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MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO BIOLOGA

PERIODO MARZO 2012-AGOSTO 2012

PRACTICA # 1 TEMA: EL MICROSCOPIO OBJETIVOS: GENERAL Conocer las partes del microscopio Familiarizar al estudiante con los usos y cuidados que se deben dar al microscopio ESPECIFICOS Identificar la parte mecnica y ptica del microscopio Adiestrar al estudiante en el manejo del microscopio mediante la observacin de varias muestras Educar al estudiante sobre los usos y cuidados que se debe dar al microscopio. Identificar las partes del microscopio y comprender sus caractersticas y la visin con l. Manejar el microscopio correctamente. Realizar una observacin con este instrumento. MARCO TEORICO PROCEDIMIENTO PARA OBSERVAR MUESTRAS EN EL MICROSCOPIO OPTICO 1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones.

2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas. 3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias. 4. Para realizar el enfoque: a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos. b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntida la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino. 5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo de inmersin. 6. Empleo del objetivo de inmersin: a. Bajar totalmente la platina. b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite. c. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el de x40. d. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz. e. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin. f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.

g. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. h. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el paso 3. i. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en posicin de observacin. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio.

j.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico, platina, revlver y condensador). El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs del ocular. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido en xilol. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.

MATERIALES Y REACTIVOS Microscopio compuesto Placas porta y cubre objetos Papel milimetrado Papel peridico Tijeras Lpiz

PROCEDIMIENTO DE LA PRCTICA A. RECORTE DE PERIODICO Recortar la letra e de un peridico Colocar en una placa porta objetos y cubrirla con la placa cubre objetos Colocar la muestra en el microscopio sujetndola con la pinza de la platina Observar con los lentes objetivos de 4X, 10X y 40X Dibujar lo observado con los 3 lentes

B. PAPEL MILIMETRADO Dibujar con un lpiz la letra e en una cuadricula de papel milimetrado Recortar la cuadricula y colocar sobre una placa porta objetos y cubrirla con la placa cubre objetos Colocar la muestra en el microscopio sujetndola con la pinza de la platina

Observar con los lentes objetivos de 4X, 10X y 40X Dibujar lo observado con los 3 lentes

CUESTIONARIO Microscopio 1. Dibuje un microscopio, ponga sus partes y explique brevemente cada una de ellas 2. Describa brevemente los microscopios de campo oscuro, electrnico y de barrido 3. Defina qu es Apertura Numrica y Poder de Resolucin; y cmo se calcula cada uno de ellos. 4. Explique por qu se ven las imgenes invertidas en el microscopio 5. Para qu sirve el aceite de inmersin en el lente hmedo? Bioseguridad 6. Qu bioseguridad? 7. Cuntos niveles de bioseguridad existen para clasificar los laboratorios y en qu consiste cada uno de ellos? 8. A qu nivel de bioseguridad pertenece el laboratorio de Biologa? 9. De al menos 3 recomendaciones para un trabajo seguro en el laboratorio de Biologa?

GRAFICOS
LETRA e
PAPEL MILIMETRADO

40x

10x

4x

PRCTICA #2 TEMA: MONTAJE DE PREPARACIONES FRESCAS Y TEMPORALES ANTECEDENTES Para poder observar al microscopio clulas, tejidos animales o vegetales y microorganismos es necesario hacer preparaciones sobre portaobjetos. Hacer una preparacin consiste por lo tanto en colocar y extender el tejido o la muestra sobre un portaobjetos, cubrindolo despus con un cubreobjetos. Las preparaciones pueden ser temporales, frescas y permanentes. Las primeras son aquellas que solo se van a utilizar durante la prctica, unos das; las frescas se usan solo durante la prctica y posteriormente se lavan. Y las permanentes son aquellas preparaciones que duran para siempre, por lo que deben hacerse con un material especial (blsamo de Canad) para que el cubre-objetos permanezca perfectamente adherido al porta-objetos, durante aos. OBJETIVOS: GENERAL Aprender a preparar placas con muestras frescas y temporales. ESPECIFICOS Escribir por lo menos 2 objetivos especficos. MARCO TEORICO MATERIALES Y REACTIVOS Portaobjetos Cubreobjetos Aguja de diseccin Agua de charco Moho de pan, de tortilla o de cualquier fruta Tejidos meristemticos Solucin fisiolgica Barniz de uas. Blsamo de Canad. PROCEDIMIENTO 1. Para hacer preparaciones frescas, simplemente coloca un corte muy delgado de tejido meristemtico, una gota de agua de charco o una muestra pequea de moho (extendida con la aguja de diseccin) sobre el portaobjetos. 2. Si el material utilizado es moho o tejidos meristemticos, coloca sobre tu muestra una gota de agua o solucin fisiolgica. 3. Cubra la muestra con el cubreobjetos dejndolo caer suavemente para que no haga burbujas. Observa la figura: 4. Esta preparacin est lista para que hagas observaciones microscpicas. Su duracin es de aproximadamente una hora ya que al evaporarse el agua con el calor de la lmpara del microscopio, las clulas o los organismos morirn. 5. Para hacer preparaciones temporales, coloca un corte o una muestra sobre el portaobjetos y aade agua o colorante segn se te indique.

