secundarios inaceptables. Un campo de indagacin reciente es la bsqueda de compuestos con un intenso efecto coadyuvante que no representen peligro para quienes recibirn la vacuna. Entre los compuestos candidatos se encuentran los que activan clulas dendrticas y macrfagos va receptores tipo Toll. Esta activacin de clulas del sistema inmunitario innato movilizaran una respuesta de componentes del sistema inmunitario adaptativo. Entre las sustancias que se investigan por sus efectos coadyuvantes estn oligonucletidos con la secuencia [CpG]n (un motivo comn en bacterias) y componentes de la pared celular de las bacterias gramnegativas, como LPS. Si las protenas subunitarias pueden constituir vacunas tiles, se concluye que es posible identicar sus eptopos ms activos, crear pptidos sintticos que imiten esos eptopos, y usarlos como vacunas. Entre las ventajas se incluiran facilidad de sntesis en condiciones altamente controladas y seguridad virtualmente total. A pesar de estas caractersticas muy promisorias, el empleo de pptidos sintticos como vacunas no ha progresado como se proyect en un principio. Los pptidos no son tan inmungenos como las protenas, y es difcil conferir inmunidad humoral o mediada por clulas contra ellos. 1.3.4. Vacunas conjugadas

Una limitacin de las vacunas de polisacrido es su incapacidad de activar las clulas TH. Activan las clulas B del tipo 2 (TI-2) de una forma independiente del timo, lo que tiene como consecuencia produccin de IgM pero poco cambio de clase, maduracin nula de la anidad y poco desarrollo, en el mejor de los casos, de clulas de memoria. Diversos investigadores han informado la induccin de clulas plasmticas secretoras de IgA que reciben inmunizacin subcutnea con la vacuna de polisacridos neumoccicos. En este caso, como las clulas TH no participan en la reaccin, la vacuna puede activar clulas B de memoria especcas de IgA que se generaron con anterioridad con la exposicin natural de las supercies mucosas a los antgenos bacterianos. Como estas bacterias tienen eptopos polisacridos y protenicos, activaran las clulas TH, las que a su vez podran mediar el cambio de clase y la formacin de clulas de memoria. Una manera de hacer participar a las clulas TH en la reaccin a un antgeno polisacrido consiste en conjugarlo con alguna clase de protena portadora. Por ejemplo, la vacuna para combatir Haemophilus in uenzae del tipo b (Hib), causa principal de la meningitis bacteriana en nios menores de cinco aos, est constituida por polisacrido capsular del tipo b enlazado de manera covalente con una protena portadora, el toxoide tetnico (ver Fig. 04).

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1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS

Figura 04. Una vacuna conjugada protege contra Haemophilus in uenzae tipo b. La vacuna se produce conjugando el polisacrido de supercie de Hib con una molcula de protena El conjugado de polisacrido y protena es mucho ms inmungeno que el polisacrido por s solo y, puesto que activa las clulas TH, permite el cambio de clase desde la IgM hacia la IgA. Aunque este tipo de vacuna puede inducir clulas B de memoria, no lo puede hacer con clulas T de memoria especcas para el agente patgeno. En el caso de la vacuna Hib, parece que las clulas B de memoria se pueden activar en cierto grado en ausencia de una poblacin de clulas TH de memoria, lo que explica la ecacia de esta vacuna. Las infecciones por Hib pueden causar sordera y defectos neurolgicos; la utilidad de esta vacuna se aprecia en pases con amplia cobertura de la vacuna conjugada. En la Fig. 05 se observa la rpida declinacin de los casos de Hib en Estados Unidos.

