DIVISIN ACADEMICA DE CIENCIAS BIOLGICAS DACBIOL

Anlisis Qumico e Instrumental

MTODOS PARA LA CUANTIFICACIN DE MUESTRAS

Wendy Cristel Martnez Daz Lic. Ingeniera Ambiental.

FECHA: 23/04/12

INTRODUCCIN

Investigacin cuantitativa y cualitativa

Existen dos enfoques bsicos en la investigacin: 1. El cuantitativo utiliza la recoleccin y el anlisis de datos para contestar preguntas de investigacin y probar hiptesis establecidas previamente y confa en la medicin numrica, el conteo y frecuentemente en el uso de la estadstica para establecer con exactitud patrones de comportamiento de una poblacin. 2. El cualitativo por lo comn, se utiliza primero para descubrir y refinar preguntas de investigacin. A veces, pero no necesariamente, se prueban hiptesis. Con frecuencia se basa en mtodos de recoleccin de datos sin medicin numrica, como las descripciones y las observaciones. Ambos usan fases similares y relacionadas entre s: 1. Observacin y evaluacin de fenmenos 2. Establecimiento de ideas como resultado 3. Pruebas que demuestren el fundamento 4. Revisin de ideas 5. Proposicin de nuevas observaciones para cimentar las ideas originales o generar otras

DESARROLLO
La Qumica Analtica se divide en Cualitativa y Cuantitativa. La primera tiene por objeto el reconocimiento o identificacin de los elementos o de los grupos qumicos presentes en una muestra. La segunda, la determinacin de las cantidades de los mismos y sus posibles relaciones qumicas e incluso estructurales.

Clasificacin de los Mtodos Cuantitativos.

Los mtodos de anlisis cuantitativo se pueden dividir en varios grupos, basados en la medida final del anlisis, cuya magnitud depende de la magnitud de la muestra tomada. De acuerdo con su naturaleza: Mtodos Inorgnicos de Anlisis: Referente al anlisis de sustancias Inorgnicas Mtodos Orgnicos de Anlisis: Anlisis de sustancias Orgnicos y qumica del carbono.

De acuerdo a la Cantidad de Muestra usada en el Anlisis: Macro mtodos: Cuando se usan mas de 100 mg de muestra en el anlisis Semi Macrometodos : Cuando se usan cantidades entre 10 y 100 mgs Micro mtodos: Son muestras de menos de 10 mgs Ultra micro-mtodos : Cantidades comprendidas en el orden de los microgramos (mg)

De acuerdo a la medida final en que se den los resultados: Mtodos Gravimetricos : El anlisis gravimetrico se basa en el peso de una sustancia de composicin conocida y qumicamente relacionada con el analito. Mtodos Volumtricos : Se basan en la cuantificacin del volumen de una solucin patrn que reacciona totalmente con el analito de inters y esta relacionada estequimetricamente con este. Estos mtodos implican la utilizacin de indicadores para determinar el punto final de la reaccin. Mtodos Instrumentales o Fisicoqumicos: Los mtodos fisicoqumicos se basan en propiedades de interaccin (absorcin o emisin) de la materia con energa radiante o electromagntica. Estos mtodos estn muy difundidos gracias a las caractersticas de estas interacciones y al amplio espectro de las radiaciones.

Analito: es el componente (elemento, compuesto o ion) de inters analtico de una muestra. pticos: Espectroscpicos y no-espectroscpicos: Cuantifican la interaccin entre la radiacin electromagntica con el analito o las radiaciones que emanan del mismo. Electroanalticos: Cuantifican ciertas magnitudes elctricas relacionadas con la cantidad de analito. Algunos ejemplos son la potenciometra, culombimetra y la electrogravimetra. Otros mtodos variados: Cuantifican propiedades trmicas (como la conductividad trmica), radiactivas, etc. Un ejemplo es la calorimetra. Espectrofotometra: La espectrofotometra se refiere a los mtodos, cuantitativos, de anlisis qumico que utilizan la luz para medir la concentracin de las sustancias qumicas. Se conocen como mtodos espectrofotomtricos y segn sea la radiacin utilizada como espectrofotometra de absorcin visible (colorimetra), ultravioleta, infrarroja. Fotometra. Dentro de los mtodos colorimtricos, un gran nmero de determinaciones que se realizan habitualmente en el laboratorio, utiliza medidas de energa radiante, ya sea emitida, absorbida o reflejada.

Para medir el pH de una disolucin podemos emplear dos mtodos, en funcin de la precisin con que queramos hacer la medida:

Para realizar medidas del pH que no necesiten ser muy precisas se utilizan unas sustancias llamadas indicadores, que varan reversiblemente de color en funcin del pH del medio en que estn disueltas. Se pueden aadir directamente a la disolucin o utilizarlas en forma de tiras de papel indicador (tabla inferior). Para realizar medidas exactas se utiliza un pH-metro, que mide el pH ( la tabla inferior) por un mtodo potenciomtrico

Existen tres mtodos para la cuantificacin de protenas (muestras): Biuret, Bradford y BCA. Para cada uno de los mtodos se realizan: una curva estndar, el clculo del coeficiente de extincin y el rango de sensibilidad. Se realizar la cuantificacin de dos muestras problemas de baja y alta concentracin, respectivamente, y se discutir las ventajas e inconvenientes de cada uno de los mtodos. Palabras clave: cuantificacin de protenas, Biuret, Bradford, BCA Abreviaturas: BCA: cido bicinconnico. Existen diferentes mtodos para la cuantificacin de protenas. Muchos de estos mtodos se basan en: a) la propiedad intrnseca de las protenas para absorber luz en el UV, b) para la formacin de derivados qumicos, o c) la capacidad que tienen las protenas de unir ciertos colorantes. En la Tabla I se recogen los mtodos ms usados as como sus respectivas sensibilidades. Cada uno de estos mtodos tiene sus ventajas e inconvenientes, las principales se recogen en la Tabla II.

1.2. Mtodo de Biuret Se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptdicos en medio bsico. 1Cu2+ se acompleja con 4 NH. La intensidad de coloracin es directamente proporcional a la cantidad de protenas (enlaces peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del mtodo es muy baja y slo se recomienda para la cuantificacin de protenas en preparados muy concentrados (por ejemplo en suero). 1.3. Mtodo de Bradford Se basa en la unin de un colorante, Comassie Blue G-250 (tambin Serva Blue) a las protenas. El colorante, en solucin cida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las protenas se unen a la forma azul para formar un complejo protena-colorante con un coeficiente de extincin mayor que

el colorante libre. Este mtodo es sensible (1-15 g), simple, rpido, barato y pocas sustancias interfieren en su determinacin. Entre las sustancias que interfieren estn los detergentes y las soluciones bsicas. 1.4. Mtodo de BCA El cido bicinconnico, sal sdica, es un compuesto capaz de formar un complejo prpura intenso con inones Cu1+ en medio alcalino. Este reactivo forma la base de un mtodo analtico capaz de monitorizar el in cuproso producido en una reaccin entre las protenas con Cu2+ en medio alcalino (reaccin de Biuret). La estabilidad del reactivo y el cromforo proporciona un mtodo para la cuantificacin de protenas que es sencillo, rpido, muy sensible, y que muestra una gran tolerancia a compuestos que afectan a otros mtodos.