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1 INTRODUCCIN Debido a la existencias de hongos fitopatgenos en el suelo que causan prdidas cada vez ms considerables en el rendimiento de la cosecha y la resistencia

acentuada en los ltimos aos experimentada de los hongos por los productos qumicos, hoy en da existe el desafo de buscar nuevas tcnicas de manejo como ser el control biolgico de plagas. Se entiende por control biolgico a la reduccin de la densidad o de las actividades productoras de enfermedades de un patgeno o parsito, en su estado activo o durmiente, lograda de manera natural o a travs de la manipulacin del ambiente, del hospedero o de antagonistas del patgeno o plaga que se quiere controlar. El cultivo de kaa hee es susceptible al ataque de diversos hongos, estos atacan produciendo daos al cultivo y ocasionando prdidas en la produccin. El experimento se realiz en el laboratorio de fitopatologa del departamento de Proteccin Vegetal de la Facultad de Ciencias Agrarias (FCA) de la Universidad Nacional de Asuncin (UNA). La resistencia de los microorganismos al uso prolongado de productos qumicos propone nuevos mecanismos de control, como una alternativa de solucin a esta problemtica se propone hoy en da el control biolgico, ya que esta tcnica esta directamente involucrada a la ecologa del cultivo, de esta manera mantenemos la poblacin de un organismo en un nivel ms bajo por competencia, hiperparasitismo o antagonismo. El beneficio mas resaltante del hongo trichoderma en los cultivos es por antagonismo de los microorganismos fitopatgenos mediante actividades como las secreciones de enzimas

toxicas, por produccin de qumicos voltiles y antibiticos, por penetracin hifal, por competencia por oxigeno y nutrientes as como espacio en el suelo. Los productores sern beneficiados ofreciendo una alternativa para el control de biolgicos de patgenos del suelo disminuyendo el uso de productos qumicos, que desembocara la reduccin de costos, fomentara la aparicin de otros controladores biolgicos, y promover la dinmica de la macroflora del suelo. Con esto puede obtenerse un buen rendimiento del cultivo, teniendo as una buena produccin, generando mano de obra. Como objetivo general, evaluar cepas de trichoderma que inhiben el crecimiento de hongos fitopatgenos del suelo y en cuanto a los objetivos especficos, determinar el grado de antagonismo de las cepas de hongos de trichoderma en fusarium, determinar el grado de antagonismo de las cepas de hongos de trichoderma en sclerotium rolfsidii, determinar el grado de antagonismo de las cepas de hongos de trichoderma en macrophomina. Como hiptesis se plante que; existe una diferencia con el uso de cepas de trichoderma en la inhibicin del grado de crecimiento de hongos patgenos del suelo.

3 MATERIALES Y MTODOS

3.1 Lugar y poca del experimento El experimento se realiz en el laboratorio de fitopatologa del departamento de Proteccin Vegetal de la Facultad de Ciencias Agrarias (FCA) de la Universidad Nacional de Asuncin (UNA), ubicado en el campus de dicha institucin en la ciudad de San Lorenzo, Paraguay en el mes de mayo del 2012.

3.2 Poblacin de unidades y variables de medicin Se utilizaron diez cepas del hongo Trichoderma spp y tres cepas de hongos fitopatgenos de suelo, Fusarium, Macrophomina y Sclerotium rolsfii, aislados de cultivos de ka'a he' Trichoderma spp Cepas Cepa 1 (C1) Cepa 2 (C2) Cepa 3 (C3) Cepa 4 (C4) Cepa 5 (C5) Origen Parcela en Caacup Parcela en Caacup Parcela en Caacup Parcela en Caacup Parcela de una empresa Mariano Roque Alonso Cepa 6 (C6) Parcela de una empresa

Mariano Roque Alonso Cepa 7 (C7) Cepa 8 (C8) Cepa 9 (C9) Cepa 10 (C10) Parcela en Chore Parcela en Capiat Parcela en Capiat Obtenida de la coleccin de hongos del Centro de Investigacin Hernn Bertoni

3.2.1 Multiplicacin de cepas Para obtener una cantidad adecuada de cultivos, para los experimentos, se procedi a realizar un repique de las distintas cepas de hongos que se utilizaron, incluyendo a las cepas de Trichoderma De los cultivos ya aislados y puros se extrajeron una pequea porcin y fueron transferidas a las placas de Petri, estos repiques a su vez fueron de nuevo utilizados hasta obtener la cantidad de hongos requerida para el experimento. (Loredo y Mena 2009) 3.2.2 Tratamientos Se realizaron tres experimentos, de antagonismo de compatibilidad, el cual conto con once tratamientos con cinco repeticiones de cada uno, a excepcin del testigo que consto con tres repeticiones, cada cepa de trichoderma spp fitopatgenos Tratamientos T1; uso de la cepa de Trichoderma spp C1 con los tres hongos fitopatgenos T2; uso de la cepa de Trichoderma spp C2 con los tres hongos fitopatgenos T3; uso de la cepa de Trichoderma spp C3 con los tres hongos fitopatgenos T4; uso de la cepa de Trichoderma spp C4 con los tres hongos fitopatogenos T5; uso de la cepa de Trichoderma spp C5 con los tres hongos fitopatogenos T6; uso de la cepa de Trichoderma spp C6 con los tres hongos fitopatogenos Repeticiones Cinco repeticiones para cada cepa de hongos Cinco repeticiones para cada cepa de hongos Cinco repeticiones para cada cepa de hongos Cinco repeticiones para cada cepa de hongos Cinco repeticiones para cada cepa de hongos Cinco repeticiones para cada cepa de hongos se uso con cada uno de los hongos