Figura 05. Una vacuna conjugada protege contra Haemophilus in uenzae tipo b (Hib). Desde la introduccin de esta vacuna en Estados Unidos, la incidencia de enfermedad por Hib ha disminuido de manera impresionante 16

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS Una de las limitaciones de las vacunas de pptidos sintticos y de las de protenas recombinantes es que tienden a ser decientes desde el punto de vista inmungeno. Tambin tienden a inducir una reaccin de anticuerpo humoral, pero es menos probable que induzcan una mediada por clulas. Por lo tanto, lo que se necesita es un mtodo para elaborar vacunas de pptidos sintticos que contengan eptopos inmunodominantes de clulas B y T. Ms an, si se desea una reaccin de CTL, la vacuna debe descargarse por va intracelular de modo que los pptidos se puedan procesar y presentar en conjunto con molculas MHC clase I. En la actualidad se aplican diversas tcnicas innovadoras para desarrollar vacunas multivalentes que puedan presentar copias mltiples de un pptido determinado o una mezcla de pptidos al sistema inmunitario (ver Fig. 06).

Figura 06. Vacunas subunitarias multivalentes. (a) Es posible disear complejos de matriz slida, anticuerpo y antgeno para que contengan pptidos sintticos que representen eptopos de clulas T y B. (b) Pueden elaborarse micelas protenicas, liposomas y complejos inmunoestimulantes (ISCOM) con antgenos extrados o pptidos antignicos. En micelas y liposomas los residuos hidrlos de las molculas de antgeno estn orientados hacia el exterior. En los ISCOM las colas largas de cidos grasos de la capa detergente externa se encuentran junto a los residuos hidrfobos de las molculas de antgeno localizadas a nivel central. (c) ISCOM y liposomas pue den descargar antgenos dentro de las clulas, de modo que imiten a los antgenos endgenos. El procesamiento ulterior por la va citoslica y la presentacin con molculas MHC clase I inducen una inmunorreaccin mediada por clulas. 17

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS Un mtodo consiste en producir complejos antgeno-anticuerpo en matriz slida (SMAA, del ingls solid matrix-antibody- antigen), para lo cual se jan anticuerpos monoclonales a matrices slidas particuladas y luego se satura el anticuerpo con el antgeno deseado. Despus se emplean los complejos resultantes como vacunas. Se ha demostrado que estos complejos multivalentes provocan reacciones humorales y celulares intensas. Otro medio para producir una vacuna multivalente consiste en emplear detergente para incorporar los antgenos protenicos en micelas de protenas, vesculas lipdicas (llamadas liposomas) o complejos inmunoestimulantes como se indica en la Fig. 06-b. 1.3.5. Vacunas de DNA

En una estrategia de vacunacin que se investiga actualmente para varias enfermedades se utiliza DNA de plsmido que codica protenas antignicas, el cual se inyecta directamente en el msculo del receptor. Las clulas musculares captan el DNA y expresan el antgeno protenico codicado, lo que precipita una reaccin de inmunidad humoral y otra mediada por clulas. Lo que es ms sorprendente de esta observacin es que las clulas musculares captan y expresan el DNA inyectado con eciencia mucho mayor que la observada en clulas de cultivo tisular. El DNA parece integrarse en el DNA cromosmico o conservarse durante perodos prolongados en forma de episoma. El antgeno vrico es expresado no slo por las clulas musculares, sino tambin por las clulas dendrticas en la zona de la inyeccin. Las clulas musculares expresan concentraciones bajas de molculas MHC clase I y no molculas coestimuladoras, lo cual sugiere que las clulas dendrticas locales podran ser cruciales para el desarrollo de reacciones antignicas a las vacunas de DNA (ver Fig. 07).

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1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS

Figura 07. El empleo de las vacunas de DNA induce inmunidad humoral y celular. El gen inyectado se expresa en la clula muscular que lo ha recibido y en las clulas presentadoras de antgeno (APC) cercanas. Los pptidos de la protena codicada por el DNA se expresan en la supercie de ambos tipos de clulas despus del procesamiento como antgeno endgeno por la va de MHC clase I. Las clulas presentadoras de antgeno en el contexto de las molculas MHC clase I estimulan el desarrollo de clulas T citotxicas. La protena codicada por el DNA inyectado se expresa tambin como protena secretada soluble, que se capta, procesa y presenta en el contexto de molculas MHC clase II. Esta va estimula la inmunidad mediada por clulas B y genera anticuerpos y clulas B de memoria contra la protena. Las vacunas de DNA ofrecen ventajas sobre muchas de las existentes. Por ejemplo, la protena codicada se expresa en el hospedador en su forma natural, sin desnaturalizacin ni modicacin. Por lo tanto, la reaccin inmunitaria se dirige contra el antgeno tal y como lo expresa el agente patgeno. 19

