UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO FACULTAD DE MEDICINA HUMANA BIOQUIMICA

ENZIMOLOGA
Pedro Lezama
plezamaa@upao.edu.pe P. Lezama - UPAO bioqupao@.yahoo.com

ENZIMAS
Definicin Catalizadores biolgicos Funcin Viabilizar la actividad de las clulas por su participacin en todas las reacciones biolgicas Naturaleza qumica: protenas globulares principalmente, excepto las RIBOZIMAS (RNA con propiedades catalticas)
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ESTRUCTURA ENZIMATICA
Estructura bsica

Holoenzima
Protena Cofactor
Coenzima - Nucleotidos - Comp. Vit. B

RNA

Apoenzima o
Apoprotena
Grupo Prosttico

Ribozimas

Abzimas Anticuerpos Granzimas Actividad citotxica P. Lezama -(apoptosis) UPAO

Estructura enzimtica bsica

S E

[ES]

[ES]
Apoenzima

Cofactor

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Glucosa

Fructosa

Sitio cataltico Enzima (sacarasa)

Productos son liberados

Sustrato (sacarosa)

Enzima disponible con sitio cataltico vaco

E+S
3 Sustrato es convertido a productos

[ES]

[EP] P+E

Sustrato se une a la enzima por encaje inducido

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Modelo de Accin enzimtica

Energia de activacin sin enzima

Diferencia entre la energia libre de y P

S P

Energia de activacin con enzima

Establecer las diferencias

Camino de la Reaccin
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MODELOS DE ACCION ENZIMATICA

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Modelo llavecerradura

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Modelo del encaje (acoplamiento) inducido

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CLASIFICACION DE ENZIMAS
1. Oxidoreductasas transferencia de electrones 2. Transferasas reacciones de transferencia de grupo (no agua) 3. Hidrolasas reacciones de hidrlisis (participa agua) 4. Liasas catalizan reacciones reversibles de adicin de un grupo funcional a un doble enlace 5. Isomerasas transferencia de grupos dentro de la misma molcula para dar ismeros 6. Ligasas Formacin de enlaces C-C, C-S, C-O y CN por reacciones de condensacin acopladas a hidrlisis de ATP
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Factores que afectan la actividad enzimtica

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Factores Bsicos
1. Temperatura 2. pH 3. Concentraciones de:
A. Enzima B. Sustrato C. Producto (retroalimentacin negativa)

4. Activadores
Cofactores Modificaciones covalentes

5. Inhibidores
Competitivos No competitivos Enzimas alostricas

6. Localizacin
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(en un periodo de tiempo 8

S + E P

20

80

60

40

Producto

Incremento en concentracin de S

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Sustrato (mmol)
4 6

Concentracin constante ES en estado de transicin

S
Concentracin

ES
Tiempo de Reaccin

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EFECTO DE LA TEMPERATURA

Temperatura ptima para una tpica enzima humana

Temperatura ptima para enzima de termfila

(Bacteria termotolerante)

Actividad

20

40

80

100

Temperatura (C)

Temperatura ptima para dos enzimas P. Lezama - UPAO

Efecto del pH
ENZIMA Fosfatasa alcalina Lipasa pancretica Quimotripsina Tripsina Catalasa Carboxipeptidasa Amilasa salival Fosfatasa cida Pepsina pH 9.5 8.0 8.0 7.9 7.6 7.5 6.8 5.0 1.5

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CINTICA ENZIMTICA

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vo

Vmax

Efecto de S

[S]

v = Vmax [S] Km 1

v = Vmax
2

Vmax
2

Cuando se alcanza la velocidad mxima?