6. Cubre tu muestra con el cubreobjetos dejndolo caer suavemente para que no haga burbujas; con un pincel de barniz de uas cubre los cuatro lados del cubreobjetos, djalo secar y tendrs una preparacin temporal. 7. Esta preparacin est lista para que hagas observaciones microscpicas. Su duracin es de aproximadamente de un mes o mas dependiendo de la muestra. RESULTADOS: Esquematice el procedimiento que seguiste para obtener tus preparaciones.

CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. Cmo se clasifican los seres vivos? A qu dominio/reinos pertenecen los organismos observados? En qu consisten las asociaciones biolgicas? Qu tipos de asociaciones biolgicas existen?

PRACTICA # 3 TEMA: LOS CARBOHIDRATOS OBJETIVOS: GENERAL Observar microscpicamente los grnulos de almidn de diferentes tipos de harinas. ESPECIFICOS Conocer como esta conformado un grnulo de almidn. Determinar la forma que tiene cada tipo de almidn. Conocer la importancia que tienen los carbohidratos en la dieta diaria. MARCO TEORICO MATERIALES Y REACTIVOS Microscopio compuesto Placas porta y cubre objetos Estilete o cuchillo Almidn de maz Arroz, papa, yuca, pltano Solucin de lugol PROCEDIMIENTO 1. Cortar un trozo de papa/yuca/pltano en pedazos muy finos y colocarlos en un vaso con agua. En caso de emplear arroz, colocar una cucharada de ste en 1/4 de taza de agua. Agitar hasta que en el fondo del vaso se aprecie un sedimento blanco (almidn). 2. Colocar en una placa porta objetos una gota de agua con almidn, ya sea la obtenida en el paso 1 u otra preparada con el almidn de maz. 3. Aadir una gota de lugol y homogenizar con un mondadientes. 4. Cubrir la muestra con una placa cubre objetos 5. Colocar cada una de las muestras en el microscopio sujetndola con la pinza de la platina 6. Observar con los lentes objetivos de 10X y 40X. 7. Dibujar lo observado con los 2 lentes. Identificar el tamao relativo y la forma particular que tienen los grnulos de al menos 3 tipos diferentes de almidn. CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. 6. Qu son los carbohidratos y cul es su clasificacin? Qu funcin cumplen los carbohidratos estructurales y los de reserva? Qu es la diabetes y cul es su causa? Cmo se realiza la digestin de los carbohidratos en nuestro organismo? Qu es la fibra diettica? Explique el proceso mediante el cual se transforman los carbohidratos en energa

PRCTICA # 4 TEMA: MACROMOLCULAS

OBJETIVOS: GENERAL Conocer y ejecutar pruebas bsicas de identificacin para hidratos de carbono, lpidos y protenas.

ESPECIFICOS Escribir por lo menos 3 objetivos.

MATERIALES Y REACTIVOS Reactivo de Benedict Lugol Reactivo de Sudn III Reactivo de Biuret Agua destilada Glucosa Sacarosa Cebolla perla Leche Almidn Huevo Papel filtro Franela Cajas petri Tubos de ensayo Pinzas para tubos de ensayo Gradilla Bao Mara Pipetas Marcador permanente Mortero y pistilo Estilete Detergente Cepillo para tubo de ensayo

PROCEDIMIENTO: Preparar una solucin de cada una de las siguientes muestras: Test de Benedict 1. Rotular 5 tubos de ensayo (B, G, S, C, L) 2. Con la ayuda de una pipeta, colocar en cada tubo, 2mL de la muestra correspondiente, segn indica la tabla: TUBO MUESTRA B Agua destilada G Glucosa S Sacarosa C Cebolla L Leche 3. Agregar 0.5 mL del reactivo de Benedict. Anotar las observaciones respectivas en la tabla de resultados. 4. Colocar los tubos de ensayo en bao Mara a 100 C durante dos minutos. Dejar enfriar y observar la coloracin en cada uno de los tubos. Anotar los resultados en la tabla.