T7; uso de la cepa de Trichoderma spp C7 con los tres hongos fitopatogenos T8; uso de la cepa de Trichoderma spp C8 con los tres hongos fitopatogenos T9; uso de la cepa de Trichoderma spp C9 con los tres hongos fitopatogenos T10; uso de la cepa de Trichoderma spp C10 con los tres hongos fitopatogenos T11; uso de las diez cepas de trichoderma como testigo

Cinco repeticiones para cada cepa de hongos Cinco repeticiones para cada cepa de hongos Cinco repeticiones para cada cepa de hongos Cinco repeticiones para cada cepa de hongos Tres repeticiones para cada cepa de Trichoderma spp

Para el ensayo de compatibilidad se tuvieron en cuenta las tres cepas que resultaron ms eficientes en las pruebas de antagonismo. Los tratamientos consistieron en cepas de trichoderma spp x 5 productos x 2 dosis x 5 repeticiones ms las 3 cepas como testigo cada una con tres repeticiones. En el experimento in vivo se utilizaron las tres cepas de trichoderma ms

eficientes, cada una inoculada en un tabln de suelo de un metro cuadrado con los tres patgenos, ms un tabln sin antagonista inoculado solo con fitopatgenos como testigo, se realizaron cinco repeticiones.

3.3 Diseo experimental En el primer experimento la unidad experimental que se utilizo fueron las placas de Petri se utilizo diseo completamente al azar con once tratamientos de cinco repeticiones a excepcin del testigo que tuvo tres repeticiones. En la prueba de compatibilidad la unidad experimental fueron las placas de Petri se utilizo diseo completamente al azar con cuatro tratamientos y cinco repeticiones con excepcin del testigo que tuvo tres repeticiones. Para el experimento a campo se utilizo un diseo de bloques al azar.

3.4 Recursos materiales y equipos tcnicos Materiales Papel selofn Agenda Boligrafos Hipoclorito de sodio al 2% Agua destilada Agua corriente Cultivo PDA Cepas de trichoderma Cepas de hongos patgenos del suelo Tinta Hojas Carpetas Placas de petri Libros Documentos en linea Equipos Autoclave Computadora Incubadora

3.5 Descripcin del proceso o recoleccin de datos Prueba de Antagonismo de Trichoderma y hongos fitopatgenas. Para evaluar la actividad antagnica de las cepas de trichoderma se utilizo la tcnica de Cherif y Benhamaou segn es mencionada por Michels, et al (2009), en el extremo de cada placa de Petri se coloco un disco con micelio de hongo fitopatogeno y en el otro extremo un disco de cepa de trichoderma, se puso a incubar luego se tomaron lecturas cada 24 hs para determinar el nmero de das al primer contacto entre las hifas de los dos hongos. Posteriormente se utilizo la clasificacin propuesta por (Bell et al. 1982), donde 1

= Trichoderma sobrecrece completamente al patgeno y cubre totalmente la superficie del medio, 2 = Trichoderma sobrecrece las dos terceras partes de la superficie del medio, 3 =

Trichoderma y el patgeno colonizan cada uno aproximadamente la mitad de la superficie y ningn organismo parece dominar al otro, 4 =el patgeno coloniza las dos terceras partes de la superficie del medio y parece resistir a la invasin por Trichoderma y 5= el patgeno sobrecrece completamente a Trichoderma yocupa la superficie total del medio. De las cepas de Trichoderma se seleccion, tres que presentaron mejor capacidad antagnica, con estas se utiliz el mtodo de papel celofn, para determinar la presencia de metabolitos antifngicos no voltiles. Este mtodo consiste en cortar el papel celofn en crculos del dimetro de las palcas de Petri, el papel fue esterilizado previamente, cada recorte fue colocado en las placas con medio de cultivo PDA, sobre este luego se inocul colocando sobre el papel un fragmento de la cepa de trichoderma seleccionada, que se puso luego en la incubadora.

3.6 Mtodos de control de calidad de los datos Aislamiento de hongos a partir de las muestras de plantas enfermas. Este procedimiento consisti en aislar cepas de hongos fitopatgenos presentes en las plantas de kaa hee para hacerlas crecer en un medio de cultivo Primeramente se desinfect mediante una solucin de hipoclorito de sodio al 2%, diluida con 5 partes de agua destilada, se lav el material con agua corriente y posteriormente se sec el tejido vegetal fue cortado en trozos de 0.3 a 0.5mm estos fueron desinfectados y transferidos a palcas de Petri con PDA en Incubadoras (Puo et al 2011). Luego se procedi a separar las cepas de los patgenos para producir cultivos puros, mediante cortes en las puntas de los micelios en los bordes de las colonias en crecimiento mediante agujas de diseccin, la identificacin se realiz mediante manuales especializados.

3.7 Anlisis estadsticos Los datos obtenidos fueron sometidos al anlisis de Varianza (ANAVA) se aplico el test de Tukey al 5% de probabilidad. Variable a evaluar en el primer experimento fue el grado de colonizacin de la placa de Petri por parte del antagonista as como del fitopatgeno.