P. Lezama - UPAO m

[S]

Linewever - Burk

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INHIBICION ENZIMATICA

Tipos

Tipo de inhibidores
COMPETITIVO

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Tipo de inhibidores
NO COMPETITIVO

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INHIBICION

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Inhibicin enzimtica (Resumen)

I

Competitiva
Vmax

No-competitiva
Vmax

Acompetitiva
Vmax

Ploteo directo

vo

vo

Vmax

Vmax

Km Km

[S], mM

Km = Km

[S], mM

Km Km

[S], mM

Vmax no se altera Km se incrementa

Vmax disminuye Km no se altera 1/vo

Vmax & Km disminuye 1/vo

Doble Reciproco

1/vo

1/ Vmax 1/Km 1/[S] 1/Km

1/ Vmax 1/[S] 1/Km

1/ Vmax 1/[S]

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ALGUNOS EJEMPLOS DE INHIBIDORES

COMPETITIVA AINEs lactmicos (penicilina) Sulfas (~PABA) IECAs (Captopril, enalapril) Alopurinol Fluorouracilo NO COMPETITIVA Plomo EDTA ACOMPETITIVA Fen (- a Fosfatasa alcalina intestinal)

REVISAR EN LA REVISAR EN LA LITERATURA OTROS LITERATURA OTROS EJEMPLOS EJEMPLOS

Organofosforados
REVISAR EN LA LITERATURA OTROS EJEMPLOS
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Ejemplo de inhibicin competitiva Angiotensingeno Hipotensin, hipovolemia Renina Angiotensina I

Enzima convertidora X de Angiotensina, ECA

IECA Captopril
Anlogo del estado de transicion

Angiotensina II

P. Lezama UPAO Aumento- de la presin arterial

CONTROL Y REGULACION ENZIMATICA

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MECANISMOS DE REGULACIN ENZIMTICA

Cantidad de enzima sintetizada por las clulas Degradacin por proteasas citoslicas o lisosomales Inhibicin reversible por productos Interaccin con protenas moduladoras
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MECANISMOS DE REGULACIN ENZIMTICA

Activacin/inhibicin alostrica
El modulador alostrico se une a un sitio diferente al activo La unin del modulador es reversible e implica cambio conformacional Generalmente son enzimas multimricas Presentan cintica sigmoide

Modificacin covalente
Fosforilacin ADP-ribosilacin Metilacin

Activacin proteoltica de proenzimas

Zimgenos P. Lezama - UPAO Activacin en cascada

Modificaciones covalentes
Fosforilacin (adicin de un grupo fosfato) puede activar o inactivar una enzima Muchos procesos en la clula se controlan mediante la activacin y desactivacin de las enzimas

Revisar la bilbiografia y plantear ejemplos

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P. Lezama - UPAO

Modulacion de enzimas alostricas

Moduladores positivos o activadores: Ej. El sustrato. Estas molculas se enlazan a una regin de la enzima distinta al sitio activo. Estabiliza la forma activa Moduladores negativos: se llaman inhibidores alostricos si actan en lugares distintos del sitio activo de la enzima. Estabiliza la forma inactiva P. Lezama - UPAO

Proenzimas (cimgenos)

Sitio de sntesis Estmago Pncreas Pncreas Pncreas P. Lezama - UPAOPncreas

Zimgeno Pepsingeno Quimotripsingeno Tripsingeno Procarboxipeptidasa Proelastasa

Enzima activa Pepsina Quimotripsina Tripsina Carboxipeptidasa Elastasa

ENZIMAS ESPECIALES

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TELOMERASA
Esta enzima repara los telmeros de los cromosomas mediante la adicin de secuencias TTAGGG

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Ciclo celular normal y el de las clulas tumorales

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Ribozimas

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Abzimas

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Granzima B

Granzima B
Granzima B y perforina, son protenas liberadas por clulas efectoras (LT citotoxicos), pueden inducir apoptosis en clulas blanco formando poros transmembrana y el clivaje de efectores de caspasas, tal como caspasa-3, aunque la apoptosis puede lograrse independiente de granzima B.
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Granzima A