Test del lugol 1. Rotular 6 tubos de ensayo (B, G, A, C, L, P) 2. Con la ayuda de una pipeta, colocar en cada tubo, 1mL de la muestra correspondiente, segn indica la tabla: TUBO MUESTRA B Agua destilada G Glucosa A Almidn C Cebolla L Leche P Pedazo de papel 3. Agregar 5 gotas de lugol. Anotar las observaciones respectivas en la tabla de resultados 4. Colocar los tubos de ensayo en bao Mara a 100 C durante dos minutos. Dejar enfriar y observar la coloracin en cada uno de los tubos. Anotar los resultados en la tabla. Test de Biuret 1. Rotular 5 tubos de ensayo (B, G, A, C, L) 2. Con la ayuda de una pipeta, colocar en cada tubo, 1,5mL de la muestra correspondiente, segn indica la tabla: TUBO MUESTRA B Agua destilada G Glucosa A Albmina (clara de huevo) C Cebolla L Leche 3. Aadir 1mL de reactivo de Biuret a cada tubo 4. Observar la coloracin en cada uno de los tubos. Anotar los resultados en la tabla. Test de Sudan III

1. Cortar 6 cuadrados de papel filtro de aproximadamente 5cm x 5cm. El papel debe 2. 3.


encontrarse limpio y seco. Rotular con lpiz los 6 pedazos de papel (B, A, M, C, L y H) Con la ayuda de una pipeta, colocar en cada papel, 1,0 mL de la muestra correspondiente, segn indica la tabla: TUBO MUESTRA B Agua destilada A Aceite de cocina M Mezcla agua y aceite C Cebolla L Leche H Yema de huevo

4. Poner cada papel sobre una caja petri y aadir unas 4 gotas del reactivo de Sudan III. 5. Esperar 2 minutos y lavar el exceso de colorante con agua. El colorante tie de forma
estable y no se elimina por lavado con agua si existe una grasa. Anotar los resultados en la tabla correspondiente

Resultados TEST DE BENEDICT TUBO B G S C L MUESTRA Agua destilada Glucosa Sacarosa Cebolla Leche ANTES DE BENEDICT BENEDICT SIN TEMPERATURA BENEDICT CON TEMPERATURA

TEST DEL LUGOL TUBO B G A C L P MUESTRA Agua destilada Glucosa Almidn Cebolla Leche Pedazo papel de ANTES DEL LUGOL LUGOL SIN TEMPERATURA LUGOL CON TEMPERATURA

TEST DE BIURET TUBO MUESTRA B Agua destilada G A C L Glucosa Albmina Cebolla Leche

ANTES DE BIURET

DESPUS DE BIURET

TEST DE SUDAN TUBO B A M MUESTRA Agua destilada Aceite de cocina Mezcla agua y aceite DISTRIBUCIN DEL COLOR EN RELACIN A LA MUESTRA

C L H

Cebolla Leche Yema de huevo

PRACTICA # 5 TEMA: OBSERVACION DE CLULAS EUCARIOTAS OBJETIVOS: GENERAL Conocer las partes de una clula eucariota mediante la observacin microscpica

ESPECIFICOS Observar clulas vegetales describiendo las estructuras visibles al microscopio. Describir las partes de una clula eucariota (cebolla) Utilizar colorantes para una mejor observacin de la clula eucariota. Continuar con el adiestramiento al estudiante sobre el manejo del microscopio.

MATERIALES Y REACTIVOS Microscopio compuesto Placas porta y cubre objetos Bistur Epidermis de cebolla Colorante: Lugol Colorante: Cristal violeta Colorante: Fucsina

PROCEDIMIENTO 1. Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la sutil membrana que est adherida por su cara inferior cncava De la parte cncava de una de las hojas carnosas del bulbo de la cebolla y con la ayuda de un bistur y una pinza fina, separar una pequea porcin de epidermis, procurando no arrancar el tejido subyacente, de tal forma que la parte desprendida tenga el aspecto de una fina pelcula traslcida como el celofn. 2. Depositar el fragmento de membrana en un porta con unas gotas de agua. Pon el porta sobre la cubeta de tincin para que caiga en ella el agua y los colorantes. Si es preciso, estirar el trozo de epidermis con ayuda de dos agujas enmangadas. 3. Colocar en una placa porta objetos, aadir una gota de colorante y cubrirla con la placa cubre objetos 4. Colocar la muestra en el microscopio sujetndola con la pinza de la platina 5. Observar con los lentes objetivos de 4X, 10X y 40X 6. Dibujar lo observado con los 3 lentes e identificar cada parte de la clula eucariota. CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. 6. Que importancia tiene la organizacin celular en un individuo? Dibuje una clula con sus respectivas partes y explique ligeramente cada una de ellas. Diferencias y semejanzas entre la clula animal y la clula vegetal. Exponga 5 funciones celulares. Cules son los aminocidos esenciales y cuales no lo son? Clasificacin de las vitaminas, para que sirve cada una y de donde se obtiene.