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS Las vacunas de DNA inducen adems inmunidad humoral y mediada por clulas; la estimulacin de ambas ramas de la inmunidad mediante vacunas que no son de DNA requiere, en condiciones normales, inmunizacin con un preparado de microorganismos vivos atenuados, que introducen elementos de riesgo adicionales. Por ltimo, las vacunas de DNA producen expresin prolongada del antgeno, lo que crea memoria inmunitaria considerable. Los aspectos prcticos de las vacunas de DNA son tambin muy promisorios. No se requiere refrigeracin para la manipulacin y el almacenamiento del DNA de plsmido, lo que reduce de manera signicativa el costo y la complejidad de su envo. El mismo vector plsmido puede disearse de manera individualizada para que produzca diversas protenas, de tal modo que puedan emplearse las mismas tcnicas para la fabricacin de las diversas vacunas de DNA, cada una codicadora de un antgeno proveniente de un patgeno distinto. Un mtodo mejorado para la administracin de estas vacunas consiste en cubrir partculas microscpicas de oro con el DNA del plsmido y, a continuacin, introducirlas a travs de la piel hasta el msculo subyacente con una pistola de aire (llamada pistola gnica). Esto hace posible la administracin rpida de una vacuna a grandes poblaciones sin necesidad de reservas gigantescas de agujas y jeringas. Las pruebas efectuadas con vacunas de DNA en modelos animales han demostrado que son capaces de conferir inmunidad protectora contra diversos agentes patgenos, entre ellos el virus de la gripe. Se ha corroborado asimismo que la inclusin de ciertas secuencias de DNA en el vector desencadena una reaccin inmunitaria intensi cada. Una de tales secuencias es la CpG observada en patgenos. En la actualidad se realizan ensayos en seres humanos con diferentes vacunas de DNA, entre ellas las de paludismo, SIDA, gripe, ebre de bola y herpes. En un xito experimental reciente con vacunas de DNA se conri proteccin a ratones contra inculos de coronavirus del SARS mediante un vector de DNA que codicaba la protena de las espculas de este virus. El suero de los receptores de la vacuna transri inmunidad, lo cual demuestra que los antgenos neutralizantes se formaron a raz de la vacunacin y fueron protectores en el modelo murino de infeccin por SARS. En los estudios experimentales futuros de vacunas con DNA se mezclarn genes de protenas antignicas con los de citocinas o quimiocinas que dirigen la reaccin inmunitaria hacia la va ptima. Por ejemplo, puede incluirse el gen de la IL-12 en una vacuna de DNA; la expresin de esta interleucina en el sitio de inmunizacin estimular la inmunidad del tipo TH1 inducida por la vacuna. Las vacunas de DNA se encuentran en la fase de ensayos clnicos, y es probable que se usen en la inmunizacin de personas en los prximos aos. Sin embargo, no constituyen una solucin universal a los problemas de la vacunacin; por ejemplo, slo pueden codicarse antgenos protenicos; adems, ciertas vacunas, como las usadas contra infecciones neumoccicas y meningoccicas, se basan en antgenos polisacridos y no son candidatas para el suministro va DNA. 1.3.6. Vacunas con vectores recombinantes

Es posible introducir en virus o bacterias atenuados genes que codican antgenos mayores de agentes patgenos especialmente virulentos. El microorganismo atenuado funciona como vector, se multiplica en el hospedador y expresa el producto gnico del agente patgeno. 20