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APLICACIONES DE LAS ENZIMAS EN LA MEDICINA

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Generalidades
Por su alta especificidad y eficacia cataltica son muy apreciadas para su aplicacin como agentes teraputicos. As mismo tienen valor diagnstico y/o pronstico, y como reactivos de laboratorio Pare ello requieren: un alto grado de pureza, alta estabilidad a las condiciones de temperatura y pH fisiolgicos Baja antigenicidad y accesibilidad al sitio P. Lezama corporal de destino - UPAO

APLICACIONES TERAPEUTICAS CONVENCIONALES

ENZIMA Pancreatina Pepsina Amilasa Papaina Celulasa Lipasa Bromelina Peptidasa Dextranasa Estreptoquinasa Uroquinasa Colagenasa ORIGEN pncreas bovino mucosa estomacal porcina Aspergillus sp Carica papaya Aspergillus sp pncreas porcino Ananas comosus (pia) Serratia sp. Penicillium funicolosum Streptococcus sp. orina Clostridium hystolyticum FUNCION ayuda-digestivo ayuda-digestivo ayuda-digestivo ayuda-digestivo ayuda-digestivo ayuda-digestivo antiinflamatorio antiinflamatorio tratamiento de caries agente tromboltico agente tromboltico tratamiento de quemaduras cutneas oftalmologa: potenciador de antibiticos

Lisozima

clara de huevo
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Actuales
Tratamiento de deficiencias metablicas congnitas: catalasa, para el tratamiento de acatalasemia; fenilalanina hidroxilasa y fenilalanina amoniaco liasa (Fenilcetonuria), Galactosa, 1- P uridil transferasa (Galactosemia) Eliminacin de metabolitos txicos por malfuncionamiento de rganos: ureasa y uricasa en caso de mal funcionamiento renal (para eliminar urea y cido rico); UDP glucoronil transferasa y bilirrubina oxidasa (eliminacin de bilirrubina) en casos de ictericia; anhidrasa carbnica y catalasa en intercambio gaseoso de O2 y CO2 en respiradores artificiales Eliminacin selectiva de nutrientes especficos de clulas malignas: asparaginasa y glutaminasa en la eliminacin de L-asparagina y L-glutamina en el tratamiento de leucemia; carboxipeptidasa; fenilalanina y tirosina en el control del crecimiento deLezama - UPAO tumores. P.

ALGUNAS ENZIMAS CON VALOR DIAGNOSTICO COMPROBADO

NOMBRE Lactato deshidrogenasa (LDH) Glutamato deshidrogenasa (GLDH) -Glutamiltransferasa ( GT) Aspartato aminotransferasa (AST) Glutamato oxalacetato transaminasa (GOT) Alanina aminotransferasa (ALT) Glutamato piruvato transaminasa (GPT) Creatin quinasa (CPK) Lipasa pancretica Colinesterasa (CHE) Fosfatasa alcalina (AP) Fosfatasa cida (ACP) -Amilasa Fructosa, 1,6 bifosfato aldolasa (ALD) Glutamato descarboxilasa (GAD) ALTERADO EN Isquemia miocrdica, anemia perniciosa Ictericia obstructiva, Tumores hepticos Cirrosis alcohlica, tumores hepticos Enfermedades hepticas, isquemia miocardica Enfermedades hepticas, isquemia miocardica

Isquemia miocrdica, lesiones del Msculo esqueltico Pancreatitis aguda Hgado graso, intoxicacin alcohlica aguda Ictericia obstructiva, tumores Carcinoma de prstata Pancreatitis aguda Trastornos musculares Trastornos de pncreas endocrino

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MARCADORES ENZIMATICOS
Auxiliares para el diagnstico de enfermedades agudas o crnicas Se puede trabajar en fluidos: suero, plasma, saliva, semen, LCR, orina Relaciona la actividad enzimtica con alteraciones que afectan rganos

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Revisar: Bioqumica de Hicks (Cap. 7)

INFARTO AL MIOCARDIO
LDH AST(GOT) CK

HEPATITIS ALT(GPT) AST (GOT) GT

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