PRACTICA # 6 TEMA: PRESION OSMOTICA OBJETIVOS: GENERAL Observar el comportamiento de las clulas sanguneas en soluciones con diferentes concentraciones de sal. ESPECIFICOS Reconocer los glbulos rojos. Observar la forma que presentan los glbulos rojos en una solucin hipotnica, isotnica e hipertnica. MATERIALES Y REACTIVOS Microscopio compuesto Placas porta y cubre objetos lanceta Torunda de algodn Tubos de ensayo con tapn de caucho Gradilla Solucin de NaCl al 0.9% ; 2.0% ; 0.2%

PROCEDIMIENTO

1. Con ayuda de una lanceta, realizar una pequea incisin a nivel del pulpejo del dedo pulgar. 2. Colocar 1 gota de sangre en un tubo con NaCl al 0,9% (solucin isotnica) y homogenizar 3. Colocar 1 gota de sangre en un tubo con NaCl al 2% (solucin hipertnica) y homogenizar 4. Colocar 1 gota de sangre en un tubo con NaCl al 0,2% (solucin Hipotnica) y homogenizar 5. Colocar 1 gota de cada tubo en 3 diferentes placas porta objetos y cubrir con la placa cubre objetos 6. Observar cada una de las muestras en el microscopio con los lentes objetivos de 10X y 40X 7. Dibujar lo observado con los 2 lentes, identificar y describir lo que ha pasado con las clulas sanguneas (tamao y forma).

CUESTIONARIO 1. Qu diferencias existen entre venas, arterias y capilares? 2. Esquematice el procedimiento de extraccin de sangre venosa, arterial y capilar. 3. Defina: Osmosis, Presin Osmtica, Solucin Isotnica, Solucin Hipotnica, Solucin Hipertnica. 4. Se sumergen dos clulas en soluciones de distinta concentracin salina (A y B del dibujo):

a) Deduce la concentracin relativa de las soluciones A y B. b) Nombra las estructuras sealadas en el dibujo. c) Cmo se llama el proceso por el cual el agua entra en "A" o el agua sale en "B". 5. Explique por qu se da los procesos de plasmlisis celular y turgencia celular. 6. Hable sobre la permeabilidad que posee la membrana celular. 7. Cmo preparara una solucin de NaCl al 2,5 % si tenemos 50 ml de solvente?

PRACTICA # 7 TEMA: OBSERVACIN DE CLULAS PROCARIOTAS (BACTERIAS) OBJETIVOS: GENERAL Realizar el estudio de una colonia de bacterias utilizando la tcnica de tincin Gram. ESPECIFICOS Ensear al estudiante como se debe realizar un frotis. Explicar sobre la importancia que tiene la coloracin Gram en las clulas procariotas (bacterias). Saber distinguir a las bacterias Gram positivas y a las Gram negativas. MATERIALES Y REACTIVOS Microscopio compuesto Placas porta objetos Guantes y mascarilla Aceite de inmersin Colorante: Cristal violeta Mordiente: Lugol Decolorante: Alcohol- Acetona Colorante: Safranina o Fucsina

PROCEDIMIENTO 1. Con ayuda de un aplicador, raspar la mucosa bucal de manera enrgica. La muestra obtenida en este aplicador debe ser recolectada en un portaobjetos. 2. Con otro aplicador, frotar enrgicamente la epidermis de un compaero. La muestra obtenida en este aplicador puede ser depositada en el mismo portaobjetos en el cual se coloc la muestra anterior. 3. Dejar secar por lo menos 3 minutos el frotis y luego fijar la muestra en la placa hacindola pasar 3 veces por la llama del mechero de forma que la placa corte la llama. 4. Cubrir la muestra cristal violeta por 1 minuto. 5. Lavar con agua 6. Colocar lugol por 45 segundos 7. Lavar la placa con agua 8. Aadir alcohol-acetona por 30 segundos 9. Lavar con agua 10. Cubrir con Safranina o fucsina durante 1 minuto 11. Lavar con agua y dejar secar 12. Colocar 1 gota de aceite de inmersin en la muestra. 13. Colocar la muestra en el microscopio sujetndola con la pinza de la platina 14. Observar con el lente objetivos de 100 X 15. Dibujar lo observado en el lente e identificar si son bacterias Gram positivas o Gram negativas. CUESTIONARIO 1. Qu son las clulas procariotas? Esquematice su clasificacin. 2. Dibuje una bacteria con sus partes y hable brevemente de cada una de ellas. 3. Consulte las diferencias entre bacterias Gram positivas y Gram negativas. 4. Realice un dibujo que esquematice la membrana celular de gram positivas y en otro la membrana de gram negativas. Identifique en ambos dibujos los componentes principales de cada una de ellas. 5. Cul es el fundamento de la tincin Gram?. 6. Qu tipo de bacteria son las ms patgenas para el hombre : las Gram positivas o las Gram negativas y por qu?

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