1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS Se han elaborado vacunas con virus atenuados vivos a partir de vacunas ya autorizadas a las que se agregan genes que codican antgenos presentes en patgenos de reciente aparicin. Es posible que tales vacunas de virus quimricos sean probadas y autorizadas ms rpido que un producto totalmente nuevo, con lo que se ahorrara tiempo valioso. Un ejemplo muy reciente de este tipo de quimera es la vacuna de la ebre amarilla, que se someti a ingeniera gentica para que expresara antgenos del virus nilooccidental. Se han utilizado diversos microorganismos como vectores para vacunas, por ejemplo virus de la viruela bovina, virus de la viruela de los canarios, virus de la polio atenuados, adenovirus, cepas atenuadas de Salmonella, cepa BCG de Mycobacterium bovis y ciertas cepas de estreptococos que existen habitualmente en la cavidad bucal. El virus de la viruela bovina, una forma atenuada que se utiliza para erradicar la viruela, se ha usado ampliamente como vector. Este virus complejo de gran tamao, cuyo genoma consta de unos 200 genes, puede someterse a ingeniera gentica para que porte varias docenas de genes extraos sin trastornar su capacidad de infectar clulas del hospedador y multiplicarse en ellas. En la Fig. 08 se ilustra el procedimiento para producir un vector de viruela bovina que lleva un gen extrao obtenido de un agente patgeno. El virus de la viruela bovina sometido a ingeniera gentica expresa concentraciones elevadas del producto gnico insertado, que luego puede servir como inmungeno potente en el hospedador inoculado. Al igual que la vacuna ordinaria contra la viruela, las vacunas que tienen como vector virus de la viruela bovina sometidos a ingeniera gentica pueden administrarse simplemente rasguando la piel, lo que produce infeccin localizada en las clulas del hospedador. Si el producto gnico extrao expresado por el virus de la viruela bovina es una protena de la cubierta vrica, se inserta en la membrana de la clula hospedadora infectada e induce inmunidad mediada por clulas as como inmunidad mediada por anticuerpo. Otras vacunas con vectores atenuados podran ser ms seguras que la de virus de la viruela bovina. En fecha reciente se han realizado pruebas de esta clase con el virus de la viruela de los canarios. Como su pariente, el virus de los bovinos, el de los canarios es de gran tamao y se somete con facilidad a ingeniera gentica para que lleve mltiples genes. A diferencia de aqul, ste no parece ser virulento incluso en individuos que padecen supresin grave de la inmunidad. Otro posible vector es una cepa atenuada de Salmonella typhimurium, en la que se han insertado mediante ingeniera genes de la bacteria causante del clera. La ventaja de este vector vacunal consiste en que Salmonella infecta clulas de la tnica mucosa del intestino y por tanto induce la produccin de IgA secretoria. La inmunidad ecaz contra diversas enfermedades, entre ellas el clera y la gonorrea, depende del aumento de la produccin de IgA secretoria en las super cies de las mucosas. Se encuentran en desarrollo medidas similares en las que se emplean bacterias que son habitantes normales de la de la cavidad bucal. La estrategia consistira en introducir ora genes que codican antgenos de microorganismos patgenos en cepas bacterianas que habitan en la boca o las vas respiratorias. La induccin de inmunidad en la supercie de la mucosa podra ofrecer excelente proteccin en la puerta de entrada que usa el patgeno.

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1. MTODOS DE INMUNIZACIN Y TIPOS DE VACUNAS

Figura 08. Produccin de la vacuna vectorial para la viruela. El gen que codica el antgeno deseado (anaranjado) se inserta en un vector plsmido adyacente al promotor de la viruela bovina (rosado) y anqueado a cada lado por el gen de la timidincinasa (TK) de este virus (verde). Cuando se incuban clulas en cultivo tisular de manera simultnea con virus de la viruela bovina y el plsmido recombinante, se insertan el gen del antgeno y el promotor en el genoma del virus por recombinacin homloga en el sitio del gen TK no esencial, lo que tiene como consecuencia un virus recombinante TK . Las clulas que contienen el virus de la viruela bovina recombinante se seleccionan mediante adicin de bromodesoxiuridina (BUdr), que destruye los individuos TK .

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REFERENCIAS

Referencias
[1] Thomas J. Kindt, Richard A. Goldsby, Barbara A. Osborne, Inmunologa de Kuby, Ed. McGraw-Hill, Sexta Edicin, 2007 [2] Ian R. Tizard, Introduccin a la Inmunologa Veterinaria, Ed. Elsevier Saunders, Octava Edicin, 2